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荠菜生长素极性运输基因1(CbPIN1)的克隆与表达分析

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华北农学报 2019年第1期34卷 26-32页

作者：刘晓柱李银凤贵州理工学院贵州贵阳550003

为了探讨荠菜PIN1基因的生物学功能,根据Gen Bank中拟南芥PIN1氨基酸序列,设计同源引物,通过RT-PCR技术,克隆了荠菜PIN1基因(CbPIN1)编码区c DNA序列;生物信息学方法分析了荠菜PIN1蛋白结构特征,并进行了亚细胞定位与原核表达;荧光定量... 详细信息

为了探讨荠菜PIN1基因的生物学功能,根据Gen Bank中拟南芥PIN1氨基酸序列,设计同源引物,通过RT-PCR技术,克隆了荠菜PIN1基因(CbPIN1)编码区c DNA序列;生物信息学方法分析了荠菜PIN1蛋白结构特征,并进行了亚细胞定位与原核表达;荧光定量PCR方法检测了PIN1组织表达特性;构建了植物表达载体p BI121-CbPIN1,并获得转基因植株。结果表明,CbPIN1 c DNA序列全长1 869 bp,C+G含量为49%。Blast比对结果显示,CbPIN1与拟南芥PIN1基因高度同源,相似性高达93%。进一步分析发现,CbPIN1可编码1条622个氨基酸的多肽,CbPIN1蛋白分子质量为67. 05 ku,等电点为9. 02,碱性氨基酸(K、R)个数为49,酸性氨基酸(D、E)个数为42,疏水氨基酸(A、I、L、F、W、V)个数为241,极性氨基酸(N、C、Q、S、T、Y)个数为157。CbPIN1属于跨膜蛋白,含12个丝氨酸磷酸化位点,1个苏氨酸磷酸化位点。亚细胞定位结果显示,CbPIN1定位于细胞膜; CbPIN1在荠菜不同组织均有表达,其中,根中表达最高,种子中表达最低。原核表达显示CbPIN1蛋白大小87. 05 ku。过表达荠菜植株中CbPIN1基因表达量均显著增加。试验结果为进一步分析CbPIN1在荠菜器官发育中的作用奠定了基础。

关键词：荠菜生长素极性运输基因1 基因克隆表达分析

海拔高度对刺梨根际土壤真菌与细菌多样性的影响

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河南农业科学 2023年第10期52卷 82-91页

作者：李银凤刘晓柱贵州理工学院食品药品制造工程学院贵州贵阳550003

为研究海拔高度对刺梨根际土壤真菌与细菌多样性的影响,从而为分离根际促生菌提供参考,采用高通量测序技术分析了不同海拔[1550 m(B1)、1650 m(B2)、1750 m(B3)、1850 m(B4)、2050 m(B5)]刺梨根际土壤真菌与细菌种群组成以及其潜在功能... 详细信息

为研究海拔高度对刺梨根际土壤真菌与细菌多样性的影响,从而为分离根际促生菌提供参考,采用高通量测序技术分析了不同海拔[1550 m(B1)、1650 m(B2)、1750 m(B3)、1850 m(B4)、2050 m(B5)]刺梨根际土壤真菌与细菌种群组成以及其潜在功能。结果表明,不同海拔刺梨根际土壤真菌与细菌物种数不同,B2样本的真菌与细菌物种数相对较多,B3样本真菌与细菌物种数相对较少。海拔高度对刺梨根际土壤真菌与细菌的分布具有重要影响,镰孢霉属(Unclassified_g__Fusarium)相对丰度随海拔高度增加表现出先降低、再升高、再降低的趋势,鞘氨醇单胞菌(Uncultured_Sphingomonadaceae_bacterium_g__Sphingomonas)则表现出先降低、再升高的趋势。此外,刺梨根际土壤真菌与细菌具有多种功能,根际真菌功能的分布随海拔不同而不同。综上,海拔高度影响刺梨根际土壤真菌与细菌组成与多样性。

关键词：刺梨根际土壤海拔真菌细菌多样性

非生物胁迫对平菇抗氧化酶及NADPH氧化酶活性的影响

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食品科技 2022年第7期47卷 26-32页

作者：李银凤刘晓柱贵州理工学院贵州贵阳550003

为分析非生物胁迫对平菇抗氧化酶以及NADPH氧化酶活性的影响,采用马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)培养平菇菌丝体,并进行温度胁迫(高温和低温)、盐胁迫、脱水胁迫、酸碱胁迫、氧化胁迫以及重金属胁迫(Cd、Pb)等非生物胁迫处理,测定各胁迫... 详细信息

为分析非生物胁迫对平菇抗氧化酶以及NADPH氧化酶活性的影响,采用马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)培养平菇菌丝体,并进行温度胁迫(高温和低温)、盐胁迫、脱水胁迫、酸碱胁迫、氧化胁迫以及重金属胁迫(Cd、Pb)等非生物胁迫处理,测定各胁迫处理组的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)以及NADPH氧化酶的活性,同时实时荧光定量PCR方法检测各非生物胁迫处理组NADPH氧化酶基因NoxA的表达量。结果表明,非生物胁迫均可增强SOD、POD和CAT的活性,高温和低温胁迫、脱水胁迫以及重金属胁迫均可提高NADPH氧化酶的活性,上调NADPH氧化酶基因NoxA的表达;而盐胁迫、酸、碱胁迫以及氧化胁迫则降低了NADPH氧化酶的活性,下调NoxA的表达。因而,非生物胁迫可造成平菇菌丝体的氧化胁迫,提高了抗氧化酶的活性;同时NADPH氧化酶也参与了平菇响应非生物胁迫过程,但对不同的非生物胁迫响应模式具有差异性。

关键词：平菇菌丝体非生物胁迫抗氧化酶 NADPH氧化酶

野生刺梨与栽培刺梨自然发酵过程中酵母菌多样性比较分析

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食品科技 2023年第12期48卷 16-24页

作者：李银凤刘晓柱贵州理工学院贵州贵阳550000 农业农村部农业微生物资源收集与保藏重点实验室北京100081

文章通过比较分析野生刺梨与栽培刺梨自然发酵过程中酵母菌多样性,为可培养酵母菌的分离提供参考。采用高通量测序技术比较分析了野生刺梨和栽培刺梨自然发酵过程中酵母菌种群组成及变化特点。结果表明,野生刺梨果实自然发酵过程中共检... 详细信息

文章通过比较分析野生刺梨与栽培刺梨自然发酵过程中酵母菌多样性,为可培养酵母菌的分离提供参考。采用高通量测序技术比较分析了野生刺梨和栽培刺梨自然发酵过程中酵母菌种群组成及变化特点。结果表明,野生刺梨果实自然发酵过程中共检测到169种酵母菌,优势酵母菌为Pichia kluyveri、Pichia terricola、Hanseniaspora uvarum、Candida stellimalicola及Saccharomycopsis crataegensis等;栽培刺梨自然发酵过程中共检测到200种酵母菌,优势酵母菌为***、Saturnispora diversa、***、Candida sorboxylosa等;2个刺梨品种均检测到了***、***、Wickerhamomyces pijperi等酵母物种。***在刺梨自然发酵过程中丰度逐渐增加,而***和***则逐渐降低;***、***、***在刺梨发酵不同阶段种群丰度具有显著差异性。因此,刺梨品种影响刺梨酵母菌组成与多样性,不同酵母种群在自然发酵过程中种群变化具有一定的差异性。

关键词：刺梨酵母菌自然发酵多样性

miR-149抑制结直肠癌细胞迁移的分子机制研究

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天津医药 2020年第1期48卷 19-24页

作者：刘晓柱李银凤贵州理工学院食品药品制造工程学院 550003

目的探讨miR-149对结直肠癌(CRC)细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡的影响及其作用机制。方法实时荧光定量PCR(q-PCR)方法检测miR-149在CRC细胞SW620、LS174T和人结肠上皮细胞FHC中的表达水平;荧光素酶分析法验证STAT3与miR-149之间的靶向结... 详细信息

目的探讨miR-149对结直肠癌(CRC)细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡的影响及其作用机制。方法实时荧光定量PCR(q-PCR)方法检测miR-149在CRC细胞SW620、LS174T和人结肠上皮细胞FHC中的表达水平;荧光素酶分析法验证STAT3与miR-149之间的靶向结合关系;q-PCR和Western blot检测miR-149过表达对CRC细胞中STAT3、p-STAT3 mRNA和蛋白表达的影响。将miR-149 mimics与STAT3过表达质粒单独或者共转染至CRC细胞中,并分为miR-NC组、miR-149 mimics组、miR-149 mimics+pEGFP/STAT3组。采用CCK-8法、Transwell法、细胞划痕法、流式细胞术分别检测各分组CRC细胞的增殖、侵袭、迁移和凋亡情况。结果与正常结肠上皮细胞FHC相比,CRC细胞SW620、LS174T中miR-149表达水平受到抑制(P<0.01)。荧光素酶实验证实,在CRC细胞中STAT3是miR-149的一个直接靶基因。过量表达miR-149抑制STAT3、p-STAT3 mRNA和蛋白的表达,降低CRC细胞增殖能力、侵袭能力以及迁移能力(P<0.01)。同时,过量表达miR-149也可促进CRC细胞的凋亡(P<0.01)。但过表达STAT3可解除miR-149对CRC细胞增殖、侵袭以及迁移能力的抑制作用。结论 miR-149通过靶向STAT3抑制结直肠癌细胞的增殖、侵袭与迁移,同时促进细胞的凋亡。

关键词：结直肠肿瘤微RNAs STAT3转录因子细胞增殖细胞运动细胞凋亡 miR-149

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低温处理对平菇贮藏品质的影响

食品研究与开发 2023年第8期44卷 67-73页

作者：刘晓柱李银凤贵州理工学院贵州贵阳550003

以市售平菇为试材,分析低温处理对其贮藏品质的影响。对平菇进行不同时间(4、8、12、16 d)的低温(4℃)处理,测定平菇贮藏期间感官特性、白度、硬度、失重率、可溶性蛋白含量、细菌菌落总数、活性氧含量、丙二醛含量、总酚含量、超氧化... 详细信息

以市售平菇为试材,分析低温处理对其贮藏品质的影响。对平菇进行不同时间(4、8、12、16 d)的低温(4℃)处理,测定平菇贮藏期间感官特性、白度、硬度、失重率、可溶性蛋白含量、细菌菌落总数、活性氧含量、丙二醛含量、总酚含量、超氧化物歧化酶活性、过氧化氢酶活性、多酚氧化酶活性、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH)氧化酶活性。结果表明,延长低温处理时间可降低平菇感官特性、白度、硬度以及可溶性蛋白的含量;增加平菇的失重率和表面菌落数;诱发平菇细胞的氧化应激,导致细胞内活性氧、丙二醛及总酚含量的增加;同时也增强了细胞内超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、多酚氧化酶及NADPH氧化酶等抗氧化酶的活性。因此,长时间低温处理降低了平菇的贮藏品质,低温保藏只能作为一种平菇极短时间的保存方式。

关键词：平菇低温处理感官特性贮藏品质抗氧化酶

拟南芥AtSWEET4基因启动子序列、编码蛋白结构分析及其在病原菌胁迫下表达特性检测

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南方农业学报 2019年第9期50卷 1893-1902页

作者：刘晓柱李银凤贵州理工学院

【目的】分析拟南芥糖运输载体蛋白基因(AtSWEET4)启动子序列及其编码蛋白的结构,并检测病原菌胁迫下AtSWEET4基因的表达特性,为研究AtSWEET4蛋白在拟南芥生长发育和生物胁迫中的作用机制提供理论依据。【方法】采用生物信息学方法分析A... 详细信息

【目的】分析拟南芥糖运输载体蛋白基因(AtSWEET4)启动子序列及其编码蛋白的结构,并检测病原菌胁迫下AtSWEET4基因的表达特性,为研究AtSWEET4蛋白在拟南芥生长发育和生物胁迫中的作用机制提供理论依据。【方法】采用生物信息学方法分析AtSWEET4基因启动子序列及其编码蛋白的结构,并采用实时荧光定量PCR(qRTPCR)和β-葡萄糖苷酸酶(GUS)组织染色法检测人工接种菜豆晕疫病菌(Pseudomonas syringae pv. phaseolicola,Psp)NPS3121和丁香假单胞菌番茄致病变种(Pseudomonas syringae pathovar tomato,Pst)DC3000后AtSWEET4基因的表达情况。【结果】AtSWEET4蛋白由251个氨基酸组成,分子量为27.8 kD,分子式为C1300H2038N304O346S11,理论等电点(pI)为8.71,脂肪氨基酸指数为118.76,不稳定指数为38.72,平均亲水性指数为0.629,为稳定的亲水蛋白,且含有7个跨膜结构域,无信号肽,为非分泌型蛋白。AtSWEET4蛋白与芥属的亚麻荠和荠菜SWEET4蛋白亲缘关系最近,其次是十字花科的甘蓝和萝卜SWEET4蛋白,与禾本科的二穗短柄草SWEET4蛋白亲缘关系最远。AtSWEET4基因启动子序列中包含核心元件TATA-box、增强子元件CAAT-box、调控植物生长发育相关元件、激素响应相关元件、非生物胁迫响应相关元件和生物胁迫响应相关元件。Psp NPS3121和Pst DC3000均可诱导AtSWEET4基因表达,但表达模式不同:接种Psp NPS3121后6和12 h的AtSWEET4基因表达明显上调,但至接种后24 h又迅速下降;接种Pst DC3000后AtSWEET4基因表达量逐渐增加。【结论】AtSWEET4基因的启动子序列特征及其编码蛋白结构与其参与植物免疫反应密切相关。

关键词：拟南芥运输载体蛋白(SWEET4) 理化性质结构特征启动子序列病原菌胁迫表达分析

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2种食用菌NADPH氧化酶A蛋白结构分析

中国食用菌 2020年第8期39卷 22-28页

作者：李银凤刘晓柱贵州理工学院贵州贵阳550003

NADPH氧化酶A(NADPH oxidase A,Nox A)为NADPH氧化酶亚家族一员,可催化产生ROS。通过检索Gen Bank中Nox A序列,利用生物信息学方法分析了2种食用菌Nox A蛋白结构特征。结果表明,在Gen Bank中仅搜索到平菇Nox A(Po Nox A)与双色蜡蘑Nox A... 详细信息

NADPH氧化酶A(NADPH oxidase A,Nox A)为NADPH氧化酶亚家族一员,可催化产生ROS。通过检索Gen Bank中Nox A序列,利用生物信息学方法分析了2种食用菌Nox A蛋白结构特征。结果表明,在Gen Bank中仅搜索到平菇Nox A(Po Nox A)与双色蜡蘑Nox A(Lb Nox A)序列。进一步序列比对发现,2种Nox A序列同源性达80%,均包含2个FAD结合模体、4个NADPH结合模体以及4个亚铁红素结合位点(heme binding)中的保守组氨酸残基;蛋白结构分析表明,2种Nox A一级结构、二级结构及三级结构较为相似,但在结构数量上也存在一定差异;2种Nox A均属于跨膜蛋白,但Po Nox A蛋白N端存在5个跨膜结构,Lb Nox A蛋白N端存在6个跨膜结构,中间区域存在1个跨膜结构;2种Nox A蛋白质中均存在磷酸化位点修饰,具有潜在的磷酸激酶特性。但2种Nox A蛋白质中丝氨酸、苏氨酸及酪氨酸修饰位点个数和存在位置不同;进化分析表明,2种Nox A基因亲缘关系最近,位于进化树的同一分枝。因此推测2种食用菌Nox A氧化酶功能较一致,但也存在差异性。

关键词：食用菌 NADPH氧化酶A 蛋白结构

生长素结合蛋白与纤维素合成酶在同一细胞中的标记与定位

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湖南农业大学学报（自然科学版） 2012年第6期38卷 602-606,F0003页

作者：陈宗星刘晓柱黄妤黄丽华张学文湖南农业大学生物科学技术学院湖南长沙410128

生长素通过其结合蛋白(ABP1)促进细胞纤维素合成并使细胞伸长生长。为探明ABP1与纤维素合成酶(CesA1)这2种蛋白质之间的相互关系,分别对这2种蛋白质进行了荧光标记,构建了绿色荧光蛋白(GFP)对ABP1融合标记以及青色荧光蛋白(CFP)对CesA1... 详细信息

生长素通过其结合蛋白(ABP1)促进细胞纤维素合成并使细胞伸长生长。为探明ABP1与纤维素合成酶(CesA1)这2种蛋白质之间的相互关系,分别对这2种蛋白质进行了荧光标记,构建了绿色荧光蛋白(GFP)对ABP1融合标记以及青色荧光蛋白(CFP)对CesA1融合标记的2种载体。采用烟草叶片侵注法,将2种重组体转入烟草叶片同一细胞进行瞬时表达。扫描激光共聚焦显微成像观察到转基因瞬时表达的烟草铺列细胞的细胞膜上有强烈两色荧光信号,表明这2种蛋白集中在细胞膜上分布,其分布区域存在明显的重叠。在细胞的内膜系统中绿色荧光信号相对较强,青色荧光信号较弱,表明内膜系统中也分布着一定量的ABP1,而纤维素合成酶在内膜系统中不会集中分布。在叶片铺列细胞间嵌合交错区可以观察到青色荧光的高亮点,表明此处存在纤维素合成酶的高密度分布,也说明在此部位有更多的纤维素合成。

关键词：生长素结合蛋白纤维素合成酶荧光标记细胞定位