检索结果-南通市图书馆

HBV S基因重组体的构建及免疫小鼠的实验

维普期刊数据库评论

在线全文

维普期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

浙江大学学报（医学版） 2002年第6期31卷 440-443,452页

作者：陈建忠朱海红刘克洲陈智浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所浙江杭州310031

目的 :探讨 HBV核酸免疫的可行性。方法 :采用 PCR技术 ,扩增得到编码 HBV HBs Ag的 S基因片段 ,将其插入到真核表达载体 pc DNA3,酶切鉴定并测序确证 ,得到质粒 pc DNA3- S,转染至 COS- 7细胞表达。将所构建的核酸疫苗免疫小鼠 ,观察... 详细信息

目的 :探讨 HBV核酸免疫的可行性。方法 :采用 PCR技术 ,扩增得到编码 HBV HBs Ag的 S基因片段 ,将其插入到真核表达载体 pc DNA3,酶切鉴定并测序确证 ,得到质粒 pc DNA3- S,转染至 COS- 7细胞表达。将所构建的核酸疫苗免疫小鼠 ,观察其诱导产生的特异性体液免疫和细胞免疫功能。结果 :HBV S基因序列与文献报道一致 ,转染真核细胞后能表达目的蛋白。免疫小鼠后实验组和阳性对照组抗 - HBs阳性率分别为 70 % (7/ 10 )和 80 %(8/ 10 ) ,抗体水平分别为 (32 .14± 13.79) m IU/ ml和 (2 8.5 0± 11.87) m IU/ ml,两者比较无显著性差异 (P>0 .0 5 )。对照组和空白组抗 - HBs均为阴性 ,小于 10 m IU/ ml。实验组和阳性对照组的特异性 CTL杀伤率在效∶靶比为 2 0∶ 1时分别为 (35 .4 0± 4 .85 ) %和 (38.2 0± 7.6 9) % ,效∶靶比为 10∶ 1时则分别为 (2 3.95± 3.98) %和 (2 4 .5 5±3.5 9) % ,两者比较无显著性差异 (P>0 .0 5 )。对照组和空白组的 CTL杀伤率在效∶靶比为 2 0∶ 1和 10∶ 1时均小于 5 %。结论 :pc DNA3-

关键词：乙型肝炎病毒 DNA疫苗聚合酶链反应基因核酸疫苗小鼠

三种启动子-shRNA表达框的制备及其在筛选有效SiRNA中的应用

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

浙江大学学报（工学版） 2005年第7期39卷 1086-1090页

作者：倪勤刘克洲羊正纲姚航平陈智浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所浙江杭州310003

为能快速经济地获取小干扰核糖核酸(smallinterferingRNAsiRNA),设计采用特异性延伸引物和上游、下游两条通用引物,通过重叠延伸一步聚合酶链反应(PCR)法一次性快速、简捷地制备包含U6+1、H1或tRNAVal在内的三种人小RNA多聚酶III启动子... 详细信息

为能快速经济地获取小干扰核糖核酸(smallinterferingRNAsiRNA),设计采用特异性延伸引物和上游、下游两条通用引物,通过重叠延伸一步聚合酶链反应(PCR)法一次性快速、简捷地制备包含U6+1、H1或tRNAVal在内的三种人小RNA多聚酶III启动子-小发夹状RNA(shRNA)表达框.用该方法制备的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)特异性三种启动子-shRNA表达框在转染HepG2细胞后有效地抑制了EGFP转基因表达,其中以tRNAVal-shRNA表达框抑制效果最显著,且未检测到干扰素应答基因2'5'OASmRNA的表达,表明该表达框可被有效转染并启动产生特异基因的RNA干扰效应,进而用于快速筛选最佳siRNA位点及其最适搭配启动子.

关键词：小干扰核糖核酸(siRNA) 核糖核酸多聚酶Ⅲ启动子筛选增强型绿色荧光蛋白(EGFP)

汉坦病毒疫苗株Z10与Z37重组核蛋白NP的表达纯化及其特异结合基因组末端反向重复序列的功能研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

病毒学报 2004年第2期20卷 110-117页

作者：刘合宾刘克洲翁景清朱智勇浙江大学医学院附一医院传染病研究所杭州310003 浙江省疾病预防控制中心肾综合征出血热重点实验室杭州310009

汉坦病毒是引起肾综合征出血热(HFRS)和汉坦病毒型肺炎综合征(HPS)的主要病原体。其基因组由三节段的单股负链RNA组成,即S、M与L基因片段。汉坦病毒基因组的一个重要特点是每个基因片段的两个末端都有一段长18个核苷酸的高度保守的反向... 详细信息

汉坦病毒是引起肾综合征出血热(HFRS)和汉坦病毒型肺炎综合征(HPS)的主要病原体。其基因组由三节段的单股负链RNA组成,即S、M与L基因片段。汉坦病毒基因组的一个重要特点是每个基因片段的两个末端都有一段长18个核苷酸的高度保守的反向重复序列,互补可形成双链发夹结构,并且这一特点为不同型病毒所共有。为了研究该基因组末端保守的反向重复序列的功能,首先构建了汉坦病毒中国疫苗株Z10(汉滩型)及Z37(汉城型)的核蛋白原核表达载体,并在大肠杆菌中高效表达。经NI NAT亲和柱和HiPrep16/10DEAE离子交换柱液相色谱(FPLC)二步提纯,获得高纯度的重组核蛋白,并分别以胰蛋白酶消化后,用Westernblotting进行区分和鉴定。以T4DNA激酶同位素标记一对人工合成互补的18个核苷酸反向重复序列,制备双链探针。然后将该探针与纯化的Z10、Z37株的核蛋白NP进行非变性凝胶电泳迁移改变实验(EMSA)后发现,重组的Z10、Z37株的核蛋白NP,在体外均可特异地结合其基因组末端反向重复序列形成的双链探针。该结果表明,汉坦病毒基因组末端的反向重复序列是核蛋白重要结合位点,这对理解汉坦病毒核蛋白功能以及病毒复制过程中病毒粒子的包装机制有重要的意义。

关键词：汉坦病毒疫苗重组核蛋白表达纯化汉坦病毒型肺炎综合征

慢性丙型肝炎患者血清sFas和sICAM-1及IL-18水平与意义

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

浙江大学学报（医学版） 2002年第1期31卷 2-5页

作者：姚航平夏大静张立煌刘克洲浙江大学医学院附属第一医院浙江杭州310003 浙江大学医学院浙江杭州310031

目的 :观察可溶性 Fas(s Fas)和可溶性细胞间粘附分子 - 1(s ICAM- 1)及白细胞介素 - 18(IL- 18)在慢性丙型肝炎患者血清中的水平 ,探讨它们在丙型肝炎发病机制中的作用。方法 :采用 EL ISA法检测 30例慢性丙型肝炎患者 α-干扰素治疗... 详细信息

目的 :观察可溶性 Fas(s Fas)和可溶性细胞间粘附分子 - 1(s ICAM- 1)及白细胞介素 - 18(IL- 18)在慢性丙型肝炎患者血清中的水平 ,探讨它们在丙型肝炎发病机制中的作用。方法 :采用 EL ISA法检测 30例慢性丙型肝炎患者 α-干扰素治疗前后血清 s Fas、s ICAM- 1、IL- 18的水平 ,荧光定量 PCR技术测定血清 HCV- RNA滴度。结果 :慢性丙型肝炎患者 s Fas、s ICAM- 1、IL- 18的水平均显著高于正常人 (P0 .0 5 )。实验结果还显示 ,抗病毒治疗有效者 ,血清s Fas、s ICAM- 1、IL- 18较治疗前明显下降 ,而无反应者治疗前后改变不明显。结论 :s Fas、s ICAM- 1、IL- 18均参与慢性丙型肝炎免疫致病过程 ,且与肝脏炎症活动性。

关键词：慢性丙型肝炎白细胞介素-18 可溶性Fas IL-18 sFas sICAM-1 可溶性细胞间粘附分子-1

反转录病毒MSCV介导汉坦病毒核蛋白基因在NIH3T3细胞中整合和表达

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

病毒学报 2004年第4期20卷 298-302页

作者：刘合宾刘克洲翁景清朱智勇浙江大学医学院附一医院传染病研究所杭州310003 浙江省疾病预防控制中心肾综合征出血热重点实验室杭州310009

汉坦病毒是引起肾综合征出血热(HFRS)和汉坦病毒型肺炎综合征(HPS)的主要病原体。由S基因编码的核蛋白(NP)主要与机体的细胞免疫有关,并调节病毒的复制及诱导细胞程序性死亡。构建了汉坦病毒Z10株核蛋白cDNA与含有pac基因的反转录病毒... 详细信息

汉坦病毒是引起肾综合征出血热(HFRS)和汉坦病毒型肺炎综合征(HPS)的主要病原体。由S基因编码的核蛋白(NP)主要与机体的细胞免疫有关,并调节病毒的复制及诱导细胞程序性死亡。构建了汉坦病毒Z10株核蛋白cDNA与含有pac基因的反转录病毒鼠干细胞病毒(MSCV)重组体MSCV-FlagNP,通过磷酸钙转录法导入产病毒的包装细胞系BOSC23中,产生完整的重组MSCV-FlagNP病毒。然后以重组病毒感染NIH3T3细胞,利用Puromycin的选择特性(pac基因)对感染细胞进行连续压力筛选,获得了转核蛋白抗性细胞。利用Southernblot和PCR方法分别对核蛋白基因在抗性细胞染色体整合情况及其完整性进行了鉴定。并且用Westernblot在抗性细胞中可检测到核蛋白的表达。进一步以Flag单克隆抗体介导的免疫荧光染色联合共聚焦激光扫描荧光显微镜,分析了内源性Flag融合核蛋白在抗性细胞内分布,发现核蛋白主要分布于胞浆及胞核周围区,并且部分核蛋白可聚集形成胞浆包涵体。转核蛋白基因细胞模型的建立,对进一步研究汉坦病毒核蛋白功能以及病毒复制机制有重要意义。

关键词：核蛋白基因汉坦病毒胞浆介导表达 NIH 3T3细胞 ac基因反转录病毒利用

慢性HBV感染免疫耐受期抗病毒治疗有益于预防肝硬化和肝癌的发生

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

临床肝胆病杂志 2021年第5期37卷 1024-1025页

作者：贾红宇刘克洲浙江大学医学院附属第一医院感染病科传染病国家重点实验室杭州310003

目前,美国肝病学会(AASLD)[1]、欧洲肝病学会(EASL)[2]和亚太肝病学会(APASL)[3]以及我国2019年版乙型肝炎指南[4]对免疫耐受期的定义及其抗病毒需求存在一定的差别,如反映肝功能的生化指标——ALT的正常值上限(ULN)存在差异。各指南多... 详细信息

目前,美国肝病学会(AASLD)[1]、欧洲肝病学会(EASL)[2]和亚太肝病学会(APASL)[3]以及我国2019年版乙型肝炎指南[4]对免疫耐受期的定义及其抗病毒需求存在一定的差别,如反映肝功能的生化指标——ALT的正常值上限(ULN)存在差异。各指南多主张对于有肝硬化客观依据的患者,无论ALT水平和HBeAg状态如何,只要检测到HBV DNA,均建议行抗病毒治疗。免疫耐受期抗病毒治疗的适应证通常主要基于以下3个标准的组合:血清HBV DNA水平、血清ALT水平和肝病严重程度(通过临床肝活检或无创诊断方法进行评估)。

关键词：乙型肝炎病毒乙型肝炎,慢性免疫耐受治疗学

拉米夫定耐药患者乙型肝炎病毒聚合酶基因G743C和G743A点突变的检测及分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中华肝脏病杂志 2003年第10期11卷 616-618页

作者：潘小平沃健儿陈智陈峰梁伟峰刘克洲浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所杭州310003 浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所所杭州310003

目的探讨拉米夫定耐药患者乙型肝炎病毒聚合酶(HBV P)基因点突变。方法聚合酶链反应(PCR)扩增拉米夫定耐药患者的HBV P基因,产物经直接测序检测其YMDD变异;同时,用PCR-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析测序后的17例YIDD变异样本,... 详细信息

目的探讨拉米夫定耐药患者乙型肝炎病毒聚合酶(HBV P)基因点突变。方法聚合酶链反应(PCR)扩增拉米夫定耐药患者的HBV P基因,产物经直接测序检测其YMDD变异;同时,用PCR-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析测序后的17例YIDD变异样本,先用3对引物扩增HBV P基因,再分别用3个限制性内切酶Fok I、Ssp I、Alw441酶切扩增产物,酶切产物用8.0％聚丙烯酰胺凝胶电泳分析。结果拉米夫定耐药患者HBV P基因PCR产物序列分析结果与GenBank的HBV标准株相比,发现16例存在HBV P基因G743C点突变和1例存在G743A点突变。其核苷酸序列由ATG变为ATC和ATA,YMDD基因序列发生变异,即由YMDD变异为YIDD;但是,PCR-RFLP不能确定这17例样本存在YIDD变异。结论拉米夫定耐药患者存在HBV P基因G743C和G743A的点突变,同样引起YIDD变异;而PCR-RFLP法不能准确地检测出G743C和G743A的点突变;该发现对HBV P基因YMDD变异检测和临床均有指导意义。

关键词：拉米夫定耐药性乙型肝炎病毒聚合酶 G743C G743A 基因点突变检测

外周血CD83+细胞检测在慢性病毒性肝炎中的意义

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

科技通报 2002年第2期18卷 114-117页

作者：汤灵玲刘克洲李敏伟浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所浙江杭州310003

为了解树突状细胞 (DC)在慢性病毒性肝炎中的变化及其临床应用价值 ,采用流式细胞仪检测技术检测了 6 5例慢性肝炎患者外周血中 CD83+细胞的水平 .结果显示 :慢性病毒性肝炎患者外周血中 CD83+细胞的水平与病情、短期内患者的预后显著相... 详细信息

为了解树突状细胞 (DC)在慢性病毒性肝炎中的变化及其临床应用价值 ,采用流式细胞仪检测技术检测了 6 5例慢性肝炎患者外周血中 CD83+细胞的水平 .结果显示 :慢性病毒性肝炎患者外周血中 CD83+细胞的水平与病情、短期内患者的预后显著相关 .说明 DC在慢性病毒性肝炎的发生中发挥重要作用 ,而 CD83+细胞的检测有助疾病的鉴别诊断和短期内预后的判断 ,有很好的临床应用价值 .

关键词：外周血CD83+细胞检测树突状细胞慢性病毒性肝炎 CD83 流式细胞仪诊断

静脉药瘾者人类免疫缺陷病毒核酸测定及亚型分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中华传染病杂志 2003年第1期21卷 14-16页

作者：吴南屏刘克洲陈智 Dennin.DH 浙江大学医学院附一医院传染病研究所杭州310003 德国吕贝克大学

目的　了解静脉药瘾者人类免疫缺陷病毒 (HIV)感染情况及感染亚型 ,追踪传染源 ,预测未来流行株。方法　对 1997年从新疆至杭州的 15例静脉药瘾者血清进行抗 HIV的初步筛选 ,结果为阳性者再行免疫印迹 (Westernblot)、套式聚合酶链反应... 详细信息

目的　了解静脉药瘾者人类免疫缺陷病毒 (HIV)感染情况及感染亚型 ,追踪传染源 ,预测未来流行株。方法　对 1997年从新疆至杭州的 15例静脉药瘾者血清进行抗 HIV的初步筛选 ,结果为阳性者再行免疫印迹 (Westernblot)、套式聚合酶链反应 (Nest PCR)及HIV核酸序列分析。结果15例新疆籍静脉药瘾者均感染了HIV 1,其中有 2例为E亚型 ,其余均为C亚型。结论　静脉吸毒者主要感染HIV 1C亚型。我国HIV 1主要流行株可能已经发生变化。

关键词：静脉药瘾者人类免疫缺陷病毒核酸序列分析亚型 HIV感染 HIV-1