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非洲猪瘟病毒对宿主自噬作用研究进展

中国兽药杂志 2024年第8期58卷 80-86页

作者：岳怀宁任静刘业兵中国兽医药品监察所(农业农村部兽药评审中心) 国家/WOAH猪瘟参考实验室北京100081 河北农业大学动物医学院河北保定071000

自噬是真核细胞一种非常保守的溶酶体对蛋白质和细胞器降解过程。自噬的主要作用机制是饥饿时降解蛋白质等提供能量保持机体能量守恒、清除损伤衰老的细胞器和错误折叠的蛋白质以及吞噬入侵机体的病原体等,在维持细胞稳态、宿主代谢等... 详细信息

自噬是真核细胞一种非常保守的溶酶体对蛋白质和细胞器降解过程。自噬的主要作用机制是饥饿时降解蛋白质等提供能量保持机体能量守恒、清除损伤衰老的细胞器和错误折叠的蛋白质以及吞噬入侵机体的病原体等,在维持细胞稳态、宿主代谢等方面发挥着重要的作用。非洲猪瘟是一种急性、高致死性的疾病,目前尚无有效的商品化疫苗或者药物可用于防治非洲猪瘟。研究发现非洲猪瘟部分基因会抑制自噬反应的发生,从而抑制先天免疫反应。缺失这些基因的毒株不仅毒力降低,而且感染宿主后会促进自噬反应引起强烈的免疫反应。因此研究非洲猪瘟病毒与自噬的作用机制,对非洲猪瘟病毒疫苗的研发具有重要作用。从细胞自噬以及非洲猪瘟病毒部分基因对自噬的影响两个方面进行概述,以期为非洲猪瘟自噬作用机制研究和非洲猪瘟疫苗研发提供理论支持。

关键词：非洲猪瘟病毒巨自噬自噬作用

犬弓形虫巢式PCR检测方法的建立及初步应用

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中国动物传染病学报 2024年第1期32卷 129-134页

作者：柳方远李双星印春生吉婧朱明哲刘业兵中国兽医药品监察所北京100081 张家港市畜牧兽医站张家港215600 青岛农业大学青岛266109

弓形虫病是一种重要的人兽共患病,犬是弓形虫重要的中间宿主,有必要建立一种快速、灵敏的犬弓形虫病检测方法。根据GenBank中弓形虫529 bp基因重复序列设计巢式PCR引物,通过优化反应条件建立巢式PCR检测方法。特异性试验结果显示,该方... 详细信息

弓形虫病是一种重要的人兽共患病,犬是弓形虫重要的中间宿主,有必要建立一种快速、灵敏的犬弓形虫病检测方法。根据GenBank中弓形虫529 bp基因重复序列设计巢式PCR引物,通过优化反应条件建立巢式PCR检测方法。特异性试验结果显示,该方法对牛巴贝斯虫、环形泰勒虫、犬新孢子虫的基因扩增无条带;灵敏度试验结果显示,该方法最低可以检出0.134 pg的弓形虫基因,比目前国标PCR方法高100倍。对感染弓形虫犬的组织样品检测发现,巢式PCR能在感染犬的不同组织中检测出弓形虫基因。建立的犬弓形虫巢式PCR检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好,为该病的检测奠定了基础。

关键词：弓形虫巢式PCR 犬

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非洲猪瘟病毒入胞过程相关蛋白及分子机制的研究进展

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中国兽药杂志 2024年第6期58卷 79-85页

作者：宋新宇夏应菊刘业兵中国兽医药品监察所(农业农村部兽药评审中心) 国家/WOAH猪瘟参考实验室北京100081

非洲猪瘟病毒(ASFV)是非洲猪瘟的病原,可引发家猪和野猪急性、出血性死亡,目前尚无有效的疫苗和抗病毒药物。ASFV是囊膜病毒,其囊膜蛋白的结构和功能可能是影响病毒入侵和细胞嗜性的重要因素。病毒入胞是病毒感染细胞的第一步,通常是通... 详细信息

非洲猪瘟病毒(ASFV)是非洲猪瘟的病原,可引发家猪和野猪急性、出血性死亡,目前尚无有效的疫苗和抗病毒药物。ASFV是囊膜病毒,其囊膜蛋白的结构和功能可能是影响病毒入侵和细胞嗜性的重要因素。病毒入胞是病毒感染细胞的第一步,通常是通过细胞表面特定的分子与病毒蛋白相结合吸附于宿主细胞表面,以ASFV入胞过程的病毒蛋白或宿主因子为靶点或可有效抑制ASFV的复制。从ASFV入胞过程中起重要作用的囊膜蛋白出发,了解ASFV的入胞分子机制,为ASFV入胞深入研究以及治疗性药物和疫苗的研发提供参考。

关键词：非洲猪瘟病毒囊膜蛋白病毒入胞分子机制

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猪瘟病毒C株表位突变毒株的构建及拯救

畜牧兽医学报 2024年第2期55卷 698-705页

作者：刘元杰徐璐朱元源徐嫄张乾义李翠李明夏应菊王琴刘业兵赵启祖邹兴启中国兽医药品监察所国家猪瘟参考实验室北京100081

本研究旨在突变猪瘟病毒C株WH303位点,构建感染性克隆,为猪瘟病毒C株标记疫苗的研究提供候选毒株。本试验以猪瘟病毒C株为研究材料,经重叠PCR方法突变WH303位点,再分别连接至C株和C-flag株全长感染性克隆。体外转录RNA,转染PK15细胞,细... 详细信息

本研究旨在突变猪瘟病毒C株WH303位点,构建感染性克隆,为猪瘟病毒C株标记疫苗的研究提供候选毒株。本试验以猪瘟病毒C株为研究材料,经重叠PCR方法突变WH303位点,再分别连接至C株和C-flag株全长感染性克隆。体外转录RNA,转染PK15细胞,细胞连续传代完成病毒的拯救和增殖。结果显示,经特异性限制内切酶酶切反应验证,感染性克隆构建成功。经RT-PCR、过氧化物酶单层细胞试验检测,表明病毒成功拯救。病毒细胞传代至17代,检测到病毒,表明病毒可以稳定传代。综上,本研究成功构建了C株WH303突变感染性克隆MC和MC-flag,并成功拯救MC株,得到可以稳定传代的病毒株。

关键词：猪瘟病毒 C株 WH303位点突变感染性克隆

动物mRNA疫苗生产厂房布局与工艺设计要点探究

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中国兽药杂志 2024年第2期58卷 71-80页

作者：刘业兵吴涛夏应菊陈紫昱李佳昕张存帅中国兽医药品监察所(农业农村部兽药评审中心)国家猪瘟参考实验室北京100081

mRNA疫苗技术具备研发周期短、安全性优良、生产技术通用性强的特点,但由于mRNA疫苗的特殊工艺,传统的生物制品厂房设计已不能完全满足其制备要求。科学合理的厂房工艺设计是确保mRNA疫苗产能与质量的主要条件,因此,如何设计既符合工艺... 详细信息

mRNA疫苗技术具备研发周期短、安全性优良、生产技术通用性强的特点,但由于mRNA疫苗的特殊工艺,传统的生物制品厂房设计已不能完全满足其制备要求。科学合理的厂房工艺设计是确保mRNA疫苗产能与质量的主要条件,因此,如何设计既符合工艺要求又满足兽药GMP的动物mRNA疫苗生产厂房成为摆在我们面前急需探究的课题。鉴于不同国家在能源结构、环保要求、设计理念等方面存在差异,在借鉴欧美已有的mRNA疫苗规模化生产设施和我国人用mRNA疫苗厂房设计的基础上,提出了符合我国兽药GMP规范的mRNA疫苗厂房生产设施、工艺关键点和设计方案,以期为国内动物mRNA疫苗车间建设提供参考。

关键词：动物 mRNA疫苗生产设施工艺设计 GMP

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猪伪狂犬病疫苗效力评价方法比较研究

中国兽药杂志 2024年第8期58卷 63-69页

作者：赵俊杰徐璐李琰邹兴启夏应菊李芳韬刘业兵中国兽医药品监察所(农业农村部兽药评审中心) 国家/WOAH猪瘟参考实验室北京100081

猪伪狂犬病是一种严重危害养猪业的急性病毒性传染病,疫苗免疫是其防控的有效手段。目前正式通过注册生产上市的产品有14个,涉及10个毒株,其效力评价方法及标准不统一。就猪伪狂犬病疫苗的效力评价方法进行比较研究,以期为进一步规范疫... 详细信息

猪伪狂犬病是一种严重危害养猪业的急性病毒性传染病,疫苗免疫是其防控的有效手段。目前正式通过注册生产上市的产品有14个,涉及10个毒株,其效力评价方法及标准不统一。就猪伪狂犬病疫苗的效力评价方法进行比较研究,以期为进一步规范疫苗效力评价方法、建立通用质量标准提供思路。

关键词：猪伪狂犬病疫苗免疫效力评价

猪细小病毒血凝抑制试验抗原、阳性血清与阴性血清的制备与鉴定

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中国兽药杂志 2024年第4期58卷 14-19页

作者：李琰李佳昕李芳韬李琪吴睿智朱元源徐璐刘业兵中国兽医药品监察所(农业农村部兽药评审中心) 国家/WOAH猪瘟参考实验室北京100081

猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)血凝抑制试验抗原、阳性血清和阴性血清在猪细小病毒制品的效力检验中不可或缺,对猪细小病毒相关生物制品的质量控制至关重要。试验采用PPV 7909株病毒同步接种PK-15细胞制备血凝抑制试验抗原,用制... 详细信息

猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)血凝抑制试验抗原、阳性血清和阴性血清在猪细小病毒制品的效力检验中不可或缺,对猪细小病毒相关生物制品的质量控制至关重要。试验采用PPV 7909株病毒同步接种PK-15细胞制备血凝抑制试验抗原,用制备的抗原乳化后免疫豚鼠制备阳性血清,同时用未免疫的阴性豚鼠制备阴性血清。对抗原、阳性血清和阴性血清进行鉴定,结果表明,制备的PPV血凝抑制试验抗原HA效价达1∶512;阳性血清HI效价达1∶1024;阴性血清HI效价小于1∶8,且特异性均良好。用制备的HI试验抗原与不同PPV疫苗株的阳性血清进行HI试验,同时,用制备的阳性血清、阴性血清与不同PPV疫苗株的灭活抗原进行HI试验。结果表明,制备的抗原与阳性血清具备良好的血清学交叉反应性,制备的阴性血清与不同疫苗株抗原均呈阴性反应,可用于PPV制品的统一评价。

关键词：猪细小病毒血凝抑制试验抗原阳性血清生物制品检验

猪圆环病毒2型疫苗及其效力评价方法比较研究

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中国兽药杂志 2024年第1期58卷 87-94页

作者：徐嫄彭国瑞徐小艾吴睿智赵启祖朱元源李翠王团结邹兴启李琰刘业兵中国兽医药品监察所北京100081

为探索对不同猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type2,PCV2)疫苗产品进行统一质量评价的可行性,对国内该类疫苗产品及其现有效力评价方法进行了归纳和比较研究。结果发现,目前猪圆环病毒2型疫苗类产品种类有25个,且疫苗毒株数量多达10... 详细信息

为探索对不同猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type2,PCV2)疫苗产品进行统一质量评价的可行性,对国内该类疫苗产品及其现有效力评价方法进行了归纳和比较研究。结果发现,目前猪圆环病毒2型疫苗类产品种类有25个,且疫苗毒株数量多达10余个,效力检验方法包括传统的免疫攻毒法、血清学方法和多种不同的替代方法,但尚没有统一的效力评价体系。本研究可为进一步完善PCV2疫苗效力评价方法、统一评价疫苗效力、提高产品质量提供参考。

关键词：猪圆环病毒2型疫苗效力评价方法

弓形虫GRA1蛋白单克隆抗体的制备与间接免疫荧光检测方法的建立

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中国动物传染病学报 2022年

作者：吉婧朱明哲宋新宇印春生单虎刘业兵中国兽医药品监察所青岛农业大学

本研究旨在利用原核表达系统表达弓形虫GRA1蛋白并制备单克隆抗体，用于弓形虫病的诊断及GRA1蛋白功能研究。以弓形虫cDNA为模板，设计引物扩增GRA1基因片段，构建原核表达质粒，转化至BL21(DE3)感受态细胞，利用IPTG诱导表达蛋白并纯...

本研究旨在利用原核表达系统表达弓形虫GRA1蛋白并制备单克隆抗体，用于弓形虫病的诊断及GRA1蛋白功能研究。以弓形虫cDNA为模板，设计引物扩增GRA1基因片段，构建原核表达质粒，转化至BL21(DE3)感受态细胞，利用IPTG诱导表达蛋白并纯化。用纯化后的重组蛋白作为免疫原免疫小鼠制备单克隆抗体并鉴定。以制备的弓形虫GRA1单克隆抗体为一抗，FITC标记的羊抗鼠IgG为二抗，优化反应条件建立弓形虫间接免疫荧光检测方法。结果表明：成功构建了原核表达质粒pET-30a(+)-TG-GRA1；SDS-PAGE结果显示，重组蛋白GRA1为可溶性表达，分子质量约为27 kDa；Western blot结果显示重组蛋白GRA1可被犬弓形虫阳性血清识别，表明GRA1有良好的反应原性。成功筛选出5株单克隆细胞株，分别命名为1-B10、2-C3、2-C9、3-C11以及6-E6，并对它们进行亚型鉴定，其中2-C3、2-C9、3-C11为IgG1，1-B10、6-E6为IgM；IFA 结果显示单克隆抗体具有良好的反应原性；建立了McAb 2-C9最佳稀释浓度为0.875μg/mL、最佳孵育时间为1.5 h，FITC标记的羊抗鼠IgG最佳稀释倍数为1:400、最佳孵育时间为1.5 h的间接免疫荧光检测方法，并对15只小鼠的肝脏组织切片进行检测，结果表明该方法可用弓形虫动物组织切片的检测，有助于弓形虫感染的实验室诊断及弓形虫的动态分布研究。

关键词：