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雌激素对老年C57BL/6J小鼠耳蜗螺旋神经节细胞凋亡的影响

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中国应用生理学杂志 2020年第6期36卷 529-533页

作者：陈龙杨玉琪冯子奕李雪蕊韩子伟马克涛司军强李丽石河子大学医学院生理教研室新疆石河子832002 新疆军区总医院第951医院新疆库尔勒841000 嘉兴学院医学院浙江嘉兴314000 中国人民解放军69340部队新疆阿勒泰836100

目的:观察雌激素对于老年C57BL/6J小鼠耳蜗螺旋神经节细胞凋亡的影响,并探讨雌激素对老年性耳聋保护作用的可能机制。方法:将40只C57BL/6J雌鼠分为以下4组(10只/组):3 m组(3月龄组),12 m组(12月假手术组);12 m OVX组(12月去卵巢组),在9... 详细信息

目的:观察雌激素对于老年C57BL/6J小鼠耳蜗螺旋神经节细胞凋亡的影响,并探讨雌激素对老年性耳聋保护作用的可能机制。方法:将40只C57BL/6J雌鼠分为以下4组(10只/组):3 m组(3月龄组),12 m组(12月假手术组);12 m OVX组(12月去卵巢组),在9月龄行双侧卵巢切除术,正常饲养至12月龄;12 m OVX+E2组(雌激素干预组)在9月龄行双侧卵巢切除术,经过1月洗脱期后,给予皮下注射雌激素100μg/(kg·d),持续2月至12月龄,其余各组小鼠正常喂养。至12 m OVX+E2组小鼠给药结束后,尾静脉采血,酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组小鼠血清雌激素水平;听性脑干反应(ABR)检测各组小鼠听力阈值变化;用2%戊巴比妥钠麻醉小鼠,断颈后取双侧耳蜗,石蜡包埋切片,苏木精-伊红HE染色观察各组小鼠耳蜗螺旋神经节形态学变化;TUNEL染色观察各组小鼠耳蜗螺旋神经节神经元凋亡情况;取耳蜗螺旋神经节,应用实时荧光定量PCR(QRT-PCR)检测各组小鼠耳蜗螺旋神经节凋亡蛋白Caspase-3、Bax、Bcl-2 mRNA表达水平。结果:12 m组与3 m组相比,小鼠听力阈值升高(P<0.01),耳蜗螺旋神经节细胞出现缺失严重及异常凋亡(P<0.01);12 m OVX组小鼠听力阈值高于12 m组(P<0.01),且螺旋神经节细胞缺失加重,细胞凋亡增多(P<0.01),凋亡蛋白Caspase-3、Bax mRNA水平升高(P<0.01),抗凋亡蛋白Bcl-2 mRNA水平降低(P<0.01);外源性给予雌激素12 m OVX+E2组,较12 m OVX组,听力阈值降低(P<0.01),细胞凋亡减少,凋亡蛋白Caspase-3、Bax mRNA水平降低(P<0.01),抗凋亡蛋白Bcl-2 mRNA水平升高(P<0.01)。结论:雌激素可抑制老年C57BL/6J小鼠耳蜗螺旋神经节细胞凋亡,从而实现对老年性耳聋的保护作用。

关键词：老年性耳聋小鼠耳蜗螺旋神经节雌激素凋亡

G蛋白偶联雌激素受体通过改善肾叶间动脉舒缩活动减轻肾脏缺血再灌注损伤

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中华肾脏病杂志 2018年第11期34卷 838-844页

作者：常越辰韩子伟周颖张洋冯子奕马克涛张志琴李丽司军强新疆石河子大学医学院基础医学系 832000 浙江金华职业技术学院医学院基础医学机能课程组 321017

目的探讨G蛋白偶联雌激素受体（G protein—coupled estrogen receptor，GPER）对肾叶间动脉舒缩功能的影响，及其减轻大鼠肾脏缺血再灌注损伤的作用。方法雌性去卵巢大鼠被分为对照组；缺血再灌注损伤（IRI）组；GPER特异性激动剂（G1... 详细信息

目的探讨G蛋白偶联雌激素受体（G protein—coupled estrogen receptor，GPER）对肾叶间动脉舒缩功能的影响，及其减轻大鼠肾脏缺血再灌注损伤的作用。方法雌性去卵巢大鼠被分为对照组；缺血再灌注损伤（IRI）组；GPER特异性激动剂（G1）干预组；GPER特异性阻断剂＋GPER特异性激动剂（G15＋G1）干预组。采用组织病理学检查（HE染色）、肾功能检测及Paller评分等方法鉴定模型成功与否及肾脏损伤程度；离体微血管压力直径测定仪检测各组大鼠肾叶间动脉舒缩活动情况；免疫荧光技术观察GPER在肾叶间动脉上的表达；Western印迹法检测各组大鼠肾叶间动脉GPER蛋白表达量；硝酸还原酶法检测血清NO含量。结果与IRI组比较，G1干预组大鼠血BUN、Scr水平及Paller评分明显降低（均P〈0．05）；肾叶间动脉收缩率明显升高[（40．76±1．57）％比（29．78±1.87）％，P〈0.05]。免疫荧光结果冠示，GPER在肾叶间动脉平滑肌细胞及内皮细胞中表达，且IRI组较对照组表达增多；G15＋G1干预组较G1干预组表达降低（均P〈0．05）。与IRI组比较，G1干预组大鼠血清NO含量显著上升（均P〈0．05）。结论肾脏缺血再灌注损伤过程中GPER可能通过提高NO含量，从而调节肾叶问动脉的舒缩活动，减轻肾缺血再灌注损伤。

关键词：再灌注损伤受体,雌激素一氧化氮肾叶间动脉

T16Ainh-A01对耳蜗血管纹毛细血管内皮细胞凋亡及衰老的影响

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中国应用生理学杂志 2020年第5期36卷 385-389页

作者：冯子奕李雪蕊陈龙周颖常越辰马克涛司军强李丽石河子大学医学院生理教研室石河子832002 武汉市中心医院武汉430000 石河子大学医学院教学实验中心石河子832002 嘉兴学院医学院嘉兴314000

目的:原代培养豚鼠耳蜗血管纹毛细血管内皮细胞(ECs),探讨跨膜蛋白16A(TMEM16A)在耳蜗血管纹毛细血管ECs衰老过程中的变化及对耳蜗血管纹毛细血管ECs凋亡及衰老的影响。方法:原代培养耳蜗血管纹毛细血管ECs,细胞传代构建衰老模型并根据C... 详细信息

目的:原代培养豚鼠耳蜗血管纹毛细血管内皮细胞(ECs),探讨跨膜蛋白16A(TMEM16A)在耳蜗血管纹毛细血管ECs衰老过程中的变化及对耳蜗血管纹毛细血管ECs凋亡及衰老的影响。方法:原代培养耳蜗血管纹毛细血管ECs,细胞传代构建衰老模型并根据CCK-8及β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色评估细胞衰老程度,衰老细胞被随机分为衰老组(P12)、溶剂组(P12+DMSO)、T16Ainh-A01组(P12+T16Ainh-A01),免疫荧光及Western blot检测TMEM16A在ECs上的表达及分布,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blot检测各组Bax、Bcl-2、cleaved casepase-3蛋白表达水平。结果:原代培养的耳蜗血管纹毛细血管ECs阳性率在95%以上,并确定第12代耳蜗血管纹毛细血管ECs为衰老组,与年轻组ECs相比,衰老组ECs上TMEM16A荧光及蛋白表达显著增强(P<0.05),细胞凋亡率升高,衰老组给予T16Ainh-A01干预24 h后,Bax、cleaved casepase-3的蛋白表达下调(P<0.01),Bcl-2的蛋白表达上调(P<0.05),凋亡率下降且SA-β-gal阳性细胞率明显下降(P<0.01)。结论:衰老耳蜗血管纹毛细血管ECs凋亡增多且TMEM16A表达增加,TMEM16A特异性阻断剂T16Ainh-A01可以降低耳蜗血管纹毛细血管ECs的凋亡和衰老程度,提示TMEM16A可能参与耳蜗血管纹毛细血管ECs的凋亡和衰老过程。

关键词： TMEM16A 衰老凋亡耳蜗血管纹老年性耳聋

TMEM16A对衰老耳蜗血管纹周细胞凋亡的作用

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中华耳科学杂志 2021年第1期19卷 113-119页

作者：李雪蕊冯子奕陈龙徐少然邓双马克涛司军强李丽石河子大学医学院生理学教研室/新疆地方与民族高发病教育部重点实验室石河子832000 嘉兴学院医学院生理学教研室嘉兴314000

目的原代培养豚鼠耳蜗血管纹毛细血管周细胞(PCs),探讨TMEM16A在耳蜗血管纹PCs上的表达变化及其对衰老耳蜗血管纹PCs凋亡的影响。方法原代培养耳蜗血管纹PCs并鉴定;运用β-半乳糖苷酶染色确定细胞衰老模型;全细胞膜片钳技术记录PCs上Ca... 详细信息

目的原代培养豚鼠耳蜗血管纹毛细血管周细胞(PCs),探讨TMEM16A在耳蜗血管纹PCs上的表达变化及其对衰老耳蜗血管纹PCs凋亡的影响。方法原代培养耳蜗血管纹PCs并鉴定;运用β-半乳糖苷酶染色确定细胞衰老模型;全细胞膜片钳技术记录PCs上CaCCs的电流变化;免疫荧光检测耳蜗血管纹PCs上TMEM16A的表达变化;Western Blot技术检测TMEM16A和凋亡相关蛋白Caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白水平;流式细胞术检测各组细胞凋亡率。结果原代培养的耳蜗血管纹PCs阳性率在95%以上,确定第13代耳蜗血管纹PCs为衰老组。全细胞膜片钳记录到衰老组较年轻组PCs上CaCCs电流密度增大。与年轻组PCs相比,衰老组周细胞上TMEM16A、Caspase-3、Bax表达升高,Bcl-2表达下降,细胞凋亡率明显升高。衰老组给予30μmol/L T16Ainh-A01干预24 h后,Caspase-3、Bax表达下降,Bcl-2表达升高,细胞凋亡率明显下降。结论衰老的耳蜗血管纹PCs凋亡增多且TMEM16A表达增加,TMEM16A特异性阻断剂T16Ainh-A01可以减少衰老耳蜗血管纹PCs的凋亡。提示TMEM16A可能参与衰老耳蜗血管纹PCs的凋亡。

关键词：血管纹周细胞 TMEM16A 凋亡原代培养膜片钳

新疆地区230例苯丙氨酸羟化酶缺乏症患儿基因突变分析

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国际检验医学杂志 2024年第6期45卷 698-705,710页

作者：刘昱彤冯子奕薛淑媛新疆医科大学公共卫生学院新疆乌鲁木齐830011 乌鲁木齐市妇幼保健院产前诊断中心新疆乌鲁木齐830000 西北大学生命科学学院陕西西安710069

目的探讨新疆地区苯丙氨酸羟化酶(PAH)缺乏症患儿基因变异频率和分布特征。方法将2015年1月1日至2023年2月28日在乌鲁木齐市妇幼保健院确诊的230例PAH缺乏症患儿纳入研究,分析PAH基因变异情况以及比较不同表型患儿的PAH基因变异位点。... 详细信息

目的探讨新疆地区苯丙氨酸羟化酶(PAH)缺乏症患儿基因变异频率和分布特征。方法将2015年1月1日至2023年2月28日在乌鲁木齐市妇幼保健院确诊的230例PAH缺乏症患儿纳入研究,分析PAH基因变异情况以及比较不同表型患儿的PAH基因变异位点。结果新疆地区230例PAH缺乏症患儿共检出441个PAH基因变异位点,总检出率为95.87%。其中,227例患儿检测到2个变异位点,2例患儿仅检测到1个变异位点,1例患儿检测到3个变异位点;复合杂合变异217例,纯合变异10例。高频变异位点为c.158G>A[23.39%(102/441)]、c.728G>A[11.70%(51/441)]、c.688G>A[5.05%(22/441)]、c.721C>T[3.90%(17/441)]、c.611A>G[3.67%(16/441)]、c.1238G>C[3.21%(14/441)]。经典型PKU的高频变异位点为c.728G>A、c.331C>T和c.782G>A;轻度PKU的高频变异位点为c.721C>T、c.1068C>A和c.1301C>A;轻度HPA患儿的高频变异位点为c.158G>A和c.688G>A。以上三种表型之间,高频突变的频率比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论新疆PAH缺乏症患儿以轻度HPA为主,明确了新疆地区PAH基因高频变异位点,在三种不同表型中均观察到特异性PAH基因变异位点,可为产前诊断及临床遗传咨询提供理论依据。

关键词：高苯丙氨酸血症苯丙酮尿症基因型表型遗传代谢病

一种简单易行的小鼠尾静脉注射方法和验证方法

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农垦医学 2019年第1期41卷 89-91页

作者：胡娜邓诗瑜许珍珍冯子奕王洋石河子大学医学院医学教学实验中心新疆石河子832002 石河子大学医学院基础医学系新疆石河子832002

小鼠是生物医学科研研究中最常用的实验动物之一,小鼠尾静脉注射是实验中最常用的注射方法。小鼠尾静脉注射要求速度快且准确率高,由于小鼠尾静脉较细,新手穿刺成功率较低,本文着重介绍一种利用自制的小鼠固定装置、恒温水浴锅对小鼠进... 详细信息

小鼠是生物医学科研研究中最常用的实验动物之一,小鼠尾静脉注射是实验中最常用的注射方法。小鼠尾静脉注射要求速度快且准确率高,由于小鼠尾静脉较细,新手穿刺成功率较低,本文着重介绍一种利用自制的小鼠固定装置、恒温水浴锅对小鼠进行尾静脉注射,此方法为一种方便实用的小鼠尾静脉注射方法和注射成功的验证方法。

关键词：小鼠尾静脉注射台盼蓝离心管恒温水浴锅

新疆地区新生儿遗传代谢病串联质谱检测氨基酸和酰基肉碱正常值参考范围的确立

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中国优生与遗传杂志 2023年第8期31卷 1551-1556页

作者：朱静潆韩丽冯子奕杨苹靖文薛淑媛乌鲁木齐市妇幼保健院产前诊断中心新疆乌鲁木齐市830000

目的建立新疆地区新生儿遗传代谢病串联质谱筛查中氨基酸和酰基肉碱的正常值参考范围,为本地区新生儿遗传代谢病筛查结果的判读提供理论依据。方法利用串联质谱非衍生化法检测试剂盒,对新疆地区符合筛查标准的33776例新生儿进行多种... 详细信息

目的建立新疆地区新生儿遗传代谢病串联质谱筛查中氨基酸和酰基肉碱的正常值参考范围,为本地区新生儿遗传代谢病筛查结果的判读提供理论依据。方法利用串联质谱非衍生化法检测试剂盒,对新疆地区符合筛查标准的33776例新生儿进行多种遗传代谢病筛查。利用SPSS 23.0软件进行统计分析,采用百分位数法计算新疆地区11种氨基酸和31种酰基肉碱的正常值参考范围(P0.5~P99.5);并采用Wilcoxon秩和检验与上海新华医院的正常值参考范围比较差异。结果 33776例新生儿的串联质谱筛查结果数据呈非正态分布,采用百分位数法(P0.5~P99.5)得到新疆地区正常新生儿氨基酸及酰基肉碱串联质谱检测指标参考范围(μmol/L);新疆地区与上海新华医院参考范围的上下限进行比较,结果显示丙氨酸(ALA)、瓜氨酸(CIT)、甘氨酸(GLY)、亮氨酸(LEU)、鸟氨酸(ORN)、戊二酰基肉碱+3-羟基-己酰基肉碱(C5DC+C6OH)等检测指标的上下限均差异显著(P<0.05)。结论新疆地区串联质谱氨基酸、酰基肉碱正常值参考范围的建立,为筛查结果的分析提供了理论依据,并且随着数据的逐步积累,应定期对其进行相应的调整。

关键词：遗传代谢病串联质谱技术氨基酸酰基肉碱参考范围

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新疆地区新生儿遗传代谢病筛查诊断结果分析

中国优生与遗传杂志 2024年第8期32卷 1611-1617页

作者：朱静潆韩丽陈琪杨苹靖文冯子奕薛淑媛乌鲁木齐市妇幼保健院产前诊断中心新疆乌鲁木齐830000 新疆围产期疾病临床医学研究中心新疆乌鲁木齐830000 石河子大学医学院新疆石河子832000

目的将串联质谱联合二代测序技术应用于新疆地区新生儿遗传代谢病的诊断,并初步获得新疆地区新生儿遗传代谢病的发病率、疾病谱和遗传特征。方法采用串联质谱技术对2018年11月至2022年12月乌鲁木齐市妇幼保健院的64980例新生儿干血斑样... 详细信息

目的将串联质谱联合二代测序技术应用于新疆地区新生儿遗传代谢病的诊断,并初步获得新疆地区新生儿遗传代谢病的发病率、疾病谱和遗传特征。方法采用串联质谱技术对2018年11月至2022年12月乌鲁木齐市妇幼保健院的64980例新生儿干血斑样本进行遗传代谢病筛查,筛查阳性待确诊的婴儿需要进行进一步鉴别诊断,并采用高通量测序技术进行遗传学分析。结果初筛阳性的新生儿召回复查结果仍为阳性人数为232人,其中67人利用二代测序进一步诊断。最终42名新生儿和2名家系成员被确诊为遗传代谢病,总体的阳性预测值(PPV)18.10%。新疆地区新生儿遗传代谢病的总体发病率为1∶1547(42/64980)。氨基酸代谢异常、有机酸代谢异常和脂肪酸氧化障碍的发病率分别为1∶2320(28/64980)、1∶7220(9/64980)和1∶12996(5/64980)。苯丙酮尿症和甲基丙二酸血症是本地区最常见的IEM类型,占所有确诊新生儿的76%(32/42)。高苯丙氨酸血症PAH基因c.158G>A和c.688G>A点突变最为常见;发现了本地区甲基丙二酸血症MMACHC基因包括c.609G>A、c.567dupT、c.217C>T、c.445_446delTG四种突变类型;发现了MMUT基因c.729_730insT等的6种突变类型;发现了HPD、PCCB、IVD、GCDH、MCCC1、SLC22A5、ACADS这7种基因的16种突变类型。结论本研究联合串联质谱技术和二代测序技术,用于遗传代谢病的筛查与诊断,为新疆地区扩大新生儿筛查、基因筛查和IEM基因咨询的普及及应用提供了有效的临床指导与数据基础。

关键词：遗传代谢病串联质谱技术二代测序

乌鲁木齐市孕妇血清中氨基酸水平与子痫前期的相关性研究

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国际检验医学杂志 2024年第23期45卷 2883-2888页

作者：朱静潆陈琪迟晓兰杨苹靖文冯子奕薛淑媛乌鲁木齐市妇幼保健院产前诊断中心新疆乌鲁木齐830000 新疆围产期疾病临床医学研究中心新疆乌鲁木齐830000 石河子大学医学院新疆石河子832000

目的分析乌鲁木齐市子痫前期(PE)与正常妊娠孕妇血清中氨基酸水平的差异,并探讨差异有统计学意义的氨基酸与PE严重程度的相关性及其对PE患者的诊断价值。方法选取2021年6至2023年6月在乌鲁木齐市妇幼保健院就诊的49例正常妊娠孕妇作为... 详细信息

目的分析乌鲁木齐市子痫前期(PE)与正常妊娠孕妇血清中氨基酸水平的差异,并探讨差异有统计学意义的氨基酸与PE严重程度的相关性及其对PE患者的诊断价值。方法选取2021年6至2023年6月在乌鲁木齐市妇幼保健院就诊的49例正常妊娠孕妇作为对照组和55例PE孕妇作为PE组,PE组进一步分为轻度PE组(25例)和重度PE组(30例)。采用液相色谱-串联质谱技术测定孕妇血清中25种代谢物水平。采用Spearman相关性分析氨基酸与PE严重程度的相关性,采用Logistic回归分析对潜在混杂因素进行校正,采用受试者工作特征曲线分析差异有统计学意义的氨基酸对PE的诊断效能。结果PE组与对照组体质量指数(BMI)和分娩方式比较差异有统计学意义(P<0.05)。PE组血清组氨酸、苏氨酸、谷氨酰胺、乙醇胺、甲基组氨酸、犬尿氨酸水平高于对照组(P<0.05);重度PE组血清苏氨酸、谷氨酰胺、甲基组氨酸、犬尿氨酸水平高于轻度PE组和对照组(P<0.05);轻度PE组、重度PE组血清乙醇胺水平均高于对照组(P<0.05);重度PE组血清组氨酸水平高于对照组(P<0.05)。相关性分析结果显示,血清中谷氨酰胺、乙醇胺、甲基组氨酸、犬尿氨酸与PE的严重程度呈正相关(P<0.05);校正BMI后PE组和对照组苏氨酸、谷氨酰胺、甲基组氨酸水平差异有统计学意义(P<0.05);血清苏氨酸、谷氨酰胺和甲基组氨酸联合检测诊断PE的曲线下面积为0.734。结论血清苏氨酸、谷氨酰胺和甲基组氨酸水平与PE严重程度具有一定的相关性,且联合检测对PE具有较高的诊断价值。

关键词：子痫前期氨基酸液相色谱-串联质谱代谢组学