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甲型H1N1流感病人外周血免疫细胞和细胞因子水平变化

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中国免疫学杂志 2011年第2期27卷 167-171页

作者：王海刁宏燕崔光莹浙江大学医学院附属第一医院传染病诊治国家重点实验室杭州310003

目的:观察甲型H1N1流感患者和流感症状患者外周血中B淋巴细胞(B)、自然杀伤细胞(NK)、辅助性T淋巴细胞(CD4+T)、细胞毒性T淋巴细胞(CD8+T)绝对数的变化以及血清中细胞因子水平的变化,探讨甲型H1N1流感病毒对机体免疫反应的影响。方法:收... 详细信息

目的:观察甲型H1N1流感患者和流感症状患者外周血中B淋巴细胞(B)、自然杀伤细胞(NK)、辅助性T淋巴细胞(CD4+T)、细胞毒性T淋巴细胞(CD8+T)绝对数的变化以及血清中细胞因子水平的变化,探讨甲型H1N1流感病毒对机体免疫反应的影响。方法:收集68名病人(流感症状26名,轻症甲流29名,重症甲流患者13名),健康体检者20名;应用流式细胞术检测B%、CD4+T%、CD8+T%以及NK%;应用酶联吸附免疫法检测其血清中TNF-α、IL-12、IL-18的浓度。结果:与健康对照组相比较,流感症状组、轻症甲流组及重症甲流组外周血中B、CD4+T、CD8+T细胞绝对数显著降低(P0.05);流感症状组、轻症甲流组及重症甲流组血清中细胞因子TNF-α、IL-12、IL-18的浓度均高于健康对照组(P0.05)。结论:甲型H1N1流感病毒感染后,外周血中TNF-α、IL-12、IL-18等相关细胞因子上升;以及NK细胞增加,B、CD4+T、CD8+T细胞减少。

关键词：细胞因子甲型H1N1流感免疫反应

实时荧光定量PCR检测手足口病肠道病毒71型与柯萨奇病毒16型临床分析

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中华医院感染学杂志 2014年第24期24卷 6074-6075,6078页

作者：王海周蕾张永乐刁宏燕浙江省立同德医院检验科浙江杭州310012 杭州市儿童医院检验科浙江杭州310014 杭州市第六人民医院检验科浙江杭州310013 浙江大学医学院附属第一医院传染病诊治国家重点实验室浙江杭州310003

目的探讨肠道病毒71型(EV71)与柯萨奇病毒A 16型(Cox A16)实时荧光定量PCR检测在早期诊断手足口病(HFMD)中的意义,为临床治疗提供参考依据。方法对2012年3月-2013年6月157例疑似HFMD患儿的粪便、疱疹液、鼻咽拭子样本进行EV71、Cox A16... 详细信息

目的探讨肠道病毒71型(EV71)与柯萨奇病毒A 16型(Cox A16)实时荧光定量PCR检测在早期诊断手足口病(HFMD)中的意义,为临床治疗提供参考依据。方法对2012年3月-2013年6月157例疑似HFMD患儿的粪便、疱疹液、鼻咽拭子样本进行EV71、Cox A16、肠道病毒(EV)的实时荧光定量PCR检测,根据试剂说明书的标准判定;采用SPSS16.0进行数据分析。结果粪便中EV、EV71、Cox A16的检出率分别为94.09%、42.04%、38.85%,高于鼻咽拭子样本,差异有统计学意义(P<0.05);而粪便与疱疹液中EV、EV71、Cox A16的阳性率相比,差异无统计学意义。结论对HFMD患儿早期诊断、早期治疗,应该首选粪便标本采用实时荧光定量PCR法检测EV、EV71、Cox A16。

关键词：手足口病肠道病毒71型柯萨奇病毒A 16型实时荧光定量聚合酶链反应

正畸过程中唾液基质金属蛋白酶水平的变化及意义

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正畸过程中唾液基质金属蛋白酶水平的变化及意义

浙江省免疫学会第六次会员代表大会暨第十一次学术大会

作者：曾萍刁宏燕浙江大学附属第一医院传染病诊治国家重点实验室

背景:正畸过程中牙周组织改建是由治疗性机械应力引起的复杂生物学过程,涉及细胞外基质的降解与合成、牙周组织结构的改变以及多种生物学因子的调节和诱导。研究报道基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)在牙周组织重塑过程中... 详细信息

背景:正畸过程中牙周组织改建是由治疗性机械应力引起的复杂生物学过程,涉及细胞外基质的降解与合成、牙周组织结构的改变以及多种生物学因子的调节和诱导。研究报道基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)在牙周组织重塑过程中起重要作用,并参与正畸后牙齿的移动,而唾液中MMPs的水平与正畸后牙齿受力移动的生物学机理尚不十分清楚。目的:该研究旨在确认正畸患者唾液中MMPs的水平,并试图阐明MMPs在正畸后牙齿移动中的潜在作用。方法:将22名正畸患者分为正畸前拔牙组和非拔牙组,分别收集初诊(T1)、正畸前(T2)、正畸1小时后(T3)、以及正畸8周后(T4)的口腔唾液,并记录各患者正畸前和正畸8周后的牙齿移动距离。采用液相芯片检测口腔唾液中MMPs的水平。结果:拔牙组正畸8周后牙齿移动距离明显大于非拔牙组。拔牙组和非拔牙组唾液中MMP-8和MMP-9在正畸1小时后水平显著上升达到峰值,而MMP-12仅在拔牙组正畸1小时后显著上升,非拔牙组没有变化。此外,相关性分析发现,拔牙组中MMP-8、MMP-9、和MMP-12的水平与正畸后牙齿移动距离呈正相关。而MMP-1、MMP-3、MMP-10、MMP-13的水平在两组中都没有显著差异。结论:牙齿移动可以调节唾液中MMPs的表达,且MMP-8和MMP-9可能在口腔正畸的生理反应中起重要作用。

关键词：基质金属蛋白酶正畸牙齿移动唾液

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脉冲电场肿瘤消融激发免疫反应的研究进展

脉冲电场肿瘤消融激发免疫反应的研究进展

第十届全国免疫学学术大会

作者：崔光莹刁宏燕

肿瘤的免疫治疗提供了一种新型抗肿瘤武器,其目的是激发或调动机体的免疫系统,增强肿瘤微环境的抗肿瘤免疫力,从而控制和杀伤肿瘤细胞。然而这种治疗方法的关键在于针对肿瘤细胞的机体免疫反应的激发和活化,因此,一种既可微创消融肿瘤,... 详细信息

肿瘤的免疫治疗提供了一种新型抗肿瘤武器,其目的是激发或调动机体的免疫系统,增强肿瘤微环境的抗肿瘤免疫力,从而控制和杀伤肿瘤细胞。然而这种治疗方法的关键在于针对肿瘤细胞的机体免疫反应的激发和活化,因此,一种既可微创消融肿瘤,又能激发针对肿瘤细胞特异性的免疫反应的新型肿瘤治疗手段则具备更强的临床应用潜力。本文综述了微秒和纳秒脉冲电场肿瘤消融的特点。微秒脉冲电场作为一个相对成熟的肿瘤消融手段,已经应用于临床试验,可微创消融不同类型肿瘤,包括肝脏、胰腺、肾脏和肺肿瘤等,均取得安全有效的临床预后。纳秒脉冲电场作为其升级版,可诱导肿瘤细胞凋亡、抗血管生成和降低肿瘤复发等,其肿瘤消融的生物学效应已在不同肿瘤中得到研究,包括恶性黑色素瘤、皮肤基底细胞癌、皮肤鳞状细胞癌、肝细胞癌、及结肠癌、卵巢癌、口腔癌、胰腺癌等。同时,阐述了脉冲电场肿瘤消融激发免疫反应的研究过程。微秒脉冲电场可破坏细胞膜稳定性,以一种非产热的方式诱导肿瘤细胞死亡而实现局部肿瘤消融,但许多自体固有的肿瘤抗原在脉冲消融后仍然保留。肿瘤细胞本身具有免疫原性,其在靶向抗癌治疗过程中可能会产生危险相关分子,进而触发抗肿瘤的适应性免疫反应。因此,微秒脉冲肿瘤消融中死亡的肿瘤细胞可能成为治疗性的疫苗,并产生针对剩余肿瘤细胞的细胞毒性免疫反应。纳秒脉冲电场在诱导生物学效应和激发抗肿瘤免疫反应方面有自身特色优势。除了诱导肿瘤细胞凋亡和抗血管生成以外,纳秒脉冲电场还可破坏肿瘤微环境,引起肿瘤细胞相关的信号通路改变,甚至通过激发机体特异性的免疫反应,来抑制肿瘤的迁移和侵袭以及新生肿瘤的生成,最终不仅可消融原发肿瘤,还可抑制肿瘤的复发和转移。总之,脉冲电场不仅能够引发肿瘤局部的彻底消融,还能激发机体保护性的免疫反应,进而抑制肿瘤的复发和转移。这些独特优势对于肿瘤治疗有着广阔的临床应用前景。

关键词：肿瘤消融免疫反应脉冲电场

高通量测序研究人类TCRβ链CDR3区段的图谱特征

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高通量测序研究人类TCRβ链CDR3区段的图谱特征

浙江省免疫学会第十次学术大会

作者：侯显良刁宏燕浙江大学医学院附属第一医院传染病诊治国家重点实验室

目的:个体水平的T细胞抗原受体(TCR)多样性可达到1015018,形成容量庞大的TCR库,赋予个体几乎是无限的抗原识别和应答能力,保证个体在多变环境中能和外来抗原(病原体)发生有效的免疫应答。研究TCR图谱特征对我们理解免疫应答具有重要的... 详细信息

目的:个体水平的T细胞抗原受体(TCR)多样性可达到1015018,形成容量庞大的TCR库,赋予个体几乎是无限的抗原识别和应答能力,保证个体在多变环境中能和外来抗原(病原体)发生有效的免疫应答。研究TCR图谱特征对我们理解免疫应答具有重要的作用。该研究中,我们分析了健康人的TCRβ链CDR3区段的图谱特征。方法:采集10个人的外周血,Ficoll分层液法分离单个核细胞;磁珠分选T淋巴细胞;多重PCR技术扩增TCR CDR3区段后进行高通量测序。参照IMGT/High V-QUEST分析TCR CDR3区段的图谱特征。结果:共有序列(Public sequence)和高丰度序列具有一些共同特征:V-D和D-J连接处核苷酸插入较少;序列长度较短。此外,我们发现共有的氨基酸序列能被多种核苷酸序列编码。这些现象表明这些序列之所以能被不同个体共有,是因为其在形成的过程中更易产生。我们也研究了CDR3长序列和短序列的特征:发现10个TRβV亚家族,7个TRβJ亚家族和2个TRβD亚家族的使用频率在长序列和短序列间存在差异;N区多核苷酸插入和D区高频率使用是产生FCRCDR3长序列的原因之一;4种核苷酸的使用频率在长序列和短序列没有差别,但20种氨基酸中,长序列更趋向于使用其中的11种氨基酸,短序列更趋向于使用其中的6种氨基酸。结论:TCRβ链CDR3区域具有极大的多样性,该研究发现了其中共有序列,高频序列和长序列的一些特征,其机理和意义有待进一步研究。

关键词： T细胞受体高通量测序共有序列图谱特征

原发性胆汁性胆管炎记忆T细胞抗原受体(TCR)β链CDR3的免疫图谱分析

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原发性胆汁性胆管炎记忆T细胞抗原受体(TCR)β链CDR3的免疫图谱分...

浙江省免疫学会第六次会员代表大会暨第十一次学术大会

作者：侯显良刁宏燕浙江大学医学院附属第一医院传染病诊治国家重点实验室

研究背景:原发性胆汁性胆管炎(Primary Biliary Cholangitis,PBC)又称原发性胆汁性肝硬化,是器官特异性的慢性胆汁淤积性自身免疫性肝病。其发病机制复杂,且尚未阐明。随着测序技术的发展,免疫组库测序应运而生。该技术研究T细胞受体(T ... 详细信息

研究背景:原发性胆汁性胆管炎(Primary Biliary Cholangitis,PBC)又称原发性胆汁性肝硬化,是器官特异性的慢性胆汁淤积性自身免疫性肝病。其发病机制复杂,且尚未阐明。随着测序技术的发展,免疫组库测序应运而生。该技术研究T细胞受体(T cell receptor,TCR)β链,可深入挖掘TCR图谱与疾病的关系。目的:通过免疫组库测序技术研究PBC患者TCRβ链互补决定区3(CDR3)的图谱特征,进一步阐明PBC的发病机制,为PBC疾病的早期诊断及治疗提供新的依据。方法:空腹状态下,抽取8例PBC患者和8名健康者的静脉血20ml(EDTA lmg:5ml抗凝)。采用流式细胞仪分选CD4+记忆T细胞和CD8+记忆T细胞,RNA的提取按试剂盒操作步骤进行。设计45个Vβ引物作为上游引物,13个Jβ引物作为下游引物,扩增出TCRβ链所有的CDR3区。结合高通量测序平台,分析PBC患者组和正常对照组(NC)T细胞TCRβ链的TRBV基因亚家族的表达频率、V-D和D-J连接处的碱基插入情况以及CDR3序列的共有程度等。结果:PBC患者组的TCRβCDR3图谱多样性较正常组降低,但差异未达到显著水平。PBC患者的CDR3长度明显缩短,CDR3的群体共有程度远大于正常组,无论在核苷酸水平还是氨基酸水平都具有显著性。PBC患者的V-D和D-J连接处的单核苷酸碱基插入频率存在异常。此外,PBC患者的CD4+记忆T细胞低表达TRBV7-1(P=5.30′10),TRBV21-1(P<1.00′10),和TRBV23-1(P=2.43′10),高表达TRBV4-3(P<1.00′10)和TRBV7-2(P=1.22′10)。PBC患者的CD8+记忆T细胞高表达TRBV4-3(P<3.34×10),低表达TRBV6-4(P=8.24×10),TRBV6-7 (P=2.04×10),TRBV21-1(P<1.00×10),TRBV23-1(P=5.77×10),和TRBV6-7(P=2.48×10)。结论:与正常对照组相比,PBC患者组的记忆T细胞的TCRβCDR3免疫图谱存在异常。

关键词：原发性胆汁性胆管炎 T细胞抗原受体免疫组库测序

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高通量测序揭示T细胞受体的保守特性

高通量测序揭示T细胞受体的保守特性

浙江省免疫学会第十次学术大会

作者：侯显良刁宏燕浙江大学医学院附属第一医院传染病诊治国家重点实验室

目的:T细胞受体(T cell receptor,TCR)是T细胞表面的特异性受体,负责识别由主要组织相容性复合体(MHC)所呈递的抗原。T细胞受体的抗原结合位极为多样化,主要源于TCR基因的V(D)J重组和N区核苷酸插入。该研究利用高通量测序技术研究10个... 详细信息

目的:T细胞受体(T cell receptor,TCR)是T细胞表面的特异性受体,负责识别由主要组织相容性复合体(MHC)所呈递的抗原。T细胞受体的抗原结合位极为多样化,主要源于TCR基因的V(D)J重组和N区核苷酸插入。该研究利用高通量测序技术研究10个健康人的TCRβ链CDR3区域的图谱特征。方法:采集10个人的外周血,Ficoll分层液法分离单个核细胞;磁珠分选T淋巴细胞;多重PCR技术扩增TCR CDR3区段后进行高通量测序。参照IMGT/High V-QUEST分析TCR CDR3区段的图谱特征和多样性。结果:绝大部分的TCR CDR3序列丰度很低,表明没有经历克隆性扩增。但每个个体都会有一些丰度很高的序列,可能是由生活中接触的病原体或刺激物所引起的。在不考虑序列丰度的情况下研究个体水平的TCR CDR3序列特征,发现不同个体间的TRBV、TRBJ和TRBD基因亚家族的使用频率都相似。另外,不同个体间CDR3区段的4种核苷酸(G,C,A,T)和20种氨基酸的使用频率几乎一致。我们还发现末端脱氧核苷酸转移酶(Tdt)在N区插入的核苷酸有偏向性,插入4种核苷酸的频率依次为:G(31.92%),C(27.14%),A(21.82%)和T(19.12%)。在考虑序列丰度的情况下,以上这些特征也会存在,只是个体水平间的偏差增大。结论:TCRβ链CDR3区域具有极大的多样性,该研究发现其存在一些保守的特性,其机理有待进一步阐明。

关键词： T细胞受体高通量测序图谱特征

杭州地区135例手足口病患儿早期机体免疫功能临床分析

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吉林医学 2011年第31期32卷 6632-6635页

作者：王海刁宏燕浙江大学医学院附属第一医院传染病诊治国家重点实验室浙江杭州310003

目的:观察手足口病(HFMD)患儿早期外周血中T淋巴细胞亚群(CD3+T、CD4+T、CD8+T)、B淋巴细胞(B)、自然杀伤细胞(NK)、以及免疫球蛋白和补体水平的变化,探讨其早期免疫功能改变。方法:收集杭州地区2010年4月～2010年6月手足口病患儿135例... 详细信息

目的:观察手足口病(HFMD)患儿早期外周血中T淋巴细胞亚群(CD3+T、CD4+T、CD8+T)、B淋巴细胞(B)、自然杀伤细胞(NK)、以及免疫球蛋白和补体水平的变化,探讨其早期免疫功能改变。方法:收集杭州地区2010年4月～2010年6月手足口病患儿135例作为研究对象,48例正常的健康儿童作为对照组;分别应用流式细胞术(FCM)检测CD3+T、CD4+T、CD8+T、B以及NK细胞绝对数值,计算CD4/CD8比值;用免疫透射比浊法测定IgA、IgG、IgM、C3及C4。结果:与对照组比较,患儿的CD3+T、CD4+T、CD8+T、B、NK细胞的绝对数值显著升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论:手足口病患儿早期出现机体免疫功能紊乱,早期检测免疫球蛋白及CD3+T、CD4+T、CD8+T、B、NK细胞数的变化对于判断手足口病患儿病情及预后具有重要作用。

关键词：手足口病免疫球蛋白补体免疫功能

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多项指标联合检测腹水临床意义研究

中国实用内科杂志 2011年第4期31卷 285-287页

作者：鲁伟崔光莹刁宏燕浙江大学医学院附属第一医院传染病诊治国家重点实验室杭州310003

目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、血管内皮生长因子(VEGF)及C-反应蛋白(CRP)、癌胚抗原(CEA)、乳酸脱氢酶(LDH)在肝硬化合并自发性腹膜炎(SBP)、恶性肿瘤、肾性腹水中的水平及临床意义。方法收集浙江大学医学院附属... 详细信息

目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、血管内皮生长因子(VEGF)及C-反应蛋白(CRP)、癌胚抗原(CEA)、乳酸脱氢酶(LDH)在肝硬化合并自发性腹膜炎(SBP)、恶性肿瘤、肾性腹水中的水平及临床意义。方法收集浙江大学医学院附属第一医院2008—2009年收集的26例SBP、31例恶性肿瘤、12例肾病患者的腹水,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测其中IL-6、TNF-α、VEGF的生物学活性,雅培Ci8200全自动生化、免疫分析仪检测CRP、CEA、LDH等指标,并对结果进行比较分析。结果 SBP腹水TNF-α、IL-6、CRP高于肾性和恶性腹水组,差异有统计学意义(P均<0.05);恶性腹水组VEGF、CEA、LDH高于肾性腹水组和SBP组,差异有统计学意义(P均<0.01);恶性腹水组CRP浓度高于肾性腹水组,差异有统计学意义(P<0.01);联合VEGF、CEA、LDH诊断恶性腹水的敏感性和特异性分别为90.3%和76.3%;联合TNF-α、IL-6、CRP诊断SBP腹水敏感性和特异性分别为96.2%和72.1%。结论腹水中TNF-α、IL-6、CRP的升高有助于SBP的诊断,腹水中VEGF、CEA、LDH的浓度对鉴别良、恶性腹水具有一定临床价值。

关键词：腹水自发性腹膜炎乳酸脱氢酶血管内皮生长因子 C-反应蛋白白介素-6 肿瘤坏死因子-α