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临床分离碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌菌株的分子流行病学及碳青霉烯酶抑制剂增强试验的应用

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中南大学学报:医学版 2023年第8期48卷 1210-1216页

作者：李虹玲钟一鸣晏群刘文恩梁湘辉中南大学湘雅医院检验科长沙410008

目的:碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌(carbapenem-resistant Enterobacterales,CRE)的流行已成为临床抗感染治疗的巨大挑战。本研究探讨本地区CRE耐药情况及分子流行病学特征,并评估碳青霉烯酶抑制剂增强试验在临床实验室的应用价值,旨在... 详细信息

目的:碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌(carbapenem-resistant Enterobacterales,CRE)的流行已成为临床抗感染治疗的巨大挑战。本研究探讨本地区CRE耐药情况及分子流行病学特征,并评估碳青霉烯酶抑制剂增强试验在临床实验室的应用价值,旨在为临床合理使用抗菌药物提供依据。方法:收集中南大学湘雅医院临床标本中分离的非重复性CRE,最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)联合纸片扩散法(Kirby-Bauer,KB)检测菌株的药物敏感性,PCR方法检测13种碳青霉烯酶基因。使用碳青霉烯酶抑制剂增强试验对126株经PCR确定为产碳青霉烯酶的菌株进行表型检测,了解该方法与金标准PCR结果的符合程度。结果:704株CRE呈现出高度耐药的情况,经检测,501株为产碳青霉烯酶的肠杆菌目细菌(carbapenemase producing Enterobacterales,CPE);CPE菌株以肺炎克雷伯菌为主,其次为阴沟肠杆菌和大肠埃希菌;碳青霉烯酶有9种,包括肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(Klebsiella pneumoniae carbapenemase,KPC)、新德里金属β-内酰胺酶(New Delhi metallo-β-lactamase,NDM)、维罗纳整合子金属酶β-内酰胺酶(Verona integronencoded metallo-β-lactamases,VIM)、亚胺培南酶(imipenemase,IMP)、苯唑西林酶48型(oxacillinase-48,OXA-48)以及罕见的亚胺培南水解β-内酰胺酶(imipenem-hydrolyzingβ-lactamase,IMI)、阿德莱德亚胺培南酶(adelaide imipenemase,AIM)、圭亚那超广谱β-内酰胺酶(guiana extended-spectrumβ-lactamase,GES)和Bicêtre碳青霉烯酶(bicêtre carbapenemase,BIC),KPC型丝氨酸酶检出率最高,为61.7%(309/501);碳青霉烯酶抑制剂增强试验检测单产A类丝氨酸碳青霉烯酶、单产B类金属酶以及同时产A类和B类酶菌株的符合率均为100%。结论:湖南省长沙市CRE菌株分布非常广泛,产碳青霉烯酶(特别是KPC型丝氨酸酶)是这类细菌对碳青霉烯类药物耐药的主要机制。在湖南省长沙市首次检出了肠杆菌目细菌携带GES、IMI型基因。碳青霉烯酶抑制剂增强试验结果显示该方法能准确检测产A类丝氨酸酶和B类金属酶的CRE,且操作简单、结果容易判读,能满足临床微生物实验室丝氨酸碳青霉烯酶和/或金属酶检测的需求,为临床精准用药提供依据。

关键词：碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌碳青霉烯酶产碳青霉烯酶肠杆菌目细菌碳青霉烯酶抑制剂增强试验

肺炎克雷伯菌外膜囊泡的提取、鉴定及相对定量

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中华检验医学杂志 2022年第2期45卷 164-168页

作者：蓝优周茂陈霞钟一鸣李军晏群刘文恩中南大学湘雅医院检验科长沙410008

目的基于超速离心改良法快速分离提取肺炎克雷伯菌分泌的外膜囊泡并进行鉴定和定量。方法将购于国家卫生健康委员会临床检验中心经典肺炎克雷伯菌(cKP)标准菌株和台湾大学馈赠高毒力肺炎克雷伯菌(hvKP)标准菌株分别置于M9基础培养基中培... 详细信息

目的基于超速离心改良法快速分离提取肺炎克雷伯菌分泌的外膜囊泡并进行鉴定和定量。方法将购于国家卫生健康委员会临床检验中心经典肺炎克雷伯菌(cKP)标准菌株和台湾大学馈赠高毒力肺炎克雷伯菌(hvKP)标准菌株分别置于M9基础培养基中培养9 h,利用超速离心改良法提取外膜囊泡(OMV),然后采用负染法于透射电子显微镜下观察其形态和大小,通过Stewart磷脂分析法进行相对定量,并采用两独立样本t检验进行两组间比较。结果透射电子显微镜下观察发现,cKP和hvKP分泌OMV的形态大部分呈球形、囊状小泡结构,小部分形态不规则,OMV直径为20~250 nm,可见多个囊泡聚集成团,且hvKP分泌的OMV多于cKP。相对定量检测发现,hvKP分泌的OMV数量多于cKP,差异有统计学意义(P<0.05)。结论通过超速离心改良法成功实现了肺炎克雷伯菌OMV提取、鉴定及定量检测,为后续OMV机制及功能研究奠定了基础,为抗细菌感染治疗提供了新思路。

关键词：克雷伯菌,肺炎外膜囊泡超速离心感染

实时荧光定量PCR对艰难梭菌感染诊断价值的meta分析

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临床检验杂志 2014年第5期32卷 390-394页

作者：陈伟刘文恩中南大学湘雅医院检验科长沙410008

目的系统评价实时荧光定量PCR(real-time PCR)对艰难梭菌感染的诊断价值。方法制定原始文献的纳入、排除标准及检索策略,检索有关real-time PCR诊断粪便中艰难梭菌感染且同时采用细胞培养毒素中和试验(CCCNA)或厌氧产毒培养(TC)作为诊... 详细信息

目的系统评价实时荧光定量PCR(real-time PCR)对艰难梭菌感染的诊断价值。方法制定原始文献的纳入、排除标准及检索策略,检索有关real-time PCR诊断粪便中艰难梭菌感染且同时采用细胞培养毒素中和试验(CCCNA)或厌氧产毒培养(TC)作为诊断金标准的文献,采用诊断准确性研究的质量评价工具QUADAS进行质量评价,并用Meta DiSc 1.4软件进行meta分析。结果纳入研究文献共42篇,异质性检验提示无阈值效应,但存在其他原因导致的非阈值性异质性。real-time PCR诊断粪便艰难梭菌感染的合并敏感性、特异性、阳性似然比、阴性似然比及诊断优势比(95%CI)分别为0.925(0.913,0.936)、0.965(0.962,0.969)、28.385(23.394,34.441)、0.093(0.076,0.115)和378.15(282.17,506.77)。ROC曲线下面积(AUCSROC)和Q*指数分别为0.987 8和0.953 2,漏斗图显示无发表偏倚,meta回归结果显示各个影响因素中以发表年份和样本含量为主要异质性来源,对发表年份和样本含量进行亚组分析,发现2010年之后的诊断效能大于2010年之前,样本量大于200的诊断效能大于样本量小于200者。结论通过对real-time PCR对艰难梭菌感染的诊断价值进行meta分析,发现realtime PCR具有较高的敏感性、特异性、阳性似然比及阴性似然比。因其快速准确,可广泛应用于临床。

关键词：艰难梭菌实时荧光定量PCR 荟萃分析

反向高效液相色谱测定法同时测定人血浆中5种镇静催眠药浓度

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中南大学学报（医学版） 2009年第7期34卷 689-692,F0003页

作者：梁湘辉戴智勇刘文恩中南大学湘雅医院检验科长沙410008 中南大学湘雅医院药剂科长沙410008

目的:建立人血浆中地西泮、硝西泮、奥沙西泮、艾司唑仑和阿普唑仑的反向高效液相色谱测定法(RP-HPLC)。方法:以血浆为基质,配制含有5种镇静催眠药的混合标准品,取1mL样品加入50mg/L卡马西平10μL为内标,乙酸乙酯萃取后用100μL流动相溶... 详细信息

目的:建立人血浆中地西泮、硝西泮、奥沙西泮、艾司唑仑和阿普唑仑的反向高效液相色谱测定法(RP-HPLC)。方法:以血浆为基质,配制含有5种镇静催眠药的混合标准品,取1mL样品加入50mg/L卡马西平10μL为内标,乙酸乙酯萃取后用100μL流动相溶解,进样20μL,通过高效液相色谱仪检测人血浆基质中5种镇静催眠药浓度。色谱条件:色谱柱为C18柱(4.6mm×250mm),柱温30℃,流动相为甲醇:水(65:35),流速1.0mL/min,紫外检测波长为230nm。结果:地西泮、硝西泮、奥沙西泮、艾司唑仑和阿普唑仑在5～1200μg/L范围内线性关系良好(r≥0.9966,P<0.05),加样回收率在95.5%～105.6%,萃取回收率均在75%以上,日内及日间变异相对标准偏差(RSD)均小于10%(n=5)。结论:RP-HPLC方法简便、准确、灵敏,适用于人血浆中地西泮、硝西泮、奥沙西泮、艾司唑仑和阿普唑仑的血药浓度的同时检测。

关键词：镇静催眠药反向高效液相色谱法血药浓度

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病原微生物实验室生物安全

中华检验医学杂志 2009年第10期32卷 1196-1200页

作者：刘文恩李艳冰中南大学湘雅医学院检验科长沙410008

病原微生物实验室是人类与引起感染性疾病的病原微生物作斗争的场所，也是引起实验室感染的场所。实验室人员在进行标本接种、涂片、染色、镜检、培养、鉴定、生化、药敏、血清分型等不同试验操作时都会暴露于各种病原微生物及危害因子... 详细信息

病原微生物实验室是人类与引起感染性疾病的病原微生物作斗争的场所，也是引起实验室感染的场所。实验室人员在进行标本接种、涂片、染色、镜检、培养、鉴定、生化、药敏、血清分型等不同试验操作时都会暴露于各种病原微生物及危害因子中，而且无法判断标本中所带的致病微生物种类。因此加强病原微生物实验室的生物安全管理是减少和避免实验室感染发生的关键。

关键词：实验室生物安全病原微生物微生物实验室生物安全管理感染性疾病实验室感染实验室人员危害因子

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艰难梭菌疫苗的研究进展

中华检验医学杂志 2014年第6期37卷 430-433页

作者：陈伟刘文恩中南大学湘雅医院检验科长沙410008

近年来艰难梭菌感染性疾病发病危险因素在增加，如潜在的基础疾病、住院时间、年龄、抗生素的使用、质子泵抑制剂的使用等，尽管出现了利福昔明、硝唑尼特、替加环素、雷莫拉宁、非达霉素等新型抗生素以及腔内毒素中和剂、生物治疗剂、... 详细信息

近年来艰难梭菌感染性疾病发病危险因素在增加，如潜在的基础疾病、住院时间、年龄、抗生素的使用、质子泵抑制剂的使用等，尽管出现了利福昔明、硝唑尼特、替加环素、雷莫拉宁、非达霉素等新型抗生素以及腔内毒素中和剂、生物治疗剂、粪便移植、全身抗体方法、静脉注射免疫球蛋白等非抗菌药物，艰难梭菌感染率及复发率仍居高不下，疫苗是防治艰难梭菌感染的最理想的途径和方法。艰难梭菌疫苗的研究已近20年，目前除了针对A毒素与B毒素的单克隆抗体疫苗、类毒素疫苗在人体中取得较好的效果外，一些针对毒素受体及艰难梭菌关键致病因子的基因重组疫苗在动物实验中也取得了良好的防治效果。（中华检验医学杂志，2014，37：430-433）

关键词：梭菌,难辨疫苗,合成类毒素类

自身免疫性肝病相关抗体检测及其临床意义分析

维普期刊数据库评论

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维普期刊数据库

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中华检验医学杂志 2005年第7期28卷 742-744页

作者：金燕刘文恩郭婧婧中南大学湘雅医院检验科长沙410008

长期以来,有为数不少的肝病患者因病因不明或治疗效果不佳(包括少量病毒感染阳性患者)导致病情加重,给病人造成巨大痛苦。

关键词：自身免疫性肝病抗体检测肝炎肝功能免疫学

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变栖克雷伯菌感染患者的临床特征

中国感染控制杂志 2023年第1期22卷 38-43页

作者：钟一鸣罗昕怡李艳明李虹玲简子娟晏群刘文恩中南大学湘雅医院检验科湖南长沙410008 国家老年疾病临床医学研究中心(湘雅医院) 湖南长沙410008 中南大学湘雅医学院医学检验系湖南长沙410013

目的研究变栖克雷伯菌感染患者的临床特征,为临床该病原菌的防控提供理论依据。方法回顾性收集2013年1月—2018年7月某医院临床分离经全基因组学测序鉴定为变栖克雷伯菌感染患者70例,随机选取同期肺炎克雷伯菌感染患者70例作为对照,分... 详细信息

目的研究变栖克雷伯菌感染患者的临床特征,为临床该病原菌的防控提供理论依据。方法回顾性收集2013年1月—2018年7月某医院临床分离经全基因组学测序鉴定为变栖克雷伯菌感染患者70例,随机选取同期肺炎克雷伯菌感染患者70例作为对照,分析两组患者的临床资料。结果70例变栖克雷伯菌感染患者年龄1 d~95岁,中位年龄51岁,其中1岁以内的婴儿期患者6例(8.6%);基础疾病主要有心血管疾病(16例,22.9%),其次是糖尿病(11例,15.7%)和肿瘤(9例,12.6%);感染部位主要来自呼吸系统(34例,48.6%)、血流(8例,11.4%)和腹腔内(8例,11.4%);因接受过肿瘤放射和/或化学治疗、糖皮质激素和/或免疫抑制剂治疗而导致免疫力低下或抑制的患者20例(28.6%)。变栖克雷伯菌对常见抗菌药物耐药率较低(均<40%),变栖克雷伯菌对抗菌药物的耐药率均低于肺炎克雷伯菌(均P<0.001)。结论变栖克雷伯菌感染患者临床特征与肺炎克雷伯菌感染类似,但需警惕该菌在婴儿及免疫力低下人群的流行传播。变栖克雷伯菌目前耐药率较低,但仍需规范临床合理使用抗菌药物,以防耐药性菌株的产生。

关键词：变栖克雷伯菌肺炎克雷伯菌临床感染特征全基因组测序药敏

革兰氏阴性杆菌的AmpC酶检测与其药物敏感率分析

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中南大学学报（医学版） 2006年第1期31卷 134-137页

作者：刘文恩江源唐银王红梅中南大学湘雅医院检验科长沙410008 中南大学湘雅医学院检验系长沙410008

目的:探讨湘雅医院革兰氏阴性杆菌AmpC酶产生与其耐药性的关系,为临床提供选药参考。方法:应用M icroscan微生物自动鉴定系统进行细菌鉴定与药敏试验,并应用纸片扩散法进行AmpC酶检测。结果:204株革兰氏阴性杆菌中AmpC酶阳性菌株40株,... 详细信息

目的:探讨湘雅医院革兰氏阴性杆菌AmpC酶产生与其耐药性的关系,为临床提供选药参考。方法:应用M icroscan微生物自动鉴定系统进行细菌鉴定与药敏试验,并应用纸片扩散法进行AmpC酶检测。结果:204株革兰氏阴性杆菌中AmpC酶阳性菌株40株,阳性率为19.61%;AmpC酶阳性菌株与AmpC酶阴性菌株药敏结果显示,前者大多对头孢曲松、哌拉西林、头孢他啶、头孢噻肟、头孢哌酮、氨曲南、哌拉西林/他唑巴坦、头孢呋肟、头孢他啶/棒酸、头孢噻肟/棒酸耐药,而后者大多对上述药物敏感,两者比较,差异有统计学意义(均P<0.05)。而两者大多对头孢吡肟、亚胺培南、美洛培南、头孢哌酮/舒巴坦、左氟沙星及阿米卡星敏感。结论:AmpC酶检测有助于耐药菌株的检出,AmpC酶阳性菌株大多对第三代头孢菌素及酶抑制剂及氨曲南耐药,对亚胺培南、美洛培南、头孢吡肟、头孢哌酮/舒巴坦、左氟沙星及阿米卡星敏感,可为临床经验治疗提供参考。

关键词： AmpC酶耐药革兰氏阴性杆菌