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调控自噬对二氢青蒿素诱导膀胱癌细胞凋亡的影响

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中华实验外科杂志 2017年第12期34卷 2046-2049页

作者：王凯旋李法平郭辉刘树坤刘二鹏侯宇川吉林大学第一医院泌尿外科长春130021

目的观察二氢青蒿素（DHA）和自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）联合用药抑制膀胱癌T24细胞增殖并探讨其机制。方法采用不同浓度（0、12.5、25.0、50.0、100.0 μmol/L）的DHA及加入自噬抑制剂3-MA（5 mmol/L）分别处理膀胱癌T24细胞24、4... 详细信息

目的观察二氢青蒿素（DHA）和自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）联合用药抑制膀胱癌T24细胞增殖并探讨其机制。方法采用不同浓度（0、12.5、25.0、50.0、100.0 μmol/L）的DHA及加入自噬抑制剂3-MA（5 mmol/L）分别处理膀胱癌T24细胞24、48、72 h后，通过噻唑蓝（MTT）实验分析细胞存活率，流式细胞术测定细胞凋亡，Western blot检测凋亡标记蛋白半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3酶原（procaspase-3）、多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（t-PARP）和多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶降解产物（cleaved-PARP）的表达水平。50.0 μmol/L DHA作用于膀胱癌T24细胞24 h后，丹酰戊二胺（MDC）染色后采用荧光显微镜对自噬进行形态观察，透射电子显微镜观察自噬体超微结构，Western blot检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3（LC3）、Beclin-1和p62的表达。结果DHA抑制膀胱癌T24细胞的增殖并诱导其凋亡，作用呈浓度和时间依赖性（12.5 μmol/L的DHA 24、48、72 h抑制率依次是5.79%、6.61%、11.09%；25.0 μmol/L的DHA 24、48、72 h抑制率依次是11.25%、15.32%、21.35%；50.0 μmol/L的DHA 24、48、72 h抑制率依次是27.16%、30.66%、47.58%；100.0 μmol/L的DHA 24、48、72 h抑制率依次是41.52%、57.52%、74.29%；12.5 μmol/L的DHA 24、48、72 h死亡率依次是3.66%、6.44%、9.78%；25.0 μmol/L的DHA 24、48、72 h死亡率依次是7.02%、13.40%、17.55%；50.0 μmol/L的DHA 24、48、72 h死亡率依次是20.53%、26.97%、38.69%；100.0 μmol/L的DHA 24、48、72 h死亡率依次是29.82%、39.26%、44.92%），与空白对照组比较差异有统计学意义（P＝0.003）；与空白对照组、3-MA和DHA单药组比较，自噬抑制剂3-MA和DHA联合用药可增加膀胱癌细胞的凋亡率。荧光显微镜下观察到MDC荧光染色阳性的自噬泡呈点状结构分布在细胞核的胞质内。透射电子显微镜下观察到多个双层膜包裹胞质形成的自噬体。DHA处理膀胱癌T24细胞后，自噬相关蛋白LC3、Beclin-1及凋亡标记蛋白cleaved-PARP的表达量增加，而自噬相关蛋白p62和凋亡标记蛋白procaspase-3、t-PARP表达水平降低；加入自噬抑制剂3-MA后，与对照组比较，cleaved-PARP的表达量增加及procaspase-3、t-PARP表达水平降低这一趋势更加明显。结论DHA可抑制膀胱癌细胞的增殖并诱导其凋亡及产生自噬现象，且自噬在细胞凋亡过程中对癌细胞起保护性作用。

关键词：膀胱肿瘤凋亡自噬二氢青蒿素

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基于面元属性分析的三维地震观测系统设计

山西煤炭 2011年第5期31卷 54-57页

作者：刘二鹏李瑞强李宇太原理工大学山西太原030024 中国矿业大学北京100083

基于观测系统设计在勘探中的重要性,本文通过探讨三维设计过程中,选择不同的道间距和炮线距进行不同CMP面元、不同覆盖次数、炮检距、方位角的对比分析,进行观测系统的优化设计,结果表明宽方位角的10线8炮观测系统较其它常规的观测系统... 详细信息

基于观测系统设计在勘探中的重要性,本文通过探讨三维设计过程中,选择不同的道间距和炮线距进行不同CMP面元、不同覆盖次数、炮检距、方位角的对比分析,进行观测系统的优化设计,结果表明宽方位角的10线8炮观测系统较其它常规的观测系统在保证覆盖次数的前提下,炮检距和方位角的分布上更加均匀,更加有利于压制采集过程中的采集脚印。

关键词：观测系统设计三维地震属性分析面元宽方位角覆盖次数设计过程优化设计

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大倾角山地三维地震勘探采集难点及其对策

西部探矿工程 2011年第12期23卷 110-112页

作者：李瑞强刘润胜刘二鹏太原理工大学矿业工程学院山西太原030024 河南省煤田地质局物探测量队河南郑州450009

长久以来,在地层倾角较大的山地地区开展三维地震勘探工作一直面临着野外数据采集方面的技术难点,这些难点在很大程度上制约了三维地震勘探技术本身的发展以及这一勘探手段在这类地区解决实际地质问题方面的能力。而作为野外数据采集过... 详细信息

长久以来,在地层倾角较大的山地地区开展三维地震勘探工作一直面临着野外数据采集方面的技术难点,这些难点在很大程度上制约了三维地震勘探技术本身的发展以及这一勘探手段在这类地区解决实际地质问题方面的能力。而作为野外数据采集过程中最基本的环节,观测系统的设计也就成为了最大的难点之一。结合山西某典型的大倾角山地地区三维地震勘探实例针对这一难点进行了探讨,通过对这一勘探实例在野外地震资料采集中观测系统设计方法及相应效果的分析,总结得出了在此类地区进行三维地震勘探时针对这些采集难点所采取的有效对策。

关键词：三维地震勘探大倾角山地资料采集观测系统

神经源性膀胱幼鼠膀胱形态结构功能变化及转化生长因子β1通路相关蛋白表达

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中华实用儿科临床杂志 2020年第17期35卷 1336-1340页

作者：陈燕马源何育霖刘二鹏邢栋杨兴欢朱文王庆伟窦启锋张会清文建国郑州大学第一附属医院临床医学重点学科开放实验室 450052 郑州大学第一附属医院小儿尿动力学中心&泌尿外科 450052 新乡医学院第一附属医院泌尿外科河南卫辉453100

目的探讨脊神经双侧离断神经源膀胱(NB)幼鼠模型的膀胱形态结构功能变化及转化生长因子β1(TGF-β1)通路相关蛋白的表达。方法选取SD雌性幼鼠64只,其中32只行L6+S1神经双侧离断建立NB模型,32只行假手术作为对照。神经离断和假手术3、6... 详细信息

目的探讨脊神经双侧离断神经源膀胱(NB)幼鼠模型的膀胱形态结构功能变化及转化生长因子β1(TGF-β1)通路相关蛋白的表达。方法选取SD雌性幼鼠64只,其中32只行L6+S1神经双侧离断建立NB模型,32只行假手术作为对照。神经离断和假手术3、6、12、24周后行膀胱测压检查。收集对应膀胱组织行马松染色和天狼猩红染色分析胶原纤维变化,免疫组织化学染色分析TGF-β1、Smad2、Smad6蛋白变化,采用Western blot检测TGF-β1受体Ⅰ的蛋白水平变化。结果各NB神经离断组膀胱不稳定,存在膀胱漏尿点压(BLPP),膀胱无明显排尿收缩压;神经离断3、6、12周和24周鼠的膀胱基础压(22.10±2.51)、(18.20±1.52)、(31.20±2.82)、(41.10±3.41)cmH2O(1 cmH2O=0.098 kPa)和膀胱容量(22.30±1.72)、(49.10±5.54)、(30.30±2.68)、(13.50±1.52)mL均明显高于假手术组[(3.51±0.45)cmH2O和(0.52±0.04)mL],差异均有统计学意义(均P<0.01)。神经离断组膀胱组织横切面大小为先增大(3、6周)后变小挛缩(12、24周),膀胱壁厚度先变薄(3、6周)后增厚(12、24周);膀胱质量随离断时间持续增加。马松染色结果显示,神经离断大鼠的膀胱壁中正常纤维结缔组织逐渐紊乱,膀胱壁分层结构逐渐解体,平滑肌肥大增厚,肌间胶原纤维逐渐增多,染色变深。天狼猩红检测示神经离断24周的膀胱组织中Ⅲ型胶原纤维明显增多,Ⅲ型/Ⅰ型胶原纤维比例(3.14±0.71)明显高于对应的假手术组(0.88±0.21),差异有统计学意义(t=7.48,P<0.01)。免疫组织化学染色发现,神经离断膀胱组织中TGF-β1和Smad2表达随着离断时间逐渐升高,通路抑制性蛋白Smad6随离断时间逐渐降低。Western blot显示TGF-β1受体Ⅰ蛋白水平在12、24周的表达分别高于对应的假手术组1.3、1.6倍(t=6.06、14.45,均P<0.01)。结论脊神经双侧离断导致的幼鼠NB,收缩功能瘫痪,膀胱内压逐渐增高,膀胱正常结构逐渐解体,膀胱纤维化通路TGF-β1/Smads信号通路逐渐激活,小儿NB发展的过程为膀胱纤维化,临床治疗小儿NB应尽早预防膀胱纤维化。

关键词：神经源性膀胱纤维化膀胱测压转化生长因子β1

大鼠腰骶神经离断后不同时间膀胱形态功能变化及其对上尿路扩张的影响

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中华泌尿外科杂志 2023年第5期44卷 369-375页

作者：蒲青崧杨兴欢王俊魁何翔飞刘二鹏何育霖吕磊张振威毛秋方窦启锋文建国郑州大学第一附属医院泌尿外科河南省小儿尿动力国际联合实验室膀胱结构与功能重建河南省工程实验室郑州450052 郑州大学第一附属医院超声科郑州450052 新乡医学院第三附属医院泌尿外科新乡453000 新乡医学院第一附属医院泌尿外科新乡453100

目的探讨大鼠腰骶神经离断后, 膀胱形态功能的变化及其对上尿路扩张的影响。方法取45只雌性SD大鼠, 采用随机数字表法随机分为3组, 每组15只。其中2组行椎管内双侧第6腰神经(L6)+马尾神经离断建立神经源性膀胱(NB)模型, 分别为神经离断... 详细信息

目的探讨大鼠腰骶神经离断后, 膀胱形态功能的变化及其对上尿路扩张的影响。方法取45只雌性SD大鼠, 采用随机数字表法随机分为3组, 每组15只。其中2组行椎管内双侧第6腰神经(L6)+马尾神经离断建立神经源性膀胱(NB)模型, 分别为神经离断4周组(NB-4W组)和神经离断12周组(NB-12W组);另一组大鼠仅打开椎管, 不离断神经, 为假手术组。NB-4W组手术4周后, NB-12W组和假手术组手术12周后, 分别行膀胱测压和肾脏超声检查, 检查完成后处死大鼠, 收集肾脏和膀胱组织行HE、Masson染色检查观察组织学变化, 免疫组化染色检测转化生长因子-β1(TGF-β1)表达情况, 蛋白质印迹法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达情况。结果 NB-4W组和NB-12W组大鼠均无逼尿肌收缩, 最大膀胱测压容量分别为(5.84±0.33)、(3.13±0.35)ml, 逼尿肌漏尿点压力分别为(25.41±0.86)、(27.36±2.04)cmH_(2)O(1 cmH_(2)O=0.098 kPa), 均显著高于假手术组[(0.98±0.14)ml和(7.13±0.90)cmH_(2)O, P<0.05]。NB-4W组和NB-12W组膀胱顺应性分别为(0.28±0.21)、(0.17±0.12)ml/cmH_(2)O, 显著低于假手术组[(0.34±0.26)ml/cmH_(2)O, 均P<0.05];NB-12W组与NB-4W组的最大膀胱测压容量和膀胱顺应性差异均有统计学意义(P<0.05)。膀胱组织HE染色结果示NB-4W组和NB-12W组较假手术组膀胱壁增厚, 炎症细胞浸润明显;Masson染色结果显示NB-4W组、NB-12W组的胶原容积分数分别为(30.5±1.5)%、(45.2±3.8)%, 显著高于假手术组的(20.7±2.2)%(均P<0.05), 且NB-12W组的胶原容积分数显著高于NB-4W组(P<0.05)。NB-4W组膀胱组织TGF-β1、α-SMA表达量较假手术组升高, NB-12W组TGF-β1、α-SMA表达量较NB-4W组升高。肾脏超声检查示NB-4W组和NB-12W组分别有3只(20.0%)和7只(46.7%)大鼠出现肾积水;HE染色结果示NB-4W组和NB-12W组的肾小管损伤程度和炎症细胞浸润数量高于假手术组;Masson染色结果示NB-4W组和NB-12W组肾脏胶原容积分数分别为(13.1±1.4)%和(21.6±1.9)%, 较假手术组[(4.6±0.7)%]显著增加(均P<0.05)。结论采用双侧L6+马尾神经离断能够建立大鼠NB肾积水模型, 随着神经离断时间增加, 膀胱纤维化程度逐渐加重, 上尿路扩张发生率和严重程度也逐渐增加。

关键词：膀胱,神经源性纤维化肾积水膀胱测压肌成纤维细胞

家庭和门诊尿流率检查评估遗尿患儿膀胱功能的比较研究

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中华小儿外科杂志 2022年第4期43卷 354-358页

作者：蒲青崧李琦杨兴欢单帅帅王一鹤刘二鹏吕磊文一博文建国郑州大学第一附属医院河南省小儿尿动力国际联合实验室小儿尿动力学中心郑州450052

目的探讨运用家庭尿流检查(home-uroflowmetry,HUF)评估原发性夜间遗尿(primary nocturnal enuresis,PNE)的意义。方法选取2019年12月至2021年3月在郑州大学第一附属医院泌尿外科门诊就诊的41例按照要求完成门诊尿流率检查(office-urofl... 详细信息

目的探讨运用家庭尿流检查(home-uroflowmetry,HUF)评估原发性夜间遗尿(primary nocturnal enuresis,PNE)的意义。方法选取2019年12月至2021年3月在郑州大学第一附属医院泌尿外科门诊就诊的41例按照要求完成门诊尿流率检查(office-uroflowmetry,OUF)和48 h HUF的患儿。其中,男23例,年龄为(7.3±2.0)岁,范围为5~13岁,遗尿次数为2~7次/周;女18例,年龄为(7.7±2.3)岁,范围为5~14岁,遗尿次数为1~7次/周。分别记录患儿的排尿量(voided volume,VV)、最大尿流率(maximum urine flow rate,Qmax)、平均尿流率(average urine flow rate,Qave)、排尿时间(voiding time,VT)和尿流曲线进行统计分析。结果OUF和48 h HUF分别记录到41次和568次(包括30次VV<50.0 ml不能纳入统计分析)排尿。48 h HUF记录到的PNE患儿24 h排尿频率、夜间排尿频率、24 h VV和夜间尿量分别为(6.9±1.5)次、(1.1±0.5)次、(1098.1±163.7)ml和(289.6±87.2)ml。48 h HUF与OUF测得的VV为(163.5±33.0)ml比(209.2±61.7)ml,差异具有统计学意义(P<0.001);Qmax为(19.0±3.2)ml/s比(20.6±4.5)ml/s,差异具有统计学意义(P<0.001);Qave为(9.3±1.9)ml/s比(10.3±2.7)ml/s,差异具有统计学意义(P=0.001);VT为(17.9±3.1)s比(20.9±4.6)s,差异具有统计学意义(P<0.001)。Altman-Bland分析显示VV、Qmax、Qave和VT分别仅有13/41、20/41、29/41和16/41的点位于临床可接受界限内,一致性差。对尿流曲线进行分析发现,OUF中Staccato尿流曲线发生率明显高于HUF(19.5%比6.3%)。结论HUF的结果更加符合患儿的生理状态,更加真实可靠,在条件允许情况下优先选取HUF评估PNE患儿膀胱功能。

关键词：遗尿家庭尿流率检查门诊尿流率检查儿童膀胱功能

子宫颈癌根治术后伴排尿异常患者膀胱功能的尿动力学研究

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中华老年医学杂志 2022年第3期41卷 302-306页

作者：王健健张艳平刘二鹏孟庆博姜春姿杨兴欢文建国郑州大学第一附属医院泌尿外科和河南省尿动力诊断治疗中心郑州450052 郑州大学第一附属医院肝胆胰外科郑州450052

目的探讨子宫颈癌根治术后伴排尿异常患者膀胱功能的尿动力学特点。方法本研究为前瞻性自身对照研究。选择2016年1月至2018年6月符合术前纳入标准且临床分期为ⅠB~ⅡA期子宫颈癌患者84例。所有纳入病例均接受子宫颈癌根治术治疗,于术前... 详细信息

目的探讨子宫颈癌根治术后伴排尿异常患者膀胱功能的尿动力学特点。方法本研究为前瞻性自身对照研究。选择2016年1月至2018年6月符合术前纳入标准且临床分期为ⅠB~ⅡA期子宫颈癌患者84例。所有纳入病例均接受子宫颈癌根治术治疗,于术前1周内、术后6个月时行尿动力学检测,观察评估手术前后患者的膀胱功能状态并分析其尿动力检查结果特点。结果所有患者中有58例患者根治术后伴排尿异常表现,26例无排尿异常表现,两种不同表现的患者之间年龄、临床分期及病理类型比较均无明显差异;其中根治术后伴排尿异常的患者术后均出现不同症状的排尿异常,包括排尿困难(55%)、尿频伴排尿不尽感(34%)、压力性尿失禁(7%)、急迫性尿失禁(4%)。根治术后无排尿异常患者中仅有1例表现为尿动力学检查异常(膀胱感觉异常),术后无排尿异常患者手术前后的尿动力检查结果比较差别均无统计学意义(均P>0.05)。在子宫颈癌根治术后伴排尿异常的病例中,43例(74%)膀胱功能障碍患者术前排尿模式正常而术后排尿异常需借助腹压。所有根治术后伴排尿异常患者术后6个月时的最大尿流率、平均尿流率、排尿量、尿流时间、达峰时间、膀胱残余尿量、最大逼尿肌收缩压、膀胱顺应性、正常尿意膀胱容量、最大膀胱容量、最大尿道压力、最大尿道闭合压和功能性尿道长度分别为(12.9±10.3)ml/s、(6.0±4.2)ml/s、(148.0±36.8)ml、(32.9±22.1)s、(11.4±5.0)s、(260.2±219.2)ml、(12.1±8.9)cm H_(2)O(1 cmH_(2)O=0.098 kPa)、(16.1±4.3)ml/cm H_(2)O、(354.5±204.3)ml、(587.4±152.5)ml、(97.6±33.1)cm H_(2)O、(89.9±36.4)cm H_(2)O、(29.6±6.5)mm;而术前1周相应各值分别为(25.1±11.4)ml/s、(11.38±6.6)ml/s、(318.6±96.4)ml、(29.2±18.5)s、(6.7±3.9)s、(29.9±21.5)ml、(31.87±21.43)cm H_(2)O、(78.1±33.9)ml/cm H_(2)O、(258.2±185.5)ml、(335.1±124.9)ml、(96.4±33.9)cm H_(2)O、(88.5±35.2)cm H_(2)O、(37.16±7.24)mm。子宫颈癌根治术后伴排尿异常患者最大尿流率、平均尿流率、排尿量、最大逼尿肌收缩压、膀胱顺应性、功能性尿道长度明显低于术前,而正常尿意膀胱容量、最大膀胱容量、达峰时间、膀胱残余尿量高于术前(P0.05),而两者术后尿动力结果比较其差别均有统计学意义(P0.05)。结论子宫颈癌根治术后伴排尿异常患者的尿动力特点主要表现为膀胱感觉功能减退和逼尿肌功能异常,而尿动力学检查可提供客观的临床指标进行早期诊断。

关键词：子宫颈癌膀胱尿动力学

去氨加压素对单症状遗尿症患儿症状及睡眠质量影响

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临床儿科杂志 2022年第4期40卷 294-299页

作者：吕磊王一鹤胡绘杰赵莹刘二鹏张艳平蒲青崧杨兴欢汲凤平文建国郑州大学第一附属医院河南省小儿尿动力国际联合实验室河南郑州450052 新乡医学院三全学院河南新乡453513 新乡医学院护理学院河南新乡453004

目的探讨去氨加压素(DDAVP)治疗单症状遗尿症(MNE)患儿症状和睡眠改善情况。方法选择2018—2020年门诊就诊的69例MNE患儿进行为期12周的DDAVP治疗随访研究,12周后根据遗尿改善情况将患儿分为治疗改善组和无改善组,分析DDAVP治疗对遗尿... 详细信息

目的探讨去氨加压素(DDAVP)治疗单症状遗尿症(MNE)患儿症状和睡眠改善情况。方法选择2018—2020年门诊就诊的69例MNE患儿进行为期12周的DDAVP治疗随访研究,12周后根据遗尿改善情况将患儿分为治疗改善组和无改善组,分析DDAVP治疗对遗尿症状和睡眠质量的影响。结果基线入组的69例MNE患儿中,7例中途退出随访,最终纳入62例,男34例、女28例,平均年龄(8.77±1.94)岁。接受DDAVP治疗的MNE患儿,基线、第4周、第8周、第12周的遗尿夜晚数、儿童睡眠习惯问卷(CSHQ)总分、遗尿发生时间、平时及周末睡眠时间差异均有统计学意义(P<0.05),第12周遗尿夜晚数和CSHQ总分较基线值明显下降,遗尿发生时间、平时及周末睡眠时间较基线值明显延长,差异均有统计学意义(P<0.05)。与无改善组(n=22)相比,第8周、第12周改善组(n=40)的CSHQ总分较低,遗尿发生时间、平时和周末睡眠时间均明显延长,每周遗尿夜晚数减少,差异有统计学意义(P<0.05)。从CSHQ评分8个层面得分来看,改善组在就寝习惯、入睡潜伏期、睡眠持续时间、睡眠焦虑、夜醒、异态睡眠及白天嗜睡层面的得分差异均有统计学意义(P<0.05),无改善组仅在睡眠持续时间层面的差异有统计学意义(P<0.05)。结论DDAVP治疗12周可明显改善MNE患儿的症状并提高其睡眠质量。

关键词：去氨加压素单症状遗尿症睡眠儿童

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输尿管炎性肌纤维母细胞瘤一例

中华腔镜泌尿外科杂志（电子版） 2017年第2期11卷 62-63页

作者：李法平郭辉金美善刘二鹏王瑞庆王春喜侯宇川吉林大学第一医院泌尿外一科长春130021 吉林大学第一医院病理科长春130021

临床资料患者,男,54岁。以“左侧腰部间断性疼痛2个月”为主诉入院。查体：双侧肾区无隆起,未触及双肾及异常包块,左侧肾区压痛、叩击痛阳性。检验：血尿常规正常,肾功能：肌酐147.6μmol/L,尿素氮7.44mmol/L,尿酸615μmol/L。

关键词：异常包块左侧输尿管肾区压痛肌酐左侧腰肾功能损害上段双侧肾尿路上皮椎体水平