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应用重组痘苗病毒发展活疫苗的前景

中国生物制品学杂志 1990年第1期3卷 1-9页

作者：朱既明刘庚起谷淑燕宇文镐阮力徐水婵中国预防医学科学院病毒学研究所

痘苗病毒曾被用于消灭天花。近年来,由丁分子病毒学和基因工程技术的进展,痘苗病毒作为表达外源基因的载体,又重新受到科学界的注意。在实际工作中,重组痘苗病毒可被用作体外或体内表达载体:前者系在细胞培养中表达所需产物,经提纯后用... 详细信息

痘苗病毒曾被用于消灭天花。近年来,由丁分子病毒学和基因工程技术的进展,痘苗病毒作为表达外源基因的载体,又重新受到科学界的注意。在实际工作中,重组痘苗病毒可被用作体外或体内表达载体:前者系在细胞培养中表达所需产物,经提纯后用于医学目的。与其他表达系统相比。

关键词：重组痘苗病毒活疫苗基因重组分子病毒学体内表达免疫原性外源基因启动子细胞培养中和抗体

以β-半乳糖苷酶为标记选出高效表达乙型肝炎病毒表面抗原的天坛株重组痘苗病毒

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中国科学（B辑） 1989年第6期 627-634页

作者：刘庚起曹旭朱既明任贵方李红梅解燕乡彭薇中国预防医学科学院病毒学研究所

我们从天坛株痘苗病毒的基因组中,分离编码11K及25K蛋白的双向转录启动子,以胸苦激酶(TK)基因为旁侧序列,插入到质粒pAT153中,构建成可以同时表达两个外源基因的载体质粒,并将乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)基因及大肠杆菌的β-半乳糖苦酶... 详细信息

我们从天坛株痘苗病毒的基因组中,分离编码11K及25K蛋白的双向转录启动子,以胸苦激酶(TK)基因为旁侧序列,插入到质粒pAT153中,构建成可以同时表达两个外源基因的载体质粒,并将乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)基因及大肠杆菌的β-半乳糖苦酶(LacZ)基因,插入该载体质粒,使它们分别在11K及25K启动子钠控制下,构建成共表达质粒。用钙沉淀法将此质粒DNA同天坛株痘苗病毒在细胞内进行同源重组,在含X-gal的培养基挑蓝色蚀斑,简便、准确地选出重组痘苗病毒。所选到的重组痘苗病毒高效表达了HBsAg。我们还把上述重组痘苗病毒接种动物,观察了它们的毒力及免疫原性。

关键词：半乳糖苷酶乙型肝炎病毒表面抗原痘苗

SELECTION OF RECOMBINANT VACCINIA VIRUSES (TIAN TAN STRAIN) EXPRESSING HEPATITIS B VIRUS SURFACE ANTIGEN BY USING β-GALACTOSIDASE AS A MARKER*

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Science China Chemistry 1990年第2期33卷 188-197页

作者：刘庚起曹旭朱既明任贵方李红梅解燕乡彭薇 Institute of Virology Chinese Academy of Preventive Medicine Beijing 100052 PRC

We constructed a plasmid that contains a small piece of DNA with two vaccinis promoters running in opposite directions——a promoter from a late gene encoding an 11 K polypeptide (P11) and a promoter from an early gene encoding 25K(P25). These promoters were isolated from the Tian Tan strain of vaccinia virus and were flanked by the thymidine kinase (TK) sequence of the same virus. Genes encoding the hepatitis B virus surface antigen (HBsAg) and the Rscherichia coli β-galactosidase (LacZ) were inserted downstream of the 11 K and 25 K promoters respectively so that coexpression plasmids were constructed. Recombinant vaccinis Viruses were selected directly by picking blue plaques formed under overlaying agarose medium containing X-gal. HBsAg was expressed to high level by these recombinant viruses. These recombinant viruses showed reduced virulence on rabbit skin and induced anti-HBs after intrsdermal inoculation of rabbits.

关键词： recombinant vaccinia viruses hepatitis B β-galactosidase

含口蹄疫病毒O1K亚型VP1基因的重组痘苗病毒的构建及表达

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生物工程学报 1987年第3期 189-196+241页

作者：吴晓军李鹏莽克强刘庚起张永和中国科学院微生物研究所中国预防医学科学院病毒学研究所

本文报道了将欧洲流行的口蹄疫病毒OK亚型的主要表面抗原VP克隆插入痘苗病毒的TK基因中,并在动物细胞中表达。所用痘苗病毒载体为我国长期用于防治天花的痘苗病毒效果安全的天坛株,所用OK亚型VP克隆为Hofschneider,P.H.教授惠赠的pFMDV-... 详细信息

本文报道了将欧洲流行的口蹄疫病毒OK亚型的主要表面抗原VP克隆插入痘苗病毒的TK基因中,并在动物细胞中表达。所用痘苗病毒载体为我国长期用于防治天花的痘苗病毒效果安全的天坛株,所用OK亚型VP克隆为Hofschneider,P.H.教授惠赠的pFMDV-1034。首先将pFMDV-1034中的VP基因片段插入中间质粒pBCB06~*的BamHⅠ/HindⅢ位点,该质粒含痘苗病毒WR株的P启动子和多克隆位点,其两侧序列为TK基因(由D.Boyle博士赠)。或插入pBCB08的HindⅢ位点,该质粒与pBCB06~*之区别仅在于启动子为PL、多克隆位点种类不同。将杂合的中间质粒转化已由天坛株痘苗病毒TK~+侵染过的143BTK~-细胞,通过体内同源重组而获得有VP基因插入的重组痘苗病毒。在BUDR存在时不能侵染143B TK~-细胞的病毒可视为TK~-表型病毒即含VP基因的痘苗重组病毒,再经pFMDV-1034 BamHⅠ-HindⅢ片段为探针进行杂交确证。其中所得两株重组痘苗病毒V.V10344H、V.V 103408在143B TK~-细胞中繁殖并用ELISA方法测表达,其P/N值最高分别为9.50和8.21。

关键词： FMDV O1K亚型 VP1基因重组痘苗病毒

痘苗病毒DNA片段在大肠杆菌中类似启动子的功能

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病毒学报 1989年第4期5卷 327-333页

作者：曹旭刘庚起朱既明中国预防医学科学院病毒学研究所

我们在利用β-半乳糖苷酶基因(Lac Z)作为选择重组痘苗病毒的标记的研究工作中,发现在痘苗病毒11kd和25kd蛋白的启动子下游,插入LacZ基因并构建成表达质粒后,用其转染大肠杆菌,能在含X-gal的琼脂培养基上,产生蓝色细菌菌落。11kd与25kd... 详细信息

我们在利用β-半乳糖苷酶基因(Lac Z)作为选择重组痘苗病毒的标记的研究工作中,发现在痘苗病毒11kd和25kd蛋白的启动子下游,插入LacZ基因并构建成表达质粒后,用其转染大肠杆菌,能在含X-gal的琼脂培养基上,产生蓝色细菌菌落。11kd与25kd痘苗启动子片段在大肠杆菌内,与在重组痘苗病毒中表达β-半乳糖苷酶的相对水平并不平行。在痘苗病毒DNA的F片段的几个不同内切酶位点上插入Lac Z,也获得了不同强度的单向或双向表达。这些结果表明,某些痘苗DNA片段可以在大肠杆菌中起到启动子作用。对此现象的可能本质和进一步研究的建议进行了讨论。

关键词：痘苗病毒启动子大肠杆菌

一种抗流感病毒药物筛选方法——流感病毒繁殖抑制试验

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中华医学杂志 1981年第6期61卷 359-361页

作者：陶三菊刘庚起杨冬荣朱既明中国医学科学院病毒学研究所

本文介绍小白鼠流感病毒繁殖抑制试验方法,并就其敏感性与小白鼠保护试验比较。通过观察口服干扰素诱生剂梯洛龙和金刚烷胺的抗流感效果,表明小白鼠繁殖抑制试验较保护试验敏感。对其可能原因进行了探讨。同时对本法的优缺点进行了讨论。

关键词：抗病毒药药物评价临床前正黏病毒科

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甲型流感病毒H1和H2之间的抗原关系

中国科学 1980年第3期 300-306页

作者：刘庚起龚新昌朱既明任贵方范瑞莲阮薇琴中国医学科学院病毒学研究所

应用已经证明其纯度的纯化病毒株和鸡及地鼠两种免疫血清.用血凝抑制、单扩溶血,株特异性补体结合和中和试验等方法,证明甲型流感病毒H1N1末期的变种（Dutch/56）和H2N2之间确实存在血清学交叉反应.这种交叉反应用早期H1N1变种不能测出.... 详细信息

应用已经证明其纯度的纯化病毒株和鸡及地鼠两种免疫血清.用血凝抑制、单扩溶血,株特异性补体结合和中和试验等方法,证明甲型流感病毒H1N1末期的变种（Dutch/56）和H2N2之间确实存在血清学交叉反应.这种交叉反应用早期H1N1变种不能测出.自1957—1966年分离的H2N2变种与末期H1N1变种都有血清学交叉,但交叉反应滴度逐渐下降.至1967年末分离的最后的H2H2变种则完全消失.以单特异性免疫血清或以重组株制备的抗原进行分析,结果表明末期H1N1和H2N2的血凝素之间存在着抗原关系,而它们的神经氨酸酶则完全不同.对以上的抗原关系,结合H1N1末期病毒感染后恢复的病人对H2N2有部分保护的流行病学观察.以及H2N2病毒起源的重组理论.进行了讨论.

关键词：病毒株免疫血清 H1 H2 中和试验甲型流感病毒溶血试验抗原

世界卫生组织讨论重组痘苗病毒用作活疫苗的结论和建议

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病毒学报 1985年第3期4卷 216-216页

作者：刘庚起

1984年11月中旬世界卫生组织(WHO)召开了一个非正式会议,讨论了有关基因重组痘苗病毒作为人和兽用活疫苗的问题。会议着重研究了这种疫苗的设计、优缺点、进一步研究的必要性及WHO在协调和赞助活动方面应起的作用,与会者认为,下述几个... 详细信息

1984年11月中旬世界卫生组织(WHO)召开了一个非正式会议,讨论了有关基因重组痘苗病毒作为人和兽用活疫苗的问题。会议着重研究了这种疫苗的设计、优缺点、进一步研究的必要性及WHO在协调和赞助活动方面应起的作用,与会者认为,下述几个方面应继续进行研究: 一、对疫苗效果要做进一步的分子水平的研究。重组痘苗病毒作为疫苗的效果。

关键词：重组痘苗病毒世界卫生组织联合国专门机构疫苗菌苗

关于重组痘苗病毒作为疫苗抗原活病毒载体讨论会简况

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病毒学报 1985年第3期4卷 209-209页

作者：刘庚起

1984年11月13～14日,美国公共卫生局,世界卫生组织(WHO)和伦敦国立生物制品检定所举办一次科学讨论会,讨论了有关应用基因重组的痘苗病毒作为人和兽用活疫苗的研究进展,现将会议情况简介如下。用作预防天花的不同疫苗病毒株,代表了不同... 详细信息

1984年11月13～14日,美国公共卫生局,世界卫生组织(WHO)和伦敦国立生物制品检定所举办一次科学讨论会,讨论了有关应用基因重组的痘苗病毒作为人和兽用活疫苗的研究进展,现将会议情况简介如下。用作预防天花的不同疫苗病毒株,代表了不同的,但有内在联系的病毒组。

关键词：重组痘苗病毒狂犬病毒感染疫苗菌苗