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Stemphylium eturmiunum STE2和STE3基因调控性别发育过程及相关互作基因的研究

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Stemphylium eturmiunum STE2和STE3基因调控性别发育过程及相关...

中国菌物学会2018年学术年会

作者：王群刘小缦万能张修国山东农业大学

丝状子囊真菌中信息素受体基因（STE2和STE3）对性细胞识别、交配及交配后活动具有关键调控作用,可激活真菌异型细胞的有性生殖过程（Mayrhofer et al. 2006）。信息素受体与信息素前体相互识别,特异性结合,诱发下游基因的表达,启动交... 详细信息

丝状子囊真菌中信息素受体基因（STE2和STE3）对性细胞识别、交配及交配后活动具有关键调控作用,可激活真菌异型细胞的有性生殖过程（Mayrhofer et al. 2006）。信息素受体与信息素前体相互识别,特异性结合,诱发下游基因的表达,启动交配信号,使真菌营养生长停滞,生殖过程开启（Kim et al.2012）。由于匍柄霉属是经济作物重要的致病菌（Farr et al. 1989）,且新西兰匍柄霉（Stemphylium eturmiunum）为匍柄霉属中少有的易产生有性特征的菌株,所以我们选取其为实验材料,主要研究内容包括根据已报道的信息素受体基因信息,结合软件分析找到新西兰匍柄霉全基因组中的信息素受体基因;并通过基因敲除和回补技术、根癌农杆菌介导的遗传转化系统,获得STE2和STE3的敲除及回补转化子。将野生型菌株,敲除转化子和回补转化子同时在有利于产生有性态的条件下诱导,发现STE2和STE3敲除转化子不能形成成熟的子囊壳及子囊孢子,菌丝的生长较野生型的缓慢。介于两个单敲除突变体性状变化明显,我们将野生型菌丝时期、有性态时期及两个单敲除转化子进行RNA-seq分析,比对DEG基因,找到10个重点想研究的基因。通过基因沉默和qRT-PCR验证,得到沉默转化子,均有明显表型变化。接下来利用膜酵母双杂DUALmembrane系统,对10个基因进行与信息素受体STE2和STE3的互作检测,发现糖苷水解酶家族32蛋白、128蛋白、热激蛋白、热休克蛋白42、漆酶、细胞凋亡诱导因子可能与信息素受体STE2相互作用。再利用Pull-Down进行蛋白水平检测,进一步发现糖苷水解酶家族32蛋白、128蛋白、细胞凋亡诱导因子与STE2相互作用。接下来将可能互作的基因构建载体,进行Co-IP体内。争取确定参与信息素受体基因控制丝状子囊真菌无性生长和有性生殖过程的基因,理清MAPK通路,试图阐明信息素受体对无性生长及有性进化影响的作用机制。

关键词：新西兰匍柄霉信息素受体基因转录组有性发育

新西兰匍柄霉（Stemphylium eturmiunum）组蛋白分子伴侣ASF1调控有性发育的功能研究

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新西兰匍柄霉（Stemphylium eturmiunum）组蛋白分子伴侣ASF1调控...

多彩菌物美丽中国——中国菌物学会2019年学术年会

作者：王石高素素刘小缦张修国山东农业大学植物保护学院

新西兰匍柄霉（Stemphylium eturmiunum）是一种重要的丝状真菌,是能够进行有性生殖的少数匍柄霉属真菌之一。前人研究表明,asf1在DNA复制、DNA损伤修复和基因转录激活等生物学过程具有重要作用。然而关于asf1在生物发育方面的功能还鲜... 详细信息

新西兰匍柄霉（Stemphylium eturmiunum）是一种重要的丝状真菌,是能够进行有性生殖的少数匍柄霉属真菌之一。前人研究表明,asf1在DNA复制、DNA损伤修复和基因转录激活等生物学过程具有重要作用。然而关于asf1在生物发育方面的功能还鲜有报道。（1）本研究通过农杆菌介导的遗传转化方法将asf1基因从新西兰匍柄霉野生型基因组中敲除,得到asf1基因的缺失突变体,并对突变体进行了回补实验,获得asf1基因的回补转化子;asf1缺失突变体表型发生变化,asf1基因的回补转化子的表型基本与野生型一致。（2）为了验证asf1基因功能的保守性,将asf1基因转入大孢粪壳菌（Sordaria macrospora）asf1基因缺失突变体中,并获得asf1基因异源转化子,转化子表现出有性型特征,与野生型表型一致。（3）对匍柄霉野生型和asf1基因缺失突变体的转录组进行测序并分析,并初步界定了6个关键调控基因,分别为04320（脯氨酸脱氢酶）、10206（尿囊酸透性酶）、01950（热激蛋白）、03521（GTP结合蛋白gtr1）、10302（胆碱脱氢酶）和02026（转录调控因子）。将这6个关键调控基因沉默,得到单基因的沉默突变体,突变体表型发生变化。（4）对初步界定的6个关键调控基因,与ASF1、组蛋白H3和H4酵母双杂交实验和pull down实验,最后获得ASF1互作蛋白02026（转录调控因子）、03521（GTP结合蛋白gtr1）,组蛋白H4互作蛋白02026（转录调控因子）、04320（脯氨酸脱氢酶）、03521（GTP结合蛋白gtr1）、10302（胆碱脱氢酶）、01950（热激蛋白）。为了确定ASF1、组蛋白H3和H4与6个基因的互作情况,本研究正在做CO-IP实验,做进一步互作验证。通过转录组分析界定6个关键调控基因对新西兰匍柄霉典型种有性或无性发育的调控作用,还需要深入研究。研究asf1基因通过介导组蛋白的组装与解凝对其它基因的表达进行调控,进而对新西兰匍柄霉的有性及无性发育产生非常重要的影响,为深入研究匍柄霉属真菌的有性及无性发育提供了理论指导。

关键词：新西兰匍柄霉 asf1 转录组分析组蛋白H4 有性发育

分裂泛素化酵母双杂交系统研究信息素因子STE2蛋白相互作用

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山东农业大学学报（自然科学版） 2019年第1期50卷 35-39页

作者：刘小缦王群王石高素素王晓梅吉林农业大学农学院吉林长春130118 山东农业大学植物保护学院山东省蔬菜病虫生物学省级重点实验室山东泰安271018

真菌的进化、分化及有性发育趋势受若干性别基因的调控,如交配型、信息素因子及异源三聚体G-蛋白ɑ-亚基基因等;同时,信息素因子调控真菌的有性生殖在酿酒酵母中也得到充分研究。匍柄霉属(Stemphylium)是丝状子囊真菌中的一类重要真菌类... 详细信息

真菌的进化、分化及有性发育趋势受若干性别基因的调控,如交配型、信息素因子及异源三聚体G-蛋白ɑ-亚基基因等;同时,信息素因子调控真菌的有性生殖在酿酒酵母中也得到充分研究。匍柄霉属(Stemphylium)是丝状子囊真菌中的一类重要真菌类群,许多丝状子囊真菌属、种中含有信息素因子。在自然界中,匍柄霉属真菌大多数是以无性态的形式存在,但其中也有一小部分存在有性生殖阶段。为了深入研究信息素受体STE2及其相关基因对匍柄霉属典型种有性生殖的影响,本研究选取含有信息素因子STE2的匍柄霉属典型种Stemphylium eturmiunum为试验材料,克隆鉴定了信息素受体STE2,然后将其构建至诱饵蛋白表达载体上,并在cDNA文库初筛得到数个疑似互作蛋白片段基础上,克隆其基因全长构建至靶蛋白表达载体上,并利用分裂泛素化的膜酵母双杂交系统,进行一对一验证筛选STE2的相关互作蛋白。该研究筛选出的互作蛋白结果为后期的CO-IP、Poll-Down实验提供了基础。

关键词：信息素因子STE2 匍柄霉属分裂泛素酵母双杂交互作蛋白

Stemphylium eturmiunum STE2和STE3基因调控有性发育过程及相关互作基因的研究

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Stemphylium eturmiunum STE2和STE3基因调控有性发育过程及相关...

中国菌物学会第七届全国会员代表大会暨2017年学术年会

作者：王群王石刘小缦高素素张修国山东农业大学

丝状子囊真菌含信息素前体基因和信息素受体基因（pheromones and pheromone receptors）,该类基因分别包括两个信息素前体基因（a和α）和两个信息素受体基因（STE2和STE3）,其中信息素受体基因对性细胞识别、交配及交配后活动具有关... 详细信息

丝状子囊真菌含信息素前体基因和信息素受体基因（pheromones and pheromone receptors）,该类基因分别包括两个信息素前体基因（a和α）和两个信息素受体基因（STE2和STE3）,其中信息素受体基因对性细胞识别、交配及交配后活动具有关键调控作用,可激活真菌异型细胞的有性生殖过程。信息素受体与信息素前体相互识别,特异性结合,诱发下游基因的表达,启动交配信号,使真菌营养生长停滞,生殖过程开启。我们是以新西兰匍柄霉（Stemphylium eturmiunum）为实验材料（现保存于山东农业大学真菌及真菌资源利用研究室）,主要研究内容包括根据已报道的信息素受体基因信息,结合软件分析找到新西兰匍柄霉全基因组中的信息素受体基因;并通过设计引物分别扩增获得STE2和STE3的左右侧翼序列,进而构建信息素受体基因的敲除载体;通过Overlap PCR克隆去除内含子的STE2和STE3基因,用于构建回补载体。通过建立根癌农杆菌介导的遗传转化系统,获得各自的敲除及回补转化子。将野生型菌株,敲除转化子和回补转化子同时在有利于产生有性态的条件下诱导,发现STE2敲除转化子不能形成成熟的子囊壳及子囊孢子,菌丝的生长较野生型的缓慢,菌丝无分隔,分叉增多且畸形,分生孢子基本不产生,DAPI染色显示野生型菌丝及子囊孢子细胞核分布均匀,STE2敲除转化子菌丝细胞核数量较少,分布不均;而STE3基因敲除转化子菌丝分叉增多且畸形,分生孢子产生数量显著增多,仅能形成发育不良的子囊壳及数量减少的子囊孢子,DAPI染色显示STE3敲除转化子菌丝中细胞核数量较少,均匀分散,子囊孢子中细胞核数量明显减少,分布不均。两基因的回补转化子分别带有GFP和RFP标签,用于定位和Western blot实验。介于两个单敲除突变体性状变化明显,我们将两个野生型菌丝时期、有性态时期及两个单敲除转化子分别提取RNA送样测转录组,并分析转录,结果显示:WT菌丝时期与STE2敲除转化子样本间差异表达基因总量为2513个,其中上调1724个,下调789个;WT有性态时期与STE2敲除转化子样本间差异表达基因总量为2890个,其中上调1650个,下调1240个;WT菌丝时期与STE3敲除转化子样本间差异表达基因总量为1804个,其中上调1115个,下调689个;WT有性态时期与STE3敲除转化子样本间差异表达基因总量为3369个,其中上调1657个,下调1712个;WT有性态时期与WT菌丝时期样本间差异表达基因总量为3158个,其中上调1348个,下调1810个。找到表达量变化很大的一些基因,即可能跟信息素受体基因调控有性发育相关途径可能互作的基因114个,重点想研究的基因10个:分别为2-信息素前体蛋白、糖苷水解酶家族18蛋白、糖苷水解酶家族32蛋白、糖苷水解酶家族128蛋白、漆酶、热休克蛋白42、细胞凋亡诱导因子2、多糖裂合酶家族3蛋白和两个未知蛋白,通过基因沉默和酵母双杂手段针对这些基因进行遗传学操作,争取理清信息素受体基因控制丝状子囊真菌有性生殖过程的一系列基因,试图阐明信息素受体对无性生长及有性进化影响的作用机制。新西兰匍柄霉信息素受体基因的敲除载体和回补载体的构建以及农杆菌介导的遗传转化系统的建立,为深入研究新西兰匍柄霉的其他基因打下良好基础。

关键词：新西兰匍柄霉信息素受体基因农杆菌介导的遗传转化转录组有性发育

氯虫苯甲酰胺对环境生物的急性毒性与安全性评价

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生态毒理学报 2022年第6期17卷 452-461页

作者：陈吉祥于伟丽王广友苏磊魏成彩李丽霞刘小缦吴培山东省农药科学研究院/山东省化学农药重点实验室济南250000

为明确氯虫苯甲酰胺(chlorantraniliprole)对环境生物的安全性,参照《化学农药环境安全评价试验准则》(GB/T 31270—2014)和《化学农药天敌(瓢虫)急性接触毒性试验准则》(NY/T 3088—2017),开展了70%氯虫苯甲酰胺水分散粒剂对6种环境生... 详细信息

为明确氯虫苯甲酰胺(chlorantraniliprole)对环境生物的安全性,参照《化学农药环境安全评价试验准则》(GB/T 31270—2014)和《化学农药天敌(瓢虫)急性接触毒性试验准则》(NY/T 3088—2017),开展了70%氯虫苯甲酰胺水分散粒剂对6种环境生物的急性毒性试验及安全性评价。结果表明,该药剂对日本鹌鹑急性经口毒性7 d-LD_(50)>2000 mg a.i.·kg^(-1)(以单位体质量计),低毒;对家蚕急性经口毒性4 d-LC_(50)为0.0588 mg a.i.·L^(-1),剧毒;对蚯蚓急性毒性14 d-LC_(50)>100 mg a.i.·kg^(-1)(以单位土壤干质量计),低毒;对蜜蜂经口和接触毒性2 d-LD_(50)分别为133μg a.i.·蜂^(-1)和77.3μg a.i.·蜂^(-1),低毒;对七星瓢虫急性接触毒性15 d-LR_(50)为37.3 g a.i.·hm^(-2),中风险;对斑马鱼急性毒性4 d-LC_(50)为10.2 mg a.i.·L^(-1),低毒。因此,氯虫苯甲酰胺对环境生物具有选择性,应避免在蚕室和桑园附近使用,同时避免在天敌昆虫繁育期使用。

关键词：氯虫苯甲酰胺环境生物毒性安全性

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丝孢真菌无性与有性进化分析

菌物研究 2017年第4期15卷 213-221,228页

作者：王群王石刘小缦高素素张修国山东农业大学植物保护学院泰安271018

绝大多数丝孢真菌属、种主要以无性型存在,但该类真菌绝大多数属、种含有若干调控有性分化、发育及进化的基因信息,如交配型、信息素及G-蛋白α-亚基基因等,胁迫环境诱导这些真菌有性基因有效表达乃至发育为有性型,一直倍受真菌学界的... 详细信息

绝大多数丝孢真菌属、种主要以无性型存在,但该类真菌绝大多数属、种含有若干调控有性分化、发育及进化的基因信息,如交配型、信息素及G-蛋白α-亚基基因等,胁迫环境诱导这些真菌有性基因有效表达乃至发育为有性型,一直倍受真菌学界的关注。文中系统介绍了丝孢真菌无性型与有性型属种分类研究现状、进化分析及性别调控基因,1)分析属、种三类有性基因的多样性、异型交配基因比率、系统发育关系及有性进化潜力与趋势;2)分析属、种不同有性基因调控特性胁迫环境适应性,界定靶标基因及适宜生态因子,结合地球生境演化特性,预测属、种自然演化性别变化动态;3)分析靶标基因调控生态,阐明两性种有性基因调控生态遗传机制。综上有望解析绝大多数丝孢真菌属、种主要为无性型的本质原因,丰富丝孢真菌分类研究的理论,为真菌分类研究提供科学依据。

关键词：丝孢真菌系统分类有性基因多样性生态遗传

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后现代媒介视域下微短剧的生成逻辑

中国广播电视学刊 2025年第01期 72-74+78页

作者：李晋林钟缦丽浙江传媒学院浙江省影视与戏剧研究中心浙江传媒学院华策电影学院

微短剧作为数智时代的影像流变新形态，在获得巨大产业效益的同时也改变了人们的娱乐消费习惯，重塑了文化传播的景观。本文立足后现代媒介背景，基于“媒介—文化”的双重视角，阐述了从传统范式迈向现代融合、由静态体验跃升至动态交... 详细信息

微短剧作为数智时代的影像流变新形态，在获得巨大产业效益的同时也改变了人们的娱乐消费习惯，重塑了文化传播的景观。本文立足后现代媒介背景，基于“媒介—文化”的双重视角，阐述了从传统范式迈向现代融合、由静态体验跃升至动态交互、从被动旁观进化为主动参与的媒介演进过程中，微短剧所形成的观剧模式、叙事手段、文化心理和内在动机，以及微短剧所塑造的影像消费新格局。

关键词：微短剧后现代媒介演进影像消费

锆基金属有机框架捕获黄连中的生物碱类药物活性成分

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分析测试学报 2025年第1期44卷 188-194页

作者：司甜甜赵薇王慧张红玉刘小烨容蓉冯娟娟山东中医药大学药学院济南大学化学化工学院

采用溶剂热法制备了锆基MOF-808，利用其结构优势实现了中药黄连中生物碱类药物活性成分的富集与捕获，并结合其结构特点探讨了其协同低共熔溶剂捕获生物碱类活性成分过程中的相互作用。通过优化孵育捕获等条件，对黄连粗提液中药根碱... 详细信息

采用溶剂热法制备了锆基MOF-808，利用其结构优势实现了中药黄连中生物碱类药物活性成分的富集与捕获，并结合其结构特点探讨了其协同低共熔溶剂捕获生物碱类活性成分过程中的相互作用。通过优化孵育捕获等条件，对黄连粗提液中药根碱的回收率达到85.78%，结合高效液相色谱技术建立了检测黄连粗提液中5种生物碱类活性成分的方法。方法的线性范围为0.1～300μg·L-1，检出限为0.02～0.05μg·L-1，相对标准偏差为0.40%～4.7%，加标回收率达到69.7%～128%。该研究实现了中药黄连中生物碱类活性成分的高效、快速富集与捕获，为MOFs材料在选择性捕获与富集中药有效成分等领域的研究提供了新思路。

关键词：金属有机框架选择性富集色谱分离生物碱活性成分黄连

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志愿服务参与能激发大学生创业吗

浙江学刊 2025年第1期 159-167页

作者：何伟臧小森中国社会科学院经济研究所中国社会科学院大学经济学院

培育和激发大学生的创业意愿，对于缓解就业压力、推动创新发展具有重要意义。本文基于2018年中国大学生追踪调查(PSCUS)的在校生数据及2019—2023年毕业生追踪数据，系统考察了志愿服务参与对大学生创业意愿和创业实践的影响及其作用... 详细信息

培育和激发大学生的创业意愿，对于缓解就业压力、推动创新发展具有重要意义。本文基于2018年中国大学生追踪调查(PSCUS)的在校生数据及2019—2023年毕业生追踪数据，系统考察了志愿服务参与对大学生创业意愿和创业实践的影响及其作用机制。实证研究发现：(1)志愿服务参与显著提高了大学生的创业意愿，这一结论在经过多种稳健性检验后依然成立；(2)志愿服务参与通过提升社会资本、心理资本和经济资本，实现对创业意愿的促进；(3)志愿服务参与对创业的影响存在显著的异质性，对女性、高年级以及人力资本状况较差和家庭经济困难的大学生群体，志愿服务的促进作用更为明显；(4)志愿服务参与具有显著的长期培育效应，不仅能提升创业意愿，还能影响毕业后的实际创业行为。上述发现为构建“志愿服务—创业教育”协同育人新模式、推动高校创新创业教育改革、缓解我国当前的大学生就业压力、促进国家创新创业高质量发展等，提供了重要启示。

关键词：志愿服务创业意愿创业资本大学生就业