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人酸性成纤维细胞生长因子双抗体夹心测定方法

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军事医学科学院院刊 1994年第4期18卷 297-300页

作者：王芳薛沿宁王会信刘农乐周廷冲解放军军事医学科学院基础医学所北京

用纯化的人酸性成纤维细胞生长因子（ｈａＦＧＦ）免疫家兔，获得了兔抗ｈａＦＧＦ血清。另从含ｈａＦＧＦ单克隆抗体的小鼠腹水中纯化了ＩｇＧ。用纯化的单抗ＩｇＧ和多抗血清建立了ｈａＦＧＦ的双抗体夹心测定方法，检测水平可达０．... 详细信息

用纯化的人酸性成纤维细胞生长因子（ｈａＦＧＦ）免疫家兔，获得了兔抗ｈａＦＧＦ血清。另从含ｈａＦＧＦ单克隆抗体的小鼠腹水中纯化了ＩｇＧ。用纯化的单抗ＩｇＧ和多抗血清建立了ｈａＦＧＦ的双抗体夹心测定方法，检测水平可达０．２５ｎｇ／ｍｌ。用此方法测定了Ｎ端截断型ｈａＦＧＦ和牛酸性成纤维细胞生长因子（ｂａＦＧＦ），结果显示截断型ｈａＦＧＦ的检测灵敏度较低，ｂａＦＧＦ更低，提示单克隆抗体的抗原识别部位在ｈａＦＧＦ的Ｎ端附近。另外，肝素对ｈａＦＧＦ的检测有明显的影响，说明单抗的抗原识别部位与肝素的结合部位有关．

关键词：酸性成纤维细胞生长因子双抗体夹心测定

SDS-PAGE及转移电泳法测定纤溶酶原激活剂的分子量

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军事医学科学院院刊 1990年第3期14卷 228-230页

作者：谢文光王会信蒋滋慧刘农乐四川川北医学院军事医学科学院基础医学研究所

纤溶酶原激活剂(PA)经 SDS-PAGE 分离后,在凝胶中用 Triton X-100取代SDS,使 PA 复活。在温和条件下转移到纤维蛋白板上,则纤维蛋白板上出现与 PA 对应的溶解带。该法不仅可以用来测定 PA 的分子量,鉴别 PA 的类别,同时灵敏度不低于溶... 详细信息

纤溶酶原激活剂(PA)经 SDS-PAGE 分离后,在凝胶中用 Triton X-100取代SDS,使 PA 复活。在温和条件下转移到纤维蛋白板上,则纤维蛋白板上出现与 PA 对应的溶解带。该法不仅可以用来测定 PA 的分子量,鉴别 PA 的类别,同时灵敏度不低于溶解圈法,UK 可以测到0.005IU,而 t-PA 可以测到0.03IU。

关键词：纤溶酶激活剂 SDS-PAGE 转移电泳

表皮生长因子的发光免疫测定法——吖啶酯标记抗体的应用

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生物化学与生物物理进展 1993年第1期20卷 43-45页

作者：刘农乐蒋滋慧赵明王会信赵强周廷冲军事医学科学院基础医学研究所北京100850

介绍了吖啶酯标记抗体应用于表皮生长因子的发光免疫测定法.吖啶酯类发光剂标记抗体的优点是标记方法简便、抗体用量少、发光强度大.所述方法其标准曲线范围是400pg/ml—25ng/ml.表皮生长因子浓度与发光值之间的线性关系良好.批内及批... 详细信息

介绍了吖啶酯标记抗体应用于表皮生长因子的发光免疫测定法.吖啶酯类发光剂标记抗体的优点是标记方法简便、抗体用量少、发光强度大.所述方法其标准曲线范围是400pg/ml—25ng/ml.表皮生长因子浓度与发光值之间的线性关系良好.批内及批间变异系数分别为7.3%及11%.灵敏度与使用^(125)I 标记同一抗体的放免法同属 pg 水平.加入保护剂低温保存,使标记物的使用期由原来的1个月延长到6个月.

关键词：表皮生长因子吖啶酯荧光免疫法

昆虫防御素A的分子改造及其在噬菌体表面的展示

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军事医学科学院院刊 2002年第4期26卷 270-272,293页

作者：赵安薛沿宁冯健男张杰高波刘农乐王芳王会信军事医学科学院基础医学研究所北京100850

目的 :实现对昆虫防御素A的分子改造及改造后分子的噬菌体表面展示 ,为进一步设计构象型肽库 ,研究分子间相互作用奠定基础。方法 :分子改造包括以下内容 :分子截短 ,突变碱性氨基酸 ,减少半胱氨酸的数目等。利用InsightⅡHomology系统... 详细信息

目的 :实现对昆虫防御素A的分子改造及改造后分子的噬菌体表面展示 ,为进一步设计构象型肽库 ,研究分子间相互作用奠定基础。方法 :分子改造包括以下内容 :分子截短 ,突变碱性氨基酸 ,减少半胱氨酸的数目等。利用InsightⅡHomology系统对改造后分子结构进行预测。然后再将合成的改造蛋白基因插入到pCANTAB 5E载体中 ,采用Western印迹鉴定该蛋白在噬菌体表面展示。结果与结论 :模建结果显示改造后蛋白仍保持原有三维结构不变。

关键词：昆虫防御素A 分子设计噬菌体展示

ras-raf信号转导途径对受辐射细胞G_1期阻滞的调控作用

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中华放射医学与防护杂志 2000年第6期20卷 408-410页

作者：郭德煌董波刘农乐文耕云罗庆良毛秉智北京放射医学研究所 100850 北京基础医学研究所

目的　探讨ras raf信号转导途径在受辐射KG 1细胞中对周期的调控作用方式。方法　通过转染DN ras阻断GM CSF的信号传递后 ,瞬间转染cyclinD1,观察cyclinD1对受辐射细胞周期阻滞的影响作用。结果　转染DN ras的受辐射KG 1细胞即使用GM CS... 详细信息

目的　探讨ras raf信号转导途径在受辐射KG 1细胞中对周期的调控作用方式。方法　通过转染DN ras阻断GM CSF的信号传递后 ,瞬间转染cyclinD1,观察cyclinD1对受辐射细胞周期阻滞的影响作用。结果　转染DN ras的受辐射KG 1细胞即使用GM CSF刺激亦不能跳出G1期阻滞 ;瞬间转染cyclinD1能促进受辐射细胞跳出周期阻滞。结论　ras raf信号转导途径通过促进周期蛋白cyclinD1的表达而对受辐射细胞周期进行调控。

关键词：辐射细胞周期周期蛋白D1 ras-raf信号途径

用酵母双杂交技术研究IGF-1与其结合蛋白3的相互作用

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中国生物化学与分子生物学报 2001年第1期17卷 71-74页

作者：杜清友刘宝英薛沿宁王会信刘农乐军事医学科学院基础医学研究所北京100850

为了探讨胰岛素样生长因子结合蛋白 3(IGFBP- 3)分子上的胰岛素样生长因子 1 (IGF- 1 )结合位点并找出其关键氨基酸残基组成 ,首先建立了研究 IGF- 1与 IGFBP- 3相互作用的酵母双杂交模型 ,可以定性和定量地分析两个蛋白质之间的相互作... 详细信息

为了探讨胰岛素样生长因子结合蛋白 3(IGFBP- 3)分子上的胰岛素样生长因子 1 (IGF- 1 )结合位点并找出其关键氨基酸残基组成 ,首先建立了研究 IGF- 1与 IGFBP- 3相互作用的酵母双杂交模型 ,可以定性和定量地分析两个蛋白质之间的相互作用大小 ;同时利用基因体外定点突变的方法 ,对推断出的 IGF- 1结合位点中的氨基酸突变 ,经 DNA序列分析 ,构建了 5种 IGFBP- 3突变体 .然后在酵母双杂交模型中通过对报告基因活性的定量分析 ,检测 IGF- 1与各种 IGFBP- 3突变体之间相互作用的大小 .结果表明 ,IGFBP- 3分子上的 Lys2 2 2 ,Gln2 2 3突变后 ,与 IGF- 1的结合力大大下降 ,而 Arg2 2 5,Pro2 2 6,Ser2 2 7突变后也导致与 IGF- 1结合力的部分下降 .从而初步确定了IGFBP- 3分子中第 2 2 2～ 2 2 7位的氨基酸区域为 IGF- 1的结合位点 ,并且 IGFBP- 3分子上 Lys2 2 2 ,Gln2 2 3在与 IGF- 1结合中起着重要作用 .

关键词：胰岛素样生长因子 IGF结合蛋白酵母双杂交系统

IGF1R高表达细胞株的构建及其促糖代谢作用研究

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军事医学科学院院刊 2000年第1期24卷 72-73页

作者：丁红梅刘宝英杜清友刘农乐薛沿宁王会信军事医学科学院基础医学研究所北京100850

胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor 1, IGF1)和胰岛素高度同源,它们可以通过自己的受体,即IGF1受体(IGF1R)和胰岛素受体(IR)发挥生物学效应.IR和IGF1R都是α2β2跨膜糖蛋白,在β亚单位都有酪氨酸蛋白激酶区.通常人们认为,I... 详细信息

胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor 1, IGF1)和胰岛素高度同源,它们可以通过自己的受体,即IGF1受体(IGF1R)和胰岛素受体(IR)发挥生物学效应.IR和IGF1R都是α2β2跨膜糖蛋白,在β亚单位都有酪氨酸蛋白激酶区.通常人们认为,IGF1的促生长作用主要通过IGF1R,而代谢调控功能则通过IR起作用.但是在有些情况下, 如胰岛素抵抗的代谢状态,可以通过IGF1作用于它本身受体加以纠正[1].NIH3T3细胞是小鼠成纤维细胞,其表面IGF1R较少,我们选择它为模型,研究IGF1R在介导IGF1R促细胞糖代谢过程中的作用.

关键词： IGF1R 高表达细胞株构建 IGF1 糖代谢

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人脑髓鞘碱性蛋白的分离纯化和鉴定

生物化学杂志 1990年第1期6卷 45-48页

作者：王会信赵强蒋滋慧刘农乐周廷冲军事医学科学院基础医学研究所

本文介绍了从人脑中分离纯化髓鞘碱性蛋白的方法,人脑组织匀浆经甲醇—氯仿脱脂、酸提取、硫酸铵沉淀和羧甲基纤维素柱层析,得到了纯化的髓鞘碱性蛋白。该蛋白在SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳中为单一带,分子量为21kD。在聚焦电泳中测得其等电... 详细信息

本文介绍了从人脑中分离纯化髓鞘碱性蛋白的方法,人脑组织匀浆经甲醇—氯仿脱脂、酸提取、硫酸铵沉淀和羧甲基纤维素柱层析,得到了纯化的髓鞘碱性蛋白。该蛋白在SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳中为单一带,分子量为21kD。在聚焦电泳中测得其等电点在pH10以上,氨基酸组成分析结果也与文献值接近。这为进一步研究人脑髓鞘碱性蛋白的抗原性创造了条件。

关键词：髓鞘碱性蛋白脑分离纯化

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人酸性成纤维细胞生长因子单克隆抗体的制备

免疫学杂志 1993年第4期9卷 267-270页

作者：王芳薛沿宁王会信徐秀英刘农乐邵宁生周廷冲军事医学科学院基础医学研究所北京100850 军事医学科学院生物工程研究所北京100850

以纯化的重组人酸性成纤维细胞生长因子(haFGF)为抗原,免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0细胞融合,获得一株稳定分泌抗haFGF的单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其DNA含量为脾细胞与SP2/0细胞DNA含量之和,所分泌抗体为小鼠IgG_1亚类。免疫印迹显... 详细信息

以纯化的重组人酸性成纤维细胞生长因子(haFGF)为抗原,免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0细胞融合,获得一株稳定分泌抗haFGF的单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其DNA含量为脾细胞与SP2/0细胞DNA含量之和,所分泌抗体为小鼠IgG_1亚类。免疫印迹显示:此单抗只与大肠杆菌中的haFGF有结合,与牛aFGF则没有结合反应。

关键词：细胞生长因子杂交瘤单克隆抗体