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光滑双脐螺神经系统生物胺UPLC MS/MS定量检测方法的建立

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中国血吸虫病防治杂志 2018年第2期30卷 145-148,178页

作者：黄涛郭云海刘和香张仪中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所世界卫生组织热带病合作中心科技部国家级热带病国际联合研究中心国家卫生和计划生育委员会寄生虫病原与媒介生物学重点实验室上海200025

目的建立光滑双脐螺神经系统五羟色胺和多巴胺的超高液相色谱-三重四级杆串联质谱(UPLC MS/MS)定量检测方法。方法在纯甲醇溶液中破碎光滑双脐螺神经系统,经过2次高速离心获得含有目标检测物的上清液,通过ACQUITY UPLC BEH Amide色谱柱... 详细信息

目的建立光滑双脐螺神经系统五羟色胺和多巴胺的超高液相色谱-三重四级杆串联质谱(UPLC MS/MS)定量检测方法。方法在纯甲醇溶液中破碎光滑双脐螺神经系统,经过2次高速离心获得含有目标检测物的上清液,通过ACQUITY UPLC BEH Amide色谱柱、Waters TQ-XS系列质谱检测器,采用ESI源、正离子模式上机检测。结果光滑双脐螺神经系统五羟色胺UPLC MS/MS检测限为0.03 ng/ml,定量限为0.1 ng/ml;多巴胺UPLC MS/MS检测限为0.05 ng/ml,定量限为0.15 ng/ml。在1~40 ng/ml添加范围内,五羟色胺的回收率为90.68%~94.72%;多巴胺的回收率为91.68%~96.12%。结论建立的UPLC MS/MS方法操作简单、检测结果稳定、重复性良好,可用于光滑双脐螺神经系统五羟色胺和多巴胺的定量检测分析和研究。

关键词：光滑双脐螺神经系统五羟色胺多巴胺 UPLC MS/MS

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广东省南澳岛广州管圆线虫遗传多样性调查

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2017年第2期35卷 130-135页

作者：胡求安吕山郭云海刘和香张仪中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所世界卫生组织热带病合作中心科技部国家级热带病国际联合研究中心卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室上海200025

目的研究广东省南澳岛广州管圆线虫(Angiostronglus cantonensis)遗传多样性,分析其与中国不同地区分离株间的系统发生关系。方法 2015-2016年采用分层随机抽样法在南澳岛抽取3个行政村(宫前村、金山村和六都村),选取55个采样点。用鼠... 详细信息

目的研究广东省南澳岛广州管圆线虫(Angiostronglus cantonensis)遗传多样性,分析其与中国不同地区分离株间的系统发生关系。方法 2015-2016年采用分层随机抽样法在南澳岛抽取3个行政村(宫前村、金山村和六都村),选取55个采样点。用鼠笼捕鼠,解剖鼠类收集广州管圆线虫成虫。现场采集福寿螺(Pomacea canaliculata)和玛瑙螺(Achatina fulica),从螺类收集Ⅲ期幼虫,实验室感染SD大鼠后收集成虫。提取成虫基因组DNA,PCR扩增核糖体DNA内转录间隔区2(internal transcribed spacer 2,ITS2)和线粒体DNA细胞色素氧化酶Ⅰ亚基(cytochrome c oxidase subunitⅠ,COⅠ)并测序,运用Clustal X1.83比对序列,Dna SP5.10分析其序列组成及遗传多样性。从Gen Bank上获取浙江温州(登录号HQ540551.1)、广东深圳(登录号HQ540546.1)、台湾花莲(登录号KF591125.1)等中国不同地区分离株的ITS2序列,运用Mega6.06基于Kumara双参数模型计算遗传距离,用邻接法(NJ)和最大简约法(MP)构建系统进化树,分析各地区分离株的亲缘关系。结果从南澳岛共捕获鼠类110只,广州管圆线虫感染阳性率为29.1%(32/110);分别检测福寿螺和玛瑙螺1 190只和24只,广州管圆线虫感染阳性率分别为6.1%(72/1 190)和83.3%(20/24)。PCR结果显示,广州管圆线虫ITS2和COⅠ片段长度分别为693和1 174 bp,位点变异率分别为4.7%和1.0%。南澳岛广州管圆线虫ITS2基因单倍型多样性指数为0.927,核苷酸多样性指数为0.007,平均核苷酸差异指数为4.549。COⅠ基因单倍型多样性指数为0.440,核苷酸多样性指数为0.004,平均核苷酸差异指数为3.743。基于ITS2的分析结果显示,南澳岛与国内其他地区分离株遗传距离为0.181~0.775,NJ法MP法构建的系统进化树基本一致,南澳岛大部分虫体序列与广东深圳、福建福清、云南普洱、广西南宁的分离株同属一大分支,小部分则单独聚成一支。结论南澳岛广州管圆线虫种群内存在一定程度的遗传分化和遗传多样性,其虫体可能存在多种类型和来源,但尚需进一步研究。

关键词：广州管圆线虫内转录间隔区2 细胞色素氧化酶I亚基遗传多样性亲缘关系

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上海市医学贝类物种组成及其分布

中国血吸虫病防治杂志 2015年第1期27卷 36-40,44页

作者：郭云海吕山顾文彪刘和香吴缨张仪中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室世界卫生组织疟疾、血吸虫病和丝虫病合作中心上海200025

目的调查上海市医学贝类物种多样性及其分布。方法于2012年8月至2013年10月,根据水系分布特点,对上海市嘉定、青浦、宝山、闵行、松江、金山、崇明岛和浦东新区等8个区(县)各类生境进行现场抽样调查,采集医学贝类标本。所获标本经形态... 详细信息

目的调查上海市医学贝类物种多样性及其分布。方法于2012年8月至2013年10月,根据水系分布特点,对上海市嘉定、青浦、宝山、闵行、松江、金山、崇明岛和浦东新区等8个区(县)各类生境进行现场抽样调查,采集医学贝类标本。所获标本经形态学鉴定分类,并对物种组成、生境及区系分布等进行分析。结果共获得标本5 211只,经鉴定隶属于2纲14科18属,共计25种,包括湖北钉螺指名亚种、小管福寿螺、纹沼螺、长角涵螺、尖膀胱螺、小土蜗和尖口圆扁螺等。崇明、金山、浦东和青浦等区(县)物种相对较多,分别为22、22、21种和20种。生境分析显示河流和沼泽地物种分布最多,均为14种。区系分析表明上海市医学贝类以广布种和东洋界种类为主。结论上海市淡水腹足类物种相对匮乏,但多可作为中间宿主传播相关寄生虫病,应加强监测工作。

关键词：医学贝类物种组成形态学鉴定区系中间宿主上海市

用多重PCR技术检测小管福寿螺体内广州管圆线虫幼虫

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2010年第5期28卷 355-358页

作者：危芙蓉刘和香吕山胡玲张仪中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所.卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室世界卫生组织疟疾、血吸虫病和丝虫病合作中心上海200025

目的建立一种多重PCR方法检测小管福寿螺体内的广州管圆线虫幼虫。方法根据广州管圆线虫核糖体小亚基rDNA基因序列(GenBank登录号为AY295804)设计特异性引物,并与小管福寿螺16srDNA的特异性引物组合,建立多重PCR检测方法。分别以阳性和... 详细信息

目的建立一种多重PCR方法检测小管福寿螺体内的广州管圆线虫幼虫。方法根据广州管圆线虫核糖体小亚基rDNA基因序列(GenBank登录号为AY295804)设计特异性引物,并与小管福寿螺16srDNA的特异性引物组合,建立多重PCR检测方法。分别以阳性和阴性小管福寿螺DNA为模板进行多重PCR扩增,电泳鉴定并测序。用阴性小管福寿螺DNA倍比稀释200条广州管圆线虫Ⅲ期幼虫DNA模板,使之浓度分别为1200ng/μl、120ng/μl、12ng/μl、1200pg/μl、120pg/μl和12pg/μl,检测该方法的敏感性。野外采集小管福寿螺172只,肺检法检测后,进行多重PCR扩增,计算敏感性和特异性。结果电泳和测序结果证实该多重PCR检测方法能有效扩增出目的片段,小管福寿螺和广州管圆线虫的目的片段分别为550和405bp。该方法可检测出广州管圆线虫Ⅲ期幼虫DNA的最小浓度为120pg/μl。肺检法和多重PCR法检测均为阳性结果的45只,两法均为阴性的100只。肺检法为阴性、多重PCR法为阳性的24只,肺检法为阳性而多重PCR法检测为阴性的3只。多重PCR的敏感性和特异性分别为93.8%(45/48)和80.6%(100/124)。多重PCR法的阳性检出率为40.1%(69/172),肺检法阳性检出率为27.9%(48/172),差异具有统计学意义(χ2=14.8,P<0.01)。结论建立了检测小管福寿螺体内广州管圆线虫的多重PCR方法。

关键词：广州管圆线虫多重PCR 检测小管福寿螺

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医学软体动物标本制作技术的探讨

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2006年第B12期24卷 54-57,61页

作者：张仪周晓农刘和香中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室上海200025

目的建立医学软体动物的标本制作技术,用于科学研究、教学与卫生宣传教育。方法采集医学软体动物,分别用软体浸制法、螺壳干制法制作标本。结果用规范的方法制作成的标本,符合生物学研究要求。干壳标本螺壳完整,色泽保持原样,无异味,可... 详细信息

目的建立医学软体动物的标本制作技术,用于科学研究、教学与卫生宣传教育。方法采集医学软体动物,分别用软体浸制法、螺壳干制法制作标本。结果用规范的方法制作成的标本,符合生物学研究要求。干壳标本螺壳完整,色泽保持原样,无异味,可以永久保存。软体浸制法制作的标本个体分开,软体完整,各软体结构部分易于解剖分离,长久保存质量保证。结论建立了能用于分类、分子生物学及形态学等研究,而且可长久保存的软体浸制法、螺壳干制法标本制作规范。

关键词：标本制作医学软体动物

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广东省广州管圆线虫病疫源地调查

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2010年第1期28卷 12-16页

作者：邓卓晖张启明林荣章黄少玉张仪吕山刘和香胡铃裴福全王金龙阮彩文广东省疾病预防控制中心寄生虫病防治研究所广州510300 中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所世界卫生组织疟疾、血吸虫病和丝虫病合作中心上海200025

目的了解广东省广州管圆线虫病疫源地分布情况,为制定监测方案提供依据。方法按不同地理位置分层抽样,分别抽取粤东、粤西、粤北山区和珠江三角洲4个地区共22个县(市、区),每县(市、区)随机抽取1～2个行政村(区)作为调查点。用匀浆法或... 详细信息

目的了解广东省广州管圆线虫病疫源地分布情况,为制定监测方案提供依据。方法按不同地理位置分层抽样,分别抽取粤东、粤西、粤北山区和珠江三角洲4个地区共22个县(市、区),每县(市、区)随机抽取1～2个行政村(区)作为调查点。用匀浆法或肺检法剖检在野外现场采集的部分小管福寿螺(Pomacea canaliculata)和褐云玛瑙螺(Achatina fulica),以及餐饮、集市采集的不同品种的淡水螺和陆生螺,调查广州管圆线虫(Angiostrongylus cantonen-sis)Ⅲ期幼虫感染情况。现场捕捉鼠类,鉴别种类后解剖心肺组织,检查感染情况;采集新鲜鼠粪,用清水沉淀法检查幼虫。结果22个调查县(市、区)均有小管福寿螺分布,且数量众多;广宁县未开展褐云玛瑙螺调查,和平县、曲江区和翁源县未采集到褐云玛瑙螺,其他调查点均有该螺分布。22个调查县(市、区)共采集小管福寿螺3754只,褐云玛瑙螺1465只,平均感染率分别为5.9%(172/2929)和16.5%(223/1354),两者差异有统计学意义(P<0.01)。粤东、粤西、粤北山区和珠江三角洲的受检螺平均感染率有地区差异(P<0.01),珠江三角洲最高(15.6%,152/975),其中又以东莞市的受检螺平均感染率最高(34.7%,78/225)。在9个调查县(市、区)的农贸市场采集圆田螺(Cipangopaludina)114只和环棱螺(Bellamya)541只,罗定市和开平市的环棱螺中幼虫阳性率分别为1.4%(1/70)和3.3%(3/91)。在9个调查县(市、区)捕获褐家鼠(Rattus norvegicus)、黄胸鼠(R.flavipectus)、鼩鼱(Suncus murinus)、小家鼠(Musmus-culus)、大板齿鼠(Bandicota indica)、黄毛鼠(R.losea)和黑家鼠(R.rattus)等共491只,平均感染率为11.4%(56/491),其中褐家鼠、黄胸鼠和板齿鼠的平均感染率分别为19.8%(52/263),2.5%(3/118)和10.0%(1/10),其他4种鼠类中均未发现有广州管圆线虫感染。在7个调查县(市、区)采集到新鲜鼠粪34份,Ⅰ期幼虫阳性率为44.1%(15/34)。结论广东省广州管圆线虫病疫源地分布广泛,中间宿主和终末宿主均有不同程度感染。

关键词：广州管圆线虫小管福寿螺褐云玛瑙螺宿主疫源地广东

三种方法检测福寿螺肺囊内广州管圆线虫效果的比较研究

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2007年第1期25卷 53-56页

作者：刘和香张仪吕山朱丹王显红胡铃周晓农中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所WHO疟疾血吸虫病和丝虫病合作中心卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室上海200025

目的比较肺检法、匀浆法和酶消化法检测福寿螺肺囊内广州管圆线虫的效果,以寻找快捷检测方法。方法将60只实验室人工感染广州管圆线虫的福寿螺均分2组,分别解剖成螺肺囊与肌肉两部分。镜检两组螺肺囊广州管圆线虫幼虫结节数,用匀浆法和... 详细信息

目的比较肺检法、匀浆法和酶消化法检测福寿螺肺囊内广州管圆线虫的效果,以寻找快捷检测方法。方法将60只实验室人工感染广州管圆线虫的福寿螺均分2组,分别解剖成螺肺囊与肌肉两部分。镜检两组螺肺囊广州管圆线虫幼虫结节数,用匀浆法和酶消化法分别检测螺肺囊中广州管圆线虫幼虫,比较不同检测方法的效果。酶消化法同时检测福寿螺肌肉内幼虫数,分析螺肺囊与肌肉内幼虫数的相关关系。结果肺检法、匀浆法和酶消化法等3种方法检测螺肺囊内幼虫的灵敏度依次为96.7%、93.4%和100%,差异无统计学意义(χ2=2.069,P>0.05)。肺检法的检测速度明显快于匀浆法与酶消化法,差异具有统计学意义(Z=4.782,P<0.01);螺肺囊与肌肉组织内的幼虫数呈正相关(r=0.847,P<0.01)。结论肺检法的检测效果与匀浆法和酶消化法相似,但其检测速度更快,适合现场大规模螺体广州管圆线虫的定性筛查。

关键词：广州管圆线虫福寿螺 Ⅲ期幼虫幼虫结节肺囊

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广州管圆线虫生活史的实验室构建与观察

中国病原生物学杂志 2009年第11期4卷 836-839,F0004页

作者：刘和香张仪吕山胡铃周晓农中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所 WHO疟疾、血吸虫病和丝虫病合作中心卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室上海200025

目的实验室构建广州管圆线虫生活史,进一步了解其生长变化及其致病性,为广州管圆线虫病的防治提供基础资料。方法福建省采集的广州管圆线虫L3经口、腹腔注射、皮下注射和皮肤接触等途径感染SD大白鼠,观察感染效果。从SD大白鼠粪便中获... 详细信息

目的实验室构建广州管圆线虫生活史,进一步了解其生长变化及其致病性,为广州管圆线虫病的防治提供基础资料。方法福建省采集的广州管圆线虫L3经口、腹腔注射、皮下注射和皮肤接触等途径感染SD大白鼠,观察感染效果。从SD大白鼠粪便中获得广州管圆线虫L1,感染人工繁殖的福建子代福寿螺,25.5～26.5℃条件下,分别置于无水环境和水族环境饲养,观察广州管圆线虫在宿主体内的生长规律、发育进程、分布状况、不同发育期幼虫形态特征及诱导的病理变化等。结果L3经口感染的感染率较其他感染途径为好;无水环境中的福寿螺在休眠状态不影响广州管圆线虫发育;实验室完成一个广州管圆线虫生活史最短为50 d;休眠状态螺体L3出现前期为16.5 d,水族环境螺L3出现前期为18.5 d,鼠粪L1开放前期为33.5 d。L3主要分布于感染螺的肺、肌肉及肝脏等处,螺肺囊可出现明显的L2、L3结节病理表现。折光颗粒、头部特征、鞘膜变化是各期幼虫形态特征的主要鉴别指标。观察期感染鼠多数死亡,虫卵诱导的肺纤维化和肺动脉虫栓是主要死因。结论经口感染大白鼠及感染性螺置休眠状态是维持实验室广州管圆线虫生活史较好的方式。广州管圆线虫生活史长短取决于中间宿主及环境温度。螺肺的特殊结构和幼虫结节病理表现为创立新的检测方法奠定了基础。

关键词：广州管圆线虫福寿螺生活史形态致病性

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三种淡水螺与广州管圆线虫相容性的实验研究

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2006年第4期24卷 277-280页

作者：吕山张仪王显红刘和香朱丹殷位刚周晓农中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室上海200025 南京市疾病预防控制中心南京210023

目的比较福寿螺、中国圆田螺、铜锈环棱螺等3种食用淡水螺与广州管圆线虫的相容性。方法在相同条件下,用广州管圆线虫福建株感染3种螺,1、3、6、12及24h后,随机抽样各20只,分别饲养于置有滤水器、水温(24±1)℃的玻璃缸内。记录感染2周... 详细信息

目的比较福寿螺、中国圆田螺、铜锈环棱螺等3种食用淡水螺与广州管圆线虫的相容性。方法在相同条件下,用广州管圆线虫福建株感染3种螺,1、3、6、12及24h后,随机抽样各20只,分别饲养于置有滤水器、水温(24±1)℃的玻璃缸内。记录感染2周内各组螺死亡数。第15天开始解剖,记录螺软体重量和感染虫数。同时设不感染螺对照组。结果3种螺感染后第1周死亡数达高峰。感染率和死亡率与螺的种类及感染时间均无相关性。虫负荷与虫密度,福寿螺感染6、12及24h均显著高于感染1h的(P值均0.05)。福寿螺感染6、12及24h的虫负荷均显著高于铜锈环棱螺和中国圆田螺(P值均<0.05)。感染6、12及24h,福寿螺及铜锈环棱螺虫密度均高于中国圆田螺(P值均<0.05)。结论3种螺对广州管圆线虫均易感并有较高的相容性,其中福寿螺的相容性较强。

关键词：广州管圆线虫福寿螺中国圆田螺铜锈环棱螺相容性