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作者：刘喜枝湖南师范大学

学位级别：硕士

睾丸生殖细胞肿瘤是近年来发病率呈明显上升趋势的一种男性生殖细胞肿瘤。流行病学及临床病理学的研究发现:睾丸萎缩、隐睾和不育是诱发睾丸生殖细胞肿瘤发生的一些主要的高危因素。而通过近年的分子遗传学研究,对睾丸生殖细胞肿瘤的发... 详细信息

睾丸生殖细胞肿瘤是近年来发病率呈明显上升趋势的一种男性生殖细胞肿瘤。流行病学及临床病理学的研究发现:睾丸萎缩、隐睾和不育是诱发睾丸生殖细胞肿瘤发生的一些主要的高危因素。而通过近年的分子遗传学研究,对睾丸生殖细胞肿瘤的发生原因提出了一些分子水平上的论证,在临床病理标本的观察中发现一些非常敏感和特异的标志物,例如:M2A、CD117、OCT-4和AP-2γ等。AP-2γ作为近年来发现的睾丸生殖细胞瘤发生中新的分子标记物,有研究证实正常情况下AP-2γ蛋白在22周以前的男性胎儿睾丸组织中有表达,当胎儿发育到22周后,AP-2γ蛋白表达量会逐步下降,胎儿出生后直至成年期的正常男性睾丸组织中则检测不到AP-2γ蛋白的表达。但是,在睾丸生殖细胞肿瘤中它却异常高表达,这说明在睾丸生殖细胞肿瘤从良性到恶性的转变过程中,AP-2γ起重要的作用。故而,鉴定AP-2γ调控的下游基因,将对了解睾丸生殖细胞肿瘤的遗传机制有重要的意义。在本课题中,我们通过免疫组化方法,检测了睾丸生殖细胞肿瘤组织和正常睾丸中AP-2γ蛋白表达情况,发现AP-2γ在正常睾丸组织中不表达,睾丸癌组织中高表达。随后运用ChIP-on-chip芯片实验,筛选到2000多个AP-2γ的靶基因,它们大多与细胞周期、凋亡和迁移等相关,我们结合信号通路分析选择了TGF-β信号通路中重要成员SMAD4作为研究对象,本课题研究睾丸生殖细胞瘤中AP-2γ与SMAD4基因的调控关系。Western blot实验检测NTera-2、MCF-7和HEK293三种细胞系中AP-2γ和SMAD4蛋白表达情况,发现AP-2γ在NTera-2细胞中高表达,MCF-7细胞中有表达,HEK293细胞中未见表达,而SMAD4则在以上三种细胞系中均有表达。ChIP-PCR实验结果显示,在睾丸生殖细胞肿瘤NTera-2细胞中AP-2γ能够结合到SMAD4基因启动子上游区域。Luciferase assay结果表明AP-2γ能抑制SMAD4的转录活性并呈剂量依赖性。Western blot实验结果显示,AP-2γ负调控SMAD4蛋白的表达。免疫荧光共定位实验发现在NTera-2细胞中内源AP-2γ和SMAD4蛋白在细胞核内信号叠加明显有很好的共定位。克隆形成实验、MTT实验及细胞计数实验都表明了下调AP-2γ的表达能抑制睾丸生殖肿瘤细胞株的生长和增殖,而这种抑制作用可能是通过上调肿瘤抑制基因SMAD4的表达来实现的。小鼠隐睾动物模型实验中,通过RT-PCR实验结果也显示了AP-2γ可以负调控SMAD4的表达,与体外实验结果与体外细胞水平结果一致。有文献报道姜黄素可以抑制AP-2γ的表达,我们通过western blot实验证实随着姜黄素浓度梯度升高,AP-2γ蛋白表达也呈现梯度下降,而SMAD4的表达则梯度上升,进一步证实AP-2γ可以负调控SMAD4基因的表达。综上,我们首次证明SMAD4基因是AP-2γ的靶基因,AP-2γ对SMAD4基因表达起负调控作用。AP-2γ调控睾丸生殖肿瘤细胞的生长和增殖可能是通过影响SMAD4的表达来实现的。这些研究为睾丸生殖细胞瘤发生过程中,AP-2γ参与调控TGF-β信号通路促进睾丸生殖细胞肿瘤的发生,进一步深入研究打下了基础。

关键词：睾丸生殖细胞肿瘤 AP-2γ 靶基因 SMAD4

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转录因子OCT-4对靶基因AP-2γ表达调控的研究

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生物化学与生物物理进展 2013年第1期40卷 43-49页

作者：赵晓蒙王成李晓峰张晓婷刘喜枝周畅湖南师范大学生命科学学院蛋白质化学与发育生物学教育部重点实验室长沙410081

OCT-4和AP-2γ是近年来睾丸生殖细胞瘤诊断过程中研究的热点基因.作为一个在胚胎发育中起着重要作用的转录因子,OCT-4基因在发育的不同时期、不同分化过程中发挥着多种生物学功能,其作用是通过对靶基因的调控来实现的.本研究运用多种软... 详细信息

OCT-4和AP-2γ是近年来睾丸生殖细胞瘤诊断过程中研究的热点基因.作为一个在胚胎发育中起着重要作用的转录因子,OCT-4基因在发育的不同时期、不同分化过程中发挥着多种生物学功能,其作用是通过对靶基因的调控来实现的.本研究运用多种软件分析,发现AP-2γ启动子区域的序列部分有OCT-4的结合位点.利用CHIP-PCR方法鉴定AP-2γ是OCT-4调控的靶基因.应用Luciferase assay、免疫荧光实验、小鼠隐睾模型等实验进行验证,OCT-4基因抑制AP-2γ转录活性和影响其蛋白质水平的表达.这一新发现,有利于从分子水平上研究睾丸生殖细胞瘤的发生机制.

关键词：睾丸生殖细胞肿瘤 OCT-4 靶基因 AP-2γ

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夏播高粱杂交种“郑杂11号”

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河南农业科学 1989年第4期 10-10页

作者：贺元泽卢超刘喜枝河南省农科院粮食所

“郑杂11号”高粱杂交种,是我所高粱研究室于1984年育成。1985—1987年参加全省杂交高粱区域试验三年和多点对比示范结果,产量比对照种“原杂10号”增产10%以上。最高亩产达650多公斤。该杂交种由于

关键词：高粱杂交种产量适应性广拔节期

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采取更加有力措施切实做好防汛救灾各项工作 003

采取更加有力措施切实做好防汛救灾各项工作

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池州日报

作者：刘喜枝

本报讯（通讯员刘喜枝）7月20日上午，全区防汛抗旱指挥部全体扩大会议紧急召开，深入贯彻落实中央、省、市关于进一步做好防汛救灾工作重要讲话精神和指示批示要求，并就做好Ⅰ级防汛应急响应期间贵池区防汛救灾工作进行再动员再部署... 详细信息

本报讯（通讯员刘喜枝）7月20日上午，全区防汛抗旱指挥部全体扩大会议紧急召开，深入贯彻落实中央、省、市关于进一步做好防汛救灾工作重要讲话精神和指示批示要求，并就做好Ⅰ级防汛应急响应期间贵池区防汛救灾工作进行再动员再部署。区委书记、平天湖风景区党工委书记、区防

关键词：应急响应防汛抗旱指挥部

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优化营商环境激活市场主体“一池春水” 003

优化营商环境激活市场主体“一池春水”

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池州日报

作者：刘喜枝

一端连接经济发展大动脉，一端连接城乡居民日常生活，市场主体尤其是小微企业是地方经济发展的生力军，在繁荣经济、吸纳就业、改善民生、促进创新等方面发挥着不可替代的作用。近些年，在区委、区政府的坚强领导下，区市场监管局把优... 详细信息

一端连接经济发展大动脉，一端连接城乡居民日常生活，市场主体尤其是小微企业是地方经济发展的生力军，在繁荣经济、吸纳就业、改善民生、促进创新等方面发挥着不可替代的作用。近些年，在区委、区政府的坚强领导下，区市场监管局把优化营商环境作为推进经济高质量发展的?

关键词：营商环境市场主体

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阿司匹林诱导人恶性睾丸生殖细胞瘤NTera-2细胞凋亡

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中国生物化学与分子生物学报 2012年第7期28卷 630-636页

作者：易朵李晓峰赵晓蒙王成张晓婷刘喜枝周畅湖南师范大学生命科学学院蛋白质化学与发育生物学教育部重点实验室长沙410081

阿司匹林,又称乙酰水杨酸,已证实有抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡和抑制血管生成等多种抗癌功能.除已知对环氧合酶COX-2的活性有抑制外,阿司匹林抗癌分子机制尚不十分清楚.已报道阿司匹林可以降低多种癌症发生风险,但应用于人类... 详细信息

阿司匹林,又称乙酰水杨酸,已证实有抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡和抑制血管生成等多种抗癌功能.除已知对环氧合酶COX-2的活性有抑制外,阿司匹林抗癌分子机制尚不十分清楚.已报道阿司匹林可以降低多种癌症发生风险,但应用于人类睾丸肿瘤治疗的研究报道很少.本文研究了阿司匹林对人恶性睾丸肿瘤NTera-2细胞凋亡的机制.通过MTT方法检测细胞活力,发现阿司匹林以时间和剂量依赖方式抑制NTera-2细胞增殖.不同浓度阿司匹林处理NTera-2细胞后,采用Hoechest 33258染色方法和Annexin V-FITC/PI流式法分别检测NTera-2细胞的形态学变化、凋亡小体形成、细胞凋亡水平;RT-PCR结果显示,NTera-2细胞中Fas和caspase-8的表达以阿司匹林剂量依赖性上升;蛋白印迹结果显示,FasL的蛋白表达水平下降并活化caspase-8、caspase-3蛋白表达,PARP出现剪切体.进一步的实验证明,caspase广谱抑制剂Z-VAD-FMK能够减弱阿司匹林诱导NTera-2细胞凋亡.结果显示,阿司匹林能明显抑制NTera-2细胞活力,并通过激活caspase通路诱导NTera-2细胞的凋亡,为进一步利用阿司匹林治疗人类睾丸肿瘤的研究奠定基础.

关键词：阿司匹林 NTera-2细胞细胞凋亡胱天蛋白酶

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