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猪圆环病毒2型新型纳米疫苗的研制及对小鼠免疫效果的初步评价

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猪圆环病毒2型新型纳米疫苗的研制及对小鼠免疫效果的初步评价

作者：刘俊彤山东农业大学

学位级别：硕士

猪圆环病毒病(Porcine circovirus disease)又被称作猪圆环病毒相关病(Porcine circovirus associated disease,PCVAD),它是猪圆环病毒2型(PCV2)引起的猪的多种疾病的总称,主要包括以下几种典型病症:断乳仔猪多系统衰竭综合征(Postweaning multisystemic wasting syndrome,PMWS)、猪皮炎肾病综合征(Porcine dermatitis and nephropathy syndrome,PDNS)、猪呼吸道病、肠炎、母猪繁殖障碍以及仔猪先天震颤等。PMWS病例于1991年在加拿大首次被发现,于1997年爆发流行,在这之后很多欧洲和美洲的国家都相继对该病有相关的报道,并且认定该病与猪圆环病毒2型有关。2001年我国首次报道猪圆环病毒病,截止目前该病几乎存在于我国所有猪群,严重影响了我国养猪业的生产和发展水平,给我国养猪业造成了巨大的经济损失。近年来,新型纳米疫苗因为其具有佐剂、载体且能递呈抗原等功能,越来越受到研究者的关注。纳米颗粒可以将疫苗抗原和蛋白质递送到所需的作用位点,并通过黏膜给药途径保护递送的抗原在不利条件下不被降解;抗原递呈细胞对纳米颗粒的摄取可以增加并诱导强烈的免疫反应;纳米材料的缓释作用可使得疫苗抗原实现长效化,因此纳米材料被广泛应用于递送系统中。多孔纳米材料作为一种新型纳米载体,在疫苗研发中发挥着重要作用,其中共价有机框架(COFs)与金属有机框架(MOFs)作为新兴的多孔晶态纳米材料,它们独特优异的功能可设计、结构可预测、孔径可调节等特征,外加其高比表面积与有序开放型纳米通道可保证高负载能力,证明了MOFs与COFs材料成为抗体通用载体的可行性。该纳米材料用于疫苗抗原的载体,有望大幅提高疫苗诱导的免疫应答反应和免疫保护效率。本研究首先将构建好的Cap基因质粒分别转化到BL21(DE3)、Rosetta和BL21 Star(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导后表达目的蛋白。经Ni柱亲和层析纯化,获得PCV2 Cap蛋白。用BCA法测定重组蛋白浓度,并经SDS-PAGE分析,结果表明成功表达获得分子量大小为29 k Da的单一条带的Cap蛋白。用纯化后的PCV2 Cap蛋白作为介质,选用纳米多孔晶态材料COFs与MOFs作为载体,通过包被的方式相结合,分别制备猪圆环病毒新型纳米疫苗,以实现增强被封装PCV2 Cap蛋白的热稳定性和化学稳定性、提高免疫抗体水平的目标。采用BCA法测定PCV2@MOFs和PCV2@COFs蛋白包被率。CCK-8试验分别测试了COFs、MOFs、PCV2@MOFs、PCV2@COFs在12.5μg/m L～200μg/m L浓度下对宿主细胞的毒性,结果显示上述材料对RAW264.7和PK-15无细胞毒性,说明该新型纳米疫苗在体外细胞上具有较好的安全性。通过皮下注射的方式对小鼠进行PCV2@MOFs疫苗的免疫,初步检测疫苗的免疫效果,采用猪圆环病毒ELISA试剂盒对小鼠体内PCV2抗体进行检测。结果表明不同浓度(25μg、50μg、100μg)的PCV2@MOFs注射小鼠后,PCV2抗体均为阳性。综上所述,本研究基于原核表达的PCV2 Cap蛋白,采用多孔晶态纳米材料将其包被,制备的猪圆环病毒新型纳米疫苗PCV2@MOFs表现出良好的免疫应答作用。本研究为进一步深入研发猪圆环病毒新型纳米疫苗奠定了基础。

关键词： PCV2 新型纳米颗粒疫苗原核表达纳米多孔晶态材料免疫效果评价

林下山参花化学成分及其抗缺血性脑卒中活性的研究

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林下山参花化学成分及其抗缺血性脑卒中活性的研究

作者：刘俊彤吉林大学

学位级别：硕士

林下山参(Panax ginseng C.A.Meyer cv.Silvatica)是播种在山林野生状态下自然生长的人参,习称“籽海”。15年以上的林下山参也称为野山参,其形态和药理活性更加接近野生人参,与园参在化学成分和生物活性上均存在明显差异。林下山参花... 详细信息

林下山参(Panax ginseng C.A.Meyer cv.Silvatica)是播种在山林野生状态下自然生长的人参,习称“籽海”。15年以上的林下山参也称为野山参,其形态和药理活性更加接近野生人参,与园参在化学成分和生物活性上均存在明显差异。林下山参花为林下山参的花,与根、茎叶等部位类似,林下山参花与园参花由于生长环境等的不同,其次生代谢产物和生物活性也会存在差异。文献报道了园参花的化学成分以及药理作用,但对于林下山参花的研究却鲜少见报道。缺血性脑卒中(Ischemic stroke,IS)是一种由脑血管栓塞引起的脑部坏死疾病,发病突然、治疗难度大、并发症持续时间长,成为世界致死致残主要原因之一。IS包括缺血期和再灌注损伤(Ischemia-reperfusion injury,I/R)期。本论文在综述人参花化学成分和缺血性脑卒中研究现状基础上,对林下山参花化学成分、林下山参花总皂苷抗I/R生物活性及机制进行了研究。主要研究内容包括:对林下山参花化学成分进行提取分离与鉴定;对林下山参花总皂苷抗I/R活性进行研究;基于代谢组学、网络药理学、分子对接技术探究林下山参花总皂苷抗I/R的作用机制,并筛选抗I/R的活性成分。取得了以下创新性成果:一、林下山参花化学成分的研究采用乙醇提取,大孔吸附树脂、硅胶柱色谱、高效液相色谱等分离纯化,以及薄层色谱法、核磁共振等鉴定方法,从林下山参花中分离并鉴定了26个化合物,分别为人参皂苷Mb(1)、三七皂苷A(2)、20-葡萄糖基人参皂苷Rf(3)、三七皂苷R1(4)、三七皂苷Fa(5)、珠子参皂苷F1(6)、越南人参皂苷R8(7)、人参皂苷Rk1(8)、人参皂苷Rk3(9)、人参皂苷F2(10)、人参皂苷F3(11)、人参皂苷Rh1(12)、人参皂苷Rh4(13)、人参皂苷Rc(14)、人参皂苷Re(15)、人参皂苷Rd(16)、人参皂苷Rg1(17)、人参皂苷Rg2(18)、人参皂苷Rh2(19)、人参皂苷Rb1(20)、人参皂苷Rb2(21)、人参皂苷Rb3(22)、20(R)-人参皂苷-Rg3(23)、人参皂苷Rg3(24)、原人参二醇(25)、原人参三醇(26),其中化合物1、2为首次从人参花中分离得到,化合物1～26为首次从林下山参花中分离得到。二、林下山参花总皂苷抗脑缺血/再灌注损伤的研究建立了大鼠大脑中动脉栓塞(Middle Cerebral Artery Occlusion,MCAO)模型,并使其再灌注,采用对大鼠感觉运动功能行为学评分、脑梗死面积测定、组织病理学检查以及脑组织中相关因子含量测试等方法,对林下山参花总皂苷(total saponins of ginseng flower,TSGF)的抗I/R活性进行研究。结果表明,在TSGF干预下,感觉运动功能行为学评分降低;脑梗死面积明显降低;组织细胞损伤减小;血清和脑组织中NSE、TNF-α、IL-6、IL-1、MDA含量均显著下降,氧化因子SOD含量显著上调。表明TSGF具有良好的抗I/R活性三、林下山参花总皂苷抗脑缺血/再灌注损伤的机制探讨采用基于UPLC-Q/TOF-MS技术的代谢组学技术,对TSGF抗IS的相关机制进行研究。结果表明,TSGF可通过回调大鼠血清和脑组织中17种内源代谢物的含量,以及所涉及的7条代谢通路来发挥抗I/R作用。采用网络药理学技术,构建了“化合物-靶点-疾病”网络,探究林下山参花总皂苷抗I/R作用的潜在靶点、信号通路及潜在活性成分。结果表明HSP90AA1、EGFR、IL6、MAPK1等关键靶点、PI3K-Akt、TNF、HIF-1等信号通路,与林下山参花总皂苷发挥抗I/R作用密切相关。人参皂苷Rh4、人参皂苷Rk3、人参皂苷Rk1、珠子参皂苷F1等Degree值较高的化合物为活性成分。采用分子对接技术,对活性成分与关键靶点进行了分子对接,结果表明这4种化学成分能够与4种靶点蛋白较好的结合。综上,本论文阐述了林下山参花的化学成分,弥补了林下山参花化学成分研究的不足;筛选出林下山参花总皂苷抗I/R的生物活性;探讨了林下山参花总皂苷抗I/R的作用机制和活性成分。为阐明林下山参花化学物质组成以及药物用途提供了科学依据,也为林下山参的进一步研究与开发提供了理论基础。

关键词：林下山参花化学成分总皂苷缺血性脑卒中作用机制

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镍基析氧电极的阳极氧化处理及析氧性能研究

镍基析氧电极的阳极氧化处理及析氧性能研究

作者：刘俊彤沈阳工业大学

学位级别：硕士

新能源是推动社会快速发展的主要动力之一,氢能则是一种高效、易储存、且环保的二次能源,已经逐渐成为最具发展潜力的新能源。同时,电解水制氢是制备方法简单、效率最高且产物无污染,是目前应该用最广的制氢技术。电解水反应分为阳极析... 详细信息

新能源是推动社会快速发展的主要动力之一,氢能则是一种高效、易储存、且环保的二次能源,已经逐渐成为最具发展潜力的新能源。同时,电解水制氢是制备方法简单、效率最高且产物无污染,是目前应该用最广的制氢技术。电解水反应分为阳极析氧反应和阴极析氢反应,其中析氧反应是4电子转移过程,会严重影响电解水反应进程。因此,开发高效的析氧催化剂材料成为研究者们的主要目标。本研究主要以地球储量较多且具有较好析氧性能的金属Ni为主,通过电弧熔炼法制备Ni-Fe、Ni-Co和Ni-Mo三种不同组成和不同成分的Ni基二元合金电极材料。为了提高电极的析氧性能,对电极进行阳极氧化处理优化电极表面元素之间的协调性并修饰电极表面的微观形貌,并对处理后的合金电极进行微观组织表征和析氧性能分析。通过电弧熔炼法制备的Ni-Fe二元合金电极,经电化学测试后NiFe电极的OER催化活性较高。在硫氰酸钾溶液中去合金化处理后,Ni-Fe二元合金电极表面形成一层有Fe掺杂的羟基氧化镍(NiFe(1-x))OOH)薄膜,使Ni-Fe电极的析氧性能有很大程度提高。也对Ni-Fe二元合金进行酸溶液中表面粗化处理,增大了电极的活性表面积从而提高电极的OER催化活性。最终,NiFe电极的ECSA增大至5.775 cm,10 m A·cm的电流密度的过电位为312.19 m V具有较好的OER催化活性。通过电弧熔炼法制备的Ni-Co二元合金电极,由于反应生成的CoOOH具有较好的导电性,使NiCo电极表现出优异的OER催化活性。也对Ni-Co电极在硫氰酸钾中进行去合金化处理,使NiCo电极的过电位下降至320.71 m V。酸溶液中的表面粗化处理也增大了Ni-Co二元合金电极的活性表面积,提高电极的催化活性,NiCo电极的过电位最低为356.25 mV。通过电弧熔炼法制备了Ni-Mo二元合金电极,电极的OER催化活性随Mo含量的增加而提高,NiMo电极的过电位最低为401.42 m V,表现出较好的析氧性能。Ni-Mo二元合金电极在酸溶液中的表面粗化处理后也使电极的活性表面积提高了5～10倍,NiMo在酸处理后的活性表面积为10.25 cm,在10 m A·cm的电流密度下的过电位下降至306.47 mV,具有较好的OER催化活性。

关键词： Ni基合金电极析氧反应去合金化处理酸粗化处理

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考虑自动驾驶仪延迟的非线性最优末制导方法

航空兵器 2024年

作者：刘俊彤陈征张泽浙江大学航空航天学院北京控制与电子技术研究所浣江实验室

针对过载受限和自动驾驶仪延迟等条件下的非线性最优末制导指令在线生成方法进行研究。首先，基于庞特里亚金极大值原理，建立了目标静止的非线性最优末制导问题的最优性条件，并利用饱和函数将过载约束嵌入最优性条件。其次，应用参数... 详细信息

针对过载受限和自动驾驶仪延迟等条件下的非线性最优末制导指令在线生成方法进行研究。首先，基于庞特里亚金极大值原理，建立了目标静止的非线性最优末制导问题的最优性条件，并利用饱和函数将过载约束嵌入最优性条件。其次，应用参数化方法使得通过数值积分即可快速生成满足最优性条件的飞行轨迹数据集。然后，利用该数据集训练神经网络，使其拟合弹-目相对运动状态到最优制导指令的映射关系，实现过载约束下制导指令的毫秒量级在线生成。针对自动驾驶仪的延迟响应，通过微分补偿法估计神经网络下一时刻输出的制导指令以实现快速跟踪。最后，仿真结果表明，本文所提出方法针对静止目标与小机动目标都能够在线生成最优制导指令。

关键词：过载约束自动驾驶仪延迟非线性最优末制导参数化方法神经网络

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新时代学校思想政治教育的战略思考

新时代学校思想政治教育的战略思考

2023教育创新理论与实践研讨会

作者：刘俊彤靖远县高湾镇笠山学校

在新的发展环境下,互联网的普及使得学生能够更早、更迅速地接触到来自社会各领域的信息。然而,如果没有正确的思想引导,学生的人生观和价值观极易受到负面影响。随着社会的进步,思政教育在学校中的地位变得越来越重要。学校应当将思想...

在新的发展环境下,互联网的普及使得学生能够更早、更迅速地接触到来自社会各领域的信息。然而,如果没有正确的思想引导,学生的人生观和价值观极易受到负面影响。随着社会的进步,思政教育在学校中的地位变得越来越重要。学校应当将思想政治教育融入日常教学中,注重理论与实践相结合,以人为本,从长远的角度出发开展教育工作。同时,学校还应当顺应时代的发展,不断更新思政教育的内容和方式,确保思政教育始终与时俱进。只有这样,我们才能真正培养出具备正确人生观和价值观的学生,为中华民族的伟大复兴贡献力量。

关键词：

来源： cnki会议评论

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环保社会组织治理对制造企业绿色转型的影响

环保社会组织治理对制造企业绿色转型的影响

作者：刘俊彤大连理工大学

学位级别：硕士

严重的环境污染问题制约着我国经济的可持续发展,如何有效的进行污染治理是当前我国亟需解决的重要问题。正式环境规制政策对环境治理的重要作用已毋庸置疑,随着环境共治理念的不断发展,以环保社会组织治理为代表的非正式环境规制也逐... 详细信息

严重的环境污染问题制约着我国经济的可持续发展,如何有效的进行污染治理是当前我国亟需解决的重要问题。正式环境规制政策对环境治理的重要作用已毋庸置疑,随着环境共治理念的不断发展,以环保社会组织治理为代表的非正式环境规制也逐渐发挥出其积极作用。而制造业作为我国经济发展的支柱性产业,为经济发展带来巨大贡献的同时,却也是各类污染物排放的主要来源,制造企业作为其中最基本的生产单元,能否促进其实现绿色转型关系着我国经济的长远发展。基于此,在当前环境共治格局的背景下,本文将探究环保社会组织参与环境治理对制造企业绿色转型的影响。本文首先通过理论分析和模型构建的方式对环保社会组织参与环境治理影响企业绿色转型的机理进行了分析,并指出环保社会组织参与环境治理将提高政府的环境规制力度和公众环保意识进而使企业在合法性压力下选择进行绿色转型。其次,以“公众环境研究中心”对我国部分城市公布的《污染源监管信息公开指数报告》作为一次环保社会组织参与环境治理的“准自然实验”,利用双重差分法实证分析了环保社会组织治理对制造企业绿色转型的影响。最终得出以下几点结论:第一,环保社会组织治理将有利于促进制造企业进行绿色转型。第二,环保社会组织主要是通过向外界传递环境信息的方式参与环境治理,因而区域信息化发展程度越高、区域内人口素质越高将越有利于发挥环保社会组织治理对企业绿色转型的促进作用。此外,环保社会组织可以对政府的环境治理起到有力的补充作用并且可以缓解环境治理中的委托代理问题,促进地方政府加大治理力度从而影响企业绿色转型。第三,环保社会组织参与治理显著促进了政府环境规制力度的提高,但是对于提高公众环保意识,引导公众参与环境治理的作用效果还不明显,因而环保社会组织应积极提高自身社会公信力从而发挥其良好的带动作用。最后,本文基于研究结论,提出了以下几点政策建议:促进环保社会组织在我国的发展,发挥其在治理中的积极优势;强化政府的环境规制力度,建立健全的环境信息公开制度;激发企业绿色转型的主观能动性,积极引导企业进行绿色生产;加强树立公众的环保意识,增强公众参与环境治理的积极性。从而更好的构建以政府为主导、企业为主体、社会组织和公众共同参与的环境共治新格局。

关键词：环保社会组织制造企业绿色转型委托代理理论合法性理论

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生物资产审计风险及对策

合作经济与科技 2022年第12期 160-162页

作者：刘俊彤长江大学湖北·荆州

随着我国海洋经济的不断发展,水产养殖行业的审计问题受到越来越多的关注和研究。本文以獐子岛“扇贝门”事件为例,从固有风险、控制风险、检查风险等方面对生物资产审计风险进行分析,并从国家、企业、审计单位等层面提出应对之策。

关键词：生物资产审计风险应对措施

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试论清代图们江流域边境贸易变化及影响

试论清代图们江流域边境贸易变化及影响

作者：刘俊彤延边大学

学位级别：硕士

有清一代,清朝与朝鲜在图们江地区开展了长期的贸易往来,最初体现为宗藩朝贡体制下的互市贸易,主要包括两国商民为贸易主体的公市贸易,同时兼具私市贸易、马市贸易等形式,其实质是在宗藩朝贡体制下进行的边境贸易,这一时期公贸易是其主... 详细信息

有清一代,清朝与朝鲜在图们江地区开展了长期的贸易往来,最初体现为宗藩朝贡体制下的互市贸易,主要包括两国商民为贸易主体的公市贸易,同时兼具私市贸易、马市贸易等形式,其实质是在宗藩朝贡体制下进行的边境贸易,这一时期公贸易是其主要贸易形式,贸易规模较小,对两国的经济发展的影响较小。进入19世纪后半期,清朝和朝鲜相继在西方列强的侵扰下,逐渐被卷入资本主义浪潮。在1882年前尽管两国在图们江地区的互市贸易受到了日本的威胁,但是仍在“宗藩朝贡体制”下开展互市贸易。至1882年,清朝与朝鲜在图们江地区的边境贸易不断遭受来自西方列强和日本的冲击。为了维护传统的中朝宗藩朝贡体系,保护清朝作为宗主国在朝鲜的优势地位,因此清朝政府转变政治策略,一改保守的对朝政治政策,加强了对朝鲜的控制和干涉,同时,经济上开始效仿西方国家,通过借鉴具备近代自由贸易色彩的通商章程条约来规范中朝边境贸易,《中韩商民水陆贸易章程》等章程条约的签订,正是传统宗藩朝贡下互市贸易的衰弱与新的近代自由贸易开启的典型标志,由此开始形成传统宗藩朝贡体制和近代条约体制共同作用下的双轨并行的互市贸易形式。这一举措是清朝巩固两国宗藩关系的基础上,对边境贸易做出的适时调整。一系列章程的签订标志着中朝贸易由传统的宗藩朝贡贸易向近代自由贸易转变的开始,对图们江地区的边境贸易发展有着重大的意义。甲午中日战争以清朝战败结束,清朝签订了中日《马关条约》,这一条约既代表了中朝宗藩关系的终结,清朝失去了在朝鲜的政治优势,也为整个中朝贸易关系带来了变化,清朝财政独立局面被打破,中朝在图们边境贸易的形式也逐渐转变为商埠贸易为主。这一阶段的商埠贸易体现了两国作为主权国家的平等关系,是完全在条约制度下展现了相对独立的国家间的近代化贸易形态,体现了宗藩色彩逐渐淡化、通商要素自由化、交易形式制度和规范化等特点,这意味着两国间的边境贸易关系开始向近代自由贸易关系转变。商埠贸易阶段虽然摆脱了宗藩朝贡体制的影响,但是还是面临被西方列强的瓜分和争夺的风险。从整体上看,图们江地区的边境贸易伴随着两国政治经济上的变化而变化,特别是在晚清时期,图们江边境贸易在由不平等条约到平等条约的环境过渡中,贸易关系也由传统贸易走向自由贸易,呈现出了不同的发展轨迹和特征,对两国的经济发展产生了较为深远的影响。同时,中朝边境贸易发展对现代中国与朝鲜半岛国家发展经贸关系带来了诸多启示:一是中国应坚定边境贸易发展的决心,二是要采取实际措施进一步促进边境贸易合作。

关键词：中朝边境贸易图们江互市贸易商埠贸易宗藩体制条约体制

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监测污水助力抗击疫情

Science Bulletin 2022年第11期67卷 1090-1092页

作者：张彤 Environmental Microbiome Engineering and Biotechnology Laboratory Center for Environmental Engineering ResearchDepartment of Civil EngineeringThe University of Hong KongHong KongChina

The recent outbreak of the 5th wave of COVID-19 in Hong Kong reminds us again that infectious diseases are one of the grand challenges to the public health today.The ability to rapidly monitor the spread of diseases in a large scale is the key for prevention,intervention and control.Wastewater-Based Epidemiology(WBE)is based on pooled wastewater of a population.

关键词： wastewater population. Wastewater