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变应性鼻炎患者外周血白介素4和13的检测

中华耳鼻咽喉头颈外科杂志 2007年第3期42卷 227-228页

作者：陈靖陈冬李添应林志斌冯炼强广州市番禺区人民医院耳鼻咽喉科 511400

Th1／Th2平衡和复杂的细胞因子网络学说是变应性鼻炎发病机制较新的观点。虽然IL4被认为是生成Th2型细胞的主要介质之一，但IL-13也日益受到重视。有研究表明，IL4缺陷的转基因小鼠也能产生IgE反应，而IL-4／IL-13都缺陷的转基因小鼠不... 详细信息

Th1／Th2平衡和复杂的细胞因子网络学说是变应性鼻炎发病机制较新的观点。虽然IL4被认为是生成Th2型细胞的主要介质之一，但IL-13也日益受到重视。有研究表明，IL4缺陷的转基因小鼠也能产生IgE反应，而IL-4／IL-13都缺陷的转基因小鼠不能产生IgE反应。IL—13缺陷小鼠的T细胞不能产生Th2型细胞因子。阻断IL-13可显著抑制抗原导致的气道高反应。本研究通过采用流式细胞仪检测变应性鼻炎患者细胞内IL4、IL-13、干扰素-γ（IFN-γ）的表达，以及酶联免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）检测血清中IL4、IL-13含量，以探讨变应性鼻炎的发病机制。

关键词：变应性鼻炎患者流式细胞仪检测白介素4 Th2型细胞因子外周血 Th1/Th2平衡 IL-13 转基因小鼠

肾性高血压及原发性高血压患者血内皮素及一氧化氮水平变化的研究

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中山大学学报（医学科学版） 2004年第B6期25卷 169-171页

作者：金莉子叶芬冯炼强刘红中山大学附属第五医院心内科广东珠海519000 中山大学基础医学院免疫学教研室广东广州510080

[目的]本实验旨在探讨血内皮素在肾性高血压中原发性高血压患者中水平变化及其临床意义。[方法]检测30 例肾脏高血压及30例原发性高血压患者中血浆内皮素(PET-1)、血尿素氮(BUN)、血肌酐清除率(Ccr)、一氧化氮(NO),并与 30例正常体检者... 详细信息

[目的]本实验旨在探讨血内皮素在肾性高血压中原发性高血压患者中水平变化及其临床意义。[方法]检测30 例肾脏高血压及30例原发性高血压患者中血浆内皮素(PET-1)、血尿素氮(BUN)、血肌酐清除率(Ccr)、一氧化氮(NO),并与 30例正常体检者进行对比。[结果]肾性高血压患者及原发性高血压患者系PET-1水平均明显高于对照组(P<0.01),NO水平明显低于对照组(P<0.01),而肾性高血压组PET-1(P<0.05)与BUN、SBP呈正相关,而NO与BUN、SBP呈负相关,与 Ccr呈正相关。[结论]PET-1,NO参与肾性高血压和肾脏疾病的病变发展过程。

关键词：肾性高血压原发性高血压患者血内皮素 BUN 对照组 PET 一氧化氮研究中水水平

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人白细胞介素17基因的克隆及序列测定

中国免疫学杂志 1998年第1期14卷 15-17页

作者：杨斌王斌冯炼强任秀容李树浓中山医科大学免疫学教研室中山医科大学达安基因诊断中心中山医科大学病理生理教研室

应用逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术，参照国外发表的人白细胞介素１７（ｈＩＬ－１７）ｃＤＮＡ全基因序列，利用自行设计合成的１对引物，从ＰＨＡ活化的正常人外周血单个核细胞中，扩增出ｈＩＬ－１７ｃＤＮＡ基因，并定向... 详细信息

应用逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术，参照国外发表的人白细胞介素１７（ｈＩＬ－１７）ｃＤＮＡ全基因序列，利用自行设计合成的１对引物，从ＰＨＡ活化的正常人外周血单个核细胞中，扩增出ｈＩＬ－１７ｃＤＮＡ基因，并定向插入ｐＵＣ１８载体，构建了ｈＩＬ－１７基因重组体，经ＤＮＡ序列测定，确认为ｈＩＬ－１７基因，这为今后进一步研究ｈＩＬ－１７的生物学功能提供可靠的物质基础。

关键词：白细胞介素17 分子克隆序列测定

胚胎干细胞体外诱导分化为CD34^+造血前体细胞

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中山医科大学学报 2002年第B9期23卷 1-2,F0002页

作者：周其锋何志旭冯炼强黄绍良李树浓中山大学免疫学教研室广东广州510089 中山大学孙逸仙纪念医院儿科广东广州510089 中山大学病理生理学教研室广东广州510089

【目的】胚胎干细胞 (embryonicstemcell,ES)体外诱导分化 ,制备CD34+ 造血前体细胞。【方法】胚胎干细胞在含甲基纤维素培养液中分化形成胚胎体 (embryoidbody ,EB) ,然后加入造血刺激因子诱导产生CD34+ 造血前体细胞 ,间接免疫荧光及... 详细信息

【目的】胚胎干细胞 (embryonicstemcell,ES)体外诱导分化 ,制备CD34+ 造血前体细胞。【方法】胚胎干细胞在含甲基纤维素培养液中分化形成胚胎体 (embryoidbody ,EB) ,然后加入造血刺激因子诱导产生CD34+ 造血前体细胞 ,间接免疫荧光及流式细胞仪检测分化结果。【结果】胚胎干细胞分化第 9～ 15天均有CD34+ 细胞 ,第 13天比例最高 ,可达 17 36 %。【结论】胚胎干细胞分化成胚胎体 ,在造血刺激因子的存在下 ,可大量获得CD34+ 造血前体细胞。

关键词：胚胎细胞分化造血干细胞

系统性红斑狼疮患者骨髓基质细胞对淋巴细胞增殖的影响

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新医学 2006年第3期37卷 173-175页

作者：邹外一尹培达蓝惠霞罗绍凯冯炼强彭辉中山大学附属第一医院血液科 510080 中山大学附属第一医院风湿科 510080 中山大学北校区免疫学教研室 510089

目的：探讨SLE患者骨髓基质细胞对淋巴细胞增殖的影响。方法：初诊住院的SLE患者30例为SLE组，取其髂前上棘或髂后上棘的骨髓；心胸外科非血液病非自身免疫病患者15例为正常对照组，取其手术切除的肋骨骨髓。采用四甲基偶氮唑盐比色法... 详细信息

目的：探讨SLE患者骨髓基质细胞对淋巴细胞增殖的影响。方法：初诊住院的SLE患者30例为SLE组，取其髂前上棘或髂后上棘的骨髓；心胸外科非血液病非自身免疫病患者15例为正常对照组，取其手术切除的肋骨骨髓。采用四甲基偶氮唑盐比色法．测定并比较两组骨髓基质细胞及其上清液对外周血淋巴细胞增殖反应的影响。结果：空白对照的外周血淋巴细胞增殖吸光度值为0．61±0．11。而正常对照组及SLE组的骨髓基质细胞培养上清液均对外周血淋巴细胞增殖有抑制作用，吸光度值分别为0．36±0．09和0．46±0．11；两组骨髓基质细胞亦对外周血淋巴细胞增殖有抑制作用，吸光度值分别为0．50±0．10和0．57±0．11，且两组的抑制作用有差异（P〈0．05～0．01）；与SLE组的培养上清液比较，SLE组的培养上清液加抗转化生长因子．B（transforming growth factor-β，TGF-β）单克隆抗体（单抗）的抑制作用明显减弱（P〈0．01）；而培养上清液加抗巨噬细胞炎症蛋白-1（macrophage inflammation protein-1，MIP-1）单抗、上清液加抗干扰素-γ（interferon-γ，IFN-γ）单抗，其抑制作用明显增强（P〈0.01）；上清液加抗白介素-6的抑制作用变化不大。结论：SLE患者骨髓基质细胞及其培养上清液均对淋巴细胞的增殖有抑制作用，这种抑制作用比正常人弱；另外，当在SLE患者骨髓基质细胞培养上清液中加入细胞因子MIP-1、IFN-β，TGF-β的单抗后，这种抑制作用会出现相应的变化，说明SLE患者的骨髓基质细胞存在缺陷，由于这种缺陷导致的细胞因子分泌异常是SLE患者免疫功能异常的重要原因之一，提示骨髓造血微环境与SLE的发生、发展有着密切的关系。

关键词：系统性红斑狼疮骨髓基质细胞细胞因子淋巴细胞

抗bFGF McAb制备、鉴定及轻链可变区基因克隆和序列分析

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中国免疫学杂志 2000年第7期16卷 353-355页

作者：崔蕴霞王一飞林剑任哲银巍宁波冯炼强中山医科大学分子医学中心广州510089 暨南大学生物工程研究所

目的：以重组人碱性成纤包生长因子为抗原免疫小鼠，建立多株稳定分泌ｂＦＧＦ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞。半对ｂＦＧＦ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）可变区基因进行扩增及序列分析。方法：采用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法和免疫沉... 详细信息

目的：以重组人碱性成纤包生长因子为抗原免疫小鼠，建立多株稳定分泌ｂＦＧＦ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞。半对ｂＦＧＦ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）可变区基因进行扩增及序列分析。方法：采用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法和免疫沉淀法对抗体特异性和ｌｇ类型进行鉴定，同时，应用分子生物学技术，对Ｖｋ基因的ＤＮＡ片段进行克隆，并对４ａ２Ｖｋ基因进行序列测定。结果：ｂＦＧＦ单克隆抗体可特异性结合人重组ｂＦＧＦ抗原。

关键词：单克隆抗体基因克隆 DNA序列分析 bFGF抗体

流体剪应力调节内皮化小径聚氨酯人工血管抗血栓特性的体外研究

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生物医学工程学杂志 2008年第3期25卷 621-625页

作者：杨震陶军王洁梅涂昌冯炼强潘仕荣马虹中山大学附属第一医院高血压血管病科广州510080 中山大学免疫学教研室广州510080 中山大学心血管研究所广州510080

研究不同流体剪应力条件下,内皮化小径聚氨酯人工血管分泌一氧化氮(Nitrogen monoxide,NO)和前列环素(Prostaglandin I2,PGI2)水平的变化,从而为剪应力处理调节内皮化小径聚氨酯人工血管抗血栓特性提供实验依据。分离健康成人外周血的... 详细信息

研究不同流体剪应力条件下,内皮化小径聚氨酯人工血管分泌一氧化氮(Nitrogen monoxide,NO)和前列环素(Prostaglandin I2,PGI2)水平的变化,从而为剪应力处理调节内皮化小径聚氨酯人工血管抗血栓特性提供实验依据。分离健康成人外周血的单个核细胞并诱导分化成内皮祖细胞,通过相差显微镜和免疫荧光标记等方法对诱导分化后的细胞进行形态学观察和鉴定。种植内皮祖细胞到小径聚氨酯人工血管表面后,将内皮化小径聚氨酯人工血管分为静态组、低剪应力组(5dynes/cm2)、中剪应力组(15dynes/cm2)和高剪应力组(25dynes/cm2)4个不同处理组,之后用硝酸还原酶法和酶联免疫吸附法测定不同时间点培养液中NO和6-keto-PGF1α(6-keto-prostaglandin F1α,6-keto-PGF1α)的水平。外周血单个核细胞分化成为内皮祖细胞,倒置荧光显微镜下呈典型的"纺锤样"梭形细胞,ac-LDL吞噬及lectin抗体荧光标记双阳性,FLK-1和vWF免疫荧光抗体染色均为阳性。流体剪应力增加种植人工血管表面内皮祖细胞NO和6-keto-PGF1α的产生,并且这种作用与剪应力大小呈正相关。因此,提高流体剪应力明显促进内皮祖细胞NO和PGI2等抗血栓物质的分泌,提示流体剪应力可改善内皮化小径聚氨酯人工血管抗血栓特性。

关键词：内皮祖细胞人工血管剪应力前列环素一氧化氮

促进胚胎干细胞来源造血干/祖细胞移植后细胞免疫功能恢复

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中国病理生理杂志 2003年第10期19卷 1337-1340,T003页

作者：周其锋彭延文冯炼强张秀明李艳李树浓中山大学中山医学院免疫学教研室广东广州510089 中山大学中山医学院病理生理学教研室广东广州510089

目的 :体外诱导胚胎干细胞分化为造血干 /祖细胞过程中 ,增加成熟T淋巴细胞的含量 ,以促进其重建致死量照射小鼠的造血功能后免疫功能的早期重建。方法 :胚胎干细胞在含甲基纤维素的培养基中自由分化形成胚胎体 ,分化第 6d添加造血生长... 详细信息

目的 :体外诱导胚胎干细胞分化为造血干 /祖细胞过程中 ,增加成熟T淋巴细胞的含量 ,以促进其重建致死量照射小鼠的造血功能后免疫功能的早期重建。方法 :胚胎干细胞在含甲基纤维素的培养基中自由分化形成胚胎体 ,分化第 6d添加造血生长因子 ,同时添加胸腺肽 ,流式细胞仪检测分化细胞中CD3 4 + 的造血干 /祖细胞和CD+ 3 的成熟T淋巴细胞含量 ,最后将分化细胞注射入致死量照射小鼠体内 ,观察 6 0d ,以移植物抗宿主病 (GVHD)发病率作为T淋巴细胞免疫功能的指标 ,用PCR检测Sry反映移植细胞在宿主体内的存活。结果 :分化第 13d ,未加胸腺肽 ,CD+ 3 的成熟T淋巴细胞含量仅 10 5 2 % ,重建造血后无GVHD发生 ;添加胸腺肽 ,CD+ 3 的成熟T淋巴细胞含量升高达 2 2 93% ,重建造血后GVHD发病率 10 0 %。结论 :胚胎干细胞体外分化为造血干 /祖细胞过程中 ,添加胸腺肽 ,能增加CD+ 3 的成熟T淋巴细胞含量 ,体内重建造血后细胞免疫功能恢复较快。

关键词：胚胎干细胞造血干细胞细胞因子类 T淋巴细胞

小径聚氨酯人工血管内皮化种子细胞的体外诱导分化及种植实验(英文)

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中国临床康复 2006年第29期10卷 184-186,F0003页

作者：杨震陶军涂昌冯炼强徐明国潘仕荣中山大学附属第一医院心血管医学部广东省广州市510080 中山大学免疫学教研室广东省广州市510080

背景:目前,小径人工血管移植后由于缺乏内皮细胞衬里和抗血栓特性,长期通畅率低。有研究尝试用成熟内皮细胞种植人工血管以增强其抗血栓能力,以提高长期通畅率,但由于种子细胞和支架材料存在的缺陷,其效果并不令人满意。因此,临床上亟... 详细信息

背景:目前,小径人工血管移植后由于缺乏内皮细胞衬里和抗血栓特性,长期通畅率低。有研究尝试用成熟内皮细胞种植人工血管以增强其抗血栓能力,以提高长期通畅率,但由于种子细胞和支架材料存在的缺陷,其效果并不令人满意。因此,临床上亟需寻找合适的种子细胞及血管支架材料,改善小径人工血管移植长期通畅率低这一现状。目的:探讨体外诱导骨髓单个核细胞分化成为内皮祖细胞的可行性,并种植聚氨酯小径人工血管表面,为小径聚氨酯人工血管内皮化提供合适的种子细胞。设计:观察性实验。单位:中山大学附属第一医院心血管医学部,免疫学教研室。材料:实验于2004-09/2005-05在中山大学附属第一医院完成。健康志愿者成人骨髓(n=7)约10mL。方法:收集健康成人骨髓单个核细胞,置于纤维连接蛋白预衬的DMEM培养基中,用血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子加以诱导,通过荧光显微镜和免疫组化分析等方法观察和鉴定诱导后的细胞。将诱导分化的内皮祖细胞种植到聚氨酯小径人工血管表面,用扫描电镜观察。主要观察指标:①细胞形态学变化。②免疫组化VWF和CD34抗体染色结果。③聚氨酯小径人工血管表面内皮祖细胞的黏附生长状态。结果:①在血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子等诱导因子存在的条件下,骨髓单个核细胞分化成为内皮祖细胞,倒置荧光显微镜下呈典形的“纺锤样”梭形细胞,单层细胞贴壁生长融合时呈铺路石样排列。②免疫组化示VWF和CD34抗体染色阳性。②扫描电镜下,未种植细胞的聚氨酯小径人工血管表面呈典型的多孔蜂窝状结构,孔径大小比较适合内皮祖细胞爬行。种植细胞后,聚氨酯小径人工血管表面有大量的内皮祖细胞黏附、爬行及铺展生长,有时可见内皮祖细胞长入蜂窝状孔径内。结论:在体外能将骨髓单个核细胞诱导分化成为内皮祖细胞,而诱导分化的内皮祖细胞在小径聚氨酯人工血管上黏附生长状态良好,提示体外诱导骨髓单个核细胞分化为内皮祖细胞可作为小径聚氨酯人工血管内皮化的种子细胞。

关键词：聚氨基甲酸酯类人工血管干细胞内皮血管