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香菇单核体交配型及杂交后代的等位基因特异性PCR鉴定

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微生物学通报 2024年第5期51卷 1741-1753页

作者：张芳芳陈雪凤张雯龙刘增亮赵承刚吴圣进广西壮族自治区农业科学院微生物研究所广西南宁530007

【背景】食用菌交配型和单单杂交杂合子的鉴定通常采用显微镜检测观察是否具有锁状联合的方式进行,存在耗时长、工作量大且易出现误检等问题。【目的】建立一种鉴定香菇单核体交配型和单单杂交后代的分子辅助育种技术,为提高育种效率提... 详细信息

【背景】食用菌交配型和单单杂交杂合子的鉴定通常采用显微镜检测观察是否具有锁状联合的方式进行,存在耗时长、工作量大且易出现误检等问题。【目的】建立一种鉴定香菇单核体交配型和单单杂交后代的分子辅助育种技术,为提高育种效率提供技术支撑。【方法】利用交配型因子保守序列单核苷酸多态性(single-nucleotide polymorphism,SNP)位点设计分型引物,建立等位基因特异性PCR(allele-specific PCR,AS-PCR)技术,鉴定香菇L808和YX7的单孢分离株交配型及其杂交后代。【结果】AS-PCR鉴定结果表明,L808的38个单孢分离株中,交配型为A1B1、A2B2、A1B2和A2B1的单核体分别有6、13、8和11个;YX7的45个单孢分离株中,交配型为A3B3、A4B4、A3B4和A4B3的单核体分别有15、8、8和12个,交配型为A3A4B3B4的异核体2个;12个单单杂交菌株中,10个为真正的杂合子,2个为非杂合子。传统方法与AS-PCR分子鉴定结果完全一致,但前者容易将异核体误判为单核体。【结论】基于SNP位点的AS-PCR技术能有效鉴别香菇单核体交配型和单单杂交后代,区分单核体与异核体,具有精准、高效的特点,是一种香菇分子辅助育种的理想工具。

关键词：香菇交配型杂交后代单核苷酸多态性等位基因特异性PCR

百香果响应烟草疫霉侵染的分子机制及基因挖掘

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南方农业学报 2024年第3期55卷 589-600页

作者：孙嘉曼陈格罗海玲黄永才刘增亮杨柳张进忠嘉应学院/广东省山区特色农业资源保护与精准利用重点实验室广东梅州514015 农业农村部百香果生物学与遗传育种重点实验室广西南宁530007 广西农业科学院/广西作物遗传改良生物技术重点开放实验室广西南宁530007 广西农业科学院微生物研究所广西南宁530007

【目的】在转录水平上分析百香果响应烟草疫霉(Phytophthora nicotianae)侵染的表达模式,挖掘抗性相关基因并解析其作用机制,为利用分子手段进行百香果抗病性状筛选和抗病品种选育打下基础。【方法】以百香果主栽品种钦果9号为试材,对... 详细信息

【目的】在转录水平上分析百香果响应烟草疫霉(Phytophthora nicotianae)侵染的表达模式,挖掘抗性相关基因并解析其作用机制,为利用分子手段进行百香果抗病性状筛选和抗病品种选育打下基础。【方法】以百香果主栽品种钦果9号为试材,对烟草疫霉侵染12、24、48、72和96 hpi钦果9号进行组织表型观察和生理指标测定;采用转录组测序(RNA-Seq)构建钦果9号响应烟草疫霉侵染的转录组,使用DESeq分析基因表达差异,以P<0.005、错误发现率(FDR)≤0.001和|log2 Ratio|≥1为标准筛选差异表达基因(DEGs);通过BLAST2GO和KOBAS2等进行DEGs的GO功能注释分析和KEGG信号通路富集分析,明确钦果9号响应烟草疫霉侵染的主要通路和代谢途径;挖掘与植物抗病相关代谢通路的DEGs并利用MeV软件绘制基因表达热图,分析其在烟草疫霉侵染钦果9号过程中的动态变化趋势;实时荧光定量PCR验证基因表达量差异与转录组数据的一致性。【结果】烟草疫霉侵染钦果9号初期叶片无明显症状,侵染48hpi叶片出现褪绿,随着侵染时间不断延长,病斑颜色变深并不断扩大呈明显棕色枯斑;从侵染12hpi开始所有处理组钦果9号叶片中时超氧化物歧化酶(SOD)活性显著高于对照组(P<0.05),在24 hpi时SOD活性达最高值,表明侵染初期烟草疫霉已开始从伤口侵入钦果9号叶片。转录组分析共筛选获得7163个DEGs,KEGG信号通路富集分析发现,DEGs主要在植物激素信号转导、植物—病原菌互作、苯丙烷类生物合成、MAPK信号途径及类黄酮生物合成等与植物抗病相关的通路显著富集,表明这些通路在转录水平上是百香果响应烟草疫霉侵染的主要代谢途径。植物—病原菌互作通路中的PR1、CERK1、RPM1、CDPK和CML等基因,茉莉酸(JA)/乙烯(ET)信号途径中的JAR1、JAZ2、ERF1、EBF1和ERS等基因,以及次生代谢相关的CAD6、4CL、POD、CHS和LDOX等基因均在感染烟草疫霉的钦果9号植株中大幅上调表达,推测这些基因参与了百香果对烟草疫霉的抗性反应过程。实时荧光定量PCR结果验证了RNA-Seq数据的可靠性。【结论】植物激素信号转导、植物—病原菌互作、苯丙烷类生物合成、MAPK信号途径及类黄酮生物合成是百香果响应烟草疫霉侵染的主要信号通路和代谢途径。不同代谢途径中的关键基因以复杂方式参与了百香果对烟草疫霉的抗性反应过程。

关键词：百香果烟草疫霉转录组分析分子机制基因挖掘

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香菇新品种‘金香194’

园艺学报 2024年第S1期 117-118页

作者：陈雪凤刘增亮张雯龙吴圣进赵承刚王灿琴蒋建明吴小建广西壮族自治区农业科学院微生物研究所全州县农业科学研究所

‘金香194’是由广西来宾市金秀县的野生香菇子实体经组织分离人工驯化和系统选育获得的中温型耐碱性香菇品种。菌丝耐碱性能力强，最适宜pH为4～8；子实体单生，中型，菌肉较紧实；菌盖圆整，中部具脐突状，黄褐色，表面有鳞片；菌柄... 详细信息

‘金香194’是由广西来宾市金秀县的野生香菇子实体经组织分离人工驯化和系统选育获得的中温型耐碱性香菇品种。菌丝耐碱性能力强，最适宜pH为4～8；子实体单生，中型，菌肉较紧实；菌盖圆整，中部具脐突状，黄褐色，表面有鳞片；菌柄浅白色、中粗、有鳞片。出菇温度15～22℃，菌龄120～150 d，生物学效率为85%～97%，规格15 cm×55 cm的栽培袋（干料约900 g）鲜菇产量765～873 g·袋-1。适于广西中部、北部地区栽培。

关键词：香菇系统选育耐碱性品种

黔产红托竹荪绿霉病病原菌的分离鉴定及绿色药剂筛选

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山地农业生物学报 2024年第4期 31-38页

作者：滕虎亮秦顺王俊容戴仁怀宋理洪张钰龙刘增亮陈孝玉龙贵州大学农学院贵州大学资源与环境工程学院广西自治区农业科学研究院微生物研究所贵州大学生命科学学院

为明确贵州省纳雍县红托竹荪绿霉病的病原菌种类，并探究杀菌剂对病原菌的室内抑菌效果及红托竹荪菌丝的安全性，以期为红托竹荪绿霉病的田间防治提供理论依据。本研究对贵州省纳雍县乐治镇黄家寨黔产红托竹荪种植基地具有典型症状的红... 详细信息

为明确贵州省纳雍县红托竹荪绿霉病的病原菌种类，并探究杀菌剂对病原菌的室内抑菌效果及红托竹荪菌丝的安全性，以期为红托竹荪绿霉病的田间防治提供理论依据。本研究对贵州省纳雍县乐治镇黄家寨黔产红托竹荪种植基地具有典型症状的红托竹荪绿霉病子实体进行病原菌的分离和纯化，利用科赫氏法则对所得病原菌进行致病性测定，并结合形态学特征、18S rDNA和TEF1基因序列分析及系统发育树进化分析鉴定病原菌株。同时选取了8种不同类型的杀菌剂对病原菌进行室内毒力测定以及杀菌剂对红托竹荪菌丝安全性评价。结果表明：引起红托竹荪绿霉病的病原菌为哈茨木霉（Trichoderma harzianum）;室内毒力测定结果显示，对哈茨木霉菌丝生长抑制作用最强的是450 g/L咪鲜胺水乳剂和10%苯醚甲环唑水分散粒剂，其EC50值分别为0.005 3 mg/L和0.000 7 mg/L; 8种药剂对红托竹荪的室内安全性测定结果表明，80%代森锌可湿性粉剂、75%百菌清可湿性粉剂对红托竹荪菌丝的抑制率最低，EC50值分别为12.285 4 mg/L和10.893 9 mg/L;其次是25%腐霉·福美双可湿性粉剂，其EC50值为1.845 2 mg/L。综上所述，25%腐霉·福美双可湿性粉剂不仅对红托竹荪绿霉病病原菌有较高的抑制效果，并且对红托竹荪菌丝的安全性也较高，可作为进一步田间试验的首选药剂。

关键词：红托竹荪哈茨木霉绿霉病药剂筛选

秀珍菇黄斑病病原菌的生物学特性及药剂室内毒力测定

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中国食用菌 2024年第1期43卷 67-72页

作者：刘增亮吴圣进陈雪凤胡虹娇张雯龙祁亮亮陈孝玉龙广西壮族自治区农业科学院微生物研究所广西南宁530007 广西壮族自治区农业技术推广站广西南宁530022 贵州大学农学院贵州贵阳550025

为明确秀珍菇黄斑病病原菌奈氏西地西菌的生物学特性,测定不同药剂在室内的毒力。以秀珍菇黄斑病病原菌奈氏西地西菌为试材,采用生长量法研究了温度、pH、NaCl浓度对病原菌生长的影响;采用平板抑菌圈法研究了病原菌对不同抗生素的敏感性... 详细信息

为明确秀珍菇黄斑病病原菌奈氏西地西菌的生物学特性,测定不同药剂在室内的毒力。以秀珍菇黄斑病病原菌奈氏西地西菌为试材,采用生长量法研究了温度、pH、NaCl浓度对病原菌生长的影响;采用平板抑菌圈法研究了病原菌对不同抗生素的敏感性,并测定了14种杀菌剂在室内的毒力。结果显示病原菌生长的最适温度为28℃,最适pH为7.0;在NaCl浓度为1.0%条件下病原菌生长最好,NaCl浓度为9.0%以上则停止生长。54℃为病原菌致死临界线。病原菌对氨苄青霉素、四环素、链霉素、硫酸核糖霉素、土霉素均敏感,其中对土霉素最敏感,对红霉素和庆大霉素不敏感。辛菌胺醋酸盐、乙蒜素、氯溴异氰尿酸、噻霉酮微乳剂、农用链霉素、中生菌素对病原菌均有抑制作用,其中中生菌素毒力最强。通过试验明确了病原菌的生物学特性,测定了药剂室内毒力,为田间病害发生规律研究和防治提供了理论依据。

关键词：秀珍菇黄斑病奈氏西地西菌生物学特性药剂筛选

栽培料总硒浓度对秀珍菇产量、品质及产品安全性的影响

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中国食用菌 2024年第1期43卷 55-60页

作者：陈雪凤刘增亮张雯龙吴圣进赵承刚祁亮亮石鹏韦贤平广西壮族自治区农业科学院微生物研究所广西南宁530007 河池市宜州区农业科学研究所广西河池546300

以4个秀珍菇菌株为试验材料,探索栽培料总硒浓度对秀珍菇产量及子实体硒含量、营养成分、重金属含量的影响。结果表明,栽培料总硒浓度直接影响秀珍菇子实体硒含量,随总硒浓度增加,子实体硒含量升高;总硒浓度为0.07~1.47 mg·kg^(-1)时,... 详细信息

以4个秀珍菇菌株为试验材料,探索栽培料总硒浓度对秀珍菇产量及子实体硒含量、营养成分、重金属含量的影响。结果表明,栽培料总硒浓度直接影响秀珍菇子实体硒含量,随总硒浓度增加,子实体硒含量升高;总硒浓度为0.07~1.47 mg·kg^(-1)时,子实体硒含量在《富硒农产品》(GH/T 1135-2017)规定范围内,硒未超标,产品安全;总硒浓度为0.22 mg·kg^(-1)时,供试菌株的生物学效率均较高;总硒浓度增加可以提高秀珍菇子实体粗蛋白含量;栽培料总硒浓度增加时,子实体的砷、镉、铅含量不会相应增加,富集的硒与砷、镉、铅也不会产生协同作用。

关键词：秀珍菇栽培原料硒浓度产量品质产品安全性

上覆近距离邻近采空区工作面开采关键防灭火技术研究

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能源技术与管理 2023年第6期48卷 111-114页

作者：刘增亮山西马堡煤业有限公司山西长治046300

15205工作面在复杂开采环境下,采空区内遗煤自然发火问题受到瓦斯抽采和采空区多源漏风的负面影响。为了解决马堡煤业15205工作面采空区受到瓦斯与火的双重隐患,开展了遗煤自燃综合防控的技术研究。根据煤层自燃特性和采空区自燃监测预... 详细信息

15205工作面在复杂开采环境下,采空区内遗煤自然发火问题受到瓦斯抽采和采空区多源漏风的负面影响。为了解决马堡煤业15205工作面采空区受到瓦斯与火的双重隐患,开展了遗煤自燃综合防控的技术研究。根据煤层自燃特性和采空区自燃监测预报体系,构建了采空区灌浆、喷洒阻化剂、灌注两相泡沫等综合防灭火系统,并采取了巷道破碎区压注复合胶体材料堵漏防灭火措施,破坏了采空区内部的氧化环境,保障了工作面的安全高效回采。

关键词：瓦斯抽采多源漏风遗煤自燃综合防灭火

“抽-注一体化”瓦斯与火复合灾害平衡防控技术应用

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能源技术与管理 2023年第3期48卷 19-21页

作者：刘增亮山西马堡煤业有限公司山西长治046300

为解决马堡煤业15205工作面回采期间存在的上覆近距离煤层邻近采空区遗煤自燃以及邻近层双重瓦斯异常涌出的风险,提出了“抽-注一体化”的瓦斯与火复合灾害综合防控方法。通过应用低温惰性气体控制上覆采空区、注两相泡沫和邻近层瓦斯... 详细信息

为解决马堡煤业15205工作面回采期间存在的上覆近距离煤层邻近采空区遗煤自燃以及邻近层双重瓦斯异常涌出的风险,提出了“抽-注一体化”的瓦斯与火复合灾害综合防控方法。通过应用低温惰性气体控制上覆采空区、注两相泡沫和邻近层瓦斯抽采兼顾的瓦斯与火灾害协同防治技术,实现了自燃煤层降温阻化和提高瓦斯抽采效率的双重效果,显著降低了共存灾害发生的危险性。

关键词：近距离煤层遗煤自燃瓦斯抽采两相泡沫降温阻化

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利用SCAR分子标记鉴别香菇双单杂交后代

南方农业学报 2022年第10期53卷 2868-2875页

作者：吴圣进陈雪凤刘增亮张雯龙广西农业科学院微生物研究所广西南宁530007

【目的】利用SCAR分子标记鉴别香菇双单杂交后代,为香菇分子辅助育种提供技术支撑。【方法】通过ISSR分析获得标识供体亲本菌株YX7两个细胞核的特异性条带,根据特异性条带序列设计SCAR引物,对菌株YX7为供体和菌株808孢子单核体为受体杂... 详细信息

【目的】利用SCAR分子标记鉴别香菇双单杂交后代,为香菇分子辅助育种提供技术支撑。【方法】通过ISSR分析获得标识供体亲本菌株YX7两个细胞核的特异性条带,根据特异性条带序列设计SCAR引物,对菌株YX7为供体和菌株808孢子单核体为受体杂交获得的40个杂交菌株进行SCAR-PCR鉴别,并采用传统镜检和拮抗测试方法进行验证。【结果】筛选出分别标识供体菌株YX7两个细胞核核型的特异性条带a和b,据此设计的SCAR引物PA和PB分别对供体菌株YX7的2个不同细胞核具有特异性扩增作用。SCAR-PCR鉴定结果显示,40个待测菌株中,27个菌株为杂合子,其中19个菌株具有a条带标识核型,8个菌株具有b条带标识核型;13个菌株为非杂合子,其中11个菌株同时具有条带a和b标识的两个核型,是菌株YX7本身,另外2个菌株两种核型均未被检测出,属于菌株808的孢子单核体。传统方法验证结果与SCAR分子标记鉴定结果完全一致。与传统方法相比,SCAR标记方法更简便高效、结果更稳定可靠,并可通过核型标识进一步将杂合子分为两组。【结论】SCAR分子标记能高效、全面和精准鉴别香菇双单杂交菌株的杂合子和非杂合子,可应用于香菇杂交分子辅助育种和遗传分析。

关键词：香菇 SCAR 双单杂交杂合子分子鉴别