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胰岛素作用原理的研究 Ⅵ.胰岛素片段与胰岛素受体的相互作用

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 1980年第1期 37-42页

作者：冯佑民顾嘉琍张新堂鲁子贤徐伟军朱菊红中国科学院上海生物化学研究所

研究了用胰凝乳蛋白酶限制性酶解和化学合成方法所获得的若干胰岛素片段与脂肪细胞胰岛素受体的结合。它们在低浓度时几乎观察不出与胰岛素受体结合,而在高浓度时除五肽HTyr·Thr·Pro·Lys·AlaOH外都有明显的专一性结合。说明它们具... 详细信息

研究了用胰凝乳蛋白酶限制性酶解和化学合成方法所获得的若干胰岛素片段与脂肪细胞胰岛素受体的结合。它们在低浓度时几乎观察不出与胰岛素受体结合,而在高浓度时除五肽HTyr·Thr·Pro·Lys·AlaOH外都有明显的专一性结合。说明它们具有部分与胰岛素受体的结合部位。与前文关于胰岛素结合部位设想是一致的。讨论了胰岛素结合部位的性质,并讨论了五肽HArg·Gly·Phe·Phe·TyrOH加强胰岛素与其受体亲合力的可能性。

关键词：胰岛素脂肪细胞高浓度多肽胰岛素受体结合部位作用原理

胰岛素作用原理的研究 Ⅶ.不同种属红细胞胰岛素受体与胰岛素的相互作用

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 1981年第4期 385-390页

作者：张新堂顾嘉琍冯佑民张友尚潘志耆池芝盛中国科学院上海生物化学研究所北京首都医院

参照Gambhir等人的报告建立了分离豚鼠、兔和鸡红细胞的方法。比较了豚鼠、兔和鸡红细胞胰岛素受体与猪胰岛素的相互作用,初步观察到不同种属动物的红细胞含胰岛素受体的数目似乎与其自身的胰岛素活力成反比。

关键词：胰岛素靶细胞豚鼠鸡红细胞多肽荷兰猪红细胞胰岛素受体种属作用原理

烟草花叶病毒蛋白质经若干脱保护基试剂处理后的天然化

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 1980年第4期 375-379页

作者：冯佑民顾嘉琍陈作义钱力张友尚周乐中国科学院上海生物化学研究所中国科学院上海有机化学研究所

蛋白质的一级结构决定高级结构的原理为人工合成蛋白质提供了理论基础。然而人工合成的带有保护基的某一蛋白质的一级结构经脱保护基处理后能否不受影响,因而能形成其特定的高级结构,在人工合成蛋白质的研究中仍然是很重要的问题之一。... 详细信息

蛋白质的一级结构决定高级结构的原理为人工合成蛋白质提供了理论基础。然而人工合成的带有保护基的某一蛋白质的一级结构经脱保护基处理后能否不受影响,因而能形成其特定的高级结构,在人工合成蛋白质的研究中仍然是很重要的问题之一。因此,研究天然蛋白质在各种脱保护基试剂处理后能否天然化可以帮助我们在人工合成蛋白质时选择适合的脱保护基条件。本文研究了经若干常用的脱保护基条件处理后烟草花叶病毒蛋白质(TMV-p)的天然化及其与天然烟草花叶病毒核酸(TMV-RNA)的重组合以及在大量杂质蛋白质的存在下TMV-p的聚合作用。

关键词：烟草花叶病毒天然化重组合烟草病毒1号 TMV 保护基蛋白质试剂

PCR中耐热DNA聚合酶催化DNA合成错误

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重庆医科大学学报 1992年第3期 252-252页

作者：刘先俊吕懿娟杜建国冯佑民中国科学院上海生化所重庆医科大学生化教研室

PCR(Polymerase Chain Reaction)是近年来发展起来的用于体外扩增特定DNA片段的方法,PCR早期使用的DNA聚合酶为大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ的大片段(Klenow片段),随后采用耐热DNA聚合酶(Taq DNA polymerase),不仅使PCR操作过程大为简化,而且其... 详细信息

PCR(Polymerase Chain Reaction)是近年来发展起来的用于体外扩增特定DNA片段的方法,PCR早期使用的DNA聚合酶为大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ的大片段(Klenow片段),随后采用耐热DNA聚合酶(Taq DNA polymerase),不仅使PCR操作过程大为简化,而且其催化DNA合成片段的长度、忠实性都有较大改进.但仍有极低的错误率发生.错误率发生的高低与PCR扩增条件有关.我们应用PCR技术从Ⅱ型糖尿病人(非胰岛素依赖型糖尿病)基因组DNA中扩增出胰岛素基因片段(大小为1128bp),并将PCR产物直接克隆到M13载体中(M13mp18/M13mp19 RFDNA),再用双脱氧链终止法作DNA序列分析

关键词： PCR 聚合酶多聚酶转肽酶 DNA 酶催化

大鼠肝脏、卵巢及肾上腺胰岛素受体结合性质的比较

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中国糖尿病杂志 2000年第6期8卷 345-347页

作者：李桂玲归绥琪唐月华冯佑民上海医科大学妇产医院中科院上海生化所分子生物学实验室

目的比较大鼠肝脏、卵巢和肾上腺胰岛素受体（ｉｎｓｕｌｉｎ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ，　ＩＲ）的结合性质。方法放射配体结合分析法对ＩＲ的数目（用结合容量表示）与亲和力（用饱和常数表示）进行检测。结果大鼠肝脏、卵巢和肾上腺ＩＲ... 详细信息

目的比较大鼠肝脏、卵巢和肾上腺胰岛素受体（ｉｎｓｕｌｉｎ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ，　ＩＲ）的结合性质。方法放射配体结合分析法对ＩＲ的数目（用结合容量表示）与亲和力（用饱和常数表示）进行检测。结果大鼠肝脏、卵巢和肾上腺ＩＲ高亲和位点的结合容量分别为７．３５９×１０个／ｍｇ白质、８．０２９×１０个／ｍｇ蛋白质和６．４４０×１０个／ｍｇ蛋白质，饱和常数分别为６．１４７×１０Ｍ－１、１．５２７×１０Ｍ－１、１．０１０×１０Ｍ－１；ＩＲ低亲和位点的结合容量分别为２．４０３×１０个／ｍｇ蛋白质、２．４０３×１０个／ｍｇ蛋白质和２．２５７×１０个／ｍｇ蛋白质，饱和常数分别为２．９２０×１０Ｍ－１、２．００８×１０Ｍ－１和０．４３３×１０Ｍ－１。结论卵巢和肾上腺也存在丰富的ＩＲ，其数量与肝脏的相似，而饱和常数小于肝脏的ＩＲ。提示胰岛素对卵巢和肾上腺可能有重要的调节作用。

关键词：胰岛素受体放射配体结合分析肝脏卵巢肾上腺

单链胰岛素前体在酵母中的分泌表达及其转变成人胰岛素

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中国科学（C辑） 1997年第1期27卷 1-6页

作者：朱尚权徐明华许英镐张新堂张友尚胡红明蔡若蓉冯佑民贺潜斌唐月华刘滨梁镇和中国科学院上海生物化学研究所上海200031

将化学合成的单链猪胰岛素前体(PIP)基因和用聚合酶链反应得到的α交配因子前导顺序(αMFL)基因插入质粒pVT102-U的醇脱氢酶基因ADH1的启动子和3’终止顺序之间而生成质粒pVT102-U/αMFL-PIP.被pVT102-U/αMFL-PIP转化的酵母(Saccharomy... 详细信息

将化学合成的单链猪胰岛素前体(PIP)基因和用聚合酶链反应得到的α交配因子前导顺序(αMFL)基因插入质粒pVT102-U的醇脱氢酶基因ADH1的启动子和3’终止顺序之间而生成质粒pVT102-U/αMFL-PIP.被pVT102-U/αMFL-PIP转化的酵母(Saccharomyces cerevistae)可表达单链前体并分泌到培养基中.前体在纯化后可通过胰蛋白酶的转肽作用转变成人胰岛素.纯化的人胰岛素具有全部活力并可结晶.人胰岛素的总收率为每升培养液25mg.

关键词：人胰岛素胰岛素前体分泌表达酵母

Secretory expression of α single-chain insulin precursor in yeast and its conversion into human insulin

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Science China(Life Sciences) 1996年第3期39卷 225-233页

作者：张友尚胡红明蔡若蓉冯佑民朱尚权贺潜斌唐月华徐明华许英镐张新堂刘滨梁镇和 State Key Laboratory of Molecular Biology Shanghai Institute of Biochemistry Chinese Academy of Sciences Shanghai 200031 China) Shanghai Institute of Biochemistry Chinese Academy of Sciences Shanghai 200031 China.

A synthetic single-chain porcine insulin precursor (PIP) gene and an α-mating factor leader sequence (αMFL) gene obtained by the PCR method are inserted between the promoter and 3’-terminating sequence of the alcohol dehydrogenase gene ADH1 in plasmid pVT102-U to form plasmid pVT102-U/α MFL-PIP. The single-chain insulin precursor is expressed and secreted to the culture medium by Saccharomyces cererisiae transformed by pVT102-U/αMFL-PIP. The precursor is purified and converted into human insulin by tryptic transpeptidation. The purified human insulin is fully active and can be crystallized. The overall yield of human insulin is 25 mg per liter of culture medium.

关键词： human insulin insulin precursor secretary expression Saccharomyces cerevisiae.