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香蕉束顶病毒海口分离物NSP基因的原核表达

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热带作物学报 2009年第9期30卷 1345-1350页

作者：冯团诚王健华刘志昕中国热带农业科学院热带生物技术研究所农业部热带作物生物技术重点开放实验室海南海口571101

应用PCR方法从感染香蕉束顶病毒的香蕉植株幼嫩假茎和叶片总DNA中克隆NSP(Nuclear shuttle protein)基因的编码区,并通过Gateway技术定向重组到原核表达载体pDESTTM-17中的6×His标签下游,经菌落PCR和测序鉴定结果表明,成功构建了原核... 详细信息

应用PCR方法从感染香蕉束顶病毒的香蕉植株幼嫩假茎和叶片总DNA中克隆NSP(Nuclear shuttle protein)基因的编码区,并通过Gateway技术定向重组到原核表达载体pDESTTM-17中的6×His标签下游,经菌落PCR和测序鉴定结果表明,成功构建了原核表达载体pDESTTM-17-NSP。阳性克隆转化***21(DE3),经IPTG诱导表达、SDS-PAGE分析和western blot检测,结果显示,融合蛋白以包涵体的形式稳定表达,分子量约为20ku,与预计值相符。通过诱导条件的优化,确定了最佳的融合蛋白表达条件为25℃、0.1mmol/LIPTG条件下诱导4h。从而为制备NSP多克隆抗体和进一步研究NSP的功能奠定了基础。

关键词：香蕉束顶病毒 Gateway重组技术 NSP 原核表达

香蕉束顶病毒海口分离物Rep基因的克隆、原核表达、抗血清制备及检测

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植物保护 2011年第4期37卷 38-43页

作者：余乃通冯团诚王健华张雨良刘志昕中国热带农业科学院热带生物技术研究所农业部热带作物生物技术重点开放实验室海口571101 海南大学环境与植物保护学院海口570228

[目的]对香蕉束顶病毒(Banana bunchy top virus,BBTV)海口分离物起始蛋白(replication initiation pro-teins,Rep)基因进行克隆、原核表达、抗血清制备,为BBTV有效的检测及分子流行病学等研究奠定基础。[方法]以海口地区染病香蕉幼嫩... 详细信息

[目的]对香蕉束顶病毒(Banana bunchy top virus,BBTV)海口分离物起始蛋白(replication initiation pro-teins,Rep)基因进行克隆、原核表达、抗血清制备,为BBTV有效的检测及分子流行病学等研究奠定基础。[方法]以海口地区染病香蕉幼嫩假茎和叶片的总DNA为模板,通过PCR技术克隆BBTV海口分离物的起始蛋白基因,连接到表达载体并进行大肠杆菌原核表达,制备高效价特异性抗血清。[结果]应用PCR方法从染毒香蕉幼嫩假茎和叶片总DNA中扩增复制rep基因,回收目的片段后经酶切,获得了含BBTV Rep基因的重组质粒pET32b-Rep。将重组质粒转化***21(DE3),经不同的时间、温度及IPTG浓度优化,12%SDS-PAGE电泳分析,在20℃、0.1 mmol/L IPTG条件诱导4h,最终获得大量的可溶性融合蛋白。将可溶性蛋白上清液经Ni2+-NTA亲和层析柱纯化,得到高纯度的融合蛋白。用纯化后的融合蛋白免疫家兔,获得了BBTV Rep蛋白抗血清。以融合蛋白做抗原,间接ELISA法测定抗血清效价大于125 000。以田间样品做抗原时,结果表明抗血清最佳工作浓度为1∶1 000。Western blot鉴定结果表明抗血清能与融合蛋白特异性结合。[结论]利用Rep基因制备的特异性抗血清在BBTV病毒粒体的组装机制研究及病毒病诊断上具有重要的应用价值。

关键词：香蕉束顶病毒 Rep基因原核表达抗血清制备

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虚拟细胞模型研究进展

生物信息学 2007年第2期5卷 90-93页

作者：冯团诚庄南生华南热带农业大学农学院海南儋州571737

虚拟细胞是20世纪末在国外兴起的一种利用现代信息技术和计算机模拟进行细胞研究的全新手段。主要是通过计算机建立人工细胞模型,模拟细胞内外环境,进行生物学的研究和探索。综述了国外主要的虚拟细胞模型的研究概况。

关键词：虚拟细胞生物信息学计算机模拟细胞模型

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海南胡椒中黄瓜花叶病毒分离物的分子鉴定

热带作物学报 2008年第4期29卷 510-513页

作者：牛立霞王健华冯团诚刘志昕中国热带农业科学院热带生物技术研究所海口571101

通过间接酶联免疫法,从海南罹病胡椒植株中检测到黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)。从病叶中提取总RNA,用巢式RT-PCR方法扩增获得657 bp的CMV CP基因片段,并与pMD18-T载体连接和转入大肠杆菌克隆,然后进行测序。序列分析结果表... 详细信息

通过间接酶联免疫法,从海南罹病胡椒植株中检测到黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)。从病叶中提取总RNA,用巢式RT-PCR方法扩增获得657 bp的CMV CP基因片段,并与pMD18-T载体连接和转入大肠杆菌克隆,然后进行测序。序列分析结果表明,该分离物与CMV亚组Ⅰ、亚组Ⅱ之间的核苷酸序列同源性分别为92.54%～99.09%和76.97%～77.42%,推导氨基酸序列同源性分别为98.17%～100%和81.74%～82.65%。该分离物CP基因与印度胡椒分离物同源性相对较低,应属不同株系。

关键词：胡椒黄瓜花叶病毒血清学 CP基因序列分析

香蕉束顶病毒海口分离物CP基因的原核表达、纯化及其抗血清制备

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热带作物学报 2010年第5期31卷 767-771页

作者：余乃通冯团诚王健华张雨良刘志昕中国热带农业科学院热带生物技术研究所农业部热带作物生物技术重点开放实验室海南海口571101 海南大学环境与植物保护学院海南海口570228

用PCR方法从感染香蕉束顶病毒(Banana bunchy top virus,BBTV)的香蕉植株幼嫩假茎和叶片总DNA中扩增外壳蛋白(coat protein,CP)基因。回收目的片段,经XhoⅠ和BamHⅠ双酶切后与同样酶切的质粒载体pET30a(+)相连接,酶切验证及测序结果获... 详细信息

用PCR方法从感染香蕉束顶病毒(Banana bunchy top virus,BBTV)的香蕉植株幼嫩假茎和叶片总DNA中扩增外壳蛋白(coat protein,CP)基因。回收目的片段,经XhoⅠ和BamHⅠ双酶切后与同样酶切的质粒载体pET30a(+)相连接,酶切验证及测序结果获得了含BBTV CP基因的重组质粒pET30a-CP。将重组质粒转化Codon plus表达菌,在25℃、0.4mmol/L IPTG条件下诱导6h或过夜,经12%SDS-PAGE电泳分析可知,该重组菌表达了一个与预期分子量大小一致的His-CP融合蛋白,约为30ku,且主要以包涵体的形式存在。多次洗涤包涵体后得到高纯度的融合蛋白,用其免疫家兔,获得BBTV CP蛋白抗血清。间接ELISA法测定抗血清效价大于51200。Western blot分析表明,抗血清能与融合蛋白特异性结合。

关键词：香蕉束顶病毒 CP基因原核表达纯化抗血清

辣椒脉斑驳病毒CP基因的原核表达及其抗血清的制备

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园艺学报 2010年第10期37卷 1598-1604页

作者：吴育鹏王健华冯团诚张雨良王小明刘志昕中国热带农业科学院热带生物技术研究所农业部热带作物生物技术重点开放实验室海口571101 海南大学环境与植物保护学院海南儋州570228

采用RT-PCR方法克隆了辣椒脉斑驳病毒文昌分离物(ChiVMV-WC)的CP基因,并将其连接到原核表达载体pET-30b(+)上,克隆测序以确定其阅读编码框的正确性,然后将获得的重组质粒pET30b-ChiVMVCP转化大肠杆菌Rosetta(DE3)后,用IPTG进行诱导表达... 详细信息

采用RT-PCR方法克隆了辣椒脉斑驳病毒文昌分离物(ChiVMV-WC)的CP基因,并将其连接到原核表达载体pET-30b(+)上,克隆测序以确定其阅读编码框的正确性,然后将获得的重组质粒pET30b-ChiVMVCP转化大肠杆菌Rosetta(DE3)后,用IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE分析结果表明,CP基因在大肠杆菌中获得了高效表达,获得的融合蛋白分子量约为38kD。用Ni2+-NTA琼脂糖亲和层析纯化的融合蛋白免疫兔子并获得抗血清。Western blot检测结果表明,抗血清与诱导表达的ChiVMV-WC编码CP蛋白发生特异性反应。间接酶联免疫吸附法(ID-ELISA)检测抗血清效价为1/106。通过对田间20个样品的ID-ELISA检测,证实了所制备的抗血清与ChiVMV病叶具有良好的反应特异性。

关键词：辣椒辣椒脉斑驳病毒外壳蛋白原核表达抗血清

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黄瓜花叶病毒NASBA检测技术的建立

植物病理学报 2011年第2期41卷 139-145页

作者：王小明王健华冯团诚张雨良吴育鹏刘志昕中国热带农业科学院热带生物技术研究所农业部热带作物生物技术重点开放实验室海口571101 海南大学环境与植物保护学院儋州571737

以香蕉花叶病病样为材料,初步建立了黄瓜花叶病毒核酸序列依赖性扩增(Nucleic acid sequence based amplifica-tion,NASBA)的检测技术。通过以香蕉叶片总RNA为模板,在黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)亚组ⅠRNA 2高保守区设计... 详细信息

以香蕉花叶病病样为材料,初步建立了黄瓜花叶病毒核酸序列依赖性扩增(Nucleic acid sequence based amplifica-tion,NASBA)的检测技术。通过以香蕉叶片总RNA为模板,在黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)亚组ⅠRNA 2高保守区设计特异引物,进行NASBA反应,经5%琼脂糖凝胶电泳检测,阳性样品中出现了预期大小为310 bp的条带,而阴性和空白对照中均未出现。并对11份香蕉样品分别进行NASBA反应,并经过斑点杂交验证与RT-PCR检测比较,两者的检测结果一致,灵敏度相当,检出限量可达100 pg。

关键词：香蕉黄瓜花叶病毒核酸序列依赖性扩增斑点杂交

基于改进Autoformer模型的短期电力负荷预测

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电力自动化设备 2024年第4期44卷 171-177页

作者：范杏蕊李元诚华北电力大学控制与计算机工程学院北京102206

针对短期电力负荷预测因受天气、温度、节假日等多重不确定性因素影响而造成精度低的问题,提出一种基于改进Autoformer模型的短期电力负荷预测模型。改变序列分解预处理的惯例,设计深度模型的内部分解模块,该模块提取模型中隐藏状态的... 详细信息

针对短期电力负荷预测因受天气、温度、节假日等多重不确定性因素影响而造成精度低的问题,提出一种基于改进Autoformer模型的短期电力负荷预测模型。改变序列分解预处理的惯例,设计深度模型的内部分解模块,该模块提取模型中隐藏状态的内在复杂时序趋势,使得模型具有复杂时间序列的渐进分解能力;提出Nystrom自注意力机制,该机制利用Nystrom方法来逼近标准的自注意力机制。某地电力负荷预测实验结果表明,所提模型比基于标准Autoformer模型的短期电力负荷预测模型的时间复杂度更低,准确率更高。

关键词：短期电力负荷预测时序分解模块 Nystrom自注意力机制 Sdformer模型

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命题视角下一道高考选择题的深度探秘

物理教师 2024年第5期45卷 91-92,96页

作者：蒋金团云南省保山市第八中学云南保山678000

从命题的角度对2023年高考理综甲卷第20题进行深度解读,针对文献[1]对该题解法提出了更简洁的分析方法,最后把真题涉及的“粒子入筒”模型与黑体模型的共性之处进行比较,从中寻找新的命题启示.

关键词：洛伦兹力圆形边界命题视角周期性规律黑体迁移