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Stemphylium eturmiunum STE2和STE3基因调控性别发育过程及相关互作基因的研究

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Stemphylium eturmiunum STE2和STE3基因调控性别发育过程及相关...

中国菌物学会2018年学术年会

作者：王群刘小缦万能张修国山东农业大学

丝状子囊真菌中信息素受体基因（STE2和STE3）对性细胞识别、交配及交配后活动具有关键调控作用,可激活真菌异型细胞的有性生殖过程（Mayrhofer et al. 2006）。信息素受体与信息素前体相互识别,特异性结合,诱发下游基因的表达,启动交... 详细信息

丝状子囊真菌中信息素受体基因（STE2和STE3）对性细胞识别、交配及交配后活动具有关键调控作用,可激活真菌异型细胞的有性生殖过程（Mayrhofer et al. 2006）。信息素受体与信息素前体相互识别,特异性结合,诱发下游基因的表达,启动交配信号,使真菌营养生长停滞,生殖过程开启（Kim et al.2012）。由于匍柄霉属是经济作物重要的致病菌（Farr et al. 1989）,且新西兰匍柄霉（Stemphylium eturmiunum）为匍柄霉属中少有的易产生有性特征的菌株,所以我们选取其为实验材料,主要研究内容包括根据已报道的信息素受体基因信息,结合软件分析找到新西兰匍柄霉全基因组中的信息素受体基因;并通过基因敲除和回补技术、根癌农杆菌介导的遗传转化系统,获得STE2和STE3的敲除及回补转化子。将野生型菌株,敲除转化子和回补转化子同时在有利于产生有性态的条件下诱导,发现STE2和STE3敲除转化子不能形成成熟的子囊壳及子囊孢子,菌丝的生长较野生型的缓慢。介于两个单敲除突变体性状变化明显,我们将野生型菌丝时期、有性态时期及两个单敲除转化子进行RNA-seq分析,比对DEG基因,找到10个重点想研究的基因。通过基因沉默和qRT-PCR验证,得到沉默转化子,均有明显表型变化。接下来利用膜酵母双杂DUALmembrane系统,对10个基因进行与信息素受体STE2和STE3的互作检测,发现糖苷水解酶家族32蛋白、128蛋白、热激蛋白、热休克蛋白42、漆酶、细胞凋亡诱导因子可能与信息素受体STE2相互作用。再利用Pull-Down进行蛋白水平检测,进一步发现糖苷水解酶家族32蛋白、128蛋白、细胞凋亡诱导因子与STE2相互作用。接下来将可能互作的基因构建载体,进行Co-IP体内。争取确定参与信息素受体基因控制丝状子囊真菌无性生长和有性生殖过程的基因,理清MAPK通路,试图阐明信息素受体对无性生长及有性进化影响的作用机制。

关键词：新西兰匍柄霉信息素受体基因转录组有性发育

新西兰匍柄霉（Stemphylium eturmiunum）组蛋白分子伴侣ASF1调控有性发育的功能研究

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新西兰匍柄霉（Stemphylium eturmiunum）组蛋白分子伴侣ASF1调控...

多彩菌物美丽中国——中国菌物学会2019年学术年会

作者：王石高素素刘小缦张修国山东农业大学植物保护学院

新西兰匍柄霉（Stemphylium eturmiunum）是一种重要的丝状真菌,是能够进行有性生殖的少数匍柄霉属真菌之一。前人研究表明,asf1在DNA复制、DNA损伤修复和基因转录激活等生物学过程具有重要作用。然而关于asf1在生物发育方面的功能还鲜... 详细信息

新西兰匍柄霉（Stemphylium eturmiunum）是一种重要的丝状真菌,是能够进行有性生殖的少数匍柄霉属真菌之一。前人研究表明,asf1在DNA复制、DNA损伤修复和基因转录激活等生物学过程具有重要作用。然而关于asf1在生物发育方面的功能还鲜有报道。（1）本研究通过农杆菌介导的遗传转化方法将asf1基因从新西兰匍柄霉野生型基因组中敲除,得到asf1基因的缺失突变体,并对突变体进行了回补实验,获得asf1基因的回补转化子;asf1缺失突变体表型发生变化,asf1基因的回补转化子的表型基本与野生型一致。（2）为了验证asf1基因功能的保守性,将asf1基因转入大孢粪壳菌（Sordaria macrospora）asf1基因缺失突变体中,并获得asf1基因异源转化子,转化子表现出有性型特征,与野生型表型一致。（3）对匍柄霉野生型和asf1基因缺失突变体的转录组进行测序并分析,并初步界定了6个关键调控基因,分别为04320（脯氨酸脱氢酶）、10206（尿囊酸透性酶）、01950（热激蛋白）、03521（GTP结合蛋白gtr1）、10302（胆碱脱氢酶）和02026（转录调控因子）。将这6个关键调控基因沉默,得到单基因的沉默突变体,突变体表型发生变化。（4）对初步界定的6个关键调控基因,与ASF1、组蛋白H3和H4酵母双杂交实验和pull down实验,最后获得ASF1互作蛋白02026（转录调控因子）、03521（GTP结合蛋白gtr1）,组蛋白H4互作蛋白02026（转录调控因子）、04320（脯氨酸脱氢酶）、03521（GTP结合蛋白gtr1）、10302（胆碱脱氢酶）、01950（热激蛋白）。为了确定ASF1、组蛋白H3和H4与6个基因的互作情况,本研究正在做CO-IP实验,做进一步互作验证。通过转录组分析界定6个关键调控基因对新西兰匍柄霉典型种有性或无性发育的调控作用,还需要深入研究。研究asf1基因通过介导组蛋白的组装与解凝对其它基因的表达进行调控,进而对新西兰匍柄霉的有性及无性发育产生非常重要的影响,为深入研究匍柄霉属真菌的有性及无性发育提供了理论指导。

关键词：新西兰匍柄霉 asf1 转录组分析组蛋白H4 有性发育

分裂泛素化酵母双杂交系统研究信息素因子STE2蛋白相互作用

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山东农业大学学报（自然科学版） 2019年第1期50卷 35-39页

作者：刘小缦王群王石高素素王晓梅吉林农业大学农学院吉林长春130118 山东农业大学植物保护学院山东省蔬菜病虫生物学省级重点实验室山东泰安271018

真菌的进化、分化及有性发育趋势受若干性别基因的调控,如交配型、信息素因子及异源三聚体G-蛋白ɑ-亚基基因等;同时,信息素因子调控真菌的有性生殖在酿酒酵母中也得到充分研究。匍柄霉属(Stemphylium)是丝状子囊真菌中的一类重要真菌类... 详细信息

真菌的进化、分化及有性发育趋势受若干性别基因的调控,如交配型、信息素因子及异源三聚体G-蛋白ɑ-亚基基因等;同时,信息素因子调控真菌的有性生殖在酿酒酵母中也得到充分研究。匍柄霉属(Stemphylium)是丝状子囊真菌中的一类重要真菌类群,许多丝状子囊真菌属、种中含有信息素因子。在自然界中,匍柄霉属真菌大多数是以无性态的形式存在,但其中也有一小部分存在有性生殖阶段。为了深入研究信息素受体STE2及其相关基因对匍柄霉属典型种有性生殖的影响,本研究选取含有信息素因子STE2的匍柄霉属典型种Stemphylium eturmiunum为试验材料,克隆鉴定了信息素受体STE2,然后将其构建至诱饵蛋白表达载体上,并在cDNA文库初筛得到数个疑似互作蛋白片段基础上,克隆其基因全长构建至靶蛋白表达载体上,并利用分裂泛素化的膜酵母双杂交系统,进行一对一验证筛选STE2的相关互作蛋白。该研究筛选出的互作蛋白结果为后期的CO-IP、Poll-Down实验提供了基础。

关键词：信息素因子STE2 匍柄霉属分裂泛素酵母双杂交互作蛋白

Stemphylium eturmiunum STE2和STE3基因调控有性发育过程及相关互作基因的研究

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Stemphylium eturmiunum STE2和STE3基因调控有性发育过程及相关...

中国菌物学会第七届全国会员代表大会暨2017年学术年会

作者：王群王石刘小缦高素素张修国山东农业大学

丝状子囊真菌含信息素前体基因和信息素受体基因（pheromones and pheromone receptors）,该类基因分别包括两个信息素前体基因（a和α）和两个信息素受体基因（STE2和STE3）,其中信息素受体基因对性细胞识别、交配及交配后活动具有关... 详细信息

丝状子囊真菌含信息素前体基因和信息素受体基因（pheromones and pheromone receptors）,该类基因分别包括两个信息素前体基因（a和α）和两个信息素受体基因（STE2和STE3）,其中信息素受体基因对性细胞识别、交配及交配后活动具有关键调控作用,可激活真菌异型细胞的有性生殖过程。信息素受体与信息素前体相互识别,特异性结合,诱发下游基因的表达,启动交配信号,使真菌营养生长停滞,生殖过程开启。我们是以新西兰匍柄霉（Stemphylium eturmiunum）为实验材料（现保存于山东农业大学真菌及真菌资源利用研究室）,主要研究内容包括根据已报道的信息素受体基因信息,结合软件分析找到新西兰匍柄霉全基因组中的信息素受体基因;并通过设计引物分别扩增获得STE2和STE3的左右侧翼序列,进而构建信息素受体基因的敲除载体;通过Overlap PCR克隆去除内含子的STE2和STE3基因,用于构建回补载体。通过建立根癌农杆菌介导的遗传转化系统,获得各自的敲除及回补转化子。将野生型菌株,敲除转化子和回补转化子同时在有利于产生有性态的条件下诱导,发现STE2敲除转化子不能形成成熟的子囊壳及子囊孢子,菌丝的生长较野生型的缓慢,菌丝无分隔,分叉增多且畸形,分生孢子基本不产生,DAPI染色显示野生型菌丝及子囊孢子细胞核分布均匀,STE2敲除转化子菌丝细胞核数量较少,分布不均;而STE3基因敲除转化子菌丝分叉增多且畸形,分生孢子产生数量显著增多,仅能形成发育不良的子囊壳及数量减少的子囊孢子,DAPI染色显示STE3敲除转化子菌丝中细胞核数量较少,均匀分散,子囊孢子中细胞核数量明显减少,分布不均。两基因的回补转化子分别带有GFP和RFP标签,用于定位和Western blot实验。介于两个单敲除突变体性状变化明显,我们将两个野生型菌丝时期、有性态时期及两个单敲除转化子分别提取RNA送样测转录组,并分析转录,结果显示:WT菌丝时期与STE2敲除转化子样本间差异表达基因总量为2513个,其中上调1724个,下调789个;WT有性态时期与STE2敲除转化子样本间差异表达基因总量为2890个,其中上调1650个,下调1240个;WT菌丝时期与STE3敲除转化子样本间差异表达基因总量为1804个,其中上调1115个,下调689个;WT有性态时期与STE3敲除转化子样本间差异表达基因总量为3369个,其中上调1657个,下调1712个;WT有性态时期与WT菌丝时期样本间差异表达基因总量为3158个,其中上调1348个,下调1810个。找到表达量变化很大的一些基因,即可能跟信息素受体基因调控有性发育相关途径可能互作的基因114个,重点想研究的基因10个:分别为2-信息素前体蛋白、糖苷水解酶家族18蛋白、糖苷水解酶家族32蛋白、糖苷水解酶家族128蛋白、漆酶、热休克蛋白42、细胞凋亡诱导因子2、多糖裂合酶家族3蛋白和两个未知蛋白,通过基因沉默和酵母双杂手段针对这些基因进行遗传学操作,争取理清信息素受体基因控制丝状子囊真菌有性生殖过程的一系列基因,试图阐明信息素受体对无性生长及有性进化影响的作用机制。新西兰匍柄霉信息素受体基因的敲除载体和回补载体的构建以及农杆菌介导的遗传转化系统的建立,为深入研究新西兰匍柄霉的其他基因打下良好基础。

关键词：新西兰匍柄霉信息素受体基因农杆菌介导的遗传转化转录组有性发育

氯虫苯甲酰胺对环境生物的急性毒性与安全性评价

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生态毒理学报 2022年第6期17卷 452-461页

作者：陈吉祥于伟丽王广友苏磊魏成彩李丽霞刘小缦吴培山东省农药科学研究院/山东省化学农药重点实验室济南250000

为明确氯虫苯甲酰胺(chlorantraniliprole)对环境生物的安全性,参照《化学农药环境安全评价试验准则》(GB/T 31270—2014)和《化学农药天敌(瓢虫)急性接触毒性试验准则》(NY/T 3088—2017),开展了70%氯虫苯甲酰胺水分散粒剂对6种环境生... 详细信息

为明确氯虫苯甲酰胺(chlorantraniliprole)对环境生物的安全性,参照《化学农药环境安全评价试验准则》(GB/T 31270—2014)和《化学农药天敌(瓢虫)急性接触毒性试验准则》(NY/T 3088—2017),开展了70%氯虫苯甲酰胺水分散粒剂对6种环境生物的急性毒性试验及安全性评价。结果表明,该药剂对日本鹌鹑急性经口毒性7 d-LD_(50)>2000 mg a.i.·kg^(-1)(以单位体质量计),低毒;对家蚕急性经口毒性4 d-LC_(50)为0.0588 mg a.i.·L^(-1),剧毒;对蚯蚓急性毒性14 d-LC_(50)>100 mg a.i.·kg^(-1)(以单位土壤干质量计),低毒;对蜜蜂经口和接触毒性2 d-LD_(50)分别为133μg a.i.·蜂^(-1)和77.3μg a.i.·蜂^(-1),低毒;对七星瓢虫急性接触毒性15 d-LR_(50)为37.3 g a.i.·hm^(-2),中风险;对斑马鱼急性毒性4 d-LC_(50)为10.2 mg a.i.·L^(-1),低毒。因此,氯虫苯甲酰胺对环境生物具有选择性,应避免在蚕室和桑园附近使用,同时避免在天敌昆虫繁育期使用。

关键词：氯虫苯甲酰胺环境生物毒性安全性

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丝孢真菌无性与有性进化分析

菌物研究 2017年第4期15卷 213-221,228页

作者：王群王石刘小缦高素素张修国山东农业大学植物保护学院泰安271018

绝大多数丝孢真菌属、种主要以无性型存在,但该类真菌绝大多数属、种含有若干调控有性分化、发育及进化的基因信息,如交配型、信息素及G-蛋白α-亚基基因等,胁迫环境诱导这些真菌有性基因有效表达乃至发育为有性型,一直倍受真菌学界的... 详细信息

绝大多数丝孢真菌属、种主要以无性型存在,但该类真菌绝大多数属、种含有若干调控有性分化、发育及进化的基因信息,如交配型、信息素及G-蛋白α-亚基基因等,胁迫环境诱导这些真菌有性基因有效表达乃至发育为有性型,一直倍受真菌学界的关注。文中系统介绍了丝孢真菌无性型与有性型属种分类研究现状、进化分析及性别调控基因,1)分析属、种三类有性基因的多样性、异型交配基因比率、系统发育关系及有性进化潜力与趋势;2)分析属、种不同有性基因调控特性胁迫环境适应性,界定靶标基因及适宜生态因子,结合地球生境演化特性,预测属、种自然演化性别变化动态;3)分析靶标基因调控生态,阐明两性种有性基因调控生态遗传机制。综上有望解析绝大多数丝孢真菌属、种主要为无性型的本质原因,丰富丝孢真菌分类研究的理论,为真菌分类研究提供科学依据。

关键词：丝孢真菌系统分类有性基因多样性生态遗传

绿色金融改革政策对ESG风险溢价的影响研究——来自我国A股市场的经验证据

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经济学报 2024年

作者：金缦凌士显巢湖学院经济与法学院山东大学商学院

本文以我国绿色金融改革政策试点为外生冲击,构建了含ESG因子的多因子风险资产组合的理论模型,并通过多期DID模型实证检验了绿色金融改革政策对试点城市上市公司ESG风险溢价的影响。结果显示:在绿色金融试点城市中,披露ESG的公司和高ES... 详细信息

本文以我国绿色金融改革政策试点为外生冲击,构建了含ESG因子的多因子风险资产组合的理论模型,并通过多期DID模型实证检验了绿色金融改革政策对试点城市上市公司ESG风险溢价的影响。结果显示:在绿色金融试点城市中,披露ESG的公司和高ESG表现的公司,存在更高的额外资本回报。异质性检验的结果显示随着绿色政策试点城市的增加,将带来更显著的ESG的风险溢价,并在政策的持续推进中,有效提高了ESG风险溢价波动调整速度,降低了市场的过度反应。交叉效应结果显示各种绿色政策的引导存在间接为负的交叉效应,市场对更多的规制所导致的高ESG表现具有更大的不信任感。上述结果通过一系列稳健性检验后仍然成立。本研究为我国借助绿色金融改革引导上市公司有效提高绿色价值回报、发展绿色经济,提供了基础理论依据。

关键词：绿色金融改革 ESG 风险溢价信息披露绿色经济

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同方期刊数据库

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学术期刊新型学术共同体的构建与运行

出版发行研究 2024年第5期 43-50页

作者：江波刘小姣苏州大学传媒学院/期刊中心苏州大学教育学院

学术期刊发展与学术共同体建设具有内在的耦合性。学术期刊是学术共同体的历史产物,共同体意识是学术期刊发展的哲学基础,学术期刊生产、传播、评价功能的实现都依托于学术共同体。新形势下学术期刊应构建新型学术共同体。新型学术共同... 详细信息

学术期刊发展与学术共同体建设具有内在的耦合性。学术期刊是学术共同体的历史产物,共同体意识是学术期刊发展的哲学基础,学术期刊生产、传播、评价功能的实现都依托于学术共同体。新形势下学术期刊应构建新型学术共同体。新型学术共同体是以学术期刊为轴心,学术生产、学术传播和学术评价为基本功能,以数字技术赋能学术增值实现学术价值共创的学术生态圈;其可通过完善组织架构、参与学术生产、建设虚拟社区、改进同行评议、推动平台建设等举措有效运行。

关键词：学术期刊学术共同体学术价值共创学术生态圈学术增值

制造业企业数字化对出口国内附加值率的影响研究

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山东师范大学学报（社会科学版） 2024年第5期69卷 75-88页

作者：张宏刘小迪山东大学经济学院山东济南250100

在国际环境复杂多变和数字经济迅猛发展的背景下,数字化能否赋能制造业全球价值链升级受到广泛关注。文章构造了一种衡量制造业企业数字化水平的新指标,利用WIOD数据库、中国工业企业及海关数据库的匹配数据,通过数理分析与实证检验,从... 详细信息

在国际环境复杂多变和数字经济迅猛发展的背景下,数字化能否赋能制造业全球价值链升级受到广泛关注。文章构造了一种衡量制造业企业数字化水平的新指标,利用WIOD数据库、中国工业企业及海关数据库的匹配数据,通过数理分析与实证检验,从效率提升与安全保障的视角探究了我国制造业企业数字化对出口国内附加值率(DVAR)的影响。研究发现:企业数字化显著提升了出口DVAR,且经过一系列稳健性检验后结论依旧。机制检验证实,企业数字化通过生产率提振效应与供应链本土化效应提升企业出口DVAR。进一步分析表明,企业数字化的出口DVAR提升作用对于非加工贸易企业、本土企业、劳动密集型行业与所在地区市场一体化程度高的企业更为显著。从数字化细分维度看,国内数字要素投入、数字技术应用与数字产品生产均能显著提升企业出口DVAR,而国外数字要素投入则具有抑制作用。

关键词：制造业企业数字化出口国内附加值率全球价值链升级