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河北部分地区四种肉犊牛腹泻病原调查及BVDV抗体检测方法建立

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河北部分地区四种肉犊牛腹泻病原调查及BVDV抗体检测方法建立

作者：刘勃兴河北科技师范学院

学位级别：硕士

在河北省,犊牛腹泻病是造成肉犊牛死亡和经济损失的主要疾病。在犊牛腹泻病的病因中,大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)、牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)、牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCo V)和牛轮状病毒(Bov... 详细信息

在河北省,犊牛腹泻病是造成肉犊牛死亡和经济损失的主要疾病。在犊牛腹泻病的病因中,大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)、牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)、牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCo V)和牛轮状病毒(Bovine rotavirus,BRV)是主要致病原。为了解上述四种传染性病原在河北地区犊牛腹泻病料中的阳性率,本研究自2018年至2020年收集河北省秦皇岛市、唐山市、石家庄市等市患腹泻病肉犊牛样品共计804份,19.28%(155/804)的样品检测出上述四种病原。肉犊牛腹泻样品中共计分离E.coli 649株,分离数量最多,进一步通过小鼠致病性试验验证分离E.coli的致病性,共计有120株E.coli具有致病性,检出率为14.93%(120/804)。其中,O型是致病性E.coli检出率最高的血清型,其次为O型。通过RT-PCR检测样品中BVDV、BCo V和BRV三种病毒性病原,BCo V检出率为3.61%(29/804)、BRV检出率为2.99%(24/804)、BVDV检出率为0.87%(7/804)。混合感染样品数量占比14.84%(23/155),检出率较高的病原混合感染组合形式为:致病性E.coli+BCo V、致病性E.coli+BRV、BCo V+BRV。在国内,BVDV抗体ELISA检测试剂盒主要进口于国外,而国内商品化试剂盒的品牌和种类较少,这导致我国BVDV抗体检测成本较高。BVDV的E蛋白可诱导产生中和抗体,是疫苗和诊断试剂研发的靶蛋白。为了降低BVDV抗体检测成本,了解河北地区牛群BVDV抗体阳性率,本研究以河北地方BVDV毒株为试验材料,用E.coli原核表达系统成功获得了E蛋白。以该蛋白为包被抗原建立BVDV抗体间接ELISA检测方法,并应用该方法检测河北地区牛血清样品的BVDV抗体阳性率。试验结果显示,本研究建立的BVDV抗体ELISA检测方法能特异性识别BVDV抗体阳性血清,具有较高的灵敏度(阳性血清最大稀释倍数为1 600倍)和重复性(批内和批间的变异系数均小于10%),与IDEXX试剂检测同一批样品的总符合率为93.33%。应用该方法对河北地区18家牛场的477份血清样品进行检测,其中接种疫苗牛场的血清阳性率为30.43%～92.86%,未接种免疫牛场抗体阳性率为0～100%。本研究通过对河北地区肉犊牛腹泻样品中四种病原进行流行病学调查,为河北地区由四种病原引起的肉犊牛腹泻病的防控提供数据参考,同时本研究建立的BVDV抗体ELISA检测方法为河北地区BVDV的监测和防控提供技术支持。

关键词：肉犊牛腹泻病病原流行病学调查 BVDV ELISA

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鸡红螨和鸡新勋恙螨的流行情况及防控措施

养禽与禽病防治 2023年第7期 17-24页

作者：刘勃兴王铂涵刘红黄丰立孙玮玮潘保良中国农业大学动物医学院北京100193 默沙东动物保健品(上海)有限公司上海200233 西藏自治区日喀则市动物疫病预防控制中心西藏日喀则市857000

鸡红螨和新勋恙螨是鸡养殖产业中2种最为常见和危害最为严重的体外寄生虫,前者主要危害笼养蛋鸡和种鸡,后者主要危害放养的黄羽肉鸡,给养鸡业造成严重的经济损失。本文综述了这2种寄生虫的生物特征、流行情况以及防控方法,旨在为这2种... 详细信息

鸡红螨和新勋恙螨是鸡养殖产业中2种最为常见和危害最为严重的体外寄生虫,前者主要危害笼养蛋鸡和种鸡,后者主要危害放养的黄羽肉鸡,给养鸡业造成严重的经济损失。本文综述了这2种寄生虫的生物特征、流行情况以及防控方法,旨在为这2种螨虫病的防控提供参考。

关键词：鸡红螨新勋恙螨流行情况防控方法

BVDV E^(rns)抗体ELISA检测方法的建立及初步应用

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中国兽医学报 2022年第3期42卷 445-451,471页

作者：刘勃兴刘畅王利丽付祥吴同垒刘洁高荣菊张志强史秋梅河北科技师范学院河北省预防兽医学重点实验室河北秦皇岛066004 河北省唐山市乐亭县农业农村局河北唐山063600

为了解河北地区牛群牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)抗体阳性率,本研究利用E.coli原核表达系统表达了E^(rns)蛋白。以该蛋白为包被抗原,通过优化各反应条件,建立了检测BVDV抗体的间接ELISA方法,并利用该方法检测河... 详细信息

为了解河北地区牛群牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)抗体阳性率,本研究利用E.coli原核表达系统表达了E^(rns)蛋白。以该蛋白为包被抗原,通过优化各反应条件,建立了检测BVDV抗体的间接ELISA方法,并利用该方法检测河北地区477份牛血清样品的BVDV抗体阳性率。特异性试验结果显示,本研究建立的BVDV抗体ELISA检测方法仅能检出BVDV抗体阳性血清,而检测牛传染性鼻气管炎病毒阳性血清、牛布鲁菌阳性血清、牛轮状病毒阳性血清、牛冠状病毒阳性血清、口蹄疫病毒阳性血清均为阴性。敏感性试验结果显示,建立的ELISA方法检测BVDV阳性血清具有较高的敏感性。重复性试验结果显示,ELISA检测方法的批内和批间变异系数均小于10%。应用本研究建立的抗体ELISA检测方法与IDEXX试剂盒检测某牛场90份血清样品,总符合率为93.33%。对河北地区18个牛场的477份血清样品进行检测,结果接种疫苗牛场的血清阳性率为30.43%~92.86%,未接种免疫牛场抗体阳性率为0%~100%。结果表明,本研究建立的BVDV抗体ELISA检测方法具有较高的特异性、敏感性和重复性,可应用于临床牛血清样品检测,为河北地区BVDV的监测和防控提供技术支持。

关键词：牛病毒性腹泻病毒 E^(rns)蛋白 ELISA

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貉源致病性沙门菌的分离鉴定及耐药性检测

中国动物传染病学报 2022年第4期30卷 117-123页

作者：刘勃兴赵安奇张雪佳王利丽吴同垒史秋梅张志强河北科技师范学院河北省预防兽医学重点实验室秦皇岛066004

为调查秦皇岛市毛皮动物养殖场貉源沙门菌的携带情况以及菌株的致病性和耐药性,采用鉴定培养、革兰氏染色、生化鉴定、16S rDNA鉴定检测107份病料中沙门菌的携带情况,用小鼠致病性试验、毒力基因检测和KB纸片法分别研究分离的沙门菌的... 详细信息

为调查秦皇岛市毛皮动物养殖场貉源沙门菌的携带情况以及菌株的致病性和耐药性,采用鉴定培养、革兰氏染色、生化鉴定、16S rDNA鉴定检测107份病料中沙门菌的携带情况,用小鼠致病性试验、毒力基因检测和KB纸片法分别研究分离的沙门菌的致病性和耐药性。结果显示,貉源沙门菌的分离率为12.15%(13/107);13株沙门菌均对小鼠有致病性,小鼠死亡率为20%~100%;spvr、hisj、spvb等共15种毒力基因均有检出,检出率为7.69%~69.23%,未检出毒力基因fima、ssec、ssel、inav;药敏试验结果显示,13株沙门菌分别对5~14种抗生素耐药,对土霉素、替米考星、磺胺二甲氧嘧啶、复方新诺明耐药率高达100%(13/13),对阿米卡星敏感率最高,为53.85%(7/13)。本研究为秦皇岛市沙门菌所致貉疾病的防治提供理论依据。

关键词：貉沙门菌致病性耐药性

15味中草药水煎剂对狐源O_(1)型肠外致病性大肠杆菌体外抑菌效果

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野生动物学报 2021年第4期42卷 1183-1186页

作者：冯岭刘勃兴赵安奇史秋梅乐亭县农业农村局唐山063000 河北科技师范学院河北省预防兽医学重点实验室秦皇岛066004

为研究中草药水煎制剂对秦皇岛地区分离的狐(Vulpes)源O_(1)型肠外致病性大肠杆菌(Escherichia coli)的体外抑菌效果,采用琼脂打孔法测定中草药的体外抑菌直径,用改良微量二倍稀释平板法测定最小抑菌浓度和最小杀菌浓度。结果显示:6味... 详细信息

为研究中草药水煎制剂对秦皇岛地区分离的狐(Vulpes)源O_(1)型肠外致病性大肠杆菌(Escherichia coli)的体外抑菌效果,采用琼脂打孔法测定中草药的体外抑菌直径,用改良微量二倍稀释平板法测定最小抑菌浓度和最小杀菌浓度。结果显示:6味中草药水煎剂对试验菌株有抑菌效果,其中石榴皮水煎剂效果最佳,抑菌圈直径为23.1 mm,最小抑菌浓度和最小杀菌浓度均为15.63 mg/mL;其次是五味子、乌梅、五倍子、诃子、女贞子;其余的9味中草药对试验菌株无明显抑菌效果。研究结果可为临床应用中草药水煎剂治疗狐源大肠杆菌病以及相关中药方剂组方提供参考。

关键词：狐大肠杆菌中草药体外抑菌试验

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yihE对肠炎沙门菌生物学特性影响的研究

中国预防兽医学报 2022年第4期44卷 369-376页

作者：刘畅张雪佳王利丽白和平王苗李浩刘勃兴史秋梅吴同垒张志强河北科技师范学院河北省预防兽医学重点实验室河北秦皇岛066004

为研究丝氨酸-苏氨酸激酶(yihE)在肠炎沙门菌致病中的作用,本研究利用λ-Red同源重组技术构建了肠炎沙门菌C50336(WT)yihE基因缺失突变株C50336ΔyihE(KO)、基因回补株C50336ΔyihE/pBR322-yihE(RS),测定了WT、KO、RS菌株的生长特性、... 详细信息

为研究丝氨酸-苏氨酸激酶(yihE)在肠炎沙门菌致病中的作用,本研究利用λ-Red同源重组技术构建了肠炎沙门菌C50336(WT)yihE基因缺失突变株C50336ΔyihE(KO)、基因回补株C50336ΔyihE/pBR322-yihE(RS),测定了WT、KO、RS菌株的生长特性、生化特性、运动能力,结果显示,与WT相比,KO株的生长速度、运动能力均无明显差异;但半乳糖酸盐利用、葡萄糖苷酶、葡萄糖醛酸酶等指标发生变化。体外模拟并检测各种应激条件下肠炎沙门菌的生长情况,结果显示,与WT相比,KO株抗多种应激能力均有不同程度下降;通过试管法、微量法等分析评估3株菌生物被膜(BF)的形成能力,另外,将各菌株分别接种至含刚果红和荧光增白剂的培养基,通过观察各菌落形态分析其BF成分的变化情况,结果显示,与WT菌株相比,KO株BF形成能力下降了约50%,但BF主要的组成成分卷毛蛋白和纤维素无明显变化。对3种菌株耐药性和KO、WT株毒力因子携带情况经RT-qPCR进行检测,结果显示,与WT相比,KO株对喹诺酮类、头孢曲松的敏感性提高;且csgA、bscA、flgG、sipB、sodc毒力基因的转录水平差异较大,而其他毒力基因的转录水平差异较小。利用KO、WT株菌株分别感染小鼠进行致病力试验,结果显示,WT株的LD_(50)为1.2×10^(5)cfu,KO株的LD_(50)为1.12×10^(6)cfu,毒力下降了约10倍。利用Over-lap PCR方法突变yihE蛋白217位天冬氨酸,利用蛋白质丝氨酸/苏氨酸激酶检测试剂盒检测其激酶活性,结果显示yihE蛋白突变后其激酶活性下降了约30%,表明217位天冬氨酸对yihE蛋白的活性非常关键。本研究证实yihE参与了肠炎沙门菌的多个生物学过程,且yihE基因的缺失能够使肠炎沙门菌的毒力下降,该结果为进一步研究沙门菌致病机制奠定了基础。

关键词：肠炎沙门菌丝氨酸-苏氨酸激酶致病力抗应激能力生物被膜

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气力输灰技术在钢铁企业的应用实践

天津冶金 2021年第6期 68-71页

作者：刘勃兴天津市新天钢联合特钢有限公司天津301500

钢铁企业各工序在生产过程中会产生大量的粉尘,这些粉尘通过除尘装置收集后形成除尘灰,如果通过传统的方式进行卸灰会产生大量的二次扬尘,产生的二次扬尘对环境的污染非常严重。而最近国家颁布的钢铁行业超低排放产业政策,明确要求钢铁... 详细信息

钢铁企业各工序在生产过程中会产生大量的粉尘,这些粉尘通过除尘装置收集后形成除尘灰,如果通过传统的方式进行卸灰会产生大量的二次扬尘,产生的二次扬尘对环境的污染非常严重。而最近国家颁布的钢铁行业超低排放产业政策,明确要求钢铁企业的粉状物料输送应采用气力输送等方式密闭输送。本文通过气力输灰技术在天津市新天钢联合特钢有限公司上的应用实践,分析了气力输灰的工作原理、优势特点以及常见泄漏、堵塞的问题,并提出了解决这些问题的改进措施。

关键词：除尘灰气力输灰二次扬尘工作原理改进措施

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联合特钢公司微型空气站的应用与管理

天津冶金 2021年第3期 71-73,77页

作者：刘勃兴天津市新天钢联合特钢有限公司天津301500

在大气环境监测方面,随着社会的不断发展,传统的人工监测已经无法满足环境监测要求,即使采样在线监测,也存在采购成本高、覆盖范围小等问题,为了充分利用微空气监测站有效监测污染源,实现真正的联合防治,建设微型空气监测站就显得尤为... 详细信息

在大气环境监测方面,随着社会的不断发展,传统的人工监测已经无法满足环境监测要求,即使采样在线监测,也存在采购成本高、覆盖范围小等问题,为了充分利用微空气监测站有效监测污染源,实现真正的联合防治,建设微型空气监测站就显得尤为必要。本文重点分析、探讨了微型空气监测站在联合特钢公司的应用与管理。

关键词：微型空气站大气环境监测应用管理

联合特钢公司230m^2烧结机机头电除尘器改造

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天津冶金 2015年第B8期 50-52页

作者：刘勃兴天津天钢联合特钢有限公司天津301500

为满足日益严格的环保要求,针对天钢联合特钢有限公司230 m2烧结机头电除尘器运行不稳定的问题,从电场、卸灰阀、阴阳极振打系统、阴阳极大小框架校正、阴阳极系统校正及漏风检查等方面对230 m2烧结机机头电除尘器进行改造。改造后电除... 详细信息

为满足日益严格的环保要求,针对天钢联合特钢有限公司230 m2烧结机头电除尘器运行不稳定的问题,从电场、卸灰阀、阴阳极振打系统、阴阳极大小框架校正、阴阳极系统校正及漏风检查等方面对230 m2烧结机机头电除尘器进行改造。改造后电除尘器运行正常,能够满足国家排放标准。

关键词：电除尘器烧结机改造