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吡咯伯克霍尔德氏菌JK-SH007合成IAA及其吲哚-3-乙酰胺途径分析

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吡咯伯克霍尔德氏菌JK-SH007合成IAA及其吲哚-3-乙酰胺途径分析

作者：刘婉慧南京林业大学

学位级别：硕士

吲哚-3-乙酸(IAA)作为一种天然存在的植物生长素,能对植物的发育起到重要促进作用。与植物生长发育或病害过程有关联的微生物中,许多也具有产生IAA的能力,从而使这些微生物影响和改变植物的生理过程。阐明植物生长促进细菌(PGPB)的IAA... 详细信息

吲哚-3-乙酸(IAA)作为一种天然存在的植物生长素,能对植物的发育起到重要促进作用。与植物生长发育或病害过程有关联的微生物中,许多也具有产生IAA的能力,从而使这些微生物影响和改变植物的生理过程。阐明植物生长促进细菌(PGPB)的IAA合成情况以及IAA合成机制有助于理解这类微生物的促生机制。吡咯伯克霍尔德氏菌(Burkholderia pyrrocinia)JK-SH007可以促进杨树等林木的生长,是一株良好的PGPB。已知其能够合成植物激素IAA是其发挥促生作用的原因之一。本研究将进一步分析外部环境条件对B.pyrrocinia JK-SH007分泌IAA的影响,并对其IAA的合成途径进行功能分析。主要研究结果如下:(1)B.pyrrocinia JK-SH007分泌IAA的能力通过Salkowski比色法、酶联免疫吸附法(ELISA)及高效液相色谱串联质谱法(HPLC-MS/MS)三种方法进行鉴定,表明B.pyrrocinia JK-SH007可以合成IAA,且能合成IAA合成通路相关中间体吲哚-3-丙酮酸(IPyA)、吲哚-3-乙腈(IAN)、吲哚-3-乙酰胺(IAM)以及色胺(TAM);研究了B.pyrrocinia JK-SH007菌株生长与合成IAA的关系,表明菌株生长稳定期的IAA合成量最高;研究了L-色氨酸(L-Trp)、温度和pH对B.pyrrocinia JK-SH007合成IAA的影响,表明L-Trp对菌株分泌IAA具有显著促进作用,B.pyrrocinia JK-SH007合成IAA的最佳温度是37℃,最适pH为7。(2)通过B.pyrrocinia JK-SH007无细胞提取物的IAA生成试验和利用B.pyrrocinia JK-SH007全基因组和NCBI及KEGG数据库的比对注释分析,表明B.pyrrocinia JK-SH007中含有IAM途径和TAM途径所需的全部基因,说明B.pyrrocinia JK-SH007极有可能通过完整的IAM途径和TAM途径合成IAA。(3)运用PCR技术对B.pyrrocinia JK-SH007中IAM途径关键基因——编码色氨酸2-单加氧酶基因iaaM及编码吲哚乙酰胺水解酶基因iaaH进行克隆,并通过生物信息学分析,表明:基因iaaM全长1 782 bp,可以编码593个氨基酸,蛋白分子量为64.81 kD,不具有信号肽;基因iaaH全长1 368 bp,能够编码455个氨基酸,蛋白分子量为47.28 kD,不具有信号肽。通过二级结构和系统发育分析说明两者在进化上均具有一定保守性;iaaM和iaaH基因在L-Trp处理下差异表达的实时荧光定量PCR方法(RT-qPCR)分析显示,两者表达量均显著提高,表明IAM途径在B.pyrrocinia JK-SH007合成IAA的过程中发挥了一定作用。(4)通过原核蛋白表达和底物喂养试验验证IAM途径的两个关键酶——色氨酸2-单加氧酶和吲哚乙酰胺水解酶的活性,表明两者均具有活性,IAM途径在B.pyrrocinia JK-SH007中具有活性且具有一定作用。本研究表明B.pyrrocinia JK-SH007具有合成IAA及其中间体的能力,L-Trp对菌株合成IAA具有显著促进作用,温度37℃、pH为7是B.pyrrocinia JK-SH007合成IAA的最佳条件;B.pyrrocinia JK-SH007的全基因组分析表明其可能具有完整的IAM和TAM合成途径,并分别从分子及蛋白水平对B.pyrrocinia JK-SH007基于IAM的IAA合成途径进行了功能验证,揭示了IAM途径在B.pyrrocinia JK-SH007 IAA合成中的分子功能机制,为探究B.pyrrocinia JK-SH007的促生机制奠定了基础。

关键词：吡咯伯克霍尔德氏菌吲哚-3-乙酸 L-色氨酸吲哚-3-乙酰胺

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土地供应政策对广州市房地产市场的影响研究

土地供应政策对广州市房地产市场的影响研究

作者：刘婉慧华南理工大学

学位级别：硕士

房地产行业经过近十多年的快速发展,已经逐步成为影响我国经济社会发展的重要行业;同时,该行业中亦已出现了投资规模过大、房价上涨过快、供应结构不合理以及市场秩序混乱等问题。对这些问题的解决,财政、货币政策的调控效果并未达到预... 详细信息

房地产行业经过近十多年的快速发展,已经逐步成为影响我国经济社会发展的重要行业;同时,该行业中亦已出现了投资规模过大、房价上涨过快、供应结构不合理以及市场秩序混乱等问题。对这些问题的解决,财政、货币政策的调控效果并未达到预期,亟待寻找一种更有效的政策措施以加强调控。土地政策作为一种非传统的宏观调控政策,正逐渐成为了国家宏观调控的工具之一,其对房地产行业的影响更为突出。研究土地政策如何影响房地产行业,对制订相关配套政策措施,促进房地产行业稳定健康可持续发展具有重要意义。本文通过研究国内外的土地供应政策,发现以往研究的局限性与不足,另辟蹊径,从土地调控具体作用于特定城市的效用切入,分析土地供应政策对城市房地产市场的影响程度。文章综合运用规范与实证分析相结合、一般与个别分析相结合等方法,对2002年以来我国重要的土地调控政策进行了梳理、分析及归纳总结,较系统地阐述土地政策的调控依据和机理,论述了土地政策作用于房地产市场的传导过程,以及调控土地结构、供应数量和价格的调控手段,对政府如何进一步运用土地供应政策来调控房地产市场指明了路径。文章以广州市为例进行实证分析,通过广州市房地产业的兴衰起伏,重点研究了三大关系,即广州市土地供应量与房地产数量、房地产价格关系,土地价格与房地产价格关系,及土地供应结构对房地产市场影响,以此较深入论证了土地政策对该市房地产市场的调控成效,检验了近年来土地供应政策调控的影响和效果。本研究为广州市完善土地供应调控政策体系提供理论依据和数据支持,并提出了促进广州市房地产市场良性发展的建议。通过研究,本文深化了土地政策的效果和影响研究,丰富了土地政策用于特定城市的研究实践,对今后制定包含土地政策在内的宏观调控政策具有一定的实用价值。

关键词：土地政策房地产宏观调控

吡咯伯克霍尔德氏菌JK-SH007吲哚-3-乙酰胺IAA合成功能及其依赖途径鉴定

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林业科学 2019年第9期55卷 121-129页

作者：刘婉慧陈飞飞叶建仁王朝恩康熠付欢欢南京林业大学南方现代林业协同创新中心南京林业大学林学院

【目的】探索吡咯伯克霍尔德氏菌JK-SH007(Burkholderia pyrrocinia JK-SH007)合成生长素吲哚-3-乙酸(indole-3-acetic acid, IAA)的能力,并阐明B.pyrrocinia JK-SH007存在色氨酸依赖型的吲哚-3-乙酰胺(indole-3-acetamide, IAM)IAA合成途径。【方法】使用Salkowski比色法和酶联免疫吸附法(ELISA)进行L-色氨酸对B.pyrrocinia JK-SH007合成IAA能力影响的检测;以B.pyrrocinia JK-SH007全基因组为模板,设计特异性引物克隆iaaM和iaaH基因,并使用生物信息学方法对其蛋白质和亲缘关系进行分析;通过实时荧光定量PCR方法分析B.pyrrocinia JK-SH007中的iaaM和iaaH基因在L-色氨酸处理下的差异表达。【结果】B.pyrrocinia JK-SH007菌株能够合成15.663μg·mL-1的IAA,在以L-色氨酸为前体的条件下其合成IAA的量显著增加,达到了44.404μg·mL-1。iaaM和iaaH基因均含有一个完整的开放阅读框,其中iaaM基因全长1 782 bp,编码593个氨基酸,属于Aminooxidase super family家族;iaaH基因全长1 368 bp,编码455个氨基酸,属于Amidase super family家族。在L-色氨酸的处理下,B.pyrrocinia JK-SH007中的iaaM和iaaH基因的表达量均显著增加。【结论】B.pyrrocinia JK-SH007具有合成IAA的能力,L-色氨酸对其合成IAA具有显著促进作用,且克隆得到了iaaM和iaaH基因,其在进化上具有一定的保守性,证明B.pyrrocinia JK-SH007中存在吲哚-3-乙酰胺IAA合成途径。

关键词：吡咯伯克霍尔德氏菌吲哚-3-乙酸吲哚-3-乙酰胺途径色氨酸2-单加氧酶基因吲哚乙酰胺水解酶基因

苎麻重金属ATP酶BnHMA1基因的克隆及表达分析

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植物生理学报 2020年第7期56卷 1531-1540页

作者：苏小惠佘玮杨瑞芳崔丹丹刘婕仪王继龙王昕慧刘婉慧崔国贤湖南农业大学农学院长沙410128

植物重金属ATP酶(heavy metal transporting ATPase, HMA)涉及植物对重金属的吸收、转运、解毒和富集等过程。根据苎麻(Boehmeria nivea)转录组测序结果中HMA基因的保守序列设计特异性引物,采用RACE (rapid-amplification of cDNA ends... 详细信息

植物重金属ATP酶(heavy metal transporting ATPase, HMA)涉及植物对重金属的吸收、转运、解毒和富集等过程。根据苎麻(Boehmeria nivea)转录组测序结果中HMA基因的保守序列设计特异性引物,采用RACE (rapid-amplification of cDNA ends)技术从苎麻中获得了HMA全长cDNA序列(Genbank:2209492)。该基因cDNA全长为2 811 bp,含有一个2 487 bp的开放阅读框,编码蛋白含828个氨基酸,分子量为90.70 kDa,等电点(p I)为8.84,属于P-type ATPase家族成员。与川桑(Morus notabilis)、白梨(Pyrus bretschneideri)的相似性高达80%以上。亚细胞定位预测BnHMA1定位在叶绿体, qRT-PCR分析表明BnHMA1在苎麻中的相对表达量依次为叶片>茎皮>根部>茎秆。镉(Cadmium)胁迫前后镉敏感品种‘湘苎3号’叶片、茎秆和根中BnHMA1表达量高于其他两个品种,基因表达的差异化可能是苎麻品种耐镉能力不同的原因之一。

关键词：苎麻 HMA 基因克隆序列分析

吡咯伯克霍尔德氏菌JK-SH007多聚半乳糖醛酸酶基因的克隆及表达分析

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南京林业大学学报（自然科学版） 2018年第4期42卷 127-133页

作者：陈飞飞黄金思王翕韫刘婉慧叶建仁南京林业大学南方现代林业协同创新中心南京林业大学林学院江苏南京210037

【目的】克隆吡咯伯克霍尔德氏菌JK-SH007(Burkholderia pyrrocinia JK-SH007)多聚半乳糖醛酸酶基因(BpPG),并阐明Bp PG基因在B.pyrrocinia JK-SH007定殖中的生物学功能。【方法】通过设计特异性引物(PG-F、PG-F)克隆Bp PG基因,并对其... 详细信息

【目的】克隆吡咯伯克霍尔德氏菌JK-SH007(Burkholderia pyrrocinia JK-SH007)多聚半乳糖醛酸酶基因(BpPG),并阐明Bp PG基因在B.pyrrocinia JK-SH007定殖中的生物学功能。【方法】通过设计特异性引物(PG-F、PG-F)克隆Bp PG基因,并对其全长基因进行生物信息学分析;采用MEGA 5.0软件进行系统发育树分析;将B.pyrrocinia JK-SH007接种杨树,利用实时荧光定量PCR方法,分析Bp PG基因在B.pyrrocinia JK-SH007定殖过程中的差异表达。【结果】Bp PG基因全长2 001 bp,编码666个氨基酸,预测蛋白质分子量69.23 ku,理论等电点为8.37;Bp PG蛋白有6个蛋白质结合位点,属于Glycosyl hydrolases family 28家族,为亲水性蛋白,不具有信号肽。二级结构主要包括α-螺旋、β折叠、延伸链和无规则卷曲,三级结构预测结果与二级结构相符。系统进化分析表明,Bp PG与PG(Gen Bank序列号WP 034181566.1)具有同源性。实时荧光定量PCR结果显示B.pyrrocinia JKSH007定殖过程中,不同时期的Bp PG基因表达量存在差异。【结论】克隆得到Bp PG基因,Bp PG基因在进化上是保守的,其极有可能在B.pyrrocinia JK-SH007定殖过程中发挥作用。

关键词：吡咯伯克霍尔德氏菌多聚半乳糖醛酸酶基因分子克隆表达分析

基于杜邦分析法的LY生物科技有限公司盈利能力分析

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知识经济 2021年第24期592卷 94-96页

作者：张双靠乔雅洁何明珊刘婉慧安康学院经济与管理学院 725000

在市场竞争日益激烈的大环境下,盈利能力作为企业生存和发展的基础,在财务管理中占据着重要地位,作为分析盈利能力重要方法的杜邦分析法更值得借鉴分析。文章以LY公司为研究对象,在实地调查、访谈基础上,结合公司2016-2020年财务数据,... 详细信息

在市场竞争日益激烈的大环境下,盈利能力作为企业生存和发展的基础,在财务管理中占据着重要地位,作为分析盈利能力重要方法的杜邦分析法更值得借鉴分析。文章以LY公司为研究对象,在实地调查、访谈基础上,结合公司2016-2020年财务数据,利用杜邦分析法对于公司财务指标进行分解、评价,找出影响公司盈利的关键因素,发现销售利润率偏低、财务杠杆压力较大、营业效率不足等问题对公司盈利能力产生影响。考虑公司实际和相关理论,提出应进行供应商分级采购降低费用成本、银行借款融资合理负债、加强科技研发投入等具体措施,为企业提升盈利能力提供相关建议。

关键词：盈利能力杜邦分析法净资产收益率

短小芽孢杆菌HR10产孢培养基及发酵条件优化

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微生物学杂志 2021年第2期41卷 37-45页

作者：王朝恩刘婉慧陆蓝翔付欢欢石慧敏史纪武叶建仁南京林业大学南方现代林业协同创新中心林学院江苏南京210037

短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)HR10是一株具有促生抗逆作用的优良菌株。探究菌株HR10产孢的最佳发酵培养条件,对于在更大规模上进行生产发酵具有重要的指导意义。以稀释涂布平板法计数活菌数和芽孢数并计算芽孢率;对菌株HR10产孢培养... 详细信息

短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)HR10是一株具有促生抗逆作用的优良菌株。探究菌株HR10产孢的最佳发酵培养条件,对于在更大规模上进行生产发酵具有重要的指导意义。以稀释涂布平板法计数活菌数和芽孢数并计算芽孢率;对菌株HR10产孢培养基的碳源、氮源和无机盐进行单因素分析及正交试验,并采用摇瓶发酵法对影响菌株HR10产孢的几种发酵因子进行单因素优化。结果显示,菌株HR10的产孢培养基最佳组成成分为葡萄糖1%、糖蜜1%、豆饼粉2%、KCl 0.3%、MnSO40.4%。最佳发酵条件为温度37℃、pH 7、250 mL三角瓶装液量50%、接种量5%、转速220r/min、培养时间52 h。芽孢数达到2.37×10^(10)cfu/mL,芽孢率达94.46%。相比初始培养基芽孢数提高了60.77倍,为其工业化生产提供参考。

关键词：短小芽孢杆菌菌株HR10芽孢培养基成分发酵条件正交试验

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产复春腹疗带临床应用观察

四川医学 1995年第1期16卷 44-44页

作者：刘婉慧内江市中区保健院

产复春腹疗带临床应用观察内江市中区保健院（６４１０００）刘婉慧现将我院１９９３年１２月至１９９４年４月临床应用产复春腹疗带对产妇产后形体、功能等方面恢复的观察报告如下。材料与方法“产复春腹疗带”是四川省中医学会科研产... 详细信息

产复春腹疗带临床应用观察内江市中区保健院（６４１０００）刘婉慧现将我院１９９３年１２月至１９９４年４月临床应用产复春腹疗带对产妇产后形体、功能等方面恢复的观察报告如下。材料与方法“产复春腹疗带”是四川省中医学会科研产品，由成都国泰医药科技开发公司生产...

关键词：产妇卫生保健产复春腹疗带临床应用

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卡孕栓在利凡诺中期妊娠引产失败中的应用

中国医药导报 2005年第8期2卷 78-78页

作者：刘婉慧四川省内江市市中区妇幼保健院 641000

目的利凡诺羊膜腔内注射中期妊娠引产失败后,用卡孕栓阴道给药引产的有效性及安全性。方法将我院1999年1月始到2000年9月止住院的中期妊娠患者,经羊膜腔内注射利凡诺引产达72小时后无宫缩、无胎儿排出的引产失败者20例,随机分为两组,一... 详细信息

目的利凡诺羊膜腔内注射中期妊娠引产失败后,用卡孕栓阴道给药引产的有效性及安全性。方法将我院1999年1月始到2000年9月止住院的中期妊娠患者,经羊膜腔内注射利凡诺引产达72小时后无宫缩、无胎儿排出的引产失败者20例,随机分为两组,一组用卡孕栓阴道给药,一组静滴缩宫素。比较两组方式引产的有效率,死胎排出时间、副作用。结果两组给药方式引产的有效率、死胎排出时间、出血量比较:卡孕栓组优于静滴缩宫素组,临床副作用,两组无显著差异,两组引产同样安全。

关键词：卡孕栓利凡诺引产失败引产