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作者：关雪晶重庆医科大学

学位级别：硕士

骨髓造血微环境为造血细胞的发育成熟提供了一个良好的场所,其中骨髓基质细胞（bone marrow stromal cell,BMSC）起着重要作用,BMSC除直接作用于造血细胞外,其表面的黏附分子可促使造血干/祖细胞（hematopoietic stem/progenitor cell, ... 详细信息

骨髓造血微环境为造血细胞的发育成熟提供了一个良好的场所,其中骨髓基质细胞（bone marrow stromal cell,BMSC）起着重要作用,BMSC除直接作用于造血细胞外,其表面的黏附分子可促使造血干/祖细胞（hematopoietic stem/progenitor cell, HSPC）与BMSC以及微环境中的细胞外基质相互黏附,进而促进造血细胞的增殖分化。血管细胞黏附分子-1 （vascular cell adhesion molecule-1, VCAM-1,CD106）及细胞间黏附分子-1 （intercellular adhesion molecule-1, ICAM-1,CD54）主要在BMSC上表达,可介导BMSC与HSPC的黏附,利于造血细胞的分化成熟,同时在一些细胞因子作用下还参与HSPC的动员和归巢。BMSC还可分泌一些细胞因子调控造血,血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）是BMSC分泌的一种糖蛋白,可以刺激血管内皮细胞的增殖、移行,提高血管的通透性,促进新生血管形成。辐射会对机体造成损害,尤其是造血系统更易受损。辐射损伤后BMSC细胞数明显减少,大多被阻滞于G0/G1期;细胞增殖能力受损,使得BMSC形成成纤维细胞集落（colony forming unit-fibroblast, CFU-F）能力明显下降;辐射损伤还可增加BMSC的凋亡率;另外辐射损伤还会影响BMSC表面黏附分子的表达以及抑制其细胞因子的分泌,使BMSC调控造血的功能抑制,最终导致造血功能障碍。辐射防护剂的研究已开展多年,以往的化学辐射防护剂由于毒副作用大而影响其效果,因此期待开发出毒性较小、可用于临床的中药辐射防护剂。当归是一种活血化瘀中药,主要成分为当归多糖（angelica polysaccharide,APS）,研究表明,APS可促进急性辐射损伤小鼠外周血象和淋巴细胞数量的恢复,提高组织的抗氧化能力,具有一定的抗辐射功能,但APS对辐射损伤后骨髓基质细胞的作用尚未见报道。基于此,我们以BMSC细胞周期、CFU-F数量、细胞凋亡率、表面黏附分子CD54、CD106以及VEGF mRNA的表达变化为切入点,研究APS促进辐射损伤小鼠造血功能恢复的可能机制。本实验中动物模型的建立均采用直线加速器全身照射BALB/c小鼠,研究APS对辐射损伤小鼠BMSC表面黏附分子表达及其血管生长因子表达的影响,为进一步探讨APS作为一种辐射防护剂应用于临床提供新的实验依据。目的:研究APS对急性放射损伤小鼠BMSC增殖能力、细胞凋亡率及表面黏附分子和血管内皮生长因子表达的影响,进而深入了解APS促进辐射损伤后骨髓造血功能恢复的分子机制。方法: 1. BALB/c小鼠随机分为4组:正常组不作任何处理。其余BALB/c小鼠全身均匀照射X射线,总剂量4.0 Gy,时间1.33min,照射后按给予不同药物和剂量分为生理盐水（saline,NS）组、2 mg/kg APS组和8 mg/kg APS组。 2.常规方法计数外周血WBC、RBC、PLT及单根股骨骨髓单个核细胞（bone marrow mononuclear cell,BMNC）。 3.常规方法培养BMSC,观察小鼠BMSC的贴壁情况及细胞80%贴壁时间。 4.常规方法培养BMSC,计数各组CFU-F数。 5.流式细胞术检测放射损伤小鼠BMSC细胞周期的变化以及APS对它的影响。 6流式细胞术检测APS对放射损伤小鼠BMSC凋亡率的影响。 7.流式细胞术检测APS对放射损伤小鼠BMSC黏附分子CD54和CD106表达的影响。 8. RT-PCR方法检测APS对放射损伤小鼠BMSC的VEGF mRNA表达水平的影响。结果: 1.急性放射损伤模型的建立:小鼠照射后表现为饮水、进食均减少,行动迟缓,嗜睡,皮毛略凌乱,光泽性差,偶尔会有腹泻,小鼠之间相互靠拢。 2.外周血WBC、RBC、PLT及BMNC的变化:照射后7,14,21d NS组小鼠外周血各指标及BMNC较正常组均降低（P＜0.05）;同时间点APS组较NS组WBC、PLT及BMNC下降幅度小,恢复快（P＜0.05）,第14,21d 8 mg/kg APS组WBC比2 mg/kg APS组恢复快（P＜0.05）,同时间点8 mg/kg APS组BMNC数均明显高于2 mg/kg APS组（P＜0.05）,各指标仅21d 8 mg/kg APS组恢复正常;照射后小鼠第7d APS组较NS组RBC下降幅度大（P＜0.05）,但恢复快,第14d的

关键词：当归多糖辐射损伤骨髓基质细胞黏附分子 VEGF

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当归多糖对脐血造血细胞的抗冷冻损伤作用

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第四军医大学学报 2009年第22期30卷 2549-2552页

作者：关雪晶杨慧张雁吴宏重庆医科大学干细胞与组织工程研究室组织胚胎学教研室重庆400016

目的:探讨当归多糖(APS)对脐血造血细胞的抗冷冻损伤作用.方法:采用细胞计数法比较羟乙基淀粉(HES)、明胶、淋巴细胞分离液(Ficoll)分离脐血单个核细胞(MNC)的回收率.应用细胞计数法、台盼蓝拒染法、集落形成实验和流式细胞术,检测冻存1... 详细信息

目的:探讨当归多糖(APS)对脐血造血细胞的抗冷冻损伤作用.方法:采用细胞计数法比较羟乙基淀粉(HES)、明胶、淋巴细胞分离液(Ficoll)分离脐血单个核细胞(MNC)的回收率.应用细胞计数法、台盼蓝拒染法、集落形成实验和流式细胞术,检测冻存1,3,6mo脐血MNC的生物学活性,将脐血MNC与不同浓度APS共培养24h后冻存,1mo后复苏,观察APS对脐血MNC抗冷冻损伤的作用.结果:HES法、明胶法的MNC回收率均大于85%,显著高于Ficoll法(50.00±4.00)%(P<0.05);冻存1,3,6mo组MNC,CFU-Mix,CD34+细胞回收率及台盼蓝拒染率差异均无显著性,且脐血MNC的损伤与冻存时间不相关.APS50,100,200,400mg/L不同浓度APS组MNC,CFU-Mix回收率和台盼蓝拒染率除APS400mg/L组下降外,其余各组明显上升(P<0.05);各组组间CD34+细胞回收率差异无显著性.结论:APS可有效提高脐血造血细胞的抗冷冻损伤能力.

关键词：当归多糖脐血造血细胞冷冻保存

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当归多糖对辐射损伤小鼠骨髓基质细胞的影响

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第三军医大学学报 2013年第8期35卷 779-783页

作者：关雪晶吴宏何晓莉姜蓉重庆医科大学基础医学院干细胞与组织工程研究室组织胚胎学教研室重庆400016

目的研究当归多糖(Angelica polysaccharides,APS)对辐射损伤小鼠骨髓基质细胞(bone marrow stromalcell,BMSC)的保护作用。方法 BALB/c小鼠按随机数字表法分为10组,每组24只,共计240只。正常组不作任何处理,其余9组经X射线照射后分别... 详细信息

目的研究当归多糖(Angelica polysaccharides,APS)对辐射损伤小鼠骨髓基质细胞(bone marrow stromalcell,BMSC)的保护作用。方法 BALB/c小鼠按随机数字表法分为10组,每组24只,共计240只。正常组不作任何处理,其余9组经X射线照射后分别给予生理盐水(NS)、2 mg/kg APS和8 mg/kg APS,给药至第7、14、21天计数小鼠外周血白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血小板(PLT)及骨髓单个核细胞(BMNC);观察BMSC生长达80%贴壁所需时间及形成的成纤维细胞集落(CFU-F)数量;流式细胞术检测BMSC细胞周期、凋亡率及表面黏附分子CD54、CD106的表达水平。结果与正常组比较,NS组外周血WBC、RBC、PLT及BMNC计数明显减少(P<0.05);BMSC达80%贴壁所需时间明显延长,CFU-F数明显减少(P<0.05);G0/G1期细胞比例显著增加,S期细胞比例显著降低(P<0.05);BMSC细胞凋亡率明显增高(P<0.05);CD54、CD106表达明显降低(P<0.05)。2 mg/kg APS、8 mg/kg APS组与NS组相比,外周血各指标、BMNC数及CFU-F数明显增加(P<0.05);BMSC达80%融合时间显著缩短(P<0.05);G0/G1期比例明显降低,S期比例显著增加(P<0.05);凋亡率显著降低(P<0.05);CD54、CD106表达明显增高(P<0.05)。第21天8 mg/kg APS组各指标均恢复正常。结论 APS可能是通过提高BMSC贴壁及增殖能力,加速BMSC由G0/G1期向S期转换,降低BMSC凋亡率,上调CD54、CD106表达来促进辐射损伤后小鼠造血功能的恢复。

关键词：当归多糖辐射损伤骨髓基质细胞凋亡率黏附分子

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当归多糖照射前后给药对放射损伤小鼠造血功能恢复的比较研究

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重庆医科大学学报 2010年第7期35卷 965-969页

作者：张雁吴宏关雪晶周玥重庆医科大学干细胞与组织工程研究室、基础医学院组胚教研室重庆400016

目的:研究和比较当归多糖(Adhesion molecule,APS)2种不同给药方式对放射损伤小鼠造血功能的修复作用。方法:外周血WBC、RBC、PLT及BMNC计数;流式细胞术检测APS对放射损伤小鼠Sca-1+BMNC粘附分子CD44和CD49d表达、BMNC细胞周期的影响;MT... 详细信息

目的:研究和比较当归多糖(Adhesion molecule,APS)2种不同给药方式对放射损伤小鼠造血功能的修复作用。方法:外周血WBC、RBC、PLT及BMNC计数;流式细胞术检测APS对放射损伤小鼠Sca-1+BMNC粘附分子CD44和CD49d表达、BMNC细胞周期的影响;MTT法测定APS对放射损伤小鼠骨髓细胞增殖活性的影响。结果:与正常组比较,各NS组外周血WBC、RBC、PLT及BMNC计数明显减少,Sca-1+BMNCCD44、CD49d表达、骨髓细胞增殖活性明显下降,BMNCG0/G1期细胞比例显著增加。各APS预处理组能在更早期促进外周血各系和BMNC数目恢复、更早促进Sca-1+BMNC表面CD44和CD49d的表达下降使放射损伤小鼠造血功能较同时间点、同等剂量APS治疗组恢复快。各APS预处理组骨髓细胞增殖活性、BMNCG0/G1期细胞比例较同时间点、同等剂量APS治疗组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:APS对放射损伤小鼠造血功能具有修复作用,初步观察APS预处理组优于APS治疗组。

关键词：当归多糖粘附分子 Sca-1 CD44 CD49d

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当归多糖对急性辐射损伤小鼠骨髓基质细胞及血管内皮生长因子的影响

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重庆医科大学学报 2014年第5期39卷 612-616页

作者：陈凤鸣关雪晶吴宏姜蓉重庆医科大学基础医学院组织胚胎学教研室干细胞与组织工程研究室重庆400016

目的:研究当归多糖(angelica polysaccharides,APS)对辐射损伤小鼠骨髓基质细胞(bone marrow stromal cell,BMSC)及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的保护作用。方法:直线加速器一次性全身均匀X射线(4.0 Gy)照射BALB/c小鼠,照射后腹腔注射不同剂量的APS或生理盐水,并于照射后第7、14、21天处死小鼠,取外周血进行常规检查;观察BMSC贴壁情况、细胞80%贴壁时间;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率;RT-PCR法检测VEGF mRNA的表达水平。结果:与正常组相比,辐射第7、14、21天外周血白细胞及血小板计数明显减少;BMSC贴壁细胞数少且折光性差,达80%贴壁时间明显延长;G0/G1期细胞比例及细胞凋亡率升高;VEGF mRNA的表达降低。辐射APS高剂量组和辐射APS低剂量组均能增加外周血各指标计数,BMSC贴壁细胞数增多且折光性变好,达80%贴壁时间缩短,G0/G1期细胞比例及细胞凋亡率均显著降低,VEGF mRNA的表达显著增加。结论:APS可能通过增强VEGF的表达,提高BMSC的增殖能力,减少其凋亡,从而加速机体造血功能的恢复。

关键词：辐射损伤当归多糖血管内皮生长因子骨髓基质细胞

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Klotho在急性缺血再灌注性肾损伤中的变化及其与凋亡的关系

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上海交通大学学报（医学版） 2014年第6期34卷 788-793,798页

作者：钱盈盈严玉澄沈玥车琳关雪晶戴慧莉顾乐怡吴蓓倪兆慧钱家麒上海交通大学医学院附属仁济医院肾脏科上海200127

目的观察Klotho蛋白在缺血再灌注急性肾损伤中的表达变化,探讨其在肾小管上皮细胞凋亡中的作用。方法 10只BALB/c小鼠随机分为肾脏缺血再灌注组(I/R组,n=5)和假手术组(Sham组,n=5),采用双侧肾蒂夹闭术建立肾缺血再灌注模型,于造模后24 ... 详细信息

目的观察Klotho蛋白在缺血再灌注急性肾损伤中的表达变化,探讨其在肾小管上皮细胞凋亡中的作用。方法 10只BALB/c小鼠随机分为肾脏缺血再灌注组(I/R组,n=5)和假手术组(Sham组,n=5),采用双侧肾蒂夹闭术建立肾缺血再灌注模型,于造模后24 h留取小鼠的血清及肾组织。应用酶法分别测定血清尿素氮和肌酐,ELISA法检测血清Klotho蛋白水平,TUNEL染色法检测肾脏细胞凋亡水平,Real-Time PCR及Western blotting技术分别检测肾组织Klotho、Bax、Bcl-2和Caspase-3的基因及蛋白表达,应用Pearson直线相关法分析急性肾损伤时小鼠全身及局部的Klotho水平和肾脏凋亡的关系。结果与Sham组相比,I/R组小鼠术后24 h肾小管上皮细胞明显变性、坏死,肾脏凋亡细胞明显增加,肾组织cleaved Caspase-3蛋白水平、Bax/Bcl-2 mRNA及蛋白表达比值均显著升高。I/R组小鼠血清Klotho蛋白水平较Sham组小鼠显著降低[(669.89±136.51)pg/mL vs.(2 107.92±549.22)pg/mL,P<0.01],肾组织Klotho mRNA及蛋白表达分别较Sham组下调约9/10(P<0.001)及1/5(P<0.05)。相关性分析显示肾组织bax/bcl-2 mRNA比值与血清Klotho蛋白及肾组织klotho mRNA均呈显著负相关(r=-0.833,P<0.01;r=-0.916,P<0.001),肾组织Bax/Bcl-2蛋白比值和肾组织Klotho蛋白也呈显著负相关(r=-0.637,P<0.05)。结论缺血再灌注急性肾损伤后小鼠全身及肾组织局部Klotho表达均显著下调,Klotho水平的下降可能与凋亡诱导的肾损害密切相关。

关键词：缺血再灌注损伤急性肾损伤 Klotho Bax Bcl-2 凋亡

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Klotho基因真核表达载体的构建及其在TCMK-1细胞中的稳定表达

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上海交通大学学报（医学版） 2014年第5期34卷 567-572页

作者：沈玥路丽明钱盈盈关雪晶齐渊元倪兆慧钱家麒严玉澄上海交通大学医学院附属仁济医院肾脏科上海200127 上海交通大学医学院上海市免疫学研究所上海200025

目的构建小鼠Klotho基因真核表达载体,进而获得稳定表达Klotho分子的小鼠肾上皮细胞株TCMK-1。方法应用PCR方法扩增带有FLAG标签的Klotho编码基因,并克隆至载体pCD-CXIN(CMVMCS-IRES-Neomycin)的相应位点;经酶切及测序鉴定重组质粒,脂... 详细信息

目的构建小鼠Klotho基因真核表达载体,进而获得稳定表达Klotho分子的小鼠肾上皮细胞株TCMK-1。方法应用PCR方法扩增带有FLAG标签的Klotho编码基因,并克隆至载体pCD-CXIN(CMVMCS-IRES-Neomycin)的相应位点;经酶切及测序鉴定重组质粒,脂质体转染TCMK-1细胞,通过G418筛选得到稳定表达Klotho分子的TCMK-1细胞株;Real-Time PCR检测Klotho mRNA水平,Western blotting检测Klotho蛋白的表达。结果将带有FLAG标签的Klotho基因重组表达载体转染至TCMK-1细胞后,经G418筛选获得TCMK-1细胞株。与对照组相比,Klotho mRNA和蛋白表达均显著升高。结论成功构建了Klotho基因的重组表达载体,并获得了稳定表达Klotho基因的TCMK-1细胞株,为进一步研究Klotho基因和蛋白在小鼠肾上皮细胞中的作用奠定了基础。

关键词： Klotho 内部核糖体进入位点序列 FLAG标签 TCMK-1细胞

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STEM视角下创新人才培养路径探析

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产业科技创新 2020年第25期2卷 26-27页

作者：关雪晶吉林师范大学教育科学学院吉林长春130000

进入知识经济时代以来,社会的繁荣和提升国家综合实力越来越依靠科技和创新。随着人工智能与教育深度融合,科学技术创新不断带动经济及教育现代化的发展,掌握创新思维和科学素养将成为终身学习必不可少的要素。STEM教育应运而生,作为一... 详细信息

进入知识经济时代以来,社会的繁荣和提升国家综合实力越来越依靠科技和创新。随着人工智能与教育深度融合,科学技术创新不断带动经济及教育现代化的发展,掌握创新思维和科学素养将成为终身学习必不可少的要素。STEM教育应运而生,作为一项培养整合性人才的教育运动,对于我国新时代培养创新型人才可以提供有效借鉴和有效路径。

关键词： STEM教育创新人才培养跨学科

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上海市杨浦区40岁及以上人群慢性肾脏病患病率及发病危险因素分析

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山东医药 2022年第27期62卷 61-66页

作者：陈似俊郑玉琪沈杰蒋茜张颖慧陈闽东关雪晶童佳石周蓉同济大学医学院全科医学系上海200000 同济大学附属杨浦医院肾脏内科

目的探讨上海杨浦区40岁及以上中老年人群慢性肾脏病(CKD)的患病率及其发病相关危险因素。方法采用横断面调查研究、多阶段随机抽样方法抽取2019年5月28日—2019年6月30日在杨浦区延吉街道社区40岁及以上常住人群3 348例,资料完整3 200... 详细信息

目的探讨上海杨浦区40岁及以上中老年人群慢性肾脏病(CKD)的患病率及其发病相关危险因素。方法采用横断面调查研究、多阶段随机抽样方法抽取2019年5月28日—2019年6月30日在杨浦区延吉街道社区40岁及以上常住人群3 348例,资料完整3 200例,收集研究人群的资料,包括年龄、性别、职业、婚姻状况、教育程度等基本信息,既往病史,体格检查、尿常规+沉渣镜检、血肌酐、血尿素氮、血尿酸、空腹血糖、甘油三酯、胆固醇等实验室检测资料,统计CKD及白蛋白尿、血尿、肾小球滤过率下降的患病率,采用多因素Logistic回归方法分析CKD相关危险因素。结果杨浦区CKD患病率为22.5%,其中白蛋白尿患病率为14.5%,血尿患病率为6.2%,肾功能下降患病率为3.2%。CKD的独立危险因素为男性、糖尿病、高血压、高TG、高尿酸血症。白蛋白尿的独立危险因素为男性、糖尿病、高血压、高TG、肥胖;血尿的独立危险因素为女性、高TC;肾功能下降的独立危险因素为年龄、高血压、高尿酸血症。结论杨浦区的中老年人群CKD患病率高,男性、糖尿病、高血压、高TG、高尿酸血症是CKD发病的独立危险因素。

关键词：肾脏疾病白蛋白尿血尿蛋白尿慢性病

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包皮成纤维细胞作为饲养层对人胚胎生殖细胞生长的影响

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解剖学报 2010年第6期41卷 876-879页

作者：黎晓莉王璐吴宏张雁关雪晶姜蓉重庆医科大学基础医学院组织学胚胎学教研室干细胞与组织工程研究室重庆400016

目的以人包皮成纤维细胞为饲养层体外培养人胚胎生殖细胞,观察饲养层对其生长的影响,并对人胚胎生殖细胞进行鉴定。方法分离培养4～5岁小儿包皮成纤维细胞,取P3～P30代细胞用丝裂霉素灭活后铺板备用,酶联免疫吸附测定(ELISA)-双抗夹心... 详细信息

目的以人包皮成纤维细胞为饲养层体外培养人胚胎生殖细胞,观察饲养层对其生长的影响,并对人胚胎生殖细胞进行鉴定。方法分离培养4～5岁小儿包皮成纤维细胞,取P3～P30代细胞用丝裂霉素灭活后铺板备用,酶联免疫吸附测定(ELISA)-双抗夹心法检测其分泌物成纤维细胞生长因子(FGF)的含量;分离培养5～11周人胚胎原始生殖细胞,在不添加任何细胞因子的人包皮成纤维细胞饲养层上培养人胚胎生殖细胞;细胞化学法检测人胚胎生殖细胞碱性磷酸酶的活性,免疫细胞化学法检测其胚胎表面特异性抗原SSEA-1及SSEA-4的表达,RT-PCR法检测Oct-4的表达。结果包皮成纤维细胞可以传60代以上,P3～P30代均适宜作饲养层;P3～P30代包皮成纤维细胞上清液中FGF含量在(172.09±2.66)pg/L～(245.25±1.66)pg/L之间波动。分离培养的人胚胎生殖细胞在饲养层上可形成典型的胚胎生殖细胞集落,体外连续培养超过3代,其碱性磷酸酶活性呈强阳性,集落未分化标志检测显示SSEA-l、SSEA-4呈阳性,Oct-4表达阳性。结论用人包皮成纤维细胞作为饲养层能支持人胚胎生殖细胞的生长并维持未分化状态。

关键词：包皮成纤维细胞胚胎生殖细胞饲养层酶联免疫吸附测定-双抗夹心法免疫组织化学反转录-聚合酶链式反应人

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