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一株牛源肺炎克雷伯氏菌的分离鉴定与耐药基因型检测

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浙江农业学报 2017年第4期29卷 534-541页

作者：蒙正群冷依伊任梅渗刘亚东王印姚学萍杨泽晓四川农业大学动物医学院四川温江611130 动物疫病与人类健康四川省重点实验室四川温江611130

从病死犊牛肺脏组织中分离到一株革兰阴性短杆菌,进行了细菌分离纯化、生化试验、16SrDNA测序鉴定、小鼠致病性试验、药敏试验,及碳青霉烯类酶与产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)等7种耐药基因的PCR检测。结果鉴定该菌为肺炎克雷伯氏菌,其16S... 详细信息

从病死犊牛肺脏组织中分离到一株革兰阴性短杆菌,进行了细菌分离纯化、生化试验、16SrDNA测序鉴定、小鼠致病性试验、药敏试验,及碳青霉烯类酶与产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)等7种耐药基因的PCR检测。结果鉴定该菌为肺炎克雷伯氏菌,其16S rDNA扩增序列与GenBank中肺炎克雷伯氏菌同源性达99%。对小鼠致病性强。该菌分离株对氨苄西林、头孢呋辛、复方新诺明、红霉素耐药,而对碳青霉烯类、第四代头孢等受试药物均为敏感。耐药基因PCR检测仅扩增出约862 bp的SHV基因片段,与公布的SHV-1基因序列同源性达99.3%。该牛源克雷伯氏菌分离株耐药表型与耐药基因检测结果一致。

关键词：肺炎克雷伯氏菌分离鉴定耐药基因

一种新型同时检测6种猪病毒病简化靶序列富集多重PCR的建立和初步应用

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中国兽医科学 2016年第6期46卷 695-701页

作者：肖璐邬旭龙王印杨泽晓姚学萍任梅渗张鹏飞冷依伊张博刘亚东蒙正群四川农业大学动物医学院四川成都611130 动物疫病与人类健康四川省重点实验室四川成都611130

为建立一种新型同时检测6种猪常见病的方法,针对猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪乙型脑炎病毒(JEV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪细小病毒(PPV)的保守基因,设计6对特异引物,在引物的5′端加上一... 详细信息

为建立一种新型同时检测6种猪常见病的方法,针对猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪乙型脑炎病毒(JEV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪细小病毒(PPV)的保守基因,设计6对特异引物,在引物的5′端加上一段非同源性标签序列,再设计1对可识别标签序列的超级引物。通过优化反应条件,建立了6种猪常见病毒的简化靶序列富集多重PCR(Tem-PCR)检测方法。灵敏度试验结果显示,该方法对PRV、JEV、CSFV、PCV2、PRRSV、PPV核酸的最低检测限度分别为4.36×103、2.21×103、2.69×103、3.18×103、2.63×104、3.12×104copies/L,而单重PCR检测的最低限度分别为1.3×101、2.59×102、8.03×101、3.29×101、2.65×101、2.45×102copies/L。该方法对54份临床样本的检测结果与国标单重PCR检测结果的一致性为94.9%。本试验建立的方法特异、灵敏、操作简便且成本低廉,对这6种猪病常见病原的同时检测有一定的参考意义。

关键词：靶序列富集多重PCR(Tem-PCR) 猪伪狂犬病病毒猪乙型脑炎病毒猪瘟病毒猪圆环病毒2型猪繁殖与呼吸综合征病毒猪细小病毒

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猪伪狂犬病病毒致病机理及其变异的研究进展

养猪 2016年第5期 121-126页

作者：冷依伊任梅渗蒙正群杨泽晓姚学萍王印四川农业大学动物医学院四川成都611130 动物疫病与人类健康四川省重点实验室成都611130

猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)属于疱疹病毒I型,可引起家畜和多种野生动物以发热、呼吸道症状和神经症状为特征的急性传染病。文章对猪伪狂犬病病毒的病原特征、临床症状和致病机理进行描述,尤其是对目前已发现的在致病性中... 详细信息

猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)属于疱疹病毒I型,可引起家畜和多种野生动物以发热、呼吸道症状和神经症状为特征的急性传染病。文章对猪伪狂犬病病毒的病原特征、临床症状和致病机理进行描述,尤其是对目前已发现的在致病性中存在关键作用的11种主要的糖蛋白,如g E、g D和TK等进行了详细综述,以期为猪伪狂犬病致病机理、基因变异情况和猪伪狂犬病疫苗研究提供依据。

关键词：猪伪狂犬病病毒流行现状潜伏感染致病机理变异

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丹毒丝菌属荧光定量PCR检测方法的建立

中国兽医科学 2016年第6期46卷 763-768页

作者：冷依伊任梅渗蒙正群张鹏飞杨泽晓姚学萍王印四川农业大学动物医学院四川成都611130 动物疫病与人类健康四川省重点实验室四川成都611130

为建立高效快速的丹毒丝菌属荧光定量PCR（SYBR Green real-time PCR）检测方法,根据丹毒丝菌属16S r RNA基因保守序列设计特异性引物,通过优化确定最佳反应条件,并进行敏感性、特异性、重复性试验以及临床样品的检测,建立了丹毒丝菌属... 详细信息

为建立高效快速的丹毒丝菌属荧光定量PCR（SYBR Green real-time PCR）检测方法,根据丹毒丝菌属16S r RNA基因保守序列设计特异性引物,通过优化确定最佳反应条件,并进行敏感性、特异性、重复性试验以及临床样品的检测,建立了丹毒丝菌属荧光定量PCR检测方法。结果显示,标准品浓度在1.06×106~1.06×101copies/L范围内具有良好的线性关系,最低可检测到1.06×10-2 copies/L的标准品阳性质粒;该方法与副猪嗜血杆菌、多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌等22种细菌和病毒无交叉反应;批内和批间的变异系数（CV）均小于3%。对临床样品的检测结果表明,该方法具有敏感性高、特异性强、稳定性好、准确度高和检测快速等优点,可用于猪丹毒杆菌感染的早期诊断、样品的快速检测与定量分析。

关键词：丹毒丝菌属荧光定量PCR 16S rRNA 定量分析

5种猪病毒性传染病病原的多重PCR检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2017年第2期39卷 123-126页

作者：冷依伊任梅渗蒙正群张鹏飞杨泽晓姚学萍王印四川农业大学动物医学院四川成都611130 动物疫病与人类健康四川省重点实验室四川成都611130

为建立同时检测非洲猪瘟病毒(ASFV)、水疱性口炎病毒(VSV)、猪口蹄疫病毒(FMDV),猪瘟病毒(CSFV)以及猪伪狂犬病病毒(PRV)的多重RT-PCR检测方法,本研究根据Gen Bank中登录的参考病毒株序列,选择各病毒的保守序列设计5对特异性引物,通过... 详细信息

为建立同时检测非洲猪瘟病毒(ASFV)、水疱性口炎病毒(VSV)、猪口蹄疫病毒(FMDV),猪瘟病毒(CSFV)以及猪伪狂犬病病毒(PRV)的多重RT-PCR检测方法,本研究根据Gen Bank中登录的参考病毒株序列,选择各病毒的保守序列设计5对特异性引物,通过优化反应条件,建立了一种可以同时快速检测以上5种病毒的多重RT-PCR检测方法。结果显示,该方法对不同的细菌或病毒模板扩增结果均为阴性,特异性强;敏感性试验表明该方法对PRV、CSFV、ASFV、VSV和FMDV的核酸最少检出量分别为8.82×10~3拷贝/μL、6.87×10~4拷贝/μL、5.71拷贝/μL、4.93×10~4拷贝/μL和4.32×10~2拷贝/μL。以上结果表明该方法快速、灵敏、特异性强,对以上5种猪病病毒能够进行快速鉴别检测,为其临床诊断与流行病学调查提供了有效的检测方法。

关键词：多重PCR 非洲猪瘟病毒猪口蹄疫病毒猪水疱性口炎病毒猪瘟病毒猪伪狂犬病病毒

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副猪嗜血杆菌Hfq基因缺失株的构建与鉴定

中国兽医科学 2016年第2期46卷 203-209页

作者：任梅渗王印杨泽晓姚学萍曾相杰冷依伊张鹏飞四川农业大学动物医学院四川成都611130 动物疫病与人类健康四川省重点实验室四川成都611130

为构建副猪嗜血杆菌Hfq基因缺失株,以副猪嗜血杆菌S2261基因组为模板扩增Hfq基因的上、下游同源臂,用融合PCR的方法融合拼接两条同源臂。以Eco RⅠ+HindⅢ分别对融合片段与p K18mobSac B质粒进行双酶切并用T4 DNA连接酶连接以构建同源... 详细信息

为构建副猪嗜血杆菌Hfq基因缺失株,以副猪嗜血杆菌S2261基因组为模板扩增Hfq基因的上、下游同源臂,用融合PCR的方法融合拼接两条同源臂。以Eco RⅠ+HindⅢ分别对融合片段与p K18mobSac B质粒进行双酶切并用T4 DNA连接酶连接以构建同源重组质粒p K18mob Sac B-Hfq-ud。以大肠杆菌S17-1-pir作为供体菌,副猪嗜血杆菌S2261作为受体菌,通过接合转移法成功构建了副猪嗜血杆菌Hfq基因缺失株。绘制了S2261野生株与Hfq缺失株的生长曲线以及测定了LD50,结果显示,相比于S2261野生株,Hfq缺失株在对数期的生长速度下降;S2261野生株与Hfq缺失株的LD50分别为2.9×108与3.16×1010CFU,这说明相比野生株,Hfq缺失株导致小鼠半数死亡所需的剂量显著升高,相对的其毒力则明显下降。药敏试验结果显示,Hfq缺失株对氧氟沙星和诺氟沙星的敏感性明显增加。以上结果说明在副猪嗜血杆菌中,Hfq基因对该菌的生长速度、毒力以及药物敏感性具有调控作用。这为副猪嗜血杆菌Hfq基因功能以及该菌相关的疫苗研究奠定了基础。

关键词：副猪嗜血杆菌 Hfq基因基因缺失接合转移

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2株兔出血症病毒全基因测定与遗传进化分析

江苏农业学报 2018年第4期34卷 854-861页

作者：蒙正群周丽军罗怡琳冷依伊张鹏飞王印姚学萍耿毅杨泽晓四川农业大学动物医学院四川温江611130 动物疫病与人类健康四川省重点实验室四川温江611130

对2株兔出血症病毒(RHDV)SCH04、Sch07进行全基因组序列测定,并进行同源性及遗传进化分析。按照病毒核酸组成,将病毒基因分7段进行RT-PCR扩增,将分段扩增产物分别克隆到p MD-19T载体进行测序,用DNAStar进行拼接,得到全基因组序列;参照Ge... 详细信息

对2株兔出血症病毒(RHDV)SCH04、Sch07进行全基因组序列测定,并进行同源性及遗传进化分析。按照病毒核酸组成,将病毒基因分7段进行RT-PCR扩增,将分段扩增产物分别克隆到p MD-19T载体进行测序,用DNAStar进行拼接,得到全基因组序列;参照Gen Bank上登陆的31株RHDV毒株全基因核苷酸序列、VP60基因核苷酸序列以及ORF2编码基因核苷酸序列对2株病毒进行同源性和遗传进化分析。结果显示,SCH04基因组全长7 439 bp,Sch07基因组全长7 438 bp,2株病毒全基因的核苷酸序列同源性为99.8%,与31株参考毒株全基因的核苷酸序列同源性为78.3%~97.0%;2株病毒的VP60基因核苷酸序列同源性为99.7%,ORF2编码基因核苷酸序列同源性为99.2%。进化树显示2株病毒同属于抗原变异株RHDVa(GI.1a)基因群,且亲缘关系最近。VP60基因核苷酸序列与ORF2编码基因核苷酸序列均可以作为RHDV遗传进化分析。

关键词：兔出血症病毒全基因序列遗传进化

裂谷热病毒两种PCR检测方法的建立及比较分析

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中国预防兽医学报 2018年第6期40卷 504-508页

作者：冷依伊王印项明源张鹏飞蒋子睿江地科杨泽晓姚学萍四川农业大学动物医学院四川成都611130 动物疫病与人类健康四川省重点实验室四川成都611130

裂谷热(RVF)具有较高的发病率与死亡率,极大危害着当地养殖业和生态系统的稳定。为建立一种能够快速有效检测裂谷热病毒(RVFV)的方法,本研究根据RVFV的保守序列设计了特异性引物与探针,分别建立了探针PCR和荧光PCR,并对这两种检测方法... 详细信息

裂谷热(RVF)具有较高的发病率与死亡率,极大危害着当地养殖业和生态系统的稳定。为建立一种能够快速有效检测裂谷热病毒(RVFV)的方法,本研究根据RVFV的保守序列设计了特异性引物与探针,分别建立了探针PCR和荧光PCR,并对这两种检测方法进行比较分析。结果显示,两种检测方法均不存在非特异扩增;最低检测浓度分别为1.03×10^(-2)拷贝/μL和1.03×10~0拷贝/μL,前者比后者有更高的灵敏度;探针PCR和荧光PCR组内和组间变异系数均小于3%。实验表明,探针PCR具有特异性强、灵敏度高、稳定性好、准确度高、检测速度快等优点。因此,探针PCR是一种灵敏度和可靠性均较高的RVFV检测方法。

关键词：裂谷热病毒探针PCR 荧光PCR

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国门大学普洱学院科研水平现状分析

门窗 2019年第12期 215-215,217页

作者：冷依伊蒋智林周顺文何雪涓李秋蓉赵锋曾海愿普洱学院

随着国家对教育的重视,各高校对科研的投入比重也逐步增大。为了深入的促进普洱学院科研项目的发展,本文对普洱学院的科研水平、科研现状进行了解和,采用文献资料法、数理统计法等,对普洱学院科研水平进行分析。研究表明:从普洱学院科... 详细信息

随着国家对教育的重视,各高校对科研的投入比重也逐步增大。为了深入的促进普洱学院科研项目的发展,本文对普洱学院的科研水平、科研现状进行了解和,采用文献资料法、数理统计法等,对普洱学院科研水平进行分析。研究表明:从普洱学院科研论文发表的总数量来看,其论文数量逐年递增,其中核心期刊占比也越来越高,可见近年来普洱学院相关科研政策的实施得到了显著成效。普洱学院整体的科研水平在云南省中排名较前,尤其作为国门大学来说是一所标志性的高校,为了拉近与一流大学的距离,学校还应向科研水平好的高校学习,提升本高校科研水平,从而提升自己的办学能力。

关键词：国门大学普洱学院科研水平