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递减杂交

基础医学与临床 1991年第5期11卷 61-64页

作者：冯骆中国医学科学院肿瘤研究所

递减杂交(Subtractive Hybridization)是一种高效率的筛选特异基因的方法。与经典的菌落筛选最主要的区别是,递减杂交的探针DNA序列一般尚不知晓,待筛选的基因DNA序列亦为未知,唯一了解的是该基因所具有的特异功能。递减杂交的原理即利... 详细信息

递减杂交(Subtractive Hybridization)是一种高效率的筛选特异基因的方法。与经典的菌落筛选最主要的区别是,递减杂交的探针DNA序列一般尚不知晓,待筛选的基因DNA序列亦为未知,唯一了解的是该基因所具有的特异功能。递减杂交的原理即利用待分离的基因在两种不同细胞或组织中表达的差异,经过mRNA或单链cDNA的互相杂交,去除两者间共同的基因成份,而使表达有差异的基因得到充分富集(Enrichment)。

关键词：杂交递减杂交基因 cDNA探针筛选

NMBzA对猴食管上皮癌基因和多种抑癌基因的作用

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中国医学科学院学报 1995年第1期17卷 1-6页

作者：李华川陆士新冯骆中国医学科学院中国协和医科大学肿瘤研究所

应用ＰＣＲ扩增和直接测序方法，分析致癌物甲基苄基亚硝胺（ＮＭＢｚＡ）对猴食管上皮细胞中癌基因Ｈａ－ｒａｓ和多种抑癌基因ｐ５３、Ｒｂ、ＡＰＣ的作用。结果未发现Ｈａ－ｒａｓ第１２密码子突变；给猴灌喂食管上皮ＮＭＢｚＡ２４... 详细信息

应用ＰＣＲ扩增和直接测序方法，分析致癌物甲基苄基亚硝胺（ＮＭＢｚＡ）对猴食管上皮细胞中癌基因Ｈａ－ｒａｓ和多种抑癌基因ｐ５３、Ｒｂ、ＡＰＣ的作用。结果未发现Ｈａ－ｒａｓ第１２密码子突变；给猴灌喂食管上皮ＮＭＢｚＡ２４和４８ｈ，食管上皮有ｐ５３基因突变指纹；灌喂ＮＭＢｚＡ４８ｈ，存在Ｒｂ与ＡＰＣ基因突变指纹；灌喂ＮＭＢｚＡ第５天的猴食管上皮细胞中，ｐ５３、Ｒｂ、ＡＰＣ基因突变指纹消失。实验证实：化学致癌物ＮＭＢｚＡ能引起多种抑癌基因改变，ＮＭＢｚＡ对细胞中抑癌基因的遗传性突变影响可能需要多次作用。这些基因突变指纹与过去报道的部分原发性食管癌中的ｐ５３、Ｒｂ和ＡＰＣＮＭＢｚＡ突变相同。

关键词：癌基因抑癌基因致癌物聚合酶链反应食管肿瘤

食管癌Rb基因启动子甲基化状态和甲基苄基亚硝胺对其影响的研究

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中华肿瘤杂志 1998年第6期20卷 412-414页

作者：李华川陆士新冯骆梁苑苑中国医学科学院中国协和医科大学肿瘤研究所

目的分析Ｒｂ基因表达异常原因，研究Ｒｂ基因启动子甲基化状态和甲基苄基亚硝胺（ＮＭＢｚＡ）对Ｒｂ基因启动子的影响。方法采用限制性核酸内切酶酶切和ＰＣＲ扩增方法。结果３３．３％的食管癌组织Ｒｂ基因启动子存在ＭｓｐⅠ型高甲... 详细信息

目的分析Ｒｂ基因表达异常原因，研究Ｒｂ基因启动子甲基化状态和甲基苄基亚硝胺（ＮＭＢｚＡ）对Ｒｂ基因启动子的影响。方法采用限制性核酸内切酶酶切和ＰＣＲ扩增方法。结果３３．３％的食管癌组织Ｒｂ基因启动子存在ＭｓｐⅠ型高甲基化，４０．０％的食管癌组织Ｒｂ基因启动子存在ＨｐａⅡ型高甲基化。１例标本存在ＭｓｐⅠ和ＨｐａⅡ两种类型的高甲基化。恒河猴１次灌喂３０ｍｇ／ｋｇＮＭＢｚＡ后１，２，３天，其食管上皮Ｒｂ基因启动子ＨｐａⅡ、ＭｓｐⅠ类型甲基化逐渐增强；第５天其Ｒｂ基因启动子ＨｐａⅡ、ＭｓｐⅠ类型甲基化程度明显下降。结论食管癌组织中Ｒｂ基因表达异常可能与启动子高甲基化有关，ＮＭＢｚＡ通过启动子甲基化对Ｒｂ基因调控产生影响。

关键词：食管肿瘤 Rb基因启动子甲基化聚合酶链反应

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从人食管癌细胞系分离分化基因的新方法

中国科学（B辑） 1991年第10期21卷 1059-1067页

作者：冯骆王秀琴傅明王志华田园蔡岩吴旻分子肿瘤学国家重点实验室中国医学科学院肿瘤研究所北京100021

本文报道一种从癌细胞中分离分化基因(抑癌基因)的全过程。用维甲酸(RA)处理食管癌细胞EC8712可使后者发生终末分化和衰老。从对数生长期的和RA处理5天后的EC8712各构建一cDNA文库,命名为Lib8712和Lib8712RA,后者为可在哺乳动物细胞内... 详细信息

本文报道一种从癌细胞中分离分化基因(抑癌基因)的全过程。用维甲酸(RA)处理食管癌细胞EC8712可使后者发生终末分化和衰老。从对数生长期的和RA处理5天后的EC8712各构建一cDNA文库,命名为Lib8712和Lib8712RA,后者为可在哺乳动物细胞内表达的质粒。用RA处理5天的EC8712制备cDNA探针,先同Lib8712的质粒DNA进行反复杂交,以除去探针中与之共有的DNA序列,将余下的、富集了的探针(代表RA激活的基因)同Lib8712RA进行集落杂交,以钓取其中的RA激活的序列。已获得若干个杂交阳性克隆,Northern分析表明,它们是经RA诱导后特异表达的基因。

关键词：分化基因抑癌基因维甲酸食管癌

肿瘤分子遗传学研究新进展——第15届国际肿瘤大会概况

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国外医学情报 1991年第10期12卷 1-3页

作者：冯骆中国医学科学院肿瘤研究所细胞生物室

由世界抗癌联盟(UICC)以及德国肿瘤学协会主办的第15届国际肿瘤大会于1990年8月16至22日在德国汉堡召开。引起与会者普遍注意的是肿瘤分子遗传学研究在近4～5年中取得的新进展。一、人类肿瘤的基因分析在这次大会上对肿瘤遗传易感性进... 详细信息

由世界抗癌联盟(UICC)以及德国肿瘤学协会主办的第15届国际肿瘤大会于1990年8月16至22日在德国汉堡召开。引起与会者普遍注意的是肿瘤分子遗传学研究在近4～5年中取得的新进展。一、人类肿瘤的基因分析在这次大会上对肿瘤遗传易感性进行了专题讨论,英国剑桥大学的Ponder教授提出了新见解。他认为,一些带有遗传性肿瘤家史的人具有肿瘤易感性。用基因分析的方法,即用限制性内切酶的酶切片段长度多态性(RFLPs)技术,找出某些肿瘤的易感基因。

关键词：肿瘤分子遗传学肿瘤细胞染色体肿瘤易感基因基因分析肿瘤基因肿瘤遗传易感性人类肿瘤抗癌基因酶切片段长度多态性