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痤疮丙酸杆菌生物膜诱导角质形成细胞发生炎症反应的分子机制研究

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中华皮肤科杂志 2024年第4期57卷 302-308页

作者：裴璐郑娜娜曾荣谢媛媛徐浩翔段志敏刘宇甄李岷中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所南京210042 南京医科大学附属江宁医院南京211100 江苏省皮肤病与性病分子生物学重点实验室南京210042

目的探讨痤疮丙酸杆菌生物膜诱导人原代角质形成细胞发生炎症反应的分子机制。方法体外构建痤疮丙酸杆菌生物膜模型,激光共聚焦显微镜观察其三维立体结构。将培养的人原代角质形成细胞分成3组:二甲基亚砜(DMSO)对照组(仅加入0.01%DMSO)... 详细信息

目的探讨痤疮丙酸杆菌生物膜诱导人原代角质形成细胞发生炎症反应的分子机制。方法体外构建痤疮丙酸杆菌生物膜模型,激光共聚焦显微镜观察其三维立体结构。将培养的人原代角质形成细胞分成3组:二甲基亚砜(DMSO)对照组(仅加入0.01%DMSO)、痤疮丙酸杆菌悬浮菌组(加入痤疮丙酸杆菌悬浮菌,简称悬浮菌组)、痤疮丙酸杆菌生物膜悬液组(加入痤疮丙酸杆菌生物膜悬液,简称生物膜悬液组)。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测孵育6 h后各组白细胞介素6(IL-6)、IL-8以及肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA相对表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测孵育24 h后各组IL-6、IL-8及TNF-α游离蛋白水平,Western印迹法检测角质形成细胞Toll样受体2(TLR2)蛋白表达水平。进一步用TLR2/丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)/核因子κB(NF-κB)信号通路关键分子的阻断剂(C29、ST2825、BAY11-7082、SB203580、U0126-EtOH)联合痤疮丙酸杆菌生物膜悬液作用于人原代角质形成细胞,同时设DMSO对照组和痤疮丙酸杆菌生物膜悬液阳性对照组,然后检测IL-6、IL-8及TNF-αmRNA和游离蛋白表达水平。多组间比较采用单因素方差分析,两两多重比较采用Bonferroni法。结果激光共聚焦显微镜下,痤疮丙酸杆菌生物膜形成草坪般的三维立体结构,生物膜生长状态良好。RT-qPCR及ELISA显示,生物膜悬液组、悬浮菌组、DMSO对照组炎症因子IL-6、IL-8、TNF-αmRNA及游离蛋白表达水平差异均有统计学意义(mRNA:F=89.70、312.17、46.09,均P0.05)。Western印迹结果显示,生物膜悬液组和悬浮菌组TLR2蛋白表达均明显高于DMSO对照组。经不同MAPK/NF-κB通路抑制剂预处理及痤疮丙酸杆菌生物膜悬液共孵育,C29组、ST2825组、BAY11-7082组、SB203580组、U0126-EtOH组及DMSO对照组IL-6、IL-8、TNF-αmRNA及游离蛋白表达水平均显著低于生物膜悬液组(均P<0.05)。结论痤疮丙酸杆菌生物膜诱导人角质形成细胞发生炎症反应能力较强,可能通过激活TLR2/MAPK/NF-κB信号通路实现。

关键词：痤疮丙酸杆菌生物膜角蛋白细胞 Toll样受体2 炎症反应 MAPK/NF-κB信号通路

DNaseⅠ对痤疮丙酸杆菌生物膜的抑制效应研究

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中华皮肤科杂志 2023年第10期56卷 920-924页

作者：周蒙郑娜娜曾荣徐浩翔段志敏刘宇甄李岷中国医学科学院北京协和医学院皮肤病医院南京210042 江苏省皮肤病与性病分子生物学重点实验室南京210042 南京医科大学附属江宁医院南京211100

目的探讨DNaseⅠ对痤疮丙酸杆菌生物膜的抑制效应。方法构建痤疮丙酸杆菌生物膜并给予DNaseⅠ处理,分为不同DNaseⅠ浓度组(0、5、10、20 U/ml)。采用四甲基氮盐法检测生物膜活力,结晶紫半定量法检测生物膜含量,激光共聚焦显微镜观察生... 详细信息

目的探讨DNaseⅠ对痤疮丙酸杆菌生物膜的抑制效应。方法构建痤疮丙酸杆菌生物膜并给予DNaseⅠ处理,分为不同DNaseⅠ浓度组(0、5、10、20 U/ml)。采用四甲基氮盐法检测生物膜活力,结晶紫半定量法检测生物膜含量,激光共聚焦显微镜观察生物膜结构及活菌/死菌比值。组间差异比较采用单因素方差分析。结果5、10、20 U/ml的DNaseⅠ处理后痤疮丙酸杆菌生物膜活力值分别为1.882±0.421、1.653±0.287、1.473±0.154,与阴性对照组(2.668±0.245)相比存在显著抑制,且DNaseⅠ浓度越高抑制作用越显著(F=9.68,P=0.005)。5、10、20 U/ml DNaseⅠ组生物膜含量值分别为1.039±0.003、0.489±0.079、0.147±0.034,与阴性对照组(1.359±0.071)相比显著降低,且DNaseⅠ浓度越高生物膜含量越低(F=174.40,P<0.001)。激光共聚焦显微镜观察结果显示,与阴性对照组相比,5、10、20 U/ml DNaseⅠ组生物膜结构被破坏,且DNaseⅠ浓度越高生物膜结构破坏越严重。5、10、20 U/ml DNaseⅠ组痤疮丙酸杆菌生物膜活菌/死菌比值分别为2.303±0.457、1.534±0.526、1.263±0.354,比阴性对照组(4.475±0.146)显著降低,且浓度越高生物膜活菌/死菌比值越低(F=56.75,P<0.0001)。结论DNaseⅠ对痤疮丙酸杆菌生物膜的结构有破坏作用,对其活力有抑制作用。

关键词：痤疮丙酸杆菌生物膜脱氧核糖核酸酶Ⅰ

氨基酮戊酸孵育不同时间对光动力疗法抑制痤疮丙酸杆菌生物膜效应的影响

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中华皮肤科杂志 2022年第3期55卷 208-212页

作者：刘宇甄曾荣郑娜娜段志敏徐浩翔吴秋菊林彤李岷南京医科大学附属江宁医院皮肤科南京211100 中国医学科学院、北京协和医学院皮肤病医院激光科江苏省皮肤病与性病分子生物学重点实验室南京210042 中国医学科学院、北京协和医学院皮肤病医院真菌科南京210042

目的探讨氨基酮戊酸(ALA)孵育不同时间对ALA光动力疗法(ALA-PDT)抑制痤疮丙酸杆菌生物膜效应的影响。方法在预先放置细胞爬片的24孔和96孔细胞培养板中构建痤疮丙酸杆菌生物膜,使用共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)观察生物膜的形成情况,用... 详细信息

目的探讨氨基酮戊酸(ALA)孵育不同时间对ALA光动力疗法(ALA-PDT)抑制痤疮丙酸杆菌生物膜效应的影响。方法在预先放置细胞爬片的24孔和96孔细胞培养板中构建痤疮丙酸杆菌生物膜,使用共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)观察生物膜的形成情况,用甲基四氮盐(XTT)法观察生物膜生长活力情况。确定生物膜体外模型构建成功后,分成6组,阴性对照组不加入ALA、不照光;ALA组仅予ALA孵育30 min,不照光;LED组仅予照光但不加入ALA;ALA-PDT1组、ALA-PDT2组、ALA-PDT3组分别与ALA孵育15、30、60 min后,接受LED光照射。处理完成后采用CLSM检测生物膜结构、死菌/活菌比例,XTT法观察生物膜生长活力差异。组间差异比较采用单因素方差分析及LSD-t检验。结果CLSM观察显示,痤疮丙酸杆菌生物膜体外模型构建成功。ALA-PDT1组、ALA-PDT2组、ALA-PDT3组死菌/活菌比值分别为0.90±0.16、1.75±0.19和2.57±0.32,均显著高于阴性对照组(0.31±0.01,t值分别为55.56、138.62、74.64,均P<0.001);生物膜活力值分别为0.35±0.02、0.26±0.02和0.18±0.01,均显著低于阴性对照组(0.43±0.00;t值分别为35.66、2.64、110.96,均P<0.001)。CLSM显示,痤疮丙酸杆菌生物膜在ALA-PDT作用下结构被破坏,且随着ALA孵育时间延长,生物膜破坏越严重。结论ALA孵育时间延长会增强ALA-PDT抑制痤疮丙酸杆菌生物膜效应。

关键词：痤疮丙酸杆菌生物膜光化学疗法氨基酮戊酸孵育时间

Q开关Nd:YAG激光、翠绿宝石激光及红宝石激光治疗颧部褐青色痣临床疗效对比研究及疗效影响因素探讨

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Q开关Nd:YAG激光、翠绿宝石激光及红宝石激光治疗颧部褐青色痣临...

作者：刘宇甄北京协和医学院

学位级别：硕士

颧部褐青色痣又名获得性双侧太田痣样斑、Hori’s斑,主要临床表现以双侧颧部对称分布的圆形、椭圆形或不规则形褐色、青褐色斑点为特征,不累及粘膜。组织病理示真皮上部,胶原纤维间散在细小、数量较少的梭形黑素细胞,其长轴与皮肤表面... 详细信息

颧部褐青色痣又名获得性双侧太田痣样斑、Hori’s斑,主要临床表现以双侧颧部对称分布的圆形、椭圆形或不规则形褐色、青褐色斑点为特征,不累及粘膜。组织病理示真皮上部,胶原纤维间散在细小、数量较少的梭形黑素细胞,其长轴与皮肤表面平行。随着选择性光热作用理论的提出,短脉冲激光在皮肤科广泛的应用,颧部褐青色痣的治疗取得了巨大的进步。然而对常用的Q开关Nd:YAG激光、Q开关翠绿宝石激光、Q开关红宝石激光疗效的评价及影响疗效的相关因素的分析报道有限。 [目的]对颧部褐青色痣的临床特征进行分析;探讨Q开关Nd:YAG激光、Q开关翠绿宝石激光、Q开关红宝石激光的临床疗效及影响疗效的相关因素。 [方法]回顾性分析685例颧部褐青色痣病例,其中男8例,女677例。对发病年龄、皮损颜色、累及部位等临床特点进行分析。治疗过程中分别单独接受Q开关Nd:YAG（1064nm）激光、Q开关翠绿宝石（755nm）激光、Q开关红宝石（694nm）激光治疗的患者有465例、149例、71例。由一名不参与研究的医师根据每次疗后、随访照片进行疗效评估。对三种不同激光的疗效进行统计学分析,并通过单因素和多因素Logistic回归分析疗效影响因素。 [结果]685例颧部褐青色痣患者中98.8%为女性,平均发病年龄23.29±8.69岁,平均首诊年龄31.34±8.99岁,≤14岁患者占1.9%,15-25岁患者占27.9%,26-35岁患者占36.4%,36-40岁患者占14.9%,40-49岁患者占16.4%,≥50岁患者占2.6%。常见累及部位依次为：颧部（84.4%）,鼻根（14.5%）,额外侧（8.9%）,外上眼睑（4.5%）,鼻翼（3.8%）。Q开关1064nm激光组、Q开关755nm激光组、Q开关694nm激光组总显效率分别为52.5%、51.9%、39.5%。Q开关755nm激光组、Q开关694nm激光组平均治疗5次后,75%患者达显效,Q开关1064nm激光组平均治疗7次后,才达同样效果。颧部褐青色痣合并黄褐斑,在三组不同激光间疗效及色素沉着发生几率无差异性。首次治疗年龄越小者及治疗次数越多者,疗效越好。是否合并黄褐斑是疗效影响因素（P＜0.05）,未合并黄褐斑者的疗效约是合并黄褐斑患者的47倍（OR=47.522）。三组不良反应的发生率分别是30.5%、27.5%、43.7%。色素沉着出现与否与疗效具有相关性（P＜0.001）,不出现色素沉着者的疗效是出现者的5.4倍（OR=5.448）。在Q开关694nm组中有1例出现点状色素减退。Q开关1064nm激光组中年龄、治疗次数、有无合并黄褐斑等变量与色素沉着有相关性。而Q开关755nm激光组中有无合并黄褐斑是色素沉着的相关因素。 [结论]颧部褐青色痣的主要发病人群是15-35岁女性,以颧部累及为主。Q开关Nd:YAG激光、Q开关翠绿宝石激光、Q开关红宝石激光均能有效、安全的治疗颧部褐青色痣。结合总体疗效及疗程长短进行评估,Q开关翠绿宝石激光是较好的选择。治疗次数是影响疗效的主要重要因素,治疗次数多,疗效好。Q开关1064nm、694nm激光组中色素沉着与疗效有相关性。Q开关1064nm激光对颧部褐青色痣的疗效还受年龄、有无合并黄褐斑多种因素的影响。

关键词：颧部褐青色痣临床特征 Q开关激光治疗疗效的影响因素

可耐受高温对黑曲霉生物膜体外模型构建的影响

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中国医学科学院学报 2017年第6期39卷 762-767页

作者：曾荣童建波刘宇甄陈青林彤李岷吕桂霞中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所南京210042 江苏省血液中心南京210042 江苏省皮肤性病学分子生物学重点实验室南京210042

目的在可耐受高温作用下构建黑曲霉生物膜模型,探讨可耐受高温效应对其形成结构及活力的影响。方法对比37℃下,分别采用共聚焦激光扫描显微镜和甲基四氮盐法探索在不同高温效应下(39℃或41℃)体外黑曲霉生物膜形成过程中的多个时间观察... 详细信息

目的在可耐受高温作用下构建黑曲霉生物膜模型,探讨可耐受高温效应对其形成结构及活力的影响。方法对比37℃下,分别采用共聚焦激光扫描显微镜和甲基四氮盐法探索在不同高温效应下(39℃或41℃)体外黑曲霉生物膜形成过程中的多个时间观察点(4、8、10、16、24、48和72 h)的超微结构差异及活力变化。结果与37℃相比,在4 h时,温度较高的39℃组和41℃组黏附率均显著降低(t=8.603,P=0.047;t=14.550,P=0.008),黏附浓度也均显著降低(t=8.315,P=0.0021;t=11.748,P=0.0015);在8 h时,温度越高,出芽率越低(t=8.906,P=0.049;t=23.310,P=0.009)、菌丝长度越短(t=35.118,P=0.039;t=63.450,P=0.006);在10~16 h菌丝生长阶段,温度越高菌丝极性生长破坏越严重,菌丝越弯曲,且分枝越多,活力越高(t=24.262,P=0.038;t=7.556,P=0.031);24 h时,温度越高生物膜厚度越薄(t=2.375,P=0.043,t=5.263,P=0.031),菌丝方向性越差,活力越低(t=24.262,P=0.038;t=7.556,P=0.031)。结论可耐受高温作用能够在一定程度上抑制黑曲霉生物膜的形成及其活力。

关键词：黑曲霉生物膜高温作用

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痤疮发病相关的重要皮肤微生物群研究进展

中华皮肤科杂志 2019年第5期52卷 346-349页

作者：刘宇甄曾荣徐浩翔李岷中国医学科学院北京协和医学院皮肤病医院江苏省皮肤病性病学分子生物学重点实验室南京210042

皮肤微生物群在人出生后不久就开始形成,种类繁多、数量巨大,与皮肤健康密切相关。痤疮是一种微生物感染相关的常见皮肤病。痤疮丙酸杆菌、葡萄球菌属及马拉色菌属等是目前发现与痤疮发病最密切相关的3种微生物。本文综述上述3种微生物... 详细信息

皮肤微生物群在人出生后不久就开始形成,种类繁多、数量巨大,与皮肤健康密切相关。痤疮是一种微生物感染相关的常见皮肤病。痤疮丙酸杆菌、葡萄球菌属及马拉色菌属等是目前发现与痤疮发病最密切相关的3种微生物。本文综述上述3种微生物与痤疮发病的关系,主要包括不同型别细菌或真菌致病能力、与痤疮发病机制的关系及刺激机体产生免疫应答反应的差异等,以期为制定痤疮治疗的新策略提供依据。

关键词：寻常痤疮微生物群落痤疮丙酸杆菌葡萄球菌属马拉色霉菌属

氨基酮戊酸光动力对痤疮丙酸杆菌生物膜的作用

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中国医学科学院学报 2020年第3期42卷 283-288页

作者：刘宇甄曾荣段志敏徐浩翔吴秋菊陈青林彤李岷中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所激光科南京210042 江苏省血液中心南京210042 中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所江苏省皮肤性病学分子生物学重点实验室南京210042

目的探讨氨基酮戊酸光动力治疗(ALA-PDT)对痤疮丙酸杆菌生物膜的作用。方法在细胞爬片上培养构建痤疮丙酸杆菌生物膜,然后进行ALA-PDT处理。将实验分为不同光照剂量(50、100、200 J/cm^2)的ALA-PDT组(ALA-PDT1、ALA-PDT2、ALA-PDT3组)... 详细信息

目的探讨氨基酮戊酸光动力治疗(ALA-PDT)对痤疮丙酸杆菌生物膜的作用。方法在细胞爬片上培养构建痤疮丙酸杆菌生物膜,然后进行ALA-PDT处理。将实验分为不同光照剂量(50、100、200 J/cm^2)的ALA-PDT组(ALA-PDT1、ALA-PDT2、ALA-PDT3组)和单纯ALA作用组(ALA组)、单纯LED光照射组(LED组)及阴性对照组(ALA-PDT-组),采用激光共聚焦显微镜(CLSM)观察生物膜结构及死菌/活菌比值,四甲基氮盐法(XTT)检测生物膜活力。结果CLSM观察结果显示,与ALA-PDT-组相比,ALA组和LED组的生物膜结构无明显差异;ALA-PDT1组、ALA-PDT2组和ALA-PDT3组的生物膜结构则明显被破坏,且光照强度越强,生物膜结构破坏越严重。ALA-PDT-组、ALA组、LED组、ALA-PDT1组、ALA-PDT2组和ALA-PDT3组的痤疮丙酸杆菌生物膜死菌/活菌比值分别为0.350±0.033、0.305±0.046、0.330±0.032、1.525±0.439、2.293±0.148和3.092±0.189,其中,ALA组(md=0.003,P=1.000)和LED组(md=-0.025,P=1.000)与ALA-PDT-组差异无统计学意义;ALA-PDT1组(md=-0.162,P<0.001)、ALA-PDT2组(md=-0.254,P<0.001)和ALA-PDT3组(md=-0.352,P<0.001)明显高于ALA-PDT-组。XTT检测结果显示,ALA-PDT-组、ALA组、LED组、ALA-PDT1组、ALA-PDT2组和ALA-PDT3组的痤疮丙酸杆菌生物膜活力分别为0.462±0.028、0.465±0.044、0.437±0.047、0.301±0.040、0.207±0.001和0.110±0.007,其中,ALA组(md=-0.044,P=1.000)和LED组(md=-0.020,P=1.000)与ALA-PDT-组相比差异没有统计学意义;ALA-PDT1(md=1.175,P<0.001)、ALA-PDT2(md=1.942,P<0.001)和ALA-PDT3组(md=2.742,P<0.001)明显低于ALA-PDT-组。结论ALA-PDT对痤疮丙酸杆菌生物膜有抑制作用,不仅能够破坏生物膜的结构,还能够抑制生物膜的活力。

关键词：痤疮丙酸杆菌生物膜氨基酮戊酸光动力

点阵双极射频技术治疗面颈部皱纹的疗效与安全性评价

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中华皮肤科杂志 2014年第10期47卷 695-698页

作者：郭丽芳林彤黄玉清刘宇甄中国医学科学院北京协和医学院皮肤病医院南京210042

目的评价点阵双极射频（eMatrix）治疗面颈部皱纹的有效性和安全性.方法 39例轻中度面颈部皱纹志愿者（女性37例,年龄35～ 60岁,Fitzpatrick皮肤类型Ⅳ～Ⅴ,Fitzpatrick皮肤弹性评分4～6分）接受3次（间隔4～6周）点阵双极射频治疗.治... 详细信息

目的评价点阵双极射频（eMatrix）治疗面颈部皱纹的有效性和安全性.方法 39例轻中度面颈部皱纹志愿者（女性37例,年龄35～ 60岁,Fitzpatrick皮肤类型Ⅳ～Ⅴ,Fitzpatrick皮肤弹性评分4～6分）接受3次（间隔4～6周）点阵双极射频治疗.治疗前及每次治疗后1个月进行访视,拍照,记录临床疗效和主观满意度及不良反应.结果 39例志愿者完成3次治疗后,Fitzpatrick皮肤弹性评分较基线值显著下降,皱纹改善评分随治疗次数增加而增高.额纹：3次治疗后Fitzpatrick皮肤弹性评分与治疗前比较差异有统计学意义（P＜0.01）,2次治疗后皱纹改善评分与1次治疗后比较差异有统计学意义（P＜0.05）.眉间纹、鱼尾纹、颈纹：3次治疗后Fitzpatrick皮肤弹性评分与治疗前比较,差异有统计学意义（均P＜0.01）,3次治疗后皱纹改善评分与1次后比较,差异有统计学意义（P＜ 0.05或0.01）.不良反应轻微,无休工期.结论点阵双极射频是一种安全、有效的治疗面颈部皱纹的方法.

关键词：点阵双极射频皮肤衰老治疗结果

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激光美容与皮肤年轻化

中华医学美学美容杂志 2020年第2期26卷 98-100页

作者：刘宇甄林彤中国医学科学院北京协和医学院皮肤病医院激光科南京210042

随着科技的进步,激光美容技术的发展日新月异.激光美容技术在皮肤年轻化领域的应用发展迅猛,显示了良好的临床效果及诱人的发展前景,但激光美容仪器种类繁多,治疗时怎样选择合适的激光治疗是个难题.就各种激光治疗仪器治疗皮肤老化的现... 详细信息

随着科技的进步,激光美容技术的发展日新月异.激光美容技术在皮肤年轻化领域的应用发展迅猛,显示了良好的临床效果及诱人的发展前景,但激光美容仪器种类繁多,治疗时怎样选择合适的激光治疗是个难题.就各种激光治疗仪器治疗皮肤老化的现状及发展前景进行概述.

关键词：激光美容美容技术皮肤年轻化发展前景