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作者：刘吉玲安徽医科大学

学位级别：硕士

目的呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)是一种引起婴幼儿急性下呼吸道感染最常见的病原体,目前尚无安全有效的治疗方法。虽然许多针对RSV的药物和疫苗正处在激烈的研发阶段,但其耗时长且安全性不保证。本课题选定了课... 详细信息

目的呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)是一种引起婴幼儿急性下呼吸道感染最常见的病原体,目前尚无安全有效的治疗方法。虽然许多针对RSV的药物和疫苗正处在激烈的研发阶段,但其耗时长且安全性不保证。本课题选定了课题组以前针对流感病毒筛选出来的抗流感病毒的一系列药物,先在A549细胞上进行体外抗RSV筛选,再进一步联合体内实验评价其抗RSV活性并探讨其可能的抗病毒作用机制,以期探寻更为安全有效的抗RSV药物。方法将A549细胞接种于96孔培养板上培养,待其密度达到80%时,以不同的MOI感染单层细胞培养48 h,用CCK-8法检测50%细胞活力,确定筛选体系所使用的病毒感染滴度。将化合物进行一系列的倍比稀释,分别在不感染状态下和感染状态下加药,培养48 h,CCK-8法检测,计算其IC50和EC50。以利巴韦林(Ribavirin)作为阳性对照,另外调查药物引起的不良反应以及实际应用情况,最后选取选择性指数相对最高的拉帕替尼作为接下来的研究对象。在A549细胞运用实时荧光定量PCR(Real-Time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)检测不同剂量处理、不同给药方法以及时间过程分析对病毒抑制效果。采用免疫荧光方法检测拉帕替尼抑制 RSVM 蛋白表达情况。qRT-PCR 检测 IL-6、IL-1β、TNF-α、TLR-3、RIG-Ⅰ、IFN-β、ErbB1和ErbB2含量的变化。动物实验:将72只SPF级BALB/c雌鼠随机分为正常对照组、病毒对照组、利巴韦林对照组、拉帕替尼高剂量组、拉帕替尼中剂量组、拉帕替尼低剂量组,RSV滴鼻建立感染小鼠模型,造模成功后予药物灌胃治疗,空白组和病毒对照组灌胃等体积生理盐水。分别在治疗后的第2天、第4天和第6天,每组各随机处死4只小鼠,取肺组织分别进行 HE 染色、免疫组织化学染色(Immunohistochemical staining,IHC)和 qRT-PCR检测,分别观察肺部的病理学改变以及炎症因子的变化。ELISA检测各实验组细胞培养上清液和BALB/c小鼠血清中IL-6、IL-1β和IFN-β的含量。A549细胞分为正常对照组、RSV感染组、RSV感染后加拉帕替尼药物组,48 h收取细胞样本做转录组学测序,检测各组差异基因的表达,进行GO和KEGG富集分析,进一步对拉帕替尼抗病毒作用机制进行研究。结果(1)对近百种药物库进行筛选,细胞毒和抗病毒实验结果显示3种较为有效的药物分别是:拉帕替尼(Lapatinib)、达沙替尼(Dasatinib)、乙琥胺((Ethosuximide)。阳性对照药物是利巴韦林。3种较为有效的药物和阳性对照药物利巴韦林的IC50分别为31.58 μM、41.82 μM、41.6 μM、715.4μM。EC50分别为 1.017 μM、41.59 μM、2.5 μM、73.87 μM。选择性指数(Selectivity index,SI)值分别为 31.05、1.01、16.64、9.68。综合比较可知拉帕替尼的SI值最高。(2)qRT-PCR检测结果显示:拉帕替尼在6.25 μM、3.125 μM、1.56 μM梯度浓度下,均能抑制病毒基因的表达,差异具有统计学意义(**P<0.01)。与RSV感染组相比,拉帕替尼在三种不同的加入方式下均能明显抑制病毒基因的表达,差异具有统计学意义(**P<0.01)。拉帕替尼在感染后前8 h之内加入对病毒复制有抑制效果,差异有统计学意义(**P<0.01)。(3)qRT-PCR检测结果显示:在RSV感染组中,病毒感染48 h后,炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α表达量明显升高,差异有统计学意义(***P<0.001)。拉帕替尼组中,拉帕替尼显著降低RSV诱导的IL-6、IL-1β和TNF-α在A549细胞中的表达,差异有统计学意义(*P<0.05);将RSV感染组与正常细胞对照组进行对照可知,TLR3、RIG-Ⅰ和IFN-β的mRNA表达明显增多,利巴韦林组和拉帕替尼各剂量组均抑制其上调,差异有统计学意义(*P<0.05)。(4)免疫荧光结果显示:与正常对照组相比,RSV感染后,A549细胞表达大量的RSVM蛋白,拉帕替尼各剂量组中表达RSVM蛋白的荧光细胞数量显著减少。(5)BALB/c小鼠体重及肺指数变化:RSV感染后小鼠体重在4 dpi时降至最低体重。从2 dpi开始,拉帕替尼浓度为高、中剂量组的小鼠体重逐渐呈上升趋势,低剂量组在3 dpi开始小鼠体重逐渐呈上升趋势。从4 dpi开始各实验组小鼠的体重均逐渐增加,拉帕替尼组体重增加高于利巴韦林组和RSV感染组。拉帕替尼高剂量组肺指数明显低于病毒组和利巴韦林对照组,拉帕替尼中

关键词： RSV 抗病毒活性炎症因子信号通路拉帕替尼利巴韦林

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论梁启超小说理论的现代性意义

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文学教育(下) 2019年第10期 32-33页

作者：刘吉玲武汉大学文学院

梁启超作为我国近代喊出"小说界革命"口号的第一人,他以自己的亲身实践推动了我国近代小说理论的建立和发展。在世纪之交的时代背景下,梁启超融合了中西文论二者所长,采用中西学科相结合的研究方法,建立起颇具划时代意义的小说理论。不... 详细信息

梁启超作为我国近代喊出"小说界革命"口号的第一人,他以自己的亲身实践推动了我国近代小说理论的建立和发展。在世纪之交的时代背景下,梁启超融合了中西文论二者所长,采用中西学科相结合的研究方法,建立起颇具划时代意义的小说理论。不同于传统书商重利轻本,梁启超不仅重视文化传播源头的质量,还积极启用新兴媒介传播思想理念,并将读者感受纳入研究范围,这样的现代文学传播理念有力地推动了我国小说从古代向现当代转型的跨越式发展,对后世影响深远。

关键词：梁启超小说理论中西融合传播理念

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