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紫绀型先天性心脏病病人循环内皮祖细胞的数量及功能变化

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中华胸心血管外科杂志 2008年第1期24卷 21-25页

作者：刘哲亮吴忠仕胡建国陈勇胡野荣李伟中南大学湘雅二医院胸心外科长沙410011 湖南省现代优生技术重点实验室

目的探讨紫绀型先天性心脏病病人外周血内皮祖细胞（endothelial progenitor cell，EPC）的数量及功能特点。方法选取法洛四联症及单纯室间隔缺损病人各10例，采用Fieoll密度梯度离心法从外周血中分离单个核细胞，用添加牛脑垂体提取物... 详细信息

目的探讨紫绀型先天性心脏病病人外周血内皮祖细胞（endothelial progenitor cell，EPC）的数量及功能特点。方法选取法洛四联症及单纯室间隔缺损病人各10例，采用Fieoll密度梯度离心法从外周血中分离单个核细胞，用添加牛脑垂体提取物和胎牛血清的M199培基进行体外诱导分化培养。用免疫组化和透射电镜行EPC表型鉴定；采用流式细胞仪计数CD133^＋／KDR^＋细胞；采用改良的Boyden小室，黏附能力测定实验和MTT比色法，观察EPC的迁移、黏附及增殖能力。结果紫绀型先天性心脏病病人外周血内皮祖细胞的数量增多[集落记数（14．7±3．1）／100倍视野对（8．2±1．3）／100倍视野；DiI-Acldl^＋／UEA-I^＋细胞数（72．2±9．73），200倍视野对（51．2±3．83）／200倍视野；CD133^＋／KDR^＋细胞百分比（0．66±0．20）％对（0．18±0．08）％，P〈0．01]，其迁移能力[（140．6±9．24）／200倍视野对（91．84±8．58）／200倍视野]、黏附能力[（149．00±11．58）／200倍视野对（112．6±7．02）／200倍视野]及增殖能力（0D值0．34±0．02对0．27±0．01）增强（P〈0．01）。结论紫绀型先天性心脏病病人循环内皮祖细胞的数量增多，其迁移、黏附及增殖能力增强。

关键词：心脏缺损先天性发绀内皮细胞细胞增殖细胞黏附细胞运动

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肺癌干细胞与肺癌的发生

中国组织工程研究 2014年第28期18卷 4568-4572页

作者：刘哲亮肖高明陈跃军吴冠宇中南大学湘雅医学院附属肿瘤医院湖南省肿瘤医院胸外一科湖南省长沙市410013

背景:肺癌具有高度异质性,能够抵抗化疗药物治疗,5年生存率小于15%,目前难以确定肺癌的异质性和耐药性的发病基础。肿瘤干细胞模型近年来吸引了相当多的关注,通过这种模型可以解释各种肿瘤的异质性、耐药性、休眠、复发和转移的机制。目... 详细信息

背景:肺癌具有高度异质性,能够抵抗化疗药物治疗,5年生存率小于15%,目前难以确定肺癌的异质性和耐药性的发病基础。肿瘤干细胞模型近年来吸引了相当多的关注,通过这种模型可以解释各种肿瘤的异质性、耐药性、休眠、复发和转移的机制。目的:通过综述各类肺癌的组织学类型和肿瘤生长部位的特征,概括肺癌干细胞与各种肺癌发生的关系,从而为消灭肺癌干细胞攻克肺癌提供理论依据。方法:以英文检索词为"lung cancer,cancer stem cell,lung cancer stem cell,lung cancer occur,tumor heterogeneity,drug resistance,gene mutation,signal pathways"由第一作者检索1990至2014年Sciencedirect/PubMed数据库,查阅近年肺癌干细胞对肺癌发生的影响的相关文献,最终保留48篇文献。结果与结论:肿瘤干细胞模型近年来吸引了相当多的关注,通过这种模型可以解释各种肿瘤的异质性、耐药性、休眠、复发和转移。肺癌干细胞被认为是一类异质的细胞群,多种信号通路可以有针对性的有效的消除他们,从而有助于增强治疗效果。目前多学科通力合作,正在进行肺癌干细胞表征和靶定,这将给肺癌治疗领域带来显著的治疗受益。

关键词：干细胞肿瘤干细胞肺癌肺癌干细胞肺癌发生肿瘤异质性肿瘤耐药性基因突变信号通路湖南省自然科学基金

γ射线消毒对不同保存方法牛颈静脉管道机械性能的影响

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中华实验外科杂志 2006年第9期23卷 1047-1049,i0001页

作者：胡野荣吴忠仕张明吕卫东李伟刘哲亮胡维新中南大学湘雅第二医院胸心外科长沙410011 中南大学生物科学与技术学院分子生物学研究中心

目的探讨γ射线消毒对不同保存方法牛颈静脉管道机械性能的影响,寻求牛颈静脉管道合适的灭菌和保存方法。方法：将采集、制作好的牛颈静脉拉力条按不同保存方法分为6组：新鲜对照组(A组),冷冻干燥组(B组),溶剂干燥组(C组),深冻组(D组),... 详细信息

目的探讨γ射线消毒对不同保存方法牛颈静脉管道机械性能的影响,寻求牛颈静脉管道合适的灭菌和保存方法。方法：将采集、制作好的牛颈静脉拉力条按不同保存方法分为6组：新鲜对照组(A组),冷冻干燥组(B组),溶剂干燥组(C组),深冻组(D组),PBS缓冲液保存组(E组),60％乙醇保存组(F组)。各组经25 kGyγ射线消毒(A组不进行γ射线消毒)后分别行单轴拉伸试验、细菌培养及组织形态学观察。结果上述5种方法保存的牛颈静脉管道经γ射线消毒后,其最大负荷与极限抗张强度分别为(25．23±15．95)N、(4．6±2．53)Mpa(B组),(35．28±14．66) N、(7．10±2．08)Mpa(C组),(25．44±7．97)N、(5．20±1．43)Mpa(D组),(31．55±12．32)N、(6．20±2．72)Mpa(E组),(32．02±18．44)N、(6．80±2．03)Mpa(F组)。与对照组[(23．43±11．21)N、(5．12±3．06)Mpa]相比,P＞0．05。断裂延伸率分别为(86．08±31．21)％(B组)、(137．99±38-80)％(C组)、(133．39±42．19)％(D组)、(153．23±55．00)％(E组)和(142．09±54．03)％(F组),与对照组(193.80±37．53)％相比,P＜0．05。细菌培养结果全部为阴性。组织切片显示B组和D组组织呈空腔空泡状改变。结论经25 kGyγ射线消毒后,上述五种保存方法处理牛颈静脉管道其最大负荷与极限抗张强度变化不明显,但其断裂延伸率均下降,尤以冷冻干燥保存组为甚。

关键词：颈静脉 γ射线灭菌机械性能保存

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人肺癌组织免疫缺陷鼠移植瘤模型的建立

癌症 2009年第8期28卷 890-893页

作者：胡野荣任泓刘哲亮喻风雷刘文亮周新民中南大学湘雅二医院胸心外科湖南长沙410011 美国Cell Signaling Technology公司马萨诸塞州波士顿01923

背景与目的:目前提倡对肿瘤实行靶向药物个性化治疗,建立不同通路异常肿瘤的动物模型成为必需。本研究探讨人非小细胞肺癌手术标本免疫缺陷鼠皮下移植瘤模型的建立及建模的适宜条件和方法。方法:选取BALB/c裸小鼠、SCID小鼠及NOD/scid... 详细信息

背景与目的:目前提倡对肿瘤实行靶向药物个性化治疗,建立不同通路异常肿瘤的动物模型成为必需。本研究探讨人非小细胞肺癌手术标本免疫缺陷鼠皮下移植瘤模型的建立及建模的适宜条件和方法。方法:选取BALB/c裸小鼠、SCID小鼠及NOD/scid小鼠各16只,采用套管针四点左边两块、右边一块式接种法,16例患者中每例患者的肿瘤组织标本分别接种于每个鼠种的一只。观察不同种免疫缺陷鼠移植瘤成瘤率、成瘤潜伏时间、肿瘤体积倍增时间、自然病亡率及左右两边接种点的成瘤率和头尾部成瘤点处死时大于1cm的比率,并鉴别移植瘤形态结构与来源组织的一致性及鉴定移植瘤是否为上皮来源。结果:总成瘤率为75%,其中4个病例只有SCID小鼠成瘤,2个病例只有BALB/c裸小鼠成瘤,NOD/scid小鼠无一例单独成瘤。不同种免疫缺陷鼠移植瘤成瘤率、成瘤潜伏时间和肿瘤体积倍增时间及左右两边接种点的成瘤率差异无统计学意义。SCID小鼠成瘤率最高,为56.25%;NOD/scid小鼠自然病亡率为25%,BALB/c裸小鼠、SCID小鼠在观察期内无一例病亡;处死时头部成瘤点大于1cm的比率(56.52%)与尾部成瘤点大于1cm的比率(25%)相比差异有统计学意义(P=0.037);所有移植瘤苏木精-伊红染色显示其形态结构均与来源组织一致,所有移植瘤角蛋白免疫组化均为阳性,显示移植瘤均为上皮来源。结论:四点两块套管针接种BALB/c裸小鼠和SCID小鼠各一只的方法能很好地建立非小细胞肺癌手术标本免疫缺陷鼠皮下移植瘤模型,头部移植瘤的生长速度明显快于尾部。

关键词：非小细胞肺癌移植瘤免疫缺陷小鼠套管针四点接种动物模型

人肺鳞癌来源肺癌干细胞原代培养:数量及功能变化

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中国组织工程研究 2015年第32期19卷 5172-5176页

作者：刘哲亮邬娇王林纤陈跃军吴冠宇肖高明中南大学湘雅医学院附属肿瘤医院胸外一科湖南省长沙市410013 中南大学湘雅医学院附属肿瘤医院麻醉科湖南省长沙市410013 中南大学湘雅医学院附属肿瘤医院检验科湖南省长沙市410013

背景:研究显示可从肺癌细胞系中分离出肺癌干细胞,但对于从新鲜肺鳞癌标本中原代培养肺癌干细胞的报道较少。目的:探索从新鲜肺鳞癌组织标本中分离肺鳞癌干细胞的可行方法,及其在原代培养过程中的数量和功能变化。方法:借助胶原酶消化... 详细信息

背景:研究显示可从肺癌细胞系中分离出肺癌干细胞,但对于从新鲜肺鳞癌标本中原代培养肺癌干细胞的报道较少。目的:探索从新鲜肺鳞癌组织标本中分离肺鳞癌干细胞的可行方法,及其在原代培养过程中的数量和功能变化。方法:借助胶原酶消化法、密度梯度离心法和Hoechst33342染料外排法初筛SP细胞,将初筛细胞置于条件培养基分离培养,后续应用流式细胞分析及分选技术,进一步分离纯化肺鳞癌干细胞。实验结合CD133和CD44鉴定目标细胞,计数第1代和第4代肺癌干细胞的CD133+、CD44+和CD133/CD44双阳性细胞数;检测第1代和第4代肺癌干细胞的单细胞克隆形成能力、平板集落形成能力和细胞球形成能力。结果与结论:传代培养第4代肺癌干细胞的CD133+、CD44+和CD133/CD44双阳性细胞数明显增多,流式细胞检测结果显示,第4代和第1代的CD133+和CD133/CD44双阳性细胞表达率差异有显著性意义,第4代和第1代肺癌干细胞的CD44+细胞表达率差异无显著性意义。第4代细胞的单细胞克隆形成能力,平板集落形成能力和细胞球形成能力比均明显强于第1代肺癌干细胞。实验初步从肺鳞癌患者新鲜肺组织标本中分离培养并获取干细胞样肺鳞癌细胞,且在体外稳定快速扩增,为进一步研究肺鳞癌干细胞的异质性和耐药性奠定基础。

关键词：干细胞肿瘤干细胞肺癌干细胞原代培养细胞鉴定湖南省自然科学基金

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人肺鳞癌干细胞的体外分离培养和鉴定

中国组织工程研究 2015年第28期19卷 4526-4530页

背景:研究显示可从肺癌细胞系中分离出肺癌干细胞,但对于从新鲜肺鳞癌标本中原代培养肺癌干细胞的报道较少。目的:探索从新鲜肺鳞癌组织标本中分离肺鳞癌干细胞的可行方法。方法:借助胶原酶消化法、密度梯度离心法和Hoechst33342染料外... 详细信息

背景:研究显示可从肺癌细胞系中分离出肺癌干细胞,但对于从新鲜肺鳞癌标本中原代培养肺癌干细胞的报道较少。目的:探索从新鲜肺鳞癌组织标本中分离肺鳞癌干细胞的可行方法。方法:借助胶原酶消化法、密度梯度离心法和Hoechst33342染料外排法初筛SP细胞,将初筛细胞置于条件培养基分离培养,后续应用流式细胞分析及分选技术,进一步分离纯化肺鳞癌干细胞。实验结合CD133和CD44鉴定目标细胞,并计数第4代细胞CD133+、CD44+及CD133/CD44双阳性细胞的阳性率。结果与结论:接种后0.5 h细胞贴壁生长,培养第4天形成典型的细胞集落,第7天呈铺路石样外观,细胞数量级可达108。传代培养第4代肺癌干细胞的CD133+、CD44+和CD133/CD44双阳性细胞数明显增多。说明实验初步从肺鳞癌患者新鲜肺组织标本中分离培养并快速扩增SP细胞,并从中获取更多更纯的干细胞样肺鳞癌细胞,为进一步研究肺鳞癌干细胞的异质性和耐药性奠定基础。

关键词：干细胞肿瘤干细胞肺鳞癌肺癌干细胞原代培养细胞鉴定表型诱导分化流式细胞术湖南省自然科学基金

去细胞光氧化处理牛颈静脉带瓣管道的形态学研究

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中南大学学报（医学版） 2008年第6期33卷 500-506页

作者：李伟杨丽娟吴忠仕张庆广刘哲亮胡建国刘文亮中南大学湘雅二医院心胸外科长沙410011 滨州医学院生理教研室山东滨州256603 滨州医学院附属医院胸心外科山东滨州256603

目的:评价去细胞结合光氧化技术处理的牛颈静脉带瓣管道(BJVC)组织相容性及组织稳定性。方法:取新鲜牛颈静脉20根,每根裁出4个带瓣血管片,随机分为4组,分别以染料介导光氧化(DMP)、戊二醛(GA)、去细胞(DC)及去细胞结合光氧化(DC+DMP)4... 详细信息

目的:评价去细胞结合光氧化技术处理的牛颈静脉带瓣管道(BJVC)组织相容性及组织稳定性。方法:取新鲜牛颈静脉20根,每根裁出4个带瓣血管片,随机分为4组,分别以染料介导光氧化(DMP)、戊二醛(GA)、去细胞(DC)及去细胞结合光氧化(DC+DMP)4种技术处理。通过组织蛋白提取实验观察BJVC去细胞后光氧化交联的时效性;建立大鼠皮下包埋模型,两月后获取组织标本,通过HE染色及电镜观察,比较4组试片的形态结构变化。结果:DMP交联的BJVC有明显的时效性,处理48h后交联程度至最大;与其他组比较,大鼠皮下包埋后去细胞结合光氧化组试片柔韧性好,纤维结构较完整,有轻度降解现象,细胞生长良好。结论:去细胞结合光氧化处理的BJVC组织相容性好,适于细胞浸润生长,组织稳定性较好,降解速率可通过DMP处理时间调节,是一种较理想的可降解带瓣血管支架材料。

关键词：牛颈静脉去细胞光氧化组织相容性组织稳定性

紫绀型先天性心脏病患儿外周血内皮祖细胞的体外分离培养和鉴定

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中国组织工程研究与临床康复 2008年第47期12卷 9314-9318页

作者：刘哲亮吴忠仕胡建国陈勇胡野荣李伟吴坤中南大学湘雅二医院胸心外科湖南省长沙市410011 湖南省现代优生技术重点实验室湖南省长沙市410008

背景:一些基础研究成果对于新生血管形成和内皮祖细胞的自动募集机制已做出了合理的解释,体外培养的内皮祖细胞可分化为成熟的内皮细胞,有助于血管内皮修复。目的:拟建立从紫绀型先天性心脏病患儿外周血获取内皮祖细胞的方法。设计、时... 详细信息

背景:一些基础研究成果对于新生血管形成和内皮祖细胞的自动募集机制已做出了合理的解释,体外培养的内皮祖细胞可分化为成熟的内皮细胞,有助于血管内皮修复。目的:拟建立从紫绀型先天性心脏病患儿外周血获取内皮祖细胞的方法。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-08/2008-04在中南大学湘雅二医院完成。材料:外周血来源于2007-10/12中南大学湘雅二医院胸外科收治的15例法洛四联症患儿,安静状态下末梢氧饱和度为(78.0±5.0)%。方法:采用Ficoll密度梯度离心法从外周血中分离单个核细胞,以含体积分数为0.2的胎牛血清、4mg/L牛脑垂体提取物、2mmol/L谷氨酰胺、100U/mL氨苄青霉素、100g/L硫酸链霉素的M199培养基进行体外诱导分化,调整细胞密度为2×109L-1,接种至预铺人纤维连接蛋白的6孔培养板,置于37℃、体积分数为0.05的CO2饱和湿度条件下,贴壁法纯化培养10d。主要观察指标:细胞形态和生长情况,Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白/FITC标记的荆豆凝集素双荧光染色鉴定结果,vWF、CD34及CD31免疫组化鉴定结果,PE标记CD133抗体与藻蓝蛋白标记KDR抗体免疫荧光鉴定结果,透射电镜观察内皮祖细胞特征细胞器。结果:接种后0.5h细胞贴壁生长,培养第7天形成典型的细胞集落,第14天呈铺路石样外观,细胞数量级可达108。培养第10天,贴壁细胞中70%呈Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白/FITC-UEA-Ⅰ双阳性,为正在分化的内皮祖细胞;vWF、CD34及CD31免疫组化染色均呈阳性表达;PE标记CD133抗体呈红色荧光,藻蓝蛋白标记KDR抗体呈蓝色荧光。透射电镜可见内皮祖细胞特征性幼稚线粒体及Weibel-Palade小体。结论:实验成功从紫绀型先天性心脏病患儿外周血中分离培养并获取高纯度的内皮祖细胞,且在体外稳定快速扩增。

关键词：内皮祖细胞外周血分离培养紫绀先天性心脏病

去细胞结合光氧化技术处理牛颈静脉抗钙化性能研究

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中华胸心血管外科杂志 2008年第1期24卷 39-41页

作者：李伟吴忠仕杨丽娟刘哲亮胡建国刘文亮胡野荣中南大学湘雅二医院心胸外科长沙410011 滨州医学院生理教研室山东滨州医学院附属医院胸心外科 256602

目的探讨去细胞结合光氧化技术处理后的牛颈静脉带瓣管道（BJVC）在体内的抗钙化性能。方法取新鲜牛颈静脉20根，每根裁出4个带瓣血管片，随机分为A、B、C、D4组，分别以染料介导光氧化、戊二醛、去细胞及去细胞结合光氧化4种技术处理... 详细信息

目的探讨去细胞结合光氧化技术处理后的牛颈静脉带瓣管道（BJVC）在体内的抗钙化性能。方法取新鲜牛颈静脉20根，每根裁出4个带瓣血管片，随机分为A、B、C、D4组，分别以染料介导光氧化、戊二醛、去细胞及去细胞结合光氧化4种技术处理。建立大鼠皮下包埋模型，2个月后获取组织标本，原子吸收光谱法测定组织钙含量；并应用X线、CT、骨密度扫描检测整体组织钙化情况。结果（1）D组试片标本形态较完整，柔韧性好，无结节样改变；其整体组织钙盐密度明显低于A组及B组，与C组接近。（2）D组管壁组织钙含量显著低于A组及B组（P〈0．01），与C组差异无统计学意义（P〉0．05）；D组瓣膜组织的钙含量显著低于B组（P〈0．01），与A组及C组比较均差异无统计学意义（P〉0．05）。结论去细胞结合光氧化技术与传统戊二醛及染料介导光氧化技术比较，能明显提高牛颈静脉体内抗钙化性能。

关键词：生物假体钙化生理性颈静脉牛氧化剂光化学去细胞光氧化