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Fucoidan逆转人肝癌HepG2细胞EMT表型及机制研究

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Fucoidan逆转人肝癌HepG2细胞EMT表型及机制研究

作者：刘尊东大连医科大学

学位级别：硕士

目的:上皮间质转化(Epithelial mesenchymal transformation,EMT)是指上皮细胞在特定情况下失去其极性向间质细胞表型转变的过程,其特点为细胞粘附性下降或消失,极性丧失,细胞运动能力和转移能力增强。在近十年研究中发现EMT在肿瘤和组... 详细信息

目的:上皮间质转化(Epithelial mesenchymal transformation,EMT)是指上皮细胞在特定情况下失去其极性向间质细胞表型转变的过程,其特点为细胞粘附性下降或消失,极性丧失,细胞运动能力和转移能力增强。在近十年研究中发现EMT在肿瘤和组织纤维化等病理改变中也会出现。EMT发生表现为上皮标志物E-cadherin等表达的减弱或缺失,而间质标志物Vimentin等表达增强以及一系列信号通路的异常激活。Snail为EMT主要核转录因子,能够促进肿瘤细胞EMT的发生及发展,在EMT过程当中,Snail可以直接参与诱导Vimentin的生成而抑制E-cadherin的生成。TGF-β相关信号通路为促进Snail生成的重要信号通路,TGF-β信号通路的异常活化被视为肿瘤细胞EMT发生的开端。因此,靶向TGF-β/Snail信号轴及Snail合成与核转位的药物的研发,对于抗肿瘤细胞EMT现象和肿瘤复发具有重要意义。多糖类广泛存在于动物、植物和微生物中,对机体多种生理过程具有调节作用。褐藻多糖硫酸酯(Fucoidan)是一种富含L-岩藻糖和硫酸根基团的酸性杂多糖,其中硫酸根基团是其主要功能基团。Fucoidan是海洋褐藻类植物的重要生物活性物质,Fucoidan具有免疫调节、抗肿瘤、抗凝血、抗病毒和防辐射等多种药理活性。在本实验室前期工作中从裙带菜孢子叶中提取的Fucoidan具有高含量的硫酸根基团,因此具有更强的生物学活性。本实验以人肝癌细胞系Hep G2细胞为基础,采用细胞生物学,生物化学以及分子生物学等方法,探究Fucoidan能否逆转Hep G2细胞EMT表型及探究可能的分子机制。方法:1.采用MTT法,检测Fucoidan对肿瘤细胞活力的影响。2.运用划痕实验及transwell方法,检测Fucoidan对肿瘤细胞迁移的影响。3.免疫荧光法,检测Fucoidan对肿瘤细胞膜、细胞骨架的影响。***-blot和Real-Time PCR法,检测Fucoidan对肿瘤细胞EMT标志蛋白Vimentin、E-cadherin表达的影响。5.采用免疫荧光、Western-blot和Real-Time PCR方法,检测Fucoidan对Snail蛋白的表达及核移位的影响。6.采用Western-blot方法,检测Fucoidan对Snail上游主要核转录因子HMGA2、HIF-1α和NF-κB的影响。7.采用Western-blot方法,检测Fucoidan对促进Snail生成主要通路TGF-β/Smads信号通路相关蛋白TGFRⅡ,Smad2/3和Smad4的影响。8.采用Western-blot方法,检测对影响Snail稳定性及核移位的信号通路PI3K/AKT/m TOR主要蛋白p-PI3K,p-AKT和p-m TOR的影响。结果:***能够有效地抑制Hep G2细胞的活力。***对肿瘤细胞的迁移能力有明显的抑制作用。***能够改变肿瘤细胞形状及骨架结构,使肿瘤细胞形状由菱形变为类鹅卵石形状,同时细胞骨架由纺锤状变为多变形。***在m RNA和蛋白水平显著影响EMT标志蛋白Vimentin和E-cadherin的表达。***对Snail因子活化形式及核移位有明显的影响。***对Snail上游相关核转录因子,NF-κB,HMGA2和HIF-1α均有明显抑制作用。***对TGF-β/Smads信号通路相关蛋白TGFRⅡ,Smad2/3有明显抑制作用,但对Smad4的表达量有促进作用。***对PI3K/AKT/m TOR信号通路中主要蛋白p-PI3K,p-AKT和p-m TOR的表达都有明显的抑制作用,而对GSK-3β表达量没有明显的影响。结论:Fucoidan对肿瘤细胞的EMT有明显的抑制作用,这种作用可能与通过影响EMT标志蛋白E-cadherin和Vimentin、抑制Snail蛋白因子的活化与核移位及Snail相关核转录因子、调节TGF-β/Smads信号通路及钝化PI3K/AKT/m TOR有关。

关键词： Fucoidan EMT Snail TGF-β/Smads信号通路 PI3K/AKT/mTOR信号通路

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合作学习在语文阅读教学中的应用研究

中华活页文选（教师） 2022年第7期 30-32页

作者：刘尊东昭通市第一中学云南省昭通市

阅读教学一直都是语文科目的重要内容。在新时代背景下,语文教师需要提高阅读课堂的教学质量,结合现阶段阅读教学的实际情况,合理运用合作学习法,使语文阅读教学能够达到新的高度。本文阐述了合作学习对语文教学产生的积极影响,并介绍... 详细信息

阅读教学一直都是语文科目的重要内容。在新时代背景下,语文教师需要提高阅读课堂的教学质量,结合现阶段阅读教学的实际情况,合理运用合作学习法,使语文阅读教学能够达到新的高度。本文阐述了合作学习对语文教学产生的积极影响,并介绍了合作学习在应用过程中的原则,之后对现阶段合作学习模式中存在的问题进行了研究,最后提出几点优化策略,以期能够为语文阅读教学中合作学习法的运用产生积极影响。

关键词：合作学习语文阅读教学应用

不忘初心,聚焦红色故事培根涛魂,筑牢红色阵地--写在中国共产党建党100周年之际

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中学生博览 2021年第20期 22-23页

作者：刘尊东云南省昭通市第一中学

“红军不怕远征难,万水千山只等闲。五岭逶迤腾细浪,乌蒙磅礴走泥丸。金沙水拍云崖暧,大渡桥横铁索寒。更喜峨山千里雪,三军过后尽开颜。”这是毛泽东的革命诗篇《七律·长征》,它形象地写出了红军战士长征途中不屈不挠英勇顽强的大无... 详细信息

“红军不怕远征难,万水千山只等闲。五岭逶迤腾细浪,乌蒙磅礴走泥丸。金沙水拍云崖暧,大渡桥横铁索寒。更喜峨山千里雪,三军过后尽开颜。”这是毛泽东的革命诗篇《七律·长征》,它形象地写出了红军战士长征途中不屈不挠英勇顽强的大无畏气概和革命乐观主义精神。

关键词：红军战士不忘初心红军不怕远征难三军过后英勇顽强革命乐观主义精神红色故事

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高中语文阅读教学中的精巧调度

语文教学通讯（学术）（D） 2018年第11期 65-67页

作者：刘尊东昭通第一中学云南昭通657000

高中阅读教学设计注重各种调度,符合学生阅读学习成长的基本诉求,具有极高的适合度和针对性。教师要注意从设悬调度、情境调度、鉴赏调度、训练调度等角度展开探索,关注阅读信息的传递,促进学生阅读信息的接受、思考和反馈,实现阅读信... 详细信息

高中阅读教学设计注重各种调度,符合学生阅读学习成长的基本诉求,具有极高的适合度和针对性。教师要注意从设悬调度、情境调度、鉴赏调度、训练调度等角度展开探索,关注阅读信息的传递,促进学生阅读信息的接受、思考和反馈,实现阅读信息认知的顺利内化。

关键词：语文阅读三趣环节

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谈作文中“立象以尽意”的运用与创新

中学语文（大语文论坛）（下旬） 2016年第9期 106-107页

作者：刘尊东云南昭通一中

我在教学中发现,教材中的名篇往往在表情达意的基础上＂别有一番滋味在心头＂。比如名篇《氓》中,就是用自然现象来表现女主人公感情生活的变化。由叶子的鲜嫩到枯黄,形象地说明感情生活从幸福到痛苦的变化,引发读者的联想和想象,给人... 详细信息

我在教学中发现,教材中的名篇往往在表情达意的基础上＂别有一番滋味在心头＂。比如名篇《氓》中,就是用自然现象来表现女主人公感情生活的变化。由叶子的鲜嫩到枯黄,形象地说明感情生活从幸福到痛苦的变化,引发读者的联想和想象,给人以鲜明深刻的印象,达到了＂言有尽而意无穷＂的艺术效果。为了让学生掌握＂立象以尽意＂的方法,尽快地实施到写作中去。

关键词：立象以尽意感情生活言有尽而意无穷《氓》造境《琵琶行》题破山寺后禅院枫叶荻花晓风残月静雅

“以意逆志”细读法在高中散文教学中的运用探索

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语文教学通讯 2023年第24期1258卷 26-28页

作者：刘尊东昭通市第一中学云南昭通657000

散文意境深邃,对于发展高中生语文能力具有重要作用。当前的散文教学效果并不乐观,引入“以意逆志”细读法进行教学,通过感受文本大意、品作者之意与生成读者之意等过程,提升高中生散文学习质量,旨在为高中语文散文教学提供借鉴。

关键词： “以意逆志”细读法高中散文教学探索

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谈数学教学中如何培养学生的非智力因素

泰山学院学报 1998年第6期23卷 30-31页

作者：刘尊东

心理学家认为,影响一个人在事业上成功的因素是多方面的,一般说来,有智力因素,即注意力、观察力、想象力、思维力、记忆力等,还有智力以外的心理因素——非智力因素即情感、意志、性格、动机、兴趣等心理素质.笔者在多年来数学教学中发... 详细信息

心理学家认为,影响一个人在事业上成功的因素是多方面的,一般说来,有智力因素,即注意力、观察力、想象力、思维力、记忆力等,还有智力以外的心理因素——非智力因素即情感、意志、性格、动机、兴趣等心理素质.笔者在多年来数学教学中发现,就大多数学生来说,智力差异并不大,导致学生两极分化的一个重要原因就是由于非智力因素的发展存在较大差异.事实证明不少中差生之所以能后来居上,就是由于改进了非智力因素的结果.因此在教学过程中,发展学生的非智力因素,培养学生良好的道德品质和心理素质,使之形成优美和谐的人格,促进个人潜能的发挥,是数学教学的一项重要目标.下面就笔者在数学教学实践中如何从兴趣、意志、习惯等方面来培养学生的非智力因素,保进教学质量的提高,谈点体会和做法.

关键词：数学教学非智力因素培养学生心理素质学习动机数学美激发学生的学习兴趣教学质量数学兴趣学习数学