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金针菇单核体DAN3和M与其杂交双核体G1菌丝阶段基因表达差异的转录组初步分析

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食用菌学报 2016年第4期23卷 1-6,F0003页

作者：徐珍刘建雨张丹王瑞娟潘迎捷谭琦尚晓冬上海海洋大学食品学院上海201306 上海市农业科学院食用菌研究所农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心国家食用菌加工技术研发中心上海市农业遗传育种重点开放实验室上海201403

以金针菇(Flammulinavelutipes)单核菌株DAN3的基因组为参考,完成单核体DAN3和M及其杂交双核体G1在菌丝阶段的转录组测序与数据分析,比较两个样本间的差异基因,并对差异基因进行GO功能分析和KEGG pathway分析。结果表明:两个样本中共有... 详细信息

以金针菇(Flammulinavelutipes)单核菌株DAN3的基因组为参考,完成单核体DAN3和M及其杂交双核体G1在菌丝阶段的转录组测序与数据分析,比较两个样本间的差异基因,并对差异基因进行GO功能分析和KEGG pathway分析。结果表明:两个样本中共有显著性差异表达的基因86个,其中,在G1中呈上调、下调表达的基因数分别为41、45个,有2个基因在G1中特异表达。GO功能分析结果表明,86个差异基因中有40个基因比对上了GO功能注释,其中18个基因在G1中呈上调表达;单一生物过程和催化活性为显著性富集的功能,相关基因在G1中呈上调表达。KEGG pathway分析结果表明,22个差异基因被定位到17条Pathway,其中10个基因在G1中呈上调表达,包括赖氨酸代谢途径对应基因,3_M和G1菌丝样品中赖氨酸含量分别为1.70×103 ng/mg和1.06×103 ng/mg,说明G1中上调的基因可能与之降解相关;DNA复制是显著性富集的代谢途径,相关基因在G1中呈下调表达。

关键词：菌丝转录组差异表达基因 GO功能分析 KEGG pathway分析

铁、锌、钙离子在三种食用菌菌丝体中的富集及对其生长的影响

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食用菌学报 2017年第2期24卷 27-33页

作者：杨慧张美彦宋春艳刘建雨徐珍尚晓冬上海市农业科学院食用菌研究所农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心国家食用菌加工技术研发分中心上海市农业遗传育种重点开放实验室上海201403

采用PDA平板和PDB液体摇瓶培养方法,比较了铁、锌和钙离子在香菇(Lentinula edodes)、金针菇(Flammulina velutipes)和刺芹侧耳(Pleurotus eryngii)菌丝体中的富集及对其生长的影响。结果表明:铁、锌和钙离子可以在香菇、金针菇和刺芹... 详细信息

采用PDA平板和PDB液体摇瓶培养方法,比较了铁、锌和钙离子在香菇(Lentinula edodes)、金针菇(Flammulina velutipes)和刺芹侧耳(Pleurotus eryngii)菌丝体中的富集及对其生长的影响。结果表明:铁、锌和钙离子可以在香菇、金针菇和刺芹侧耳菌丝中富集。实验范围内,铁离子促进香菇和金针菇生长的浓度均为5.6~28.0 mg/kg,当浓度超过279.3、279.3、28.0 mg/kg时抑制香菇、金针菇和刺芹侧耳菌丝生长。锌离子促进香菇生长的浓度为3.3~6.0mg/kg,当浓度超过653.8、327.0、327.0mg/kg时抑制香菇、金针菇和刺芹侧耳菌丝生长。钙离子浓度超过1721.7、8608.5、8608.5mg/L时抑制香菇、金针菇和刺芹侧耳生长。

关键词：矿物质元素菌丝生长富集

基于金针菇全基因组的赖氨酸合成途径关键酶分析

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微生物学通报 2016年第10期43卷 2225-2233页

作者：刘建雨王瑞娟张丹尚晓冬谭琦上海市农业科学院食用菌研究所农业部应用真菌资源与利用重点开放实验室国家食用菌工程技术研究中心上海市农业遗传育种重点实验室上海201403

【目的】以金针菇全基因组测序数据为基础研究其L-赖氨酸的从头合成途径及其关键基因。【方法】采用Illumina Hiseq2000和Roche454 FLX+两种方法完成金针菇单孢菌株Dan3的基因组测序,基于全基因组序列筛选金针菇中赖氨酸生物合成的关键... 详细信息

【目的】以金针菇全基因组测序数据为基础研究其L-赖氨酸的从头合成途径及其关键基因。【方法】采用Illumina Hiseq2000和Roche454 FLX+两种方法完成金针菇单孢菌株Dan3的基因组测序,基于全基因组序列筛选金针菇中赖氨酸生物合成的关键基因,并分析这些基因编码的蛋白质基本理化性质;预测其亚细胞定位情况及蛋白的二级结构。【结果】金针菇Dan3全基因组序列长度为34.17 Mb,预测到8个参与α-氨基己二酸途径的关键基因,这些基因都含有多个内含子和外显子,二级结构主要由α-螺旋和无规则卷曲组成,有3个蛋白定位于线粒体。【结论】金针菇是通过α-氨基己二酸途径合成赖氨酸,基因组中预测到与该途径相关的几乎所有的酶。

关键词：金针菇赖氨酸生物合成 α-氨基己二酸途径

金针菇Fvpal1基因的RNAi降低PAL酶活及菌丝色素分泌

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菌物学报 2024年

作者：陆欢沈玲刘建雨尚晓冬王瑞娟谭琦唐桂容上海市农业科学院食用菌研究所农业农村部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心上海市农业遗传育种重点实验室上海海洋大学食品学院

本研究构建了金针菇Flammulina filiformis苯丙氨酸解氨酶基因1 （F. filiformis PAL gene1，Fvpal1）的RNAi载体，以黄色的单核体菌株0990-⑤为受体，通过遗传转化获得5个基因沉默的单核转化子（RNAi-Fvpal1 1-5）。5个单核转化子再分... 详细信息

本研究构建了金针菇Flammulina filiformis苯丙氨酸解氨酶基因1 （F. filiformis PAL gene1，Fvpal1）的RNAi载体，以黄色的单核体菌株0990-⑤为受体，通过遗传转化获得5个基因沉默的单核转化子（RNAi-Fvpal1 1-5）。5个单核转化子再分别与白色单核体菌株Dan3进行杂交，获得5个基因沉默的双核转化子（ZRNAi-Fvpal1 1-5）。考察并分析了单核转化子和双核转化子在PDA培养基上的菌丝生长速度、菌丝的PAL酶活、菌丝在培养基上的色素分泌及Fvpal1基因表达量情况，以验证Fvpal1基因具有调控金针菇颜色的功能。结果显示，10个转化子的Fvpal1基因表达较野生菌株相比都显著下调（p<0.05），其中转化子RNAi-Fvpal1 1–5分别下调83.41%、75.92%、79.69%、66.49%和43.22%，转化子ZRNAi-Fvpal1 1–5分别下调80.26%、45.24%、34.09%、84.05%和79.62%；除转化子ZRNAi-Fvpal1 3外的9个转化子的PAL酶活力都显著低于出发菌株（p<0.05）。10个转化子的菌丝在PDA培养基上的色素分泌都比出发菌株浅，双核转化子的菌丝在木屑培养基中的颜色也显著变浅，以及双核转化子的子实体颜色也比出发菌株浅。本研究构建了金针菇Fvpal1基因的RNAi体系，发现该基因对金针菇菌丝和子实体的颜色具有正调控作用，为进一步开展金针菇Fvpal1基因的功能基因研究提供了数据支撑。

关键词：金针菇 Fvpal1基因 RNA干扰颜色

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农杆菌介导法转化金针菇不同受体的效率比较

食用菌学报 2015年第3期22卷 7-12页

作者：刘建雨徐珍张丹王瑞娟谭琦尚晓冬上海市农业科学院食用菌研究所农业部应用真菌资源与利用重点开放实验室国家食用菌工程技术研究中心上海市农业遗传育种重点开放实验室上海201403

以金针菇(Flammulina velutipes)单核体菌株Dan3和双核体菌株G1的菌丝碎片以及原生质体分别为转化受体,根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)LBA4404为侵染菌株,潮霉素为筛选标记,绿色荧光蛋白编码基因(egfp)为外源基因,进行农杆菌介... 详细信息

以金针菇(Flammulina velutipes)单核体菌株Dan3和双核体菌株G1的菌丝碎片以及原生质体分别为转化受体,根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)LBA4404为侵染菌株,潮霉素为筛选标记,绿色荧光蛋白编码基因(egfp)为外源基因,进行农杆菌介导转化金针菇。结果显示:金针菇双核体菌株G1的菌丝碎片作为受体时转化效率最高,为40.31%;单核体菌株Dan3的原生质体作为受体时转化效率最低,为21.87%。

关键词：金针菇农杆菌介导转化转化效率阳性转化子

红花bHLH转录因子基因的克隆、表达分析及植物表达载体构建

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中国中药杂志 2019年第2期44卷 278-282页

作者：姚娜刘建雨田媛媛董园园刘秀明李海燕吉林农业大学生命科学学院吉林长春130118 吉林农业大学生物反应器与药物开发教育部工程研究中心吉林长春130118

克隆红花花瓣中bHLH(basic helix-loop-helix)基因,研究其在红花不同开花时期花瓣中的表达量并构建其植物表达载体。利用红花基因组测序结果中富集到的bHLH家族中的基因CtbHLH1的开放阅读框,设计特异性引物进行PCR扩增。利用RT-PCR法分... 详细信息

克隆红花花瓣中bHLH(basic helix-loop-helix)基因,研究其在红花不同开花时期花瓣中的表达量并构建其植物表达载体。利用红花基因组测序结果中富集到的bHLH家族中的基因CtbHLH1的开放阅读框,设计特异性引物进行PCR扩增。利用RT-PCR法分析在红花不同开花时期花瓣中bHLH1基因的表达量,同时构建植物表达载体p BASTA-bHLH1。获得bHLH1基因全长897 bp,编码298个氨基酸。红花bHLH1与其他物种氨基酸具有一定的同源性,其与烟草的氨基酸序列相似性最高。实时荧光定量PCR分析表明,CtbHLH1基因在红花不同组织及不同开花时期的花瓣中表达水平具有显著差异,其在花瓣中表达量高,开花第3天表达量最高,末花期表达量低。另外其在根中有表达,在茎、叶中表达量极低。该研究成功地对bHLH1基因进行克隆及表达分析,并构建植物表达载体p BASTA-bHLH1。

关键词：红花 bHLH基因类黄酮表达分析植物表达载体

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单孢杂交选育金针菇新品种‘上研1820’

菌物学报 2023年第2期42卷 597-608页

作者：王瑞娟陆欢徐珍宋春艳谭琦刘建雨尚晓冬上海市农业科学院食用菌研究所、农业农村部应用真菌资源与利用重点开放实验室、囯家食用菌工程技术研究中心、上海市农业遗传育种重点实验室上海201403

本研究以收集的105份金针菇种质资源经遗传性分析后,选出‘上研1号’与‘0747’菌株作为亲本,采用单孢杂交技术共得到168个杂交菌株。经实验室初筛和工厂化小中试复筛,最终获得产量高、出芽整齐和商品性状优良的金针菇新品种‘上研1820... 详细信息

本研究以收集的105份金针菇种质资源经遗传性分析后,选出‘上研1号’与‘0747’菌株作为亲本,采用单孢杂交技术共得到168个杂交菌株。经实验室初筛和工厂化小中试复筛,最终获得产量高、出芽整齐和商品性状优良的金针菇新品种‘上研1820’。该品种为浅黄色,菌盖呈球形,菌柄基部颜色加深不显著,子实体干品氨基酸总含量为1.82×10^(4)mg/kg。工厂化栽培条件下,菌丝最适培养温度为20℃,子实体生长发育温度为5–15℃,瓶栽菌丝培养周期为22d,子实体生育时间为25d,平均单瓶产量为314.3g/瓶。研究结果表明,利用分子标记技术和传统选育手段,可有效提高育种效率,对筛选出具有遗传性状稳定、商品性状优良和适用于工厂化栽培等特性的目标菌株具有重要的理论指导意义。

关键词：金针菇品种选育单孢杂交

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金针菇原生质体杂交菌株游离氨基酸多样性

食品与机械 2023年第8期39卷 25-33,41页

作者：陆欢刘建雨尚晓冬杨慧吴燕莎王瑞娟上海市农业科学院食用菌研究所上海201403 农业部应用真菌资源与利用重点开放实验室上海201403 国家食用菌工程技术研究中心上海201403 上海市农业遗传育种重点实验室上海201403

目的:了解不同杂交金针菇品种间的品质差异,选育高品质金针菇新品种。方法:以黄色金针菇Fv1923两个不同原生质体单核为亲本之一,分别与6个(2个黄色、4个白色)金针菇原生质体进行单单杂交,共获得12个黄色杂交菌株。利用主成分分析和聚类... 详细信息

目的:了解不同杂交金针菇品种间的品质差异,选育高品质金针菇新品种。方法:以黄色金针菇Fv1923两个不同原生质体单核为亲本之一,分别与6个(2个黄色、4个白色)金针菇原生质体进行单单杂交,共获得12个黄色杂交菌株。利用主成分分析和聚类分析等方法对12个杂交菌株的游离氨基酸进行了综合评价,同时评价了不同原生质体杂交菌株呈味多样性。结果:12个杂交菌株中必需氨基酸、非必需氨基酸和总氨基酸平均含量分别为7.71,22.83,30.54 mg/g;甲硫氨酸是菌株F1、F11、F15、F16、F21、F29、F39、F41和F42的第一限制性氨基酸。12个杂交菌株中所含的氨基酸组分之间相关性较强,4个主成分累计方差贡献率为87.15%,较好地反映出杂交菌株中氨基酸的综合信息,综合得分排列前二的品种均为上研1820和Fv1923的杂交菌株。聚类分析将12个杂交菌株分为6类,与主成分分析结果较为一致,较好地反映出不同杂交菌株中游离氨基酸的品种差异性。结论:以不同原生质体单核体作为亲本选育的杂交后代在游离氨基酸组分和含量上存在显著差异。

关键词：金针菇原生质体杂交氨基酸组成营养评价

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地下油库地面工程边坡治理施工

石油化工建设 2023年第S1期45卷 503-504页

作者：黄继兵刘建雨高忠绪中国石油天然气第七建设有限公司山东青岛266061

某国家石油储备洞库项目地面工程挖方区采用坡率法进行放坡,结合锚杆(锚索)格构、人字形骨架、抗滑桩、挡土墙及截排水相结合和方式进行治理,填方区采用重力式挡土墙、俯斜式挡墙及扶壁式挡墙进行支护,成功完成了地面工程边坡治理施工... 详细信息

某国家石油储备洞库项目地面工程挖方区采用坡率法进行放坡,结合锚杆(锚索)格构、人字形骨架、抗滑桩、挡土墙及截排水相结合和方式进行治理,填方区采用重力式挡土墙、俯斜式挡墙及扶壁式挡墙进行支护,成功完成了地面工程边坡治理施工。本文详细介绍了地下油库地面工程边坡治理的关键技术。

关键词：地下洞库边坡治理锚杆(锚索)格构人字形骨架抗滑桩挡土墙