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O_(139)霍乱弧菌LPS基因和O抗原基因在大肠杆菌中的克隆表达及O抗原基因结构的初步研究

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高技术通讯 2000年第2期10卷 24-27页

作者：曲殿波刘传暄马清钧军事医学科学院生物工程研究所北京100850

本研究采用构建基因文库的方法,构建了O139霍乱弧菌的粘粒基因组文库及重组粘粒的亚克隆文库。另外构建了质粒基因组文库。从文库中筛选到可以表达O139霍乱弧菌LPS和O抗原的重组克隆,经鉴定重组克隆表达的LPS和O抗原不但具有与O139霍乱... 详细信息

本研究采用构建基因文库的方法,构建了O139霍乱弧菌的粘粒基因组文库及重组粘粒的亚克隆文库。另外构建了质粒基因组文库。从文库中筛选到可以表达O139霍乱弧菌LPS和O抗原的重组克隆,经鉴定重组克隆表达的LPS和O抗原不但具有与O139霍乱弧菌的LPS和O抗原具有相同的反应原性,而且还具有相同的免疫原性。O抗原基因的部分测序分析表明,O139霍乱弧菌的抗原基因与O1群霍乱弧菌的O抗原基因不同源。

关键词：霍乱弧菌抗原基因 LPS基因大肠杆菌克隆表达

径向离子交换色谱分离纯化分泌表达的重组霍乱毒素B亚单位

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军事医学科学院院刊 1998年第3期22卷 238-239页

作者：刘传暄张艳红马清钧军事医学科学院生物工程研究所

离子交换色谱作为常用的制备色谱技术，已广泛应用于生物工程产品的分离纯化。但传统的色谱技术处理量小、流速低，柱体设计对大规模纯化实用性差，不利于工业化生产。近年来发展的径向色谱柱，具有容量和负荷量大、操作方便、可原位再... 详细信息

离子交换色谱作为常用的制备色谱技术，已广泛应用于生物工程产品的分离纯化。但传统的色谱技术处理量小、流速低，柱体设计对大规模纯化实用性差，不利于工业化生产。近年来发展的径向色谱柱，具有容量和负荷量大、操作方便、可原位再生并可高压消毒的特点，同时由于柱体...

关键词：离子交换色谱径向霍乱霉素B

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内含肽介导的生物学效应及其应用

中国生物工程杂志 2003年第2期23卷 17-24页

作者：刘萱赵志虎刘传暄军事医学科学院生物工程研究所北京100850

蛋白质翻译产物在成熟过程中剪切释放出来的一段氨基酸序列称为“intein”———即内含肽。它与前体蛋白以框内融合的形式共同翻译 ,并内嵌于前体蛋白序列中。内含肽的解离以及内含肽两侧氨基酸序列的连接是在内含肽自身催化作用下完成... 详细信息

蛋白质翻译产物在成熟过程中剪切释放出来的一段氨基酸序列称为“intein”———即内含肽。它与前体蛋白以框内融合的形式共同翻译 ,并内嵌于前体蛋白序列中。内含肽的解离以及内含肽两侧氨基酸序列的连接是在内含肽自身催化作用下完成的。本文将从内含肽的发现、结构特征和作用机理等方面对这种具有特殊意义的蛋白质成熟机制进行较为全面的论述 ,同时介绍了近年来发展起来的以内含肽介导的蛋白质剪接为基础的蛋白质纯化和改造技术。

关键词：内含肽介导生物学效应应用蛋白质剪接

产生霍乱毒素B亚单位的工程菌在LB培养基中的振荡培养

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军事医学科学院院刊 1992年第4期16卷 266-268页

作者：于秀琴马清钧刘传暄军事医学科学院生物工程研究所

表达霍乱毒素B亚单位的工程菌MM2菌株在LB培养基中能高效合成B亚单位。观察了在培养过程中吸光度、pH及B亚单位产生的动态变化。3L摇瓶振荡培养,B亚单位产量可达16μg/ml。

关键词：霍乱毒素工程大肠菌发酵培养

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CT－B信号肽基因的化学合成及克隆

军事医学科学院院刊 1994年第1期18卷 5-7页

作者：施维马清钧刘传暄张京生军事医学科学院生物工程研究所

利用固相化学合成的方法合成了霍乱毒素Ｂ亚单位信号肽基因，并将该基因插入到ｐＢＲ３２２载体上，构建成一个可在不同相位插入异源基因的分泌表达载体。经菌落原位杂交和酶切等方法筛选出正确的克隆，为进一步研究异源表达蛋白的分泌... 详细信息

利用固相化学合成的方法合成了霍乱毒素Ｂ亚单位信号肽基因，并将该基因插入到ｐＢＲ３２２载体上，构建成一个可在不同相位插入异源基因的分泌表达载体。经菌落原位杂交和酶切等方法筛选出正确的克隆，为进一步研究异源表达蛋白的分泌提供了条件。

关键词：霍乱毒素B 信号肽化学合成克隆

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大肠杆菌生产的霍乱毒素B亚单位

中国科学（B辑） 1990年第7期20卷 726-730页

作者：马清钧刘传暄熊凌霜于秀琴军事医学科学院生物工程研究所北京100850

应用遗传工程技术,获得一株高效表达霍乱毒素B亚单位的工程大肠杆菌菌株,该菌株在501发酵罐培养,B亚单位产量达20—40μg/ml,且能分泌至胞外。将工程菌产生的B亚单位经亲和层析纯化,获得了电泳纯制品,其分子量、N端氨基酰末端分析、抗... 详细信息

应用遗传工程技术,获得一株高效表达霍乱毒素B亚单位的工程大肠杆菌菌株,该菌株在501发酵罐培养,B亚单位产量达20—40μg/ml,且能分泌至胞外。将工程菌产生的B亚单位经亲和层析纯化,获得了电泳纯制品,其分子量、N端氨基酰末端分析、抗原性、与天然的B亚单位完全相同。工程菌产生的B亚单位具有很好的免疫原性,可用于构建防治霍乱及毒源性大肠杆菌腹泻的制剂及半抗原的载体。

关键词：大肠杆菌霍乱毒素 B亚单位

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肿瘤免疫治疗的一种新技术——肽脉冲

生物工程进展 1998年第4期18卷 58-63页

作者：曲殿波刘传暄马清钧解放军军事医学科学院生物工程所北京 100850 解放军军事医学科学院生物工程所北京

肿瘤免疫治疗的一种新技术——肽脉冲曲殿波刘传暄综述马清钧审校（军事医学科学院生物工程研究所北京１００８５０）前言利用疫苗来治疗肿瘤的想法由来以久，甚至可以追溯到２００年前［１］。本世纪５０年代，研究人员发现移植过肿瘤... 详细信息

肿瘤免疫治疗的一种新技术——肽脉冲曲殿波刘传暄综述马清钧审校（军事医学科学院生物工程研究所北京１００８５０）前言利用疫苗来治疗肿瘤的想法由来以久，甚至可以追溯到２００年前［１］。本世纪５０年代，研究人员发现移植过肿瘤组织的动物在进行肿瘤移植时就可以产...

关键词：肿瘤免疫治疗肽脉冲原理技术方法

金黄色葡萄球菌肠毒素A的基因克隆、表达及活性试验

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生物工程学报 2003年第4期19卷 402-406页

作者：胥全彬刘传暄马清钧军事医学科学院生物工程研究所北京100850

利用PCR从金黄色葡萄球菌标准株 (Staphylococcusaureus,ATCC13 5 65 )中克隆了金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)的基因 ,序列测定结果与报道完全一致。构建了表达载体pET SEA并获得高效表达 ,重组蛋白 (rSEA)在 3 7℃诱导时以包涵体形式存... 详细信息

利用PCR从金黄色葡萄球菌标准株 (Staphylococcusaureus,ATCC13 5 65 )中克隆了金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)的基因 ,序列测定结果与报道完全一致。构建了表达载体pET SEA并获得高效表达 ,重组蛋白 (rSEA)在 3 7℃诱导时以包涵体形式存在 ,降低温度则出现可溶表达 ,可溶性rSEA占总rSEA的 5 5 %。可溶性rSEA经Ni2 + 亲和层析纯化 ,达电泳纯。通过同源模建对rSEA对SEA进行结构比较 ,结果表明尽管rSEA比野生型SEA多了 9个氨基酸但其结构并没有明显的变化。单核细胞增殖试验进一步证明了该结论 :将rSEA与SEA同外周血单个核细胞共同培养 ,两者均能有效地促进其增殖。将rSEA与体内激活的脾细胞共培养。

关键词：金黄色葡萄球菌肠毒素A 基因克隆可溶表达活性分析

O_(139)霍乱弧菌质粒基因组文库的建立及O-抗原基因的筛选

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微生物学报 2001年第1期41卷 65-69页

作者：曲殿波刘传暄张艳红马清钧军事医学学院生物工程研究所北京100850

合成O 抗原的基因是串联在一起的一个基因簇 ,提取O1 39霍乱弧菌基因组DNA ,限制性内切酶EcoRⅠ酶切 ,电泳回收 4～ 2 0kb的DNA片段 ,构建质粒基因组文库。随机筛选重组克隆 ,获得一株可与O1 39霍乱弧菌抗血清发生凝集反应的重组克隆 ,... 详细信息

合成O 抗原的基因是串联在一起的一个基因簇 ,提取O1 39霍乱弧菌基因组DNA ,限制性内切酶EcoRⅠ酶切 ,电泳回收 4～ 2 0kb的DNA片段 ,构建质粒基因组文库。随机筛选重组克隆 ,获得一株可与O1 39霍乱弧菌抗血清发生凝集反应的重组克隆 ,命名为大肠杆菌DH5α(pMG32 0 )。经鉴定分析重组克隆所表达的O 抗原具有良好的免疫原性及反应原性。酶切分析质粒 pMG32 0 ,推知其O 抗原基因大小约 4 6kb。这为今后O1 39霍乱疫苗的研制及O1 39霍乱弧菌O 抗原基因的结构和功能研究提供了条件。

关键词： 0-抗原基因组文库 O_(139)霍乱弧菌