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肺腺癌患者外周血中EPC的表达及生物信息学分析

肺腺癌患者外周血中EPC的表达及生物信息学分析

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作者：刘宗飞河北医科大学

学位级别：硕士

第一部分肺腺癌患者外周血中内皮祖细胞数量的变化规律目的:1.检测肺腺癌患者外周血中血管内皮祖细胞(Endothelial progenitor cells;EPC)的表达情况;2.观察应用化疗药物(培美曲塞+铂类)与化疗药物(培美曲塞+铂类)联合抗血管生成药物(... 详细信息

第一部分肺腺癌患者外周血中内皮祖细胞数量的变化规律目的:1.检测肺腺癌患者外周血中血管内皮祖细胞(Endothelial progenitor cells;EPC)的表达情况;2.观察应用化疗药物(培美曲塞+铂类)与化疗药物(培美曲塞+铂类)联合抗血管生成药物(贝伐珠单抗)治疗后,EPC表达水平的变化情况;3.探索EPC是否可作为潜在的肺腺癌的预测指标之一以及抗血管生成药物(贝伐珠单抗)对肺腺癌患者外周血中EPC的影响;4.检测正常人和肺腺癌患者血清中VEGFA、VEGFB的表达水平并分析肺腺癌患者血清中VEGFA、VEGFB的表达与外周血中EPC相关性。方法:1.收集34例肺腺癌患者(其中,初治组:12例;化疗组:11例;化疗+贝伐组:11例)和8例健康对照组,以CD133、CD34、VEGFR-2全阳性,CD45阴性细胞作为EPC的表面标记物。采用流式细胞术方法检测分析各组患者和健康对照组人外周血中循环EPC的数量变化。观察应用化疗(培美曲塞+铂类)及化疗(培美曲塞+铂类)联合抗血管生成药物(贝伐珠单抗)治疗后肺腺癌患者外周血中循环EPC的数量变化。2.将上述入组样品剩余血样离心,取上层血清,置于-80℃冰箱中保存,通过应用Elisa方法检测各个样品中VEGFA、VEGFB的表达水平,并研究其与肺腺癌患者外周血中EPC相关性分析。结果:1.初治组患者外周血中EPC的表达水平较健康对照组明显升高(P<0.05),化疗组患者外周血中EPC的表达水平较初治组高(P<0.05),而化疗+贝伐组患者外周血中EPC的表达水平较化疗组降低(P<0.05);2.肺腺癌患者血清中VEGFA、VEGFB的表达较健康对照组明显升高(P<0.05);肺腺癌患者血清中VEGFA的表达与肺腺癌患者外周血中EPC存在相关性,且呈正相关(r=0.593;P<0.05);肺腺癌患者血清中VEGFB的表达与肺腺癌患者外周血中EPC也存在相关性,且呈正相关(r=0.440;P<0.05)。结论:1.肺腺癌患者外周血中EPC可能参与肺腺癌血管的形成;应用化疗(培美曲塞+铂类)后,能够促进肺腺癌患者外周血中EPC的表达;应用化疗(培美曲塞+铂类)联合抗血管生成药物(贝伐珠单抗)后,可抑制患者外周血中EPC的动员等过程,从而导致肺腺癌患者外周血中EPC的减少。2.肺腺癌患者体内VEGFA、VEGFB可促进患者外周血中EPC的表达,从而引起肿瘤血管的生成。因此,EPC可作为一项潜在肺腺癌的预测指标之一,为临床早期发现肺腺癌提供一定的理论依据。第二部分肺腺癌的生物信息学分析目的:1.探究肺腺癌患者相关基因(VEGFA、VEGFB)m RNA与正常组织的差异化表达;2.分析上述相关因子m RNA的表达水平与肺腺癌患者预后的关系,进一步分析EPC对肺腺癌患者预后的影响。方法:应用oncomine数据库挖掘与肺腺癌相关的基因(VEGFA、VEGFB)m RNA在肺腺癌组织和正常组织中的差异表达及应用在线Kaplan-Meier plotter网站分析所发现VEGFA、VEGFB m RNA的表达水平对肺腺癌患者预后产生一定的影响。结果:通过应用oncomine数据库分析,我们发现VEGFA、VEGFB m RNA在肺腺癌中的表达水平较正常人均高且均有统计学意义(P<0.05)。并通过在线Kaplan-Meier plotter网站分析了上述相关因子VEGFA、VEGFB m RNA的表达水平与肺腺癌的预后呈反比且有统计学意义(P<0.05)。结论:通过应用oncomine数据库分析,我们发现肺腺癌患者VEGFA、VEGFB m RNA的表达水平较正常人水平较高,且肺腺癌患者中VEGFA、VEGFB的表达水平越高其预后就越差。因此,通过两部分的结论我们推测,VEGFA、VEGFB m RNA高表达的肺腺癌患者可促进EPC水平的增高,进而促进肺腺癌患者血管的生成,最终导致肺腺癌患者的预后较差。

关键词：肺腺癌血管内皮祖细胞抗血管生成药物肿瘤标记物生物信息学分析数据挖掘预后差异化表达

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高速嵌入式检测技术研究

高速嵌入式检测技术研究

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作者：刘宗瑞北京理工大学

学位级别：硕士

复杂嵌入式系统在汽车舰艇、航空航天、武器装备等领域被广泛应用,对可靠性有极高的要求,在研制生产阶段对其进行相应的测试必不可少。本课题以航空机载武器系统应用为背景,研究适用于新型航空机载武器系统的高速检测技术及检测系统设... 详细信息

复杂嵌入式系统在汽车舰艇、航空航天、武器装备等领域被广泛应用,对可靠性有极高的要求,在研制生产阶段对其进行相应的测试必不可少。本课题以航空机载武器系统应用为背景,研究适用于新型航空机载武器系统的高速检测技术及检测系统设计技术。以航空总线1553B检测为具体应用案例,基于CPCIE总线和DSP+FPGA架构技术,设计了针对1553B总线设备的检测系统。首先,本文介绍了航空机载武器系统中具有代表性的精确制导炸弹的特点,分析了它的检测技术需求。主要包括各类接口如RS232、RS422、1553B等的通信检测,以及各类模拟量、数字量的检测等。其次,以1553B总线的检测为具体应用案例,基于GJB5186-97对1553B总线研制生产的测试要求,并根据测试要求分析了1553B总线测试技术要求。提出针对1553B总线设备的检测系统设计,主要包括协议解析单元、阻抗测试单元、信号采集单元、信号发生单元和数据处理单元。然后,概述了最小系统中供电、时钟、存储等的电路设计和实现总线测试必需的1553B协议解析单元的电路设计,重点研究了高速数据处理并行模型设计与实现、检测系统高速通信设计和信号采集及信号发生模块的设计。最后,针对GJB5186-97对1553B总线的测试要求,进行了相应的检测系统测试验证。研究高速数据处理并行模型设计与实现,建立了适用于检测系统的多核DSP并行任务模型,实现数据的高速并行化处理。研究检测系统高速通信设计,包括CPCIE总线架构与实现,SRIO和Ethernet的通信原理、通信速率等。研究信号采集及信号发生模块设计,通过高速AD实现信号采集,分析1553B波形信号,通过高速DA进行信号发生,实现1553B总线测试的激励信号注入。本文针对高速嵌入式检测技术的研究,对于实现复杂嵌入式系统的高速检测具有一定参考价值。

关键词：航空机载武器嵌入式系统自动检测 1553B CPCIE

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IPv6安全技术研究

IPv6安全技术研究

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作者：刘宗伟吉林大学

学位级别：硕士

IPv6以其充足的地址空间和固有的安全特性等特点,将成为Internet的标准网络协议。本文主要针对IPv6的安全技术进行研究,并予以实现。首先对IPv6的新特性,如IPv6地址表示方法、IPv6报头、过渡技术等进行介绍与分析。重点对IPSec工作原理,... 详细信息

IPv6以其充足的地址空间和固有的安全特性等特点,将成为Internet的标准网络协议。本文主要针对IPv6的安全技术进行研究,并予以实现。首先对IPv6的新特性,如IPv6地址表示方法、IPv6报头、过渡技术等进行介绍与分析。重点对IPSec工作原理,IPSec各组成部分,如AH、ESP、安全联盟(SA)、安全策略数据库(SPD)、安全联盟数据库(SAD)以及Internet密钥交换(IKE)进行分析与研究,并编程实现相关认证算法SHA、HMACHA和加密算法DES、3DES。设计并实现IPSec协议的中央处理器、策略模块、AH与ESP处理模块、包输入/输出模块、认证与加密模块五部分。对IPv6环境下FTP命令与工作模式进行分析与研究,实现FTP在IPv6中传输数据功能。利用装有IPv6协议的主机,分别对认证算法、加密算法、IPSec整体模块、FTP进行测试。测试结果表明认证算法、加密算法实现程序可靠,IPSec整体模块设计可行,FTP在IPv6环境下运行正常。最后对利用IPSec保护FTP传输数据进行测试,测试结果表明利用IPSec实现FTP传输数据安全设计完全可行。

关键词：认证报头安全封装载荷安全策略 IPv6的FTP应用

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金代殿前都点检司长贰官群体研究

金代殿前都点检司长贰官群体研究

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作者：耿改平吉林大学

学位级别：硕士

金朝以武立国,熙宗即位后,着手进行官制改革,废除原有勃极烈制度,实行三省六部制,殿前都点检司于此时正式设立,殿前都点检司长、贰官作为扈从皇帝寝宫安全的责任人,重要性不言而喻。本文以金代殿前都点检司长、贰官为研究对象,考察金代... 详细信息

金朝以武立国,熙宗即位后,着手进行官制改革,废除原有勃极烈制度,实行三省六部制,殿前都点检司于此时正式设立,殿前都点检司长、贰官作为扈从皇帝寝宫安全的责任人,重要性不言而喻。本文以金代殿前都点检司长、贰官为研究对象,考察金代殿前都点检司长贰官的群体性特征。第一章:金代殿前都点检司的设置与职能。本章主要探讨金代殿前都点检司的设立与职能。金初,以中央勃极烈制度统筹上下,熙宗天眷新制是金代殿前都点检司设立和发展的主要节点,熙宗天眷元年殿前都点检司设立,经海陵改革至世宗时日益完善。殿前都点检司既负扈从皇帝之责,又效统摄礼仪、率军出征之力,此外,还作为外交使臣出使宋、高丽、西夏等国,在有金一代的重要性不容小觑。第二章:金代殿前都点检司长贰官的民族成分与籍贯分布。金代殿前都点检司长贰官群体以女真宗室、贵族为主,偶有汉人、契丹人,民族成分可考的37位殿前都点检中,女真人34位,契丹人2位,汉人1位;民族成分可考的31位殿前副都点检则皆系女真人;金朝统治者女真本位政策由此可见。金代殿前都点检司长贰官的籍贯分布主要集中在上京路,上京路是女真族肇兴之地,汇聚了众多优秀将领。第三章:金代殿前都点检司长贰官的仕履。入仕途径可考的35位金代殿前都点检司长贰官以出职、军功入仕为主,殿前都点检任职前,多有殿前都点检司或殿前都点检司辖属机构相关职官经历,且中央官的数量和比例远高于地方官;卸任后,多留任中央为官,或进拜一品大员,或汇聚在以尚书左右丞相、参知政事等为主的宰执集团。殿前副都点检前任官既有坐拥兵马指挥权、掌管地方军政事务的地方官,又有掌侍从、承赦令、牧养御马之事的中央官。卸任后,多转迁为殿前都点检,部分流外任职地方最高官。殿前都点检司长贰官在其仕宦履历中升至宰执者较为常见,此职在金代职官中之重要地位可见一斑。

关键词：金代殿前都点检殿前副都点检民族籍贯仕履

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大面积混凝土性能试验及工程实测研究

大面积混凝土性能试验及工程实测研究

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作者：刘改利太原理工大学

学位级别：硕士

随着社会经济的发展,城市人口迅速扩张,私家车数量与日俱增,由此带来的停车压力不言而喻。在现代建筑中地库大面积混凝土建筑不仅满足了结构的要求,也缓解了停车难问题。大面积混凝土因所在环境的特殊性对其所用混凝土有了更高的抗渗和... 详细信息

随着社会经济的发展,城市人口迅速扩张,私家车数量与日俱增,由此带来的停车压力不言而喻。在现代建筑中地库大面积混凝土建筑不仅满足了结构的要求,也缓解了停车难问题。大面积混凝土因所在环境的特殊性对其所用混凝土有了更高的抗渗和抗裂要求,掺加密实剂等外加剂能有效降低混凝土的渗透、减少收缩防止裂缝的发展。因此对于大面积混凝土的各项力学性能及应力应变的发展演变和微观特性改变等方面亟待研究。本研究依托龙湾写意居住小区一期地库工程(横向课题,项目编号:9002-030011259),采用实验室宏观力学性能测试、微观压汞及扫描电镜技术并结合工程现场实测,对大面积混凝土基本性能进行分析。研究对比了C30、C40不同强度等级的混凝土在不同FS102密实剂掺量下力学性能、微观结构的情况,通过现场实测应变,并进行应力分析,旨在为实际工程提供实验依据。本文主要从以下几个方面展开研究:1.混凝土的基本力学性能:采用与实体工程同配比的C30、C40混凝土,在标准养护的条件下对不同掺量(掺量为0%、0.21%、0.25%)密实剂混凝土各龄期(3d、7d、14d、28d)试块进行抗压强度、劈拉强度、轴压强度、弹性模量试验研究。对比分析同一强度等级的混凝土各项力学性能随龄期的变化规律。研究表明对于同一强度等级的混凝土,FS102掺量0.21%的混凝土整体性能优于掺量为0%和0.25%的混凝土,较大掺量密实剂不利于混凝土的力学性能的发展。2.应力应变实测基于混凝土力学性能实验室研究情况,在工程实测中,选用了FS102掺量为0%和0.21%的混凝土进行对比分析。通过在实体工程浇筑之前埋设振弦应变计,热电偶等相关设备,对浇筑后混凝土应变及温度随龄期的变化情况进行实测统计,进而分析混凝土内部应力变化规律以及温度的影响情况,结果表明实体工程混凝土的温度应力小于混凝土劈裂抗拉强度,可避免裂缝的发生。3.抗渗性能试验根据我国国家及行业的标准对标准养护28d的试件进行抗渗试验,结果表明各配合比的混凝土均大于项目工程的抗渗等级要求,满足工程需求。4.微观结构试验应用扫描电镜和压汞试验,对标准养护28d混凝土微结构进行研究,以揭示其内部微结构随龄期的演化规律,结果表明同一强度等级混凝土密实剂掺量0.21%较掺量为0%的混凝内部孔隙率减少,混凝土微结构更加致密,抗渗能力提高,强度提高,抗裂能力增强。

关键词：大面积混凝土力学性能微观结构应变

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城市住区入口空间组织方式探析 ——以西安城区为例

城市住区入口空间组织方式探析 ——以西安城区为例

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作者：刘改林长安大学

学位级别：硕士

城市化是社会发展到一定阶段的产物,住区是城市最重要的组成部分之一。近年来,住宅建设规模越来越大,商品化日益加快,随着住宅建设的加快,住区的规划设计也得到了一定的发展,同时,住区入口的发展也日新月异。然而在快速发展的背后,也带... 详细信息

城市化是社会发展到一定阶段的产物,住区是城市最重要的组成部分之一。近年来,住宅建设规模越来越大,商品化日益加快,随着住宅建设的加快,住区的规划设计也得到了一定的发展,同时,住区入口的发展也日新月异。然而在快速发展的背后,也带来很多新的问题。就现代住区而言,其问题突出表现在：入口空间组织不合理,入口空间设计雷同,住区内部空间与外部城市空间不融洽等等。因此,如何塑造一个既经济美观又能满足居民需求的入口空间成为现代住区规划关注的问题。本文在环境心理学、空间理论学、场所理论学等综合学科的思想基础上,选取西安城区50年代以来的20个住区入口为调查对象,进行分析和归纳,力求探明其空间组织方式。论文首先从入口功能、入口形态、入口构成三个角度分析比较了调查对象在不同时期的演变形式;其次,总结出按不同依据划分的入口类型,进而分析其特点、现状存在问题、成因和发展趋势;最后,在相关理论借鉴和调查结果的指导下,探明出住区入口空间的两种组织方式,并针对不同组织方式的不同入口空间提出设计方法,进而将其运用到规划实践中。本文的主要结论如下,第一：探明了人车分行的入口空间组织方式,主要特点是人车分流,这种方式分为平面分流型和立体分流型两种类型;对其步行入口空间的设计提出空间渗透法。第二：探明了人车混行的入口空间组织方式,主要特点是人车不分流,这种方式可分为立体混合型和平面混合型两种类型;其混行入口空间采取形态整合法。

关键词：住区入口空间入口分类入口空间组织入口空间设计

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孔门道统研究

孔门道统研究

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作者：魏改霞河南大学

学位级别：硕士

中国文化源远流长,儒家文化占据着重要地位。儒家学派创始人孔子成为历代仁人志士敬仰的对象,这并非偶然。孔子自幼勤奋好学,整理前代典籍,在前人的基础上进行发明创造,逐渐形成了独特的思想体系。他授徒讲学,传授自己思想的做法,开传... 详细信息

中国文化源远流长,儒家文化占据着重要地位。儒家学派创始人孔子成为历代仁人志士敬仰的对象,这并非偶然。孔子自幼勤奋好学,整理前代典籍,在前人的基础上进行发明创造,逐渐形成了独特的思想体系。他授徒讲学,传授自己思想的做法,开传承之先例,弟子成为儒家思想早期的接受者和传播者,自此，孔子的思想得以发扬光大,历久弥新。本文试从以下四个方面讨论儒学的形成及早期发展：一、“师”、“儒”溯源。“师”在礼书中出现的次数较多,而《周礼》一书中尤为显著,其中出现的“师氏”一词中,“师”已有“教人以道”之意,这里“师”的意义接近现在通行的“教师”、“老师”。“儒”之起源问题是学术界争论的热点,本文参考前人的研究成果,讨论“儒”经历了从“巫祝之儒”到“教化之儒”的演变过程,最终定位为以六艺教人为业者。二、孔子“师儒”身份之确立。孔子的身份历来有多种定位,如“夫子”、“素王”、“至圣先师”等,但确切的说应为“师儒”。同时,他也为创立儒学做出种种努力。首先,齐鲁文化的影响,孔子乃鲁国陬邑人,而鲁国很好的传承了西周以来的礼乐文化,那么生于斯长于斯的孔子就无可置疑的要受这种文化的影响。其次,孔子认为“三人行,必有我师焉”,因此他虚心好学、转益多师,如在研习和传承礼乐文明方面,他的请教对象就多为乐师。再次,他追怀往古,对诸先王多有赞颂。最后,对古籍进行细致的整理和学习,在学习过程中,有吸收亦有创新,更有自己取其精华、去其糟粕的取舍原则。因此,孟子称孔子为“集大成者”。三、儒家学派的形成。孔子在集前人成果和自学的基础上,开始授徒讲学,传播自己的思想,在讲学过程中和弟子逐渐形成了内涵丰富的师徒关系。由于他学识渊博且创见甚多,所以在办学过程中有其特定的教学内容和教学方式。孔子教学内容和时代息息相关,在考虑历史因素的情况下,结合政治需要,担当起了传承文明的重任。教学方式也是多种多样,如因材施教、举一反三、学与思的结合等等。四、儒家“道统”之建立。孔子建立了具有丰富内涵的儒家道统,孔子弟子和汉儒是其最早的实践者。弟子主要通过讲学来传经,而以陆贾、贾谊、叔孙通、公孙弘等为主要代表人物的汉儒,则通过努力,使儒学在汉初复兴并向前发展。另外,孔子和弟子的言行多被后世作为儒学传播者讲学的素材,而具楷模意义的道统模式更是意义重大、影响深远。本文讨论了儒学的创立和早期传承,学术界研究儒家多以孔孟荀为起点,然后延至历代,多忽略了孔子弟子这一重要的研究对象,而文中关于孔子弟子的相关论述,为孔孟之间补上了不可或缺的一环,这样,儒学的早期传承脉络才更清晰完整。

关键词：孔子孔门传承道统

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购物网站品牌资产对顾客购买意向影响的研究—产品涉入度的调节作用

购物网站品牌资产对顾客购买意向影响的研究—产品涉入度的调节作...

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作者：谭改姣大连工业大学

学位级别：硕士

20世纪90年代,互联网在全球迅速普及发展,从高端的国防、高新科技产业区、科学研究院开始走向寻常百姓家。电子商务是一种基于遍及全世界的互联网为架构,以买卖双方为主体,以网上支付为结算手段的一种新型商务模式迅猛发展。电子商务在... 详细信息

20世纪90年代,互联网在全球迅速普及发展,从高端的国防、高新科技产业区、科学研究院开始走向寻常百姓家。电子商务是一种基于遍及全世界的互联网为架构,以买卖双方为主体,以网上支付为结算手段的一种新型商务模式迅猛发展。电子商务在快速发展过程中历经曲折,暴露出物流、支付等方面的弊端,随着互联网经济环境的不断成熟,这些瓶颈逐步突破,不少网络商家迅速成长,优胜劣汰,积累了丰富的电商运营经验。他们的成功也吸引了大量传统行业和资金流入电子商务领域。进行网络购物时,消费者接触不到商品、卖家,商品资金处于分离状态,存在不确定性。品牌象征着信誉、承诺,优秀的网站品牌可以有效降低消费者感知风险,让消费者安心。因此本文研究购物网站品牌资产的构成,建立购物购物网站品牌资产和顾客购买意向的关系模型,希望提高购物网站的客户流量和成交率。购买行为的主体是顾客,自我攸关性是涉入最本质的特征。高涉入和低涉入的状态会对顾客的行为产生不同影响。本文从产品涉入程度来分析不同的产品涉入度对于顾客购买意向的调节作用。不同年龄、性别、收入水平的顾客也会对网络购物行为产生影响,因此本文将人口特征作为控制变量进行研究。本文通过查阅研究品牌资产、产品涉入理论、顾客购买意向等相关文献,提出产品涉入程度对购物网站品牌资产和顾客购买意向关系的调节模型,并根据此模型提出相关研究假设。对假设中的各个变量进行操作性定义提出测量题项,设计出调查问卷并实施与测试,明确问卷的发放与收集,利用SPSS统计软件对问卷调研数据进行信度和效度分析、相关分析、回归分析等。得出产品涉入度、购物网站品牌资产对顾客购买意向产生正面影响效果。本文的研究特色和创新点主要体现在以下方面:本文在模型构建中选择购物网站品牌资产的五个维度网站认知、感知质量、网站体验、网站信任、网站忠诚作为自变量,顾客购买意向作为因变量,加入产品涉入度这个调节变量来研究产品涉入度对于自变量五个维度和因变量的调节效应。

关键词：网站品牌资产产品涉入度顾客购买意向

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产品数据管理（PDM）中数字水印编码系统的研究

产品数据管理（PDM）中数字水印编码系统的研究

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作者：孙改玲西安电子科技大学

学位级别：硕士

数字水印技术是一种有效的数字产品版权保护技术。它克服了传统密码学技术中加密的内容在解密和被破解之后不再安全的问题。PDM(ProductDataManagement,产品数据管理)技术主要是对产品全生命周期的信息进行管理,其中存储着大量工程图。... 详细信息

数字水印技术是一种有效的数字产品版权保护技术。它克服了传统密码学技术中加密的内容在解密和被破解之后不再安全的问题。PDM(ProductDataManagement,产品数据管理)技术主要是对产品全生命周期的信息进行管理,其中存储着大量工程图。PDM系统中产品数据须有唯一编码,以适应计算机管理。网络的普及和发展给数据的非法盗用和篡改提供了很大的方便,给PDM系统中数据版权保护造成潜在威胁。因此,利用数字水印技术和PDM数据编码相结合,以解决工程图的知识产权及安全保护问题。本文阐述了数字水印技术体系,描述了数字水印的特征、分类及其应用;论述了图像水印算法的通用模型;剖析计算机图形学中图形和图像的异同;描述了AutoCAD图形数据库的格式;提出了PDM系统中产品的零件、部件编码标准,使编码和水印技术二者有机结合。实现了把产品编码等信息作为水印嵌入到工程图中具体方法是：依据要隐藏的秘密信息的信息量、载体图像等情况,利用随机函数在载体图像中随机的选择像素点进行信息隐藏,把秘密信息比特随机地分散在整个载体中,以达到信息隐藏的目的。

关键词：数字水印编码 PDM 工程图信息安全

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柑橘CitSERK基因克隆、序列分析及其遗传转化

柑橘CitSERK基因克隆、序列分析及其遗传转化

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作者：凡改恩华中农业大学

学位级别：硕士

植物组织培养中，胚性愈伤组织经长期继代后分化能力能否保持，一直是细胞工程研究中的重要课题。柑橘部分品种的愈伤组织经长期继代后，仍具有很强的体胚发生能力，但也有一些品种的愈伤组织经长期继代后体胚发生能力下降，甚至完全丧... 详细信息

植物组织培养中，胚性愈伤组织经长期继代后分化能力能否保持，一直是细胞工程研究中的重要课题。柑橘部分品种的愈伤组织经长期继代后，仍具有很强的体胚发生能力，但也有一些品种的愈伤组织经长期继代后体胚发生能力下降，甚至完全丧失体胚发生能力。从柑橘愈伤组织中克隆控制体胚发生的基因，对于通过基因工程改良品种、提高转化子的再生具有重要意义。对柑橘体细胞胚胎发生的研究，有助于进一步揭示柑橘愈伤组织体细胞胚胎发生的分子调控机理，同时，也有助于进一步提高柑橘愈伤组织离体种质库用于生物技术遗传改良的效率。本研究以暗柳橙的愈伤组织为实验材料，利用RT-PCR方法克隆了CitSERK的cDNA全序列，并对其核苷酸序列及其编码的氨基酸序列进行了生物信息学分析。同时，还构建了CitSERK的正义表达载体和反义表达载体，并进行了遗传转化。主要研究结果如下： 1．提取了暗柳橙愈伤组织的总RNA，所提取的RNA的A／A在1.65-1.90之间，A／A大于2.0;其质量和浓度能够直接用于其它分子生物学研究，如RT-PCR及Northern杂交等实验。 2．利用RT-PCR方法从暗柳橙愈伤组织中克隆得到CitSERK基因的cDNA全序列，全长1886 bp，并对重组质粒DNA进行了PCR检测和酶切检测。 3．利用美国国立生物技术信息中心BLAST程序、ExPASy和Clustal W软件进行分析发现，CitSERK基因与已克隆的其它SERK基因具有很高的同源性，编码621个氨基酸，等电点是5.57，分子量为68-3 kD，是一种疏水性蛋白，并对其氨基酸序列结构进行了分析。 4．构建了CitSERK基因的正义表达载体与反义表达载体，同时，对构建的正义表达载体与反义表达载体的重组质粒DNA进行了PCR检测和酶切检测。 5．反义表达载体的遗传转化，并获得了一定数量的抗性愈伤组织。

关键词：柑橘体细胞胚胎发生 CitSERK 基因克隆遗传转化

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