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龋病儿童唾液菌群动态变化及功能分析

四川大学学报（医学版） 2022年第2期53卷 242-249页

作者：王媛张杰凌宗欣邓淑丽浙江大学医学院附属口腔医院·浙江大学口腔医学院·浙江省口腔疾病临床医学研究中心·浙江省口腔生物医学研究重点实验室·浙江大学癌症研究院杭州310016 传染病诊治国家重点实验室浙江大学医学院附属第一医院杭州310003

目的观察龋病和无龋儿童唾液菌群的动态变化,同时对二者口腔微生态在糖代谢及多种氨基酸合成转运过程中的功能差异进行分析。方法采用宏基因组学的方法分别对10例无龋儿童和10例龋病儿童唾液菌群进行组成及功能分析,6个月后,进一步利用P... 详细信息

目的观察龋病和无龋儿童唾液菌群的动态变化,同时对二者口腔微生态在糖代谢及多种氨基酸合成转运过程中的功能差异进行分析。方法采用宏基因组学的方法分别对10例无龋儿童和10例龋病儿童唾液菌群进行组成及功能分析,6个月后,进一步利用PacBio SMRT测序技术,分析两组儿童口腔菌群变化,探索疾病和健康状态下,口腔菌群变化规律,从组成到功能对儿童口腔微生态进行全面解读。结果随时间推移,两组儿童口腔微生态组成发生显著改变,在门水平上,菌群变化趋势一致,Firmicutes比例增加,而Actinobacteria和Bacteroidetes比例降低。在属水平上,两组儿童唾液菌群的变化出现差异,其中,Lactobacillus、Methylobacterium和Megasphaera在龋病组儿童中的丰度呈上升趋势,而在无龋组儿童中呈下降趋势。在种水平上,隶属于乳杆菌属的L.fermentum、L.gasseri、L.oris、S.downei等菌株在龋病儿童中呈上升趋势,但在无龋儿童中始终处于较低水平。S.gordonii以及S.mutans在龋病儿童中有一定程度下降,但在无龋儿童中始终处于低水平。S.mutans和C.gracilis等菌种与龋失补牙数(decayed,missing and filled teeth,dmft)呈正相关,而N.flavescens与dmft呈负相关。三羧酸循环关键节点相关基因,gltA、icd以及mqo,谷氨酸生成相关基因gudB以及精氨酸生成相关基因argAB/C/J在无龋儿童中丰度显著增加。同时,电子传递链中的NADH脱氢酶相关基因nuoB/C/D/E/H/I/J/K/L/M在无龋儿童中的丰度显著增加。结论儿童唾液菌群是动态变化的,其变化趋势与口腔健康状态有关,健康的口腔微生态中有更广泛的氧化磷酸化,谷氨酸以及精氨酸等氨基酸生成和转运也更为活跃。

关键词：龋病唾液菌群高通量测序氨基酸生成

IgE介导牛乳蛋白过敏婴幼儿肠道菌群改变初探

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中国微生态学杂志 2022年第3期34卷 295-299页

作者：尹晶平程译文凌宗欣苏州大学附属第一医院临床检测中心江苏苏州215006 浙江大学医学院附属第一医院传染病诊治国家重点实验室浙江杭州310003 济南微生态生物医学省实验室山东济南250117

目的应用高通量测序技术探讨IgE介导的牛乳蛋白过敏(cow′s milk protein allergy,CMA)婴幼儿肠道菌群结构和组成的变化。方法回顾性分析2012年6月-2013年6月入组食物过敏患儿,选择出IgE介导的CMA(IgE-CMA)患儿4例,非IgE介导的CMA(non-I... 详细信息

目的应用高通量测序技术探讨IgE介导的牛乳蛋白过敏(cow′s milk protein allergy,CMA)婴幼儿肠道菌群结构和组成的变化。方法回顾性分析2012年6月-2013年6月入组食物过敏患儿,选择出IgE介导的CMA(IgE-CMA)患儿4例,非IgE介导的CMA(non-IgE-CMA)患儿4例,采集粪便样本进行454焦磷酸测序分析,血清样本进行细胞因子检测。结果与non-IgE-CMA患儿相比较,IgECMA患儿肠道菌群多样性Shannon指数(t=-2.996,P=0.010)和Simpson指数(t=-1.786,P=0.036)显著改变,菌群多样性下降,菌群丰富度指数ACE(t=0.406,P=0.021)显著升高。β-多样性PCA分析可显著区分两组,提示IgE-CMA患儿肠道菌群发生显著改变。LEfSe组成差异分析发现肠道菌群中硬壁菌门和拟杆菌门的改变与CMA的不同表型无关,IgE-CMA婴儿中链球菌、肠球菌、鞘氨醇单胞菌、双歧杆菌、罗思氏菌属、红球菌和梭菌属第Ⅺ簇等减少,而厌氧杆菌和狭义梭菌属增加,可用于鉴别诊断CMA表型。结论IgE可决定CMA患儿肠道菌群的改变,这为开展以肠道菌群为靶点的不同表型CMA诊疗提供了新策略。

关键词：牛乳蛋白肠道菌群食物过敏焦磷酸测序

非模板法溶剂热低温热处理制备纳米结构介孔金属氧化物

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非模板法溶剂热低温热处理制备纳米结构介孔金属氧化物

作者：凌宗欣南京航空航天大学

学位级别：硕士

纳米结构介孔金属氧化物因其具有介孔材料和纳米材料独特而优异的物理化学性能,在催化、气敏传感器、电极材料、陶瓷等领域具有广泛的应用前景。本论文丰富和发展了纳米结构介孔金属氧化物的制备方法,非模板法溶剂热低温热处理制备纳米... 详细信息

纳米结构介孔金属氧化物因其具有介孔材料和纳米材料独特而优异的物理化学性能,在催化、气敏传感器、电极材料、陶瓷等领域具有广泛的应用前景。本论文丰富和发展了纳米结构介孔金属氧化物的制备方法,非模板法溶剂热低温热处理制备纳米结构介孔金属氧化物是一种具有反应条件简单、产物结晶好、纯度高、绿色合成等特点的方法。本文使用XRD、SEM、TEM、BET的表征方法,较系统地研究了不同实验参数对样品的比表面积、形貌等的影响,取得的研究成果归纳如下: 溶剂热-低温热处理法制备纳米结构介孔氧化镁:样品的表征结果表明反应介质的不同对样品的比表面积、形貌有重要影响,醇水体积比1:1得到的氧化镁的比表面积为373.2 m2/g,孔容值0.71 cm3/g,孔径分布2-4 nm,反应介质中蒸馏水的存在有利于样品规则形貌的形成。文中初步探讨了样品内部介孔的形成机理。溶剂热-低温热处理法制备纳米结构介孔氧化镍:SEM、SAED照片表明该样品保留了前驱物的六边形形貌和单晶结构。在所测温度范围内,水热反应温度越高,所得样品的形貌越规则。溶剂热-低温热处理法制备纳米结构介孔氧化铟:反应碱源的不同对样品形貌有重要的影响,这为不使用模板剂获得不同形貌的纳米介孔氧化物奠定了实验基础。

关键词：溶剂热低温热处理纳米结构介孔金属氧化物

乳杆菌DM9811对数生长期培养基滤液RNA组分与HT-29细胞和VSV相互作用研究

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乳杆菌DM9811对数生长期培养基滤液RNA组分与HT-29细胞和VSV相互...

作者：凌宗欣大连医科大学

学位级别：硕士

目的:乳杆菌在维持宿主肠道自稳,促进肠道免疫系统成熟,提高机体免疫力,保持宿主健康等方面发挥着重要的作用。本课题组发现乳杆菌DM9811对数生长期培养基滤液中存在大量的100bp左右的核酸组分,该核酸组分的性质、来源、核苷酸序列、生... 详细信息

目的:乳杆菌在维持宿主肠道自稳,促进肠道免疫系统成熟,提高机体免疫力,保持宿主健康等方面发挥着重要的作用。本课题组发现乳杆菌DM9811对数生长期培养基滤液中存在大量的100bp左右的核酸组分,该核酸组分的性质、来源、核苷酸序列、生物学功能等具有重要的研究价值。本实验通过对乳杆菌DM9811对数生长期培养基滤液中核酸组分的提取和分析,观察其可能的来源;通过其在体外对肠道肿瘤细胞增殖的影响,探讨其对肠道肿瘤细胞的作用及其机制。通过其对VSV感染细胞的影响研究及其诱导细胞产生IFN的研究,探讨其在抵抗肠道病毒性感染性疾病方面的作用及其机制。为阐明乳杆菌DM9811与宿主相互作用规律的分子机制奠定基础。方法:1、乳杆菌DM9811对数生长期培养基滤液中核酸的提取、纯化、保存。绘制乳杆菌DM9811的细菌生长曲线。取对数生长期培养基滤液,核酸提取,并定量分析,观察其与细菌生长曲线的关系;电泳分析滤液中核酸组分的组成,用RNase(Free DNase)处理提取物,同时抽提相同条件下处理的细菌培养基,观察分析核酸组分可能的来源,将提取的核酸组分保存于液氮中。2、观察核酸组分对HT-29细胞增殖的影响及其机制。调整HT-29细胞浓度为1.0×10/mL,MTT法观察不同核酸组分终浓度,作用24h、48h、72h、96h时对HT-29细胞生长的影响,计算细胞生长抑制率。取终浓度为200μg/mL进行24h、48h、72h时细胞周期测定,并检测相应细胞周期相关蛋白mRNA的表达情况。3、观察核酸组分对VSV感染细胞的抑制作用及其机制。用HEp-2细胞扩增VSV,进行TCID检测。调整WI-38细胞浓度为2.5×10/mL,接种于细胞培养板形成细胞单层,而后进行病毒学实验。检测不同核酸组分终浓度对WI-38细胞的毒性作用,竞争性抑制病毒感染的作用,阻断病毒侵入的作用,抑制病毒生物合成的作用及诱导细胞产生IFN的抗病毒效应,病毒感染情况以细胞存活率检测。免疫荧光检测核酸组分抑制病毒感染细胞的分子机制。结果:1、乳杆菌DM9811细菌在接种后第0 2h之间为对数生长期,其世代时间为1.95h。琼脂糖电泳分析该核酸组分为RNA,其片段约为100bp左右。发现核酸组分的量与细菌数量呈现明显的正相关。经RNase(Free DNase)处理后未见条带,说明其中无DNA存在,表明对数期基本不存在细菌裂解,此RNA可能是由细菌分泌产生的。核酸组分保存于液氮中1月左右后,结果显示无明显的降解。2、体外对HT-29细胞增殖的影响:核酸组分对HT-29细胞生长具有明显抑制效果,抑制率呈现显著的时间剂量依赖性,终浓度200μg/mL作用96h时抑制率为63.29±3.49%。核酸组分作用于HT-29细胞24h时细胞周期检测结果显示为显著的G1/S期阻滞,并随着作用时间的延长,细胞凋亡率增加显著。RT-PCR检测G/S期细胞周期相关蛋白,Cyclin D1、Cyclin E的表达明显下降,CDK2、CDK4表达有下降,CDK6表达有上升,p27、p53的表达明显升高,PCNA的表达明显降低。3、体外对VSV感染细胞的影响:VSV扩增后,其TCID为10/0.1mL。核酸组分对WI-38细胞在本实验的浓度范围内无明显细胞毒性作用。核酸组分终浓度为200μg/mL时竞争性抑制病毒感染作用和阻断病毒侵入细胞的作用效果明显,但抑制病毒生物合成的作用不明显。核酸组分无明显诱导WI-38细胞产生抗病毒效应,但可有效诱导BALB/c小鼠脾细胞产生IFN-α的抗病毒效应,并呈现一定的剂量依赖性。细胞免疫荧光检测结果为核酸组分可抑制VSV吸附细胞,从而阻止病毒对细胞的感染。结论:1、乳杆菌DM9811对数生长期培养基滤液中存在着大量的100bp左右的RNA片段,此RNA的来源可能是细菌分泌的。2、核酸组分对HT-29细胞的生长具有显著的抑制作用,抑制作用呈现明显的时间剂量依赖性,细胞周期检测结果显示为明显的G1/S期阻滞。3、核酸组分在实验检测的浓度范围内对WI-38细胞无毒性,其对VSV具有竞争性抑制作用和阻断其侵入细胞作用,可诱导BALB/c小鼠脾细胞产生IFN-α,并呈现出剂量依赖性。核酸组分可抑制VSV吸附到细胞表面,从而阻止病毒对细胞的感染。

关键词：乳杆菌核酸 HT-29细胞 VSV IFN 免疫荧光

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树突状细胞与肠道免疫

中国微生态学杂志 2008年第3期20卷 310-315页

作者：凌宗欣唐立大连医科大学微生态教研室辽宁大连116044

肠道黏膜免疫系统是肠道防御细菌和病毒感染的第一道防线，在维持肠道黏膜自稳方面发挥着重要的作用。肠道黏膜免疫系统持续不断的与来自外界的食物抗原和病原微生物及自身长期共存的肠道菌群相互作用，刺激机体对有害抗原产生免疫应答... 详细信息

肠道黏膜免疫系统是肠道防御细菌和病毒感染的第一道防线，在维持肠道黏膜自稳方面发挥着重要的作用。肠道黏膜免疫系统持续不断的与来自外界的食物抗原和病原微生物及自身长期共存的肠道菌群相互作用，刺激机体对有害抗原产生免疫应答反应，诱导机体对无害抗原产生免疫耐受。树突状细胞（Dendritic cells，DCs）是目前已知的最强有力的一种专职抗原递呈细胞（Professional antigen presenting cells，APC），是肠道免疫系统中的重要组成成员，在这个高度抗原性的肠腔环境中，肠道黏膜免疫系统必须维持对共生菌、食物和自向抗原的免疫耐受，维持肠道自稳，并启动对病原菌的免疫应答反应，以预防控制宿主体内的感染，在这一过程中，不同亚型，不同成熟阶段的肠道DCs发挥着重要作用。本文综述了肠道DCs的不同亚型、不同成熟状态及其对肠腔抗原产生的不同免疫应答反应的分子机制，并探讨肠道DCs在肠道炎症性疾病中的作用。

关键词：树突状细胞肠道免疫

粪菌移植对肺炎克雷伯菌所致小鼠肝脓肿感染的抑制作用

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河北大学学报（自然科学版） 2022年第3期42卷 295-302页

作者：王子逸儒朱冬青付金文程宝乾凌宗欣陈楠河北大学基础医学院河北保定071000 河北医科大学临床学院河北石家庄050031 浙江大学医学院附属第一医院传染病诊治国家重点实验室浙江杭州310003

探讨粪菌移植(FMT)对高致病性肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)所致小鼠肝脓肿(KLA)感染的抑制作用及相关机制.小鼠随机分为对照(Healthy)组、肺炎克雷伯菌(Kp)组和干预(FMT)组.Kp组小鼠经口灌胃106 CFU K1血清型肺炎克雷伯菌;FMT... 详细信息

探讨粪菌移植(FMT)对高致病性肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)所致小鼠肝脓肿(KLA)感染的抑制作用及相关机制.小鼠随机分为对照(Healthy)组、肺炎克雷伯菌(Kp)组和干预(FMT)组.Kp组小鼠经口灌胃106 CFU K1血清型肺炎克雷伯菌;FMT组在给菌24 h后经口灌胃给予正常小鼠粪菌悬液(300 mg/mL,0.3 mL).结果表明,与Kp组相比,FMT处理明显降低了小鼠KLA感染率;16S rRNA高通量测序分析表明,FMT显著改变了小鼠肠道菌群组成,包括增加了Alloprevotella、norank_f_Muribaculaceae等益生菌的丰度;同时FMT处理明显降低了小鼠血清TNF-α和胃肠内防御素分子浓度,同时增加了肠黏蛋白2(MUC2)的表达.因此,肠道菌群和免疫防御因子可能一起参与了FMT对高致病性肺炎克雷伯菌所致小鼠KLA感染的抑制作用.

关键词：粪菌移植肺炎克雷伯菌肝脓肿肠道菌群黏蛋白2

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阴道菌群与子宫脱垂的相关性研究

中国微生态学杂志 2023年第1期35卷 88-96页

作者：高思依凌宗欣贾一鑫赵颖颖郑婷婷李香娟杭州师范大学浙江310000 浙江大学医学院附属第一医院浙江省中医药大学杭州市妇产科医院

目的研究阴道菌群与子宫脱垂的相关性,为该类患者的治疗提供参考。方法选取杭州市妇产科医院门诊或体检中心募集的30例子宫脱垂患者(研究组)和30例健康人群(对照组)。利用细菌16S rDNA扩增技术分析两组对象阴道菌群的组成特点,并利用L... 详细信息

目的研究阴道菌群与子宫脱垂的相关性,为该类患者的治疗提供参考。方法选取杭州市妇产科医院门诊或体检中心募集的30例子宫脱垂患者(研究组)和30例健康人群(对照组)。利用细菌16S rDNA扩增技术分析两组对象阴道菌群的组成特点,并利用LEfSe及LDA分析具有显著差异的菌群。结果在属水平上,绝经前人群阴道Oribacterium、Xanthomonadaceae_unclassified在研究组的相对丰度大于对照组(均P0.05)。研究组中绝经前人群阴道菌群Sobs、Chao、Shannon、Invsimpson指数小于绝经后人群,Simpson指数大于绝经后人群(均P<0.05)。绝经后人群中,研究组对象Finegoldia丰度较高,对照组对象Sneathia丰度较高。绝经前人群中,研究组对象Fastidiosipila丰度较高,对照组对象Parvimonas丰度较高。ROC曲线提示,Anaerococcus和Sneathia的组合有助于预测子宫脱垂的发生。绝经后,研究组对象脂质代谢显著下降,而蛋白酶体代谢通路功能显著上升。结论阴道菌群与子宫脱垂具有相关性。蛋白酶体代谢通路可能通过下调雌激素及受体水平参与了子宫脱垂的发生。

关键词：子宫脱垂炎症阴道菌群 16S rDNA

外阴阴道假丝酵母菌病患者阴道菌群多样性研究

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中国微生态学杂志 2015年第5期27卷 600-603页

作者：刘霞凌宗欣浙江大学医学院附属第一医院监护室浙江杭州310003 浙江大学医学院附属第一医院传染病诊治国家重点实验室感染性疾病诊治协同创新中心浙江杭州310003

目的探讨外阴阴道假丝酵母菌病患者阴道菌群多样性的变化。方法采集育龄期女性健康受试者（control,CN,n=50）、细菌性阴道病患者（Bacterial vaginosis,BV,n=50）、外阴阴道假丝酵母菌病患者（Vulvovaginal candidiasis,VVC,n=48）、... 详细信息

目的探讨外阴阴道假丝酵母菌病患者阴道菌群多样性的变化。方法采集育龄期女性健康受试者（control,CN,n=50）、细菌性阴道病患者（Bacterial vaginosis,BV,n=50）、外阴阴道假丝酵母菌病患者（Vulvovaginal candidiasis,VVC,n=48）、细菌性阴道病合并外阴阴道假丝酵母菌病患者（Bacterial vaginosis in combination of vulvovaginal candidiasis,BVC,n=32）的阴道拭子,提取细菌基因组DNA,而后应用25%~55%变性梯度的PCR-DGGE进行指纹图谱分析。结果阴道菌群指纹图谱结果显示,VVC组中阴道优势菌群与CN组基本一致,但与BV组和BVC组比较差异均有统计学意义。结论外阴阴道假丝酵母菌病阴道菌群多样性无明显变化。

关键词：外阴阴道假丝酵母菌病阴道菌群菌群多样性 PCR-DGGE

乳酸杆菌代谢物RNA组分对小鼠免疫细胞功能影响的研究

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中国微生态学杂志 2010年第11期22卷 961-965页

作者：唐立凌宗欣大连医科大学微生态学教研室辽宁大连116044

目的研究乳酸杆菌代谢物RNA组分对免疫细胞功能的影响,为进一步研究其可能存在的生物学功能打基础。方法采用细胞培养技术、Western Blot、ELISA和MTT等方法。结果乳酸杆菌代谢物RNA组分对全脾细胞和脾脏来源的DC增殖有促进作用,对骨髓... 详细信息

目的研究乳酸杆菌代谢物RNA组分对免疫细胞功能的影响,为进一步研究其可能存在的生物学功能打基础。方法采用细胞培养技术、Western Blot、ELISA和MTT等方法。结果乳酸杆菌代谢物RNA组分对全脾细胞和脾脏来源的DC增殖有促进作用,对骨髓来源的DC有抑制作用,它不刺激巨噬细胞数量增殖,但可以明显增强巨噬细胞的吞噬功能。用乳酸杆菌代谢物RNA组分冲激脾脏来源的DC可以轻微增强其杀伤YAC-1的作用和显著促进INF-γ分泌,但相同条件下对BMDC杀伤YAC-1的作用是抑制的,能抑制BMDC分泌INF-γ,但可以增加BMDC刺激全脾细胞的增殖和NF-κB的表达上调。结论乳酸杆菌代谢物RNA组分对小鼠免疫细胞功能具有调节作用。

关键词：乳酸杆菌RNA DC细胞 NF-κB