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猪源ST11型艰难梭菌TcdB毒素受体结合域双抗体夹心ELISA的建立

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生物工程学报 2022年第1期38卷 185-195页

作者：梁伟全柯吉赵勤武耀民穆瑜曹三杰四川农业大学动物医学院猪病研究中心四川成都611130 四川农业大学国家级动物类实验教学示范中心四川成都611130 农业部兽用药物与兽医诊断技术四川科学观测站四川成都611130

艰难梭菌是一种重要的人兽共患肠道病原菌,广泛存在于人和多种动物体内。ST11型艰难梭菌是国际上流行最广泛、危害最大的亚型之一。我国作为养猪业大国,猪源艰难梭菌的检测方法欠缺,给猪场艰难梭菌的防控留下隐患。本研究旨在建立一种... 详细信息

艰难梭菌是一种重要的人兽共患肠道病原菌,广泛存在于人和多种动物体内。ST11型艰难梭菌是国际上流行最广泛、危害最大的亚型之一。我国作为养猪业大国,猪源艰难梭菌的检测方法欠缺,给猪场艰难梭菌的防控留下隐患。本研究旨在建立一种特异、敏感的双抗体夹心ELISA,为猪源ST11型艰难梭菌流行病学调查提供血清学检测方法。首先采用原核表达并纯化出97 kDa的受体结合域(receptor binding domain, RBD)蛋白,并利用杂交瘤技术成功筛选出能稳定分泌针对RBD蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞AE2D3,经检测其抗体亚型为IgG2b(κ)。其次以针对RBD蛋白的单克隆抗体为检测抗体、兔多克隆抗体为捕获抗体,运用棋盘法确定了捕获抗体和检测抗体的配对浓度、抗原包被条件、封闭条件、检测抗体和待检样品的孵育条件、羊抗小鼠IgG/HRP和TMB显色液反应条件。经测定,此方法的临界值OD_(450)为0.152,与13株非ST11型的艰难梭菌无交叉反应,对RBD蛋白的最低检测浓度为8.83 ng/mL。这一特异、敏感、可用于兽医临床检测猪源ST11型艰难梭菌的双抗体夹心ELISA,为养猪业ST11型艰难梭菌流行病学调查提供了可靠的血清学检测方法。

关键词：艰难梭菌 ST11型 RBD蛋白单克隆抗体双抗体夹心ELISA

鸡白痢沙门氏菌orgC基因缺失株的构建及生物被膜形成特性研究

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中国家禽 2022年第10期44卷 31-37页

作者：冯政王楠全柯吉秦涛陈素娟彭大新扬州大学兽医学院江苏扬州225009 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

为探索鸡白痢沙门氏菌Ⅲ型分泌系统效应蛋白OrgC在生物被膜形成中的作用,试验以鸡白痢沙门氏菌S9及其rpoS基因缺失株S9S为母本,利用Red同源重组系统构建orgC基因缺失株并利用原核表达载体构建回复株,测定其生物被膜形成能力和对鸡肝癌(L... 详细信息

为探索鸡白痢沙门氏菌Ⅲ型分泌系统效应蛋白OrgC在生物被膜形成中的作用,试验以鸡白痢沙门氏菌S9及其rpoS基因缺失株S9S为母本,利用Red同源重组系统构建orgC基因缺失株并利用原核表达载体构建回复株,测定其生物被膜形成能力和对鸡肝癌(Leghorn male hepatoma,LMH)细胞黏附入侵能力。结果显示:orgC基因缺失株生物被膜形成能力与野生株S9相比无显著变化,rpoS和orgC双基因缺失株生物被膜形成能力与rpoS基因缺失株S9S相比显著降低(P<0.05);orgC基因缺失株对LMH细胞入侵能力与野生株S9相比无显著变化,rpoS和orgC双基因缺失株对LMH细胞入侵能力与rpoS基因缺失株S9S相比显著降低(P<0.05)。研究表明,Ⅲ型分泌系统效应蛋白OrgC与鸡白痢沙门氏菌生物被膜形成及细胞入侵能力有关。

关键词：鸡白痢沙门氏菌生物被膜 Ⅲ型分泌系统 OrgC 细胞入侵

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四川地区猪源艰难梭菌分子分型调查

微生物学通报 2021年第10期48卷 3726-3735页

作者：梁伟王博赵勤全柯吉武耀民缪昌曹三杰四川农业大学动物医学院猪病研究中心四川成都611130 四川农业大学国家级动物类实验教学示范中心四川成都611130 农业农村部兽用药物与兽医诊断技术四川科学观测站四川成都611130

【背景】艰难梭菌是一种重要的人畜共患肠道病原菌,可引起人和多种动物抗生素相关性腹泻或假膜性肠炎。四川作为我国主要的生猪产区,还未有猪源艰难梭菌流行病学调查的相关报道,对猪源艰难梭菌的防控及保障猪肉安全带来挑战。【目的】... 详细信息

【背景】艰难梭菌是一种重要的人畜共患肠道病原菌,可引起人和多种动物抗生素相关性腹泻或假膜性肠炎。四川作为我国主要的生猪产区,还未有猪源艰难梭菌流行病学调查的相关报道,对猪源艰难梭菌的防控及保障猪肉安全带来挑战。【目的】调查四川地区猪源艰难梭菌的感染、流行情况,并对分离出的艰难梭菌进行分子分型研究。【方法】收集来自四川生猪主要产区6个养殖场中猪的粪便标本(n=110),采用厌氧培养技术在艰难梭菌鉴别培养基上进行分离培养;采用PCR方法扩增艰难梭菌4个毒素基因(tcdA、tcdB、cdtA、cdtB)和7个管家基因(adk、atpA、dxr、glyA、recA、sodA、tpi),对分离株进行毒素基因分型和多位点序列分型。【结果】从110份样品中,经革兰氏染色镜检及PCR鉴定,共分离出20株艰难梭菌,分离率高达18.18%;毒素基因分型结果显示共获得3种毒素基因型,包括tcdA^(+)tcdB^(+)cdtA/cdtB^(+)(n=3)、tcdA^(+)tcdB^(+)cdtA/cdtB-(n=6)、tcdA-tcdB-cdtA/cdtB-(n=11);多位点序列分型结果显示获得5个ST型,包括ST11 (n=3)、ST3 (n=1)、ST35 (n=2)、ST36 (n=4)、ST109(n=10);进化树结果显示,所有分离株聚集为2个大群,分别为3个分支和17个分支。【结论】四川主要生猪产区猪群存在艰难梭菌感染,分离株的分子分型呈多样性,主要流行型为ST11、ST3、ST35、ST36、ST109型,并且存在ST11型高毒力菌株流行的风险。

关键词：四川地区猪艰难梭菌毒素基因分型多位点序列分型

不依赖RpoS的鸡白痢沙门菌生物被膜形成相关基因鉴定

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中国兽医科学 2023年第5期53卷 613-620页

作者：冯政苏洋洋全柯吉秦涛陈素娟彭大新扬州大学兽医学院江苏扬州225009 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

为鉴定鸡白痢沙门菌生物被膜形成不依赖Rpo S的调控基因,以鸡白痢沙门菌S6702及其rpoS基因缺失株S6702ΔrpoS为母本,对S6702生物被膜状态和S6702ΔrpoS生物被膜状态(S7BF vs S7SBF)及S6702ΔrpoS浮游状态和S6702ΔrpoS生物被膜状态(S7SF... 详细信息

为鉴定鸡白痢沙门菌生物被膜形成不依赖Rpo S的调控基因,以鸡白痢沙门菌S6702及其rpoS基因缺失株S6702ΔrpoS为母本,对S6702生物被膜状态和S6702ΔrpoS生物被膜状态(S7BF vs S7SBF)及S6702ΔrpoS浮游状态和S6702ΔrpoS生物被膜状态(S7SFY vs S7SBF)进行转录组测序分析,筛选差异表达基因,构建基因缺失株并验证其生物被膜形成能力。结果显示,S7BF vs S7SBF组共鉴定出83个差异表达基因,S7SFY vs S7SBF组共鉴定出1984个差异表达基因,筛选出15个可能与生物被膜形成相关的基因。以STM2361和STM1703为靶标构建基因缺失株,结晶紫染色定量结果显示,STM2361不影响鸡白痢沙门菌生物被膜的形成,而STM1703缺失能增强鸡白痢沙门菌的生物被膜形成能力。本研究鉴定出不依赖RpoS的鸡白痢沙门菌生物被膜形成调控基因,丰富了鸡白痢沙门菌生物被膜调控的信息。

关键词：鸡白痢沙门菌生物被膜 RpoS 转录组分析

我国H9N2亚型禽流感病毒血凝素蛋白145和153位抗原位点变异分析

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畜牧兽医学报 2022年第4期53卷 1165-1172页

作者：陈子轩张楠胡群全柯吉秦涛陈素娟彭大新刘秀梵扬州大学兽医学院扬州225009 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心扬州225009

H9N2亚型禽流感病毒(AIV)血凝素蛋白(HA)易发生抗原漂移,但识别我国H9N2亚型AIV流行株抗原差异性的关键抗原位点还不清楚。选取两株血凝抑制(HI)效价高的H9N2亚型AIV单克隆抗体2E4与2D6对A/Chicken/Shanghai/F/1998(H9N2)毒株施加抗体... 详细信息

H9N2亚型禽流感病毒(AIV)血凝素蛋白(HA)易发生抗原漂移,但识别我国H9N2亚型AIV流行株抗原差异性的关键抗原位点还不清楚。选取两株血凝抑制(HI)效价高的H9N2亚型AIV单克隆抗体2E4与2D6对A/Chicken/Shanghai/F/1998(H9N2)毒株施加抗体压力制备单抗逃逸突变株,鉴定抗原位点;利用单抗对2017—2019年H9N2亚型AIV代表株进行HI抗原谱分析,确定抗原位点与基因分型关系;分析我国H9N2亚型AIV相应抗原位点的变异规律。结果显示:单抗2E4与2D6分别识别HA头部的145位和153位抗原位点;2017—2019年华东地区H9N2亚型AIV分离株根据HA基因遗传进化树可分为Group 1和Group 2两大分支,Group 1代表株与两株单抗反应性好,而Group 2代表株与两株单抗反应性差,序列分析发现已发生S145D(16/16)和D153G(15/16)的突变;通过对我国1996—2021年禽源H9N2亚型AIV HA蛋白位点自然突变率分析发现,含HA蛋白145D和153G的毒株占比分别上升至68%和66%,成为优势流行株。单抗2E4可用于当前H9N2亚型AIV的抗原分型,抗原位点145位是鉴别Group 1和Group 2抗原群差异的分子靶标之一。

关键词： H9N2亚型AIV HA蛋白抗原变异单抗逃逸突变株抗原位点

考虑电动汽车负荷的高速公路服务区离网微电网容量配置

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长安大学学报(自然科学版) 2024年第5期 126-140页

作者：张懿璞金雨哲柯吉茹锋张成朔长安大学能源与电气工程学院

为促进交通能源融合，保障偏远地区高速公路电力的稳定供给，合理配置微电网容量至关重要。考虑路网车流量，建立高速公路电动汽车出行轨迹概率模型；基于蒙特卡洛方法抽取初始和充电时电池容量，综合考虑气温、车主出行习惯和不同车型... 详细信息

为促进交通能源融合，保障偏远地区高速公路电力的稳定供给，合理配置微电网容量至关重要。考虑路网车流量，建立高速公路电动汽车出行轨迹概率模型；基于蒙特卡洛方法抽取初始和充电时电池容量，综合考虑气温、车主出行习惯和不同车型能耗水平等因素，预测电动车负荷时空分布；从离网的高速公路服务区不同等级负荷需求出发，基于当地自然禀赋水平，建立以缺电概率最低为目标的规划模型；综合考虑新能源出力、场地限制、新能源自洽率和极端天气等约束，定量分析车辆OD（起点-终点）矩阵、电池状态SOC以及包含不同车流量、气温典型日对容量配置的影响。研究结果表明：OD矩阵的平均程度对充电负荷有显著影响，当OD矩阵越平均时，电动汽车的充电负荷越小；当OD矩阵不均衡时，充电负荷会显著增加；初始电池状态SOC0对充电负荷有直接影响，SOC0越大，充电负荷相应减少；反之，则增加；工作日、双休日和节假日的充电负荷呈递增趋势，其中双休日的充电负荷比工作日高12.5%,节假日则比工作日高20%;因冬季供暖用能比夏季供冷用能更高而风光资源匮乏，因此冬季需配置更大容量的设备以保证用电稳定；提出的微电网容量配置方法能够有效优化电力供应，保障离网地区的电力稳定性需求，并且能够优化微电网容量配置，保障离网地区用电的稳定性需求，满足1级、2级负荷用电，3级负荷缺电率不超过0.02%,自洽率超过90%,符合供电标准与绿色化要求，为新能源在交通领域的应用提供参考。

关键词：交通工程交通能源融合电动汽车负荷蒙特卡洛高速公路微电网容量配置

基于稠密雨量观测的四川省复杂地形降水特征分析

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高原气象 2024年

作者：周秋雪康岚龙柯吉冯良敏四川省气象台高原与盆地暴雨旱涝灾害四川省重点实验室

基于四川省空间稠密的3454个站点逐小时降水资料及高精度格点海拔高度资料，对四川省7个区域近10年的降水特征进行分析。研究发现：（1）四川省汛期雨量有三个大值中心：盆地西南部雅安、盆地西北部安州区和攀西地区南部盐边，其中安州... 详细信息

基于四川省空间稠密的3454个站点逐小时降水资料及高精度格点海拔高度资料，对四川省7个区域近10年的降水特征进行分析。研究发现：（1）四川省汛期雨量有三个大值中心：盆地西南部雅安、盆地西北部安州区和攀西地区南部盐边，其中安州区是全省的大暴雨中心，汛期雨量主要由R24≥100 mm的天气过程贡献。（2）受山脉走向和地形陡峭程度影响，盆周大值区形态和等值线梯度均有明显差异，且累积雨量越大，站点越向山脉迎风坡集中。（3）夜雨比率自西南向东北逐渐减弱，其中攀枝花夜雨比率为全省最大。（4）大雨及以上量级的强降水雨日分布与地形关系密切，大暴雨日站点仅分布在盆地西部与高原的陡峭过渡区。另外盆地西北部暴雨日中出现小时雨强≥50 mm·h-1的站点比率最高。（5）相较持续性大雨而言，持续性暴雨的站点分布受迎风坡地形影响更加显著。

关键词：四川强降水陡峭地形夜雨汛期

2000—2020年西南山区乡村生计韧性时空演变特征及影响因素探测

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长江流域资源与环境 2024年

作者：朱思吉吴映梅孙俊柯月嫦陆清平刘佳灵云南师范大学地理学部云南师范大学历史学院中国科学院西双版纳热带植物园综合保护中心

提高乡村生计韧性、增强乡村抗风险能力，对守好我国“三农”基本盘至关重要。基于区域宏观视角，从缓冲能力、调整能力和更新能力3个维度构建乡村生计韧性评价指标体系，运用集对分析法测度西南山区234个脱贫县的乡村生计韧性，深入探... 详细信息

提高乡村生计韧性、增强乡村抗风险能力，对守好我国“三农”基本盘至关重要。基于区域宏观视角，从缓冲能力、调整能力和更新能力3个维度构建乡村生计韧性评价指标体系，运用集对分析法测度西南山区234个脱贫县的乡村生计韧性，深入探讨乡村生计韧性的整体水平与时空演变特征，并进一步运用地理探测器分析其影响因素。研究结果表明：（1）2000—2020年，西南山区乡村生计韧性水平从次低韧性（0.1365）增长到次高韧性（0.5069），乡村生计韧性结构从“调整能力—缓冲能力—更新能力”演变为“缓冲能力—调整能力—更新能力”；（2）西南山区乡村生计韧性空间差异显著，整体呈东北—西南延伸的空间分布格局，分布重心先向东北再向西南移动，且在径向上愈发均衡；（3）乡村生计韧性在全局空间分布上呈显著集聚态势，集聚性先缓慢减弱再快速增强，冷点集聚于川滇藏区和乌蒙山区，热点集聚于川北、重庆和滇西等地；（4）自然地理环境的影响力逐渐降低，而经济发展基础、产业多样化和医疗卫生服务水平对乡村生计韧性的提升越来越具有重要意义。研究旨在将韧性理论融入乡村生计系统考察乡村生计韧性的时空演变及影响因素，为欠发达山区巩固脱贫攻坚成果、全面实施乡村振兴战略提供理论指导与实践案例。

关键词：乡村生计韧性时空演变影响因素集对分析法地理探测器西南山区

考虑光伏不确定性影响的高速公路光储换一体化能源管理策略

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交通运输工程学报 2024年第4期24卷 14-30页

作者：王飚路捷沙爱民蒋玮刘状壮柯吉长安大学能源与电气工程学院陕西西安710064 长安大学公路学院陕西西安710064

针对光伏出力不确定因素影响下的高速公路能源管理,分别从确定性光伏出力和不确定性光伏出力2个维度,研究了夏季晴朗日、黄金周和冬季雨雪日3种不同条件的出行场景在并网单一电价和并网分时电价下的光储换一体化的服务区电动汽车换电问... 详细信息

针对光伏出力不确定因素影响下的高速公路能源管理,分别从确定性光伏出力和不确定性光伏出力2个维度,研究了夏季晴朗日、黄金周和冬季雨雪日3种不同条件的出行场景在并网单一电价和并网分时电价下的光储换一体化的服务区电动汽车换电问题;以光伏自洽率最大和经济效益最高为目标函数,以微电网功率平衡以及供需两端用能特性为约束,建立了考虑光伏不确定因素的高速公路光储换一体化能源管理优化问题模型;考虑到传统遗传算法收敛速率慢、局部搜素能力差与易陷入“早熟”的缺点,提出了一种基于精英保留策略和快速非支配排序策略的改进多目标量子遗传算法。研究结果表明:夏季晴朗日、黄金周和冬季雨雪日的出行场景在考虑不确定性和确定性影响的光伏出力2种情形下皆可保证电动车换电需求,在场景气象条件限制下可再生能源利用率达到10.31%~78.27%,并取得较好的日经济效益,同时在夏季晴朗日、黄金周和冬季雨雪日光储换一体化服务区的CO_(2)排放量分别下降了62.5%、41.3%和10.3%;从并网用电模式角度考量,分时电价与单一电价相比,其光伏自洽率和碳减排量无显著差异,但日经济效益提升10%,因而分时电价方案比单一单价方案具有更高的性价比。

关键词：交通能源融合能源管理高速公路光储换一体化多目标量子遗传算法光伏不确定性可再生能源自洽