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星形胶质细胞通过Cx47上调少突胶质前体细胞S1PR3的表达并促进其增殖

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星形胶质细胞通过Cx47上调少突胶质前体细胞S1PR3的表达并促进其...

作者：刘兆雨重庆医科大学

学位级别：硕士

神经退行性疾病是一类慢性、进行性神经系统疾病的总称。其发病率高、病期长、并且缺乏特异性治疗方法与措施。该类疾病给个人、家庭、社会带来了沉重的经济负担与社会负担的虽然这类疾病的病变部位及原因各不相同,但髓鞘产生不同程度... 详细信息

神经退行性疾病是一类慢性、进行性神经系统疾病的总称。其发病率高、病期长、并且缺乏特异性治疗方法与措施。该类疾病给个人、家庭、社会带来了沉重的经济负担与社会负担的虽然这类疾病的病变部位及原因各不相同,但髓鞘产生不同程度破坏或发生脱髓鞘病变是它们的共同点。主要表现为伴随着少突胶质细胞(oligodendrocyte,OL)的减少以及脱髓鞘。虽然对于这类疾病有很多的研究,少突胶质细胞的损伤和再生修复的的具体机制依然不清楚。少突胶质细胞作为中枢神经系统唯一的髓鞘形成细胞。其前体细胞-少突胶质前体细胞(oligodendrocyte progenitor cell,OPC)具有良好的增殖能力,能在体内增殖、迁移,最后形成成熟的少突胶质细胞,为髓鞘形成发挥极其重要的作用。无论内源性诱导还是外源性移植,如何获取大量的OPC,或者促进OPC再生成为治疗脱髓鞘疾病的关键。我们前期发现星形胶质细胞(astrocytes,AST)与OPC在接触共培养的条件下促进其增殖,但具体调控增殖的机制尚不清楚。本实验探讨了ASTs影响OPCs增殖的具体机制。为治疗脱髓鞘疾病提供了新的实验依据与理论基础。本研究分为以下三个部分:第一部分:星形胶质细胞通过cx47促进opcs增殖本部分通过使用星形胶质细胞与opc不同的培养方式,利用细胞流式、edu检测细胞周期及增殖。采用二代测序分析了不同培养条件下所有的差异基因,筛选有效的差异基因cx47。构建有效的cx47sirna,wb、pcr检测cx47蛋白基因变化,细胞流式检测细胞周期、edu检测细胞增殖情况。主要结果如下:***与asts直接接触共培养后,光镜、流式、edu检测显示asts促进opcs增殖较单独培养组与上清培养组更明显,处于细胞周期s期细胞比例明显增加(p<0.05),新生细胞数目占总细胞数比例显著增加(p<0.001)。***与asts直接接触共培养中,cx47促进了opcs增殖。3.干扰cx47后,cx47蛋白与基因表达明显下降(p<0.001),细胞周期阻滞(p<0.01),增殖能力降低(p<0.001)。上述结果说明asts促进opcs的增殖可能通过直接接触的cx47。第二部分:星形胶质细胞通过cx47促进少突胶质前体细胞s1pr3表达诱导其增殖在证实接触共培养更能促进opcs增殖的前提下,我们进一步比较了共培养与单独培养条件下下游膜信号的变化,利用接触式共培养组差异表达基因go细胞组分分析,显示主要位于细胞外基质、胞外区、细胞膜。以g-proteincoupledreceptoractivity聚类分析显示,在s1prs家族中表达三个亚型,s1pr1、s1pr3、s1pr5,尤以s1pr3在接触共培养组较单独opcs培养组差异性最为显著。本部分在asts与opcs接触共培养与单独培养的条件下,进一步检测了cx47影响少突胶质前体细胞增殖的机制,流式、共聚焦检测cx47干扰后ca2+的表达,wb、pcr检测下游的s1pr3表达,流式检测细胞周期。edu检测细胞增殖情况。利用s1pr3的拮抗剂后,wb检测了s1pr3,edu检测细胞增殖情况。主要结果如下:***47干扰后,流式检测ca2+浓度下降(p<0.05),与共聚焦结果一致(p<0.001)。2.下游受体信号的变化以s1prs家族在共培养与单独培养差异最为显著,尤以s1pr3最为明显。3.干扰cx47后s1pr3的蛋白表达下降(p<0.001)、基因表达下降(p<0.01)。4.拮抗s1pr3后,相比单独培养组,在共培养组opcs细胞周期g1期阻滞(p<0.05),edu检测新生细胞数占总细胞数比例下降(p<0.001)。以上结果表明opcs与asts接触共培养中,cx47触发ca2+内流,上调s1pr3的表达调控opcs的增殖。第三部分:asts通过上调少突胶质前体细胞s1pr3激活erk/p21通路诱导其增殖本部分在asts与opcs接触共培养与单独培养的条件下,主要探讨了Cx47调控S1PR3表达促进少突胶质前体细胞增殖的下游通路。S1PR3拮抗后,WB检测了ERK1/2、p-ERK1/2、p21的蛋白变化。PCR检测了Id4的变化。EdU检测细胞增殖。主要结果如下:1.S1PR3拮抗后,p-ERK1/2降低(p<0.001),p21表达增高(p<0.05),细胞增殖能力下降(p<0.001)。***1/2阻断后,Id4表达减少(p<0.05),细胞周期阻滞(p<0.05),细胞增殖能力下降(p<0.001)。3.S1PR3可以增加ERK1/2磷酸化,减少OPCs的G1期所占比例,促进OPCs进入S期,从而调控其增殖。以上结果表明星形胶质细胞通过上调少突胶质前体细胞S1PR3表达激活ERK1/2通路诱导其增殖。

关键词：少突胶质细胞少突胶质前体细胞星形胶质细胞 Cx47 S1PR3

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浅海埋地输油管道原油泄漏数值模拟研究

浅海埋地输油管道原油泄漏数值模拟研究

作者：刘兆雨浙江海洋大学

学位级别：硕士

海底输油管道是海洋工程中必不可少的组成部分,也是海洋石油的生命线,其安全运行备受关注。海底输油管道具有运行压力大、输送量大等特点,一旦发生管道泄漏,将对海洋环境造成极大的破坏。目前我国海底输油管道主要分布在浅海区域。因此... 详细信息

海底输油管道是海洋工程中必不可少的组成部分,也是海洋石油的生命线,其安全运行备受关注。海底输油管道具有运行压力大、输送量大等特点,一旦发生管道泄漏,将对海洋环境造成极大的破坏。目前我国海底输油管道主要分布在浅海区域。因此,开展浅海埋地输油管道油品泄漏后的扩散规律是有必要的。本文先基于计算流体动力学理论、多孔介质模型及多相流模型等理论,利用Fluent软件对模型进行网格独立性验证、建立梯度化海流速度、数值验证等,建立浅海埋地输油管道原油泄漏数值模型,为后续的研究奠定基础。再针对海底裸露管道泄漏和海底埋地管道泄漏两个典型工况,对比海底裸露管道和海底埋地管道的油品泄漏特征,分析海底埋地管道泄漏油品运动特性。最后,通过控制变量法,进行数值仿真计算,研究管道泄漏孔径、土壤孔隙度、泄漏压力、海流速度、管道埋深和双孔泄漏的间距对原油在土壤及海水中扩散运动的影响,获取泄漏原油在海水扩散中的横向范围和纵向位移,土壤和海水中的油品体积占比,以及到达海面所需时间。研究表明:泄漏孔径、土壤孔隙度、泄漏压力越大,泄漏油品的扩散范围越广,到达海面时间越短;海流速度越大,泄漏油品的扩散范围越广,到达海面时间越久;管道埋深越大,泄漏油品在海水中的扩散范围越短,到达海面时间越久。本研究可为海底输油管道泄漏事故的风险评估和应急规划提供依据,并对海上溢油事故中的安全相关应用具有一定的参考价值。

关键词：浅海埋地管道原油泄漏数值模拟油品扩散

基于“货到人”拣选系统的订单分批及路径优化研究

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基于“货到人”拣选系统的订单分批及路径优化研究

作者：刘兆雨天津理工大学

学位级别：硕士

TRPC3参与糖氧剥夺致培养的少突胶质细胞凋亡

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中国生物工程杂志 2015年第4期35卷 23-29页

作者：孟赞徐丹李真李静李刚刘永刚刘兆雨吴宏唐勇彭彦重庆医科大学基础医学院组织胚胎学教研室干细胞与组织工程研究室重庆400016

目的:研究瞬时受体电位通道蛋白3(transient receptor potential channel 3,TRPC3)是否参与糖氧剥夺(oxygen glucose deprivation,OGD)少突胶质细胞的凋亡。方法:以原代培养的新生SD大鼠少突胶质细胞为对照组,以OGD2h的少突胶质细胞为... 详细信息

目的:研究瞬时受体电位通道蛋白3(transient receptor potential channel 3,TRPC3)是否参与糖氧剥夺(oxygen glucose deprivation,OGD)少突胶质细胞的凋亡。方法:以原代培养的新生SD大鼠少突胶质细胞为对照组,以OGD2h的少突胶质细胞为模型组,将模型组+Pyr3阻断设为处理组。采用蛋白质免疫印迹法检测TRPC3蛋白的表达水平,MTT试剂盒比色法检测各组细胞存活率,Annexin V-FITC试剂盒染色后经流式细胞仪检测细胞凋亡,fluo-3染色后经流式细胞仪和激光共聚焦显微镜测定胞内游离钙的变化。结果:少突胶质细胞A2B5和MBP特异性标记阳性,细胞纯度可达到95%以上;少突胶质细胞OGD2h成功建立OGD模型;OGD组TRPC3蛋白表达增加;OGD组细胞活性为(54.34±6.55)%,凋亡率为(24.24±0.86)%,与对照组有显著差异(P<0.05),Pyr处理组细胞存活率为(72.26±5.41)%,凋亡率为(14.82±0.28)%,与OGD组有显著差异(P<0.05);OGD组胞内游离钙浓度显著升高,而Pyr3阻断以后可以部分抑制其升高。结论:TRPC3表达增加介导胞内游离钙离子水平的升高可能是OGD少突胶质细胞凋亡的重要原因之一。

关键词：少突胶质细胞 OGD TRPC3 凋亡钙离子

星形胶质细胞通过CX47促进少突胶质前体细胞增殖

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中国生物工程杂志 2015年第12期35卷 21-29页

作者：李真刘兆雨徐丹陈婷孟赞唐勇彭彦重庆医科大学基础医学院重庆400016 重庆医科大学第一附属医院重庆400016

目的:研究星形胶质细胞(AST)对少突胶质前体细胞(OPC)生长分化的影响及作用机制。方法:用P3SD乳鼠,建立星形胶质细胞与少突胶质前体细胞原代培养体系。实验分两部分,第一部分为常规OPC培养组、AST分泌因子组、AST与OPC直接接触式培养组... 详细信息

目的:研究星形胶质细胞(AST)对少突胶质前体细胞(OPC)生长分化的影响及作用机制。方法:用P3SD乳鼠,建立星形胶质细胞与少突胶质前体细胞原代培养体系。实验分两部分,第一部分为常规OPC培养组、AST分泌因子组、AST与OPC直接接触式培养组;第二部分为AST与OPC直接接触式培养组、缝隙连接干扰对照组、缝隙连接干扰组。免疫荧光鉴定OPC与AST细胞纯度,光镜观察细胞生长状态,流式细胞术检测细胞周期,转录组测序分析不同状态下OPC中缝隙连接蛋白CX47差异表达,PCR和Western blot检测鉴定转录组测序CX47差异表达,EDU检测CX47干扰后OPC增殖能力,流式细胞术测干扰CX47后细胞周期变化。结果:光镜与流式检测发现,与AST接触培养的OPC增殖能力最强、新生细胞数目最多。转录组测序分析和PCR验证显示,AST接触调控OPC增殖的主要差异表达蛋白为CX47,干扰CX47后细胞周期阻滞在G1期,OPC增殖能力明显下降。结论;AST可通过缝隙连接蛋白CX47调控细胞周期,促进OPC增殖。

关键词：少突胶质前体细胞缝隙连接髓鞘再生转录组测序

星形胶质细胞调控少突胶质前体细胞增殖机制研究

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基因组学与应用生物学 2017年第10期36卷 4030-4035页

作者：刘兆雨王尚徐丹高晓燕姜露唐勇彭彦重庆医科大学基础医学院重庆400016 重庆医科大学附属第一医院神经外科重庆400016

为了探讨星形胶质细胞(AST)与少突胶质前体细胞(OPC)在共培养环境中鞘氨醇激酶1(SPHK1)对少突胶质前体细胞增殖的影响及作用机制。试验采用新生(P0~P3)SD大鼠,培养AST与OPC并建立共培养体系,分为AST与OPC共培养组、SPHK1拮抗剂组。流式... 详细信息

为了探讨星形胶质细胞(AST)与少突胶质前体细胞(OPC)在共培养环境中鞘氨醇激酶1(SPHK1)对少突胶质前体细胞增殖的影响及作用机制。试验采用新生(P0~P3)SD大鼠,培养AST与OPC并建立共培养体系,分为AST与OPC共培养组、SPHK1拮抗剂组。流式检测细胞周期;RT-PCR验证转录组测序结果 SPHK1差异基因表达的准确性及SPHK1抑制后下游p21基因表达;Western blotting检测p21蛋白水平的变化;Ed U检测SPHK1拮抗后OPC增殖能力。试验证明RT-PCR与转录组测序结果一致,SPHK1拮抗后p21蛋白与基因表达均升高,OPC增殖能力下降。因此,我们认为AST主要上调SPHK1表达诱导OPC增殖。

关键词：星形胶质细胞少突胶质前体细胞 SPHK1 p21

经济安全视角下国家经济风险管理与法律研究--评《国家经济安全管理学》

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中国安全科学学报 2024年第3期34卷 I0006-I0007页

作者：刘兆侠银川能源学院

在全球化大潮中,各国之间的经济往来日益频繁,相互依存性不断加深。这种紧密的经济联系在促进资源优化配置和提升生产效率的同时,也使得各国经济体更容易受到内外环境变化的影响,面临诸多潜在风险的挑战。在此背景下,经济安全已成为国... 详细信息

在全球化大潮中,各国之间的经济往来日益频繁,相互依存性不断加深。这种紧密的经济联系在促进资源优化配置和提升生产效率的同时,也使得各国经济体更容易受到内外环境变化的影响,面临诸多潜在风险的挑战。在此背景下,经济安全已成为国家安全体系中的重要组成部分,关系到国家的长远发展和社会稳定。因此,从经济安全视角出发,深入研究国家经济风险管理及其法律规制,对于维护国家经济安全、促进经济的持续健康发展具有重大理论和实践意义。

关键词：国家经济安全相互依存性经济往来安全视角持续健康发展内外环境资源优化配置理论和实践意义

新时期长江流域水资源保护规划及管理工作的思考

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长江科学院院报 2024年第4期41卷 1-7页

作者：刘兆孝长江水利委员会长江水资源保护科学研究所武汉430051 长江水利委员会湖库水源地面源污染生态调控重点实验室武汉430051

组织编制并实施水资源保护规划是国家赋予水行政主管部门的法定职责,也是水利部门履行水资源管理和生态环境保护责任的重要工作。长江流域水资源保护规划经历了从起步、探索、实践与发展到形成完善体系的过程,推进了流域水资源保护与管... 详细信息

组织编制并实施水资源保护规划是国家赋予水行政主管部门的法定职责,也是水利部门履行水资源管理和生态环境保护责任的重要工作。长江流域水资源保护规划经历了从起步、探索、实践与发展到形成完善体系的过程,推进了流域水资源保护与管理科学有序发展。随着国家机构改革部门职能调整和《中华人民共和国长江保护法》出台,为更好地推进和落实新时期长江流域水资源保护规划和管理工作,系统梳理长江流域水资源保护规划发展历程与成效,分析当前流域水资源保护面临的形势与挑战,厘清流域水资源保护工作定位和思路,并据此提出新时期流域水资源保护规划及管理的工作建议,对凝聚流域水资源保护规划共识、建立流域水资源保护规划体系、推进水资源保护高质量发展、助力实现治江现代化具有重要的指导意义。

关键词：水资源保护规划水资源保护管理长江保护法长江流域规划思路

通过法律手段保障日化企业正常生产运营的有效策略

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日用化学工业（中英文） 2024年第5期54卷 I0004-I0005页

作者：刘兆侠银川能源学院

在全球化的大背景下,日化行业作为与人们日常生活密切相关的领域,其发展速度和规模不断扩大,同时也面临着前所未有的挑战和风险。日化产品的生产和销售涉及复杂的法律问题,包括知识产权保护、环境保护、劳动法律风险、合同法争议以及国... 详细信息

在全球化的大背景下,日化行业作为与人们日常生活密切相关的领域,其发展速度和规模不断扩大,同时也面临着前所未有的挑战和风险。日化产品的生产和销售涉及复杂的法律问题,包括知识产权保护、环境保护、劳动法律风险、合同法争议以及国际贸易法律挑战等诸多方面。这些法律问题不仅影响企业的正常运营,还可能对企业声誉和经济效益造成严重损害。因此,探索通过法律手段有效保障日化企业正常生产运营的策略显得尤为重要。

关键词：手段保障知识产权保护严重损害日化企业日化行业企业声誉生产运营日化产品