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作者：冼培凤南方医科大学

学位级别：硕士

背景炎性痛是目前临床工作中最为常见的病理性疼痛之一,是严重困扰人类生活和工作的临床难题。辣椒素受体(TRPV1,transient receptor potential vanilloid sub-family member 1)属于瞬时受体电位辣椒素亚家族成员,又称为VR1(vanilloidre... 详细信息

背景炎性痛是目前临床工作中最为常见的病理性疼痛之一,是严重困扰人类生活和工作的临床难题。辣椒素受体(TRPV1,transient receptor potential vanilloid sub-family member 1)属于瞬时受体电位辣椒素亚家族成员,又称为VR1(vanilloidreceptor 1),是一种与痛觉传递有密切联系的膜上离子通道型受体,在介导炎性痛、癌痛、痛觉敏化中起重要作用,而在外周神经系统和中枢神经系统都有表达。炎性痛产生时TRPV1结合炎症介质白介素1-β(IL1β,Interleukin1-β)等,释放神经肽物质,促进络氨酸激酶A(TrkA,tyrosinekinase A)与神经生长因子(NGF,nerve growth factor)结合,启动细胞活性,引起神经炎症和引起自身磷酸化和活化,构成痛觉传递的肽能通路。蜂毒为透明液体,味苦,比重为1.1313,含有多种生物活性物质如活性肽类、生物酶、生物胺类等,能直接或间接地抗炎止痛、调节机体免疫机能。本研究采用蜂毒穴位注射足三里干预胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠,验证疗效、探讨蜂毒干预对CIA炎性痛大鼠背根神经节中TRPV1、TrkA表达水平的影响。目的探讨蜂毒干预CIA炎性痛大鼠及其对背根神经节TrkA和TRPV1表达水平的影响。方法1.材料与方法试剂包括不完全弗氏佐剂(IFA,incomplete Freund’s adjuvant)和蜂毒(BV,美国Sigma-Aldrich公司)、小牛Ⅱ型胶原(chondrex公司)、TRPV1、TrkA试剂盒(abcam公司),戊巴比妥钠、多聚甲醛、生理盐水等其余试剂由南方医科大学试剂中心提供。仪器设备包括数显卡尺(中国Forgester公司)、life science model 390热痛测试仪(美国IITC公司)、石蜡切片机、电子显微镜等。2.造模和分组健康Wistar大鼠23只,雄性,8周龄,SPF级,体质量180-220g。从南方医科大学动物实验中心采购,于南方医科大学实验动物中心SPF实验室进行。SPF级实验室自由饲养7天。温度保持在18-29℃,湿度维持在40%-70%,室内风速≤0.18m/s,换气次数10-20次/h,压差为20-50Pa,昼夜明暗时间12/12h,噪音要求为<60dB。在实验前1周进行大鼠样本筛选:热痛阈测定值在2～10s者纳入实验,即经热源照射足跖基底部后在2～10s内能引起缩跳反应的大鼠可被纳入实验。痛阈小于2s或大于10s者提示动物可能反应过于敏感或反应过于迟钝,实验暂排除不用(热痛阈测定方法见后文)。经筛选排除3只大鼠,余20只用于本次实验。随机分为正常对照组、模型组、蜂毒组和预处理组,每组5只。炎性痛模型的制备:参照张进玉主编《类风湿性关节炎》、居颂光等主编的《医学免疫学实验技术》的方法首先制备造模试剂。前1天(d0)将小牛Ⅱ型胶原试剂(10mg装)存于4℃过夜。d1于无菌条件下将其与IFA在等体积冰浴中混合充分乳化。检测时抽取一滴乳化剂滴入盛水烧杯中,均匀铺开为准。4℃冰箱保存备用。实验d1时于模型组、蜂毒组和预处理组大鼠尾根部注射小牛Ⅱ型胶原和IFA的乳化剂0.2ml进行初次免疫,正常对照组于尾根部相应位置注射生理盐水0.2ml。实验d8时于模型组、蜂毒组和预处理组大鼠再次注射乳化剂0.2ml加强免疫,正常对照组再次注射生理盐水0.2ml。d10造模大鼠出现足跖肿胀,从此肿胀者逐渐增多,活动减少,行走拖步,d14时造模组和蜂毒组大鼠均出现不同程度肿胀,且肿胀未见明显消退,肿胀关节评分(AI,arthritis index)均大于3分,均可进行下一步实验。3.干预方案3.1蜂毒组:d14-d21进行干预。干预方法:蜂毒溶液穴位注射足三里。注射剂量:蜂毒溶液0.1ml。溶液浓度:3mg·ml-1。注射部位:足三里穴。每日1次,每次1穴,双侧足三里穴交替使用。连续干预7天。3.2预处理组:d8-d10进行干预。干预方法:蜂毒溶液穴位注射足三里。注射剂量:蜂毒溶液0.1ml。溶液浓度:3mg·ml-1。注射部位:足三里穴。每日1次,每次1穴,双侧足三里穴交替使用。连续干预3天。3.3模型组:d14-d21进行穴位注射生理盐水0.1ml,注射部位:足三里穴。每日1次,每次1穴,双侧足三里穴交替使用。连续7天。3.4正常对照组:不干预。4.观察指标4.1双下肢足跖厚度:采用中国Forgester公司电子数显卡尺于第d15、d16、d17、d18、d19、d20、d21、d22天测量足跖底部中央与足掌关节面为轴的足跖厚度,每侧测量3次取平均值,并计算双下肢足跖厚度和为录入数据。4.2双下肢痛阈:采用美国Ⅱ TC life science model 390热痛仪

关键词：蜂毒辣椒素受体络氨酸激酶A 炎性痛胶原诱导性关节炎

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三种蜂针剂量治疗类风湿性关节炎的随机对照研究

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时珍国医国药 2015年第6期26卷 1400-1402页

作者：陈莹杨路冼培凤王升旭南方医科大学广东广州510515

目的观察不同剂量蜂针治疗类风湿性关节炎的临床疗效。方法将90例符合纳入标准的患者随机分为3组(单蜂蛰刺留针1分钟、双蜂蛰刺留针1分钟、三蜂蛰刺留针1分钟)每组30例,取阿是穴配合辨证取穴,连续治疗7天。观察临床疗效,治疗前后关节疼... 详细信息

目的观察不同剂量蜂针治疗类风湿性关节炎的临床疗效。方法将90例符合纳入标准的患者随机分为3组(单蜂蛰刺留针1分钟、双蜂蛰刺留针1分钟、三蜂蛰刺留针1分钟)每组30例,取阿是穴配合辨证取穴,连续治疗7天。观察临床疗效,治疗前后关节疼痛程度、疼痛关节个数及关节功能障碍指数。结果单蜂组总有效率优于双蜂组和三蜂组。在改善关节疼痛程度、关节功能障碍指数及减少关节疼痛个数方面,单蜂组效果均优于其余两组。结论三种剂量蜂针均可改善类风湿性关节炎患者的症状,单蜂剂量治疗类风湿性关节炎效果优于双蜂剂量和三蜂剂量。

关键词：蜂针类风湿性关节炎量效关系

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蜂毒对胶原诱导性关节炎炎性痛大鼠背根神经节TrkA、TRPV1的影响

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南方医科大学学报 2016年第6期36卷 838-841页

作者：冼培凤陈莹杨路刘国涛彭澎王升旭南方医科大学中医药学院针推教研室广东广州510515

目的探讨蜂毒对胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠Trk A、TRPV1疼痛信号分子的影响。方法分为正常对照组、模型组、蜂毒组(BV,3 mg/m L)。采用Wistar雄性成年大鼠,CollagenⅡ+IFA 0.2 m L造模。BV组于造模14 d后开... 详细信息

目的探讨蜂毒对胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠Trk A、TRPV1疼痛信号分子的影响。方法分为正常对照组、模型组、蜂毒组(BV,3 mg/m L)。采用Wistar雄性成年大鼠,CollagenⅡ+IFA 0.2 m L造模。BV组于造模14 d后开始给药,直至21 d;记录每组足跖厚度、痛阈和肿胀关节评分,背根神经节采用IHC观察病理切片TRPV1的表达和western boltting观察Trk A的表达,评价蜂毒对CIA大鼠踝关节的干预。结果造模从10 d起开始肿胀,14 d内全部出现CIA体征,足跖厚度和肿胀关节评分整体上呈逐渐增加的趋势。在14 d时趋于平稳。BV组予蜂毒0.3 mg治疗7 d,BV组足跖厚度和肿胀关节评分低于模型组。痛阈(秒):正常对照组15.47±0.35,模型组10.90±0.10,BV组13.14±0.18。免疫组化TRPV1阳性细胞百分数(%):正常对照组11.40±1.48,模型组44.47±4.38,BV组21.60±2.20。western blotting观察Trk A表达(灰度值):正常对照组1.59±0.04,模型组4.53±0.21,BV组2.46±0.17。结论蜂毒注射能降低炎性痛大鼠DRG信号分子Trk A、TRPV1的表达水平。这可能是消炎镇痛的信号通路之一,为蜂毒治疗类风湿性关节炎提供新的启发。

关键词：蜂毒辣椒素受体络氨酸激酶A 类风湿关节炎胶原诱导性关节炎

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中药超微粉腧穴敷贴对变应性鼻炎大鼠IFN-γ和IL-4含量的影响

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时珍国医国药 2014年第11期25卷 2813-2815页

作者：陈静陈莹张继苹冼培凤黄焕琳王升旭南方医科大学中医药学院广东广州510515

目的观察中药超微粉腧穴敷贴对变应性鼻炎大鼠血清IFN-γ和IL-4含量的影响。方法 50只SD大鼠随机分为正常对照组和造模组,造模组给予卵蛋白腹腔注射、滴鼻及喷雾吸入,造模成功后再随机分为空白模型组(A组)、丙酸氟替卡松组(B组)、普通粉... 详细信息

目的观察中药超微粉腧穴敷贴对变应性鼻炎大鼠血清IFN-γ和IL-4含量的影响。方法 50只SD大鼠随机分为正常对照组和造模组,造模组给予卵蛋白腹腔注射、滴鼻及喷雾吸入,造模成功后再随机分为空白模型组(A组)、丙酸氟替卡松组(B组)、普通粉组(C组)和超微粉组(D组)。干预10天后,采集外周血ELISA法测IL-4和IFN-γ。结果1A组血清IFN-γ含量较正常对照组大幅降低,B组、C组和D组血清IFN-γ含量较A组显著升高(P<0.05),D组血清IFN-γ含量与正常对照组相比无统计学差异(P=0.584);2A组血清IL-4含量较正常对照组大幅升高,B组、C组和D组血清IL-4含量较A组显著降低(P<0.05),D组血清IL-4含量与正常对照组及B组相比无统计学差异(P=0.095、0.07)。结论超微粉腧穴敷贴能显著升高IFN-γ和降低IL-4,提示其可能的作用机制是恢复Th1和Th2细胞的平衡关系。

关键词：变应性鼻炎中药超微粉白细胞介素4 γ干扰素

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蜂毒注射足三里对佐剂性关节炎大鼠治疗作用的实验研究

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辽宁中医杂志 2017年第2期44卷 383-385页

作者：冼培凤陈莹杨路王升旭南方医科大学中医药学院广东广州510515

目的:通过观察蜂毒注射对佐剂性关节炎(AA)大鼠治疗作用的影响,研究蜜蜂蜂毒提取物(BV)对AA大鼠的治疗作用和作用机制。方法:采用Wistar雄性成年大鼠30只,于右后足垫皮下注射CFA 0.1 m L造模,分为模型组、蜂毒组。另设正常组,于右后足... 详细信息

目的:通过观察蜂毒注射对佐剂性关节炎(AA)大鼠治疗作用的影响,研究蜜蜂蜂毒提取物(BV)对AA大鼠的治疗作用和作用机制。方法:采用Wistar雄性成年大鼠30只,于右后足垫皮下注射CFA 0.1 m L造模,分为模型组、蜂毒组。另设正常组,于右后足垫皮下注射生理盐水0.1 m L。每组10只。蜂毒组大鼠每日蜂毒注射0.3 mg治疗。记录所有大鼠足跖厚度、痛阈,治疗后采用ELISA检测大鼠外周血血清IL-1β水平。结果:治疗后蜂毒组足跖厚度均低于模型组,痛阈高于模型组;进一步采用ELISA检测血清中IL-1β水平显示蜂毒组血清IL-1β水平比模型组低。结论:蜂毒穴位注射足三里能减轻足跖肿胀,提高痛阈,同时抑制炎性细胞因子IL-1β的转录和表达,对AA大鼠有效。

关键词：类风湿性关节炎蜂毒 IL-1β 针灸

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蜂针对佐剂性大鼠类风湿性关节炎IL-15影响的研究

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新中医 2014年第2期46卷 197-199页

作者：陈莹冼培凤冯淑兰杨路南方医科大学广东广州510515 广州中医药大学广东广州510405

目的:观察蜂针对佐剂性大鼠类风湿性关节炎(RA)白细胞介素-15(IL-15)的影响。方法:将120只大鼠随机分为蜂针治疗组、激素治疗组、病理模型组、正常对照组,每组各30只。正常对照组不造模,其余3组采用Freund氏完全佐剂制造大鼠关节炎模型... 详细信息

目的:观察蜂针对佐剂性大鼠类风湿性关节炎(RA)白细胞介素-15(IL-15)的影响。方法:将120只大鼠随机分为蜂针治疗组、激素治疗组、病理模型组、正常对照组,每组各30只。正常对照组不造模,其余3组采用Freund氏完全佐剂制造大鼠关节炎模型。蜂针治疗组:取肾俞、足三里、命门、大椎穴,用镊子轻轻捏住蜜蜂的腰部,将其尾部对准穴位,让其自然蛰入穴位并留针10 min。均治疗21天,用ELISA法检测外周血IL-15水平。结果:与正常对照组比较,病理模型组、激素治疗组、蜂针治疗组IL-15水平均升高,差异均有显著性意义(P<0.05);与病理模型组比较,激素治疗组、蜂针治疗组IL-15水平明显下降,差异均有显著性意义(P<0.05);与激素治疗组比较,蜂针治疗组IL-15水平略高,差异有显著性意义(P<0.05)。结论:蜂针治疗RA可以有效降低IL-15水平,从而有效缓解RA病情。

关键词：类风湿性关节炎(RA) 蜂针 IL-15 动物模型

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不同蜂针剂量对佐剂性类风湿性关节炎大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6的影响

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中华中医药学刊 2017年第5期35卷 1151-1154页

作者：陈莹杨路冼培凤吴春晓王升旭南方医科大学中西医结合医院广东广州510315 南方医科大学中医药学院广东广州510515

目的:观察不同剂量的蜂针对佐剂性类风湿性关节炎(RA)大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β),白介素-6(IL-6)的影响,探究不同蜂针剂量对类风湿性关节炎的可能机制。方法:建立佐剂性类风湿性关节炎大鼠模型,将wistar大鼠... 详细信息

目的:观察不同剂量的蜂针对佐剂性类风湿性关节炎(RA)大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β),白介素-6(IL-6)的影响,探究不同蜂针剂量对类风湿性关节炎的可能机制。方法:建立佐剂性类风湿性关节炎大鼠模型,将wistar大鼠随机分为空白组、模型组和单蜂1 min组、双蜂1 min组、三蜂1min组、单蜂30 s组。观察各组足趾容积以及缩足反应,同时采用ELISA检测血清TNF-α、IL-1β、IL-6表达水平。结果:单峰1 min足趾肿胀程度低于模型组(P<0.01),缩足反应对应长于模型组(P<0.05),单蜂1 min比其余治疗组改善足趾肿胀度以及延长镇痛效果要强,而对于血清中TNF-α、IL-1β、IL-6的影响,单峰1 min表达水平低于模型组(P<0.05),单蜂1 min与其他治疗组相比抑制炎症细胞因子的表达较好。结论:适当剂量的蜂针具有减轻类风湿性关节炎大鼠足趾肿胀度和加强镇痛效果的作用,其机制可能跟抑制RA大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6的表达有关,而单蜂1 min可能为类风湿性关节炎最佳的治疗剂量。

关键词：类风湿性关节炎蜂针足趾容积缩足反应肿瘤坏死因子-α 白介素-1β 白介素-6

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针灸教学实践与探索浅谈

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河北中医 2014年第6期36卷 959-960页

作者：王升旭陈莹冼培凤南方医科大学中医药学院针灸教研室广东广州510515

针灸是研究用针刺和艾灸及其他作用于腧穴的治疗方法来调理经络气血脏腑以防治疾病的一门学科，是中医学的重要组成部分，是中医教学必不可少的内容，对其的掌握是所有中医专业学生的必然要求。但由于教学观念、教学条件及管理体制等多... 详细信息

针灸是研究用针刺和艾灸及其他作用于腧穴的治疗方法来调理经络气血脏腑以防治疾病的一门学科，是中医学的重要组成部分，是中医教学必不可少的内容，对其的掌握是所有中医专业学生的必然要求。但由于教学观念、教学条件及管理体制等多方面的限制，现在大学的针灸专业本科教学模式逐渐与社会发展不尽适应。为了培养学生学习的积极性、思维的创新性及较好的实践能力，不断探索更适应发展的实用的新型教学模式是十分必要的。针灸是一门临床学科，其教学需要接受临床的检验。因此，教学与临床是密不可分的。我们在针灸专业本科培养的过程中，探索出了一条教学-临床-科研-教学的教学模式，并取得了初步成效，介绍如下。

关键词：教育,针灸教学方法

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不同蜂针剂量对类风湿性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞活力的影响

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辽宁中医杂志 2017年第10期44卷 2207-2210,I0004页

作者：陈莹王升旭吴春晓冼培凤杨路南方医科大学中医药学院广东广州510515 南方医科大学中西医结合医院广东广州510315

目的:观察不同剂量的蜂针对佐剂诱导的类风湿性关节炎大鼠成纤维滑膜细胞活力的影响,探讨蜂针治疗类风湿性关节炎的可能机制。方法:建立大鼠佐剂性类风湿性关节炎动物模型,将Wistar大鼠随机分为空白组、模型组和单蜂1 min组、双蜂1 min... 详细信息

目的:观察不同剂量的蜂针对佐剂诱导的类风湿性关节炎大鼠成纤维滑膜细胞活力的影响,探讨蜂针治疗类风湿性关节炎的可能机制。方法:建立大鼠佐剂性类风湿性关节炎动物模型,将Wistar大鼠随机分为空白组、模型组和单蜂1 min组、双蜂1 min组、三蜂1 min组、单蜂30 s组,观察各组足底厚度以及HE染色的病理变化,同时关节滑膜取材,采用MTT法检测成纤维样滑膜细胞增殖情况。结果:足底厚度比较,1 min蜂针组较模型组以及其他蜂针剂量组别低(P<0.01);HE病理形态学评分,模型组病理形态学改变评分较各蜂针治疗组高(P<0.05);MTT检测成纤维滑膜细胞活力中,24 h时间点开始出现,1 min蜂针组抑制成纤维细胞增殖较模型组显著(P<0.05),48 h较24 h时间点各组差异更显著。结论:适当剂量的蜂针能减轻类风湿性关节炎大鼠足底厚度,降低病理形态学评分,其机制可能跟蜂针抑制成纤维样滑膜细胞增殖活力有关。

关键词：类风湿性关节炎足底厚度病理形态学评分成纤维滑膜细胞 MTT

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不同蜂针剂量治疗类风湿性关节炎大鼠的疗效研究

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辽宁中医杂志 2017年第2期44卷 392-397,I0004页

作者：陈莹杨路冼培凤符雅杰林国华王升旭南方医科大学中医药学院广东广州510515 南方医科大学中西医结合医院广东广州510315

目的:观察不同蜂针剂量对类风湿性关节炎大鼠疗效的影响。方法:将30只大鼠随机分为空白组、模型组和蜂针治疗4组(单蜂1 min组、双蜂1 min组、三蜂1 min组、单蜂30 s组),取足三里穴,连续治疗7 d。观察治疗前后体重、足趾容积、缩足反应... 详细信息

目的:观察不同蜂针剂量对类风湿性关节炎大鼠疗效的影响。方法:将30只大鼠随机分为空白组、模型组和蜂针治疗4组(单蜂1 min组、双蜂1 min组、三蜂1 min组、单蜂30 s组),取足三里穴,连续治疗7 d。观察治疗前后体重、足趾容积、缩足反应时间及HE切片观察。结果:治疗后,与空白组比较,各组大鼠足趾容积提高,缩足反应时间下降,差异均有统计学意义(P<0.05),体重改变没有显著差异。单蜂1 min组大鼠足趾容积低于其余各组,缩足反应时间高于其余各组,差异显著(P<0.05)。结论:不同蜂针剂量对类风湿性关节炎大鼠均有一定治疗作用,其中单蜂1 min组近期疗效最显著。

关键词：蜂针类风湿性关节炎量效关系

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