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STAT3基因沉默对人乳腺癌耐药株MCF-7/ADR阿霉素敏感性的影响及机制探讨

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STAT3基因沉默对人乳腺癌耐药株MCF-7/ADR阿霉素敏感性的影响及机...

作者：全军利广西医科大学

学位级别：硕士

目的：观察STAT3基因沉默后对人乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADR阿霉素耐药性的影响,并初步探讨其相关作用机制。方法：1、MTT法检测人乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADR及其亲本细胞MCF-7的阿霉素半数抑制浓度(IC50);同时,Western blot技术检测STAT... 详细信息

目的：观察STAT3基因沉默后对人乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADR阿霉素耐药性的影响,并初步探讨其相关作用机制。方法：1、MTT法检测人乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADR及其亲本细胞MCF-7的阿霉素半数抑制浓度(IC50);同时,Western blot技术检测STAT3及p-STAT3蛋白在该两株细胞中的表达差异以及3μg/mL阿霉素干预MCF-7细胞12h和36h后STAT3和P-STAT3蛋白的表达变化。2、将MCF-7/ADR细胞分为3组,即干扰组：感染STAT3干扰慢病毒颗粒(LV-shRNA-STAT3);阴性对照组：感染重组无义序列的阴性对照慢病毒颗粒(LV-shRNA-NC);空白组：不作处理。感染72 h后,1μg/mL嘌呤霉素持续筛选5天,荧光显微镜下观察慢病毒感染效率。Real-time PCR检测各组STAT3 mRNA的相对表达量,Western blot检测各组STAT3、p-STAT3蛋白表达。3、MTT法检测各组细胞的阿霉素IC50;流式细胞术(FCM)检测阿霉素干预48h后各组细胞的凋亡率和细胞周期差异;Tunel染色法进一步检测细胞凋亡指数。4、进一步采用Western blot技术检测各组细胞凋亡相关基因bcl-2、survivin和c-myc的蛋白表达水平。结果：1、常规培养条件下,MCF-7/ADR和MCF-7的阿霉素IC50值分别为(59.37±5.01)μg/mL.(5.50±0.82)μg/mL,差异具有统计学意义(P<0.05)。STAT3以及p-STAT3蛋白在MCF-7/ADR中的表达高于MCF-7,并且,一定浓度阿霉素处理MCF-7细胞不同时间后,STAT3和p-STAT3蛋白表达均呈时间依赖性增高,差异具有统计学意义(P<0.05)。2、干扰组以及阴性对照组的慢病毒感染效率均达到90%以上。与空白组和阴性对照组比较,干扰组STAT3 mRNA、蛋白以及p-STAT3蛋白表达显著降低,差异具有统计学意义(P(0.05)。3、MTT实验结果显示,干扰组、空白组和阴性对照组细胞的阿霉素IC50值分别为(7.60±0.20)μLg/mL.(56.12±3.01)μg/mL和(54.86±11.91) μg/mL(P<0.05)。FCM结果显示,干扰组、空白组和阴性对照组的细胞凋亡率分别为(34.03±3.14)%、(10.53±0.67)%和(11.70±0.72)%,并且,干扰组S期细胞比例显著增多,相应地G2/M期和G1期细胞比例下降(P<0.05).Tunnel染色结果进一步证实干扰组的细胞凋亡指数增高,差异具有统计学意义(P<0.05)。4.Western blot结果提示,与空白组和阴性对照组比较,bcl-2、 survivin和c-myc蛋白在干扰组中的表达水平显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论：1、通过构建重组的STAT3干扰慢病毒(LV-shRNA-STAT3)可特异性沉默MCF-7/ADR中STAT3基因表达,有效增强乳腺癌细胞对阿霉素的敏感性,促进阿霉素作用下耐药细胞的凋亡,使细胞周期阻滞于S期,最终有效逆转乳腺癌对阿霉素的耐药性。2、沉默STAT3基因逆转乳腺癌对阿霉素的耐药机制可能与下调其下游基因bcl-2、survivin和c-myc的蛋白表达有关。

关键词：乳腺癌 STAT3 RNAi 耐药阿霉素

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小麦矮杆基因的分子检测及遗传效应研究

分子植物育种 2018年第6期16卷 1855-1861页

作者：朱浩牛艳路王佩全军利陈耀锋西北农林科技大学农学院杨凌712100

利用矮秆基因Rht-B1b、Rht-D1b和Rht8的特异性分子标记对202份普通小麦材料进行了分子检测,连续两年观测了供试材料的重要农艺特性,分析了不同矮秆基因的遗传效应。结果表明:在202份供试材料中,22份供试材料含有基因Rht-B1b,分布频率为1... 详细信息

利用矮秆基因Rht-B1b、Rht-D1b和Rht8的特异性分子标记对202份普通小麦材料进行了分子检测,连续两年观测了供试材料的重要农艺特性,分析了不同矮秆基因的遗传效应。结果表明:在202份供试材料中,22份供试材料含有基因Rht-B1b,分布频率为10.89%;基因Rht-D1b、Rht8和不含3种矮秆基因的材料分布频率分别为73.76%、65.84%和6.93%,其中有12份材料含基因Rht-B1b+Rht8,有104份材料含Rht-D1b+Rht8,分布频率分别为5.94%和51.43%。矮秆基因对农艺特性的影响不同。3个矮秆基因均可以显著地降低株高,其降秆效应分别为Rht-D1b>Rht-B1b>Rht8,就基因组合而言,降秆效应则是Rht-D1b+Rht8>Rht-D1b>Rht-B1b+Rht8>Rht-B1b>Rht8,说明矮秆基因具有累加效应,同时含有2个矮秆基因要比只含有其中1个矮秆基因株高更低。矮秆基因在有效分蘖、穗长、小穗数和穗粒数等方面不存在显著差异,但矮秆基因对有效分蘖有一定的负效应,有利于穗长和穗粒数的增加。基因Rht8可以显著提高千粒重,而Rht-B1b和Rht-D1b对千粒重存在一定的负效应。试验中含有基因Rht-D1b和Rht8的部分材料在农艺性状中表现良好,应进一步加以利用。

关键词：小麦矮秆基因分子标记分布频率农艺性状

经隧道阴茎前移法治疗尿道下裂术后残余阴茎阴囊转位

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临床泌尿外科杂志 2022年第10期37卷 770-772页

作者：全军利周维模龙雪峰吴昌耀廖恒渐梁彦锴贵港市人民医院小儿外科广西贵港537200

目的:总结一种治疗小儿尿道下裂术后残余阴茎阴囊转位的手术经验。方法:2019年1月—2021年10月通过经隧道阴茎前移法矫治尿道下裂术后残余阴茎阴囊转位患儿18例。沿阴茎根部环形离断阴茎皮肤,游离松解尿道,在阴囊中隔正上方作梭形切口,... 详细信息

目的:总结一种治疗小儿尿道下裂术后残余阴茎阴囊转位的手术经验。方法:2019年1月—2021年10月通过经隧道阴茎前移法矫治尿道下裂术后残余阴茎阴囊转位患儿18例。沿阴茎根部环形离断阴茎皮肤,游离松解尿道,在阴囊中隔正上方作梭形切口,将阴茎经皮下隧道自梭形切口穿出,缝合固定。观察其临床效果。结果:18例患儿手术时间38~70 min,平均50 min;出血量2~6 mL,平均3 mL;住院时间3~7 d,平均5 d;术后随访2~24个月,平均6个月。所有患儿术后效果理想,外阴外观正常,排尿正常,无切口裂开、尿瘘、尿道狭窄等并发症。结论:经隧道阴茎前移法治疗小儿尿道下裂术后残余阴茎阴囊转位可获得良好的临床效果,外观佳,创伤小,并发症少。

关键词：尿道下裂阴茎阴囊转位小儿

经尿道输尿管镜钬激光碎石术治疗儿童输尿管下段结石及膀胱结石的临床效果

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中外医学研究 2023年第10期21卷 19-22页

作者：龙雪峰周维模梁阳冰全军利吴昌耀农振良廖恒渐广西医科大学第八附属医院(贵港市人民医院) 广西贵港537100

目的:探讨经尿道输尿管镜钬激光碎石术治疗儿童输尿管下段结石及膀胱结石的临床效果。方法:选取2016年1月—2022年10月广西医科大学第八附属医院收治的60例输尿管下段结石及膀胱结石患儿。根据随机数表法将其分为研究组和对照组,各30例... 详细信息

目的:探讨经尿道输尿管镜钬激光碎石术治疗儿童输尿管下段结石及膀胱结石的临床效果。方法:选取2016年1月—2022年10月广西医科大学第八附属医院收治的60例输尿管下段结石及膀胱结石患儿。根据随机数表法将其分为研究组和对照组,各30例。对照组给予传统开放手术治疗,研究组给予经尿道输尿管镜钬激光碎石术治疗。比较两组结石清除率,围手术期指标,术前及术后1个月肾功能指标及术后并发症。结果:研究组结石清除率(96.67%)与对照组(93.33%)比较差异无统计学意义(P>0.05)。研究组术中出血量少于对照组,手术时间、住院时间均短于对照组,术后进食时间早于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。术后1个月,两组胱抑素C(Cys C)、血尿素氮(BUN)、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)水平均降低,研究组Cys C、BUN、NGAL水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。研究组术后并发症发生率低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:儿童输尿管下段结石及膀胱结石采用经尿道输尿管镜钬激光碎石术治疗具有较高的结石清除率,能够有效改善围手术期指标及肾功能,减少术后并发症。

关键词：经尿道输尿管镜钬激光碎石术输尿管下段结石膀胱结石临床效果

组织型转谷氨酰胺酶对乳腺癌侵袭转移作用的研究

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中华肿瘤防治杂志 2015年第12期22卷 936-940页

作者：贺文兴黄传生全军利吴斯明李健林刘志明广西医科大学第一附属医院普通外科广西南宁530021 江西省肿瘤医院病理科江西南昌330029

目的探讨组织型转谷氨酰胺酶(transglutaminase type 2,tissue transglutaminase,TG2或tTG)对人乳腺癌细胞的侵袭转移能力作用及可能的机制。方法构建TGM2的特异性慢病毒干扰载体(TGM2-RNAi-LV),稳定转染至乳腺癌MDA-MB-231细胞,实验设T... 详细信息

目的探讨组织型转谷氨酰胺酶(transglutaminase type 2,tissue transglutaminase,TG2或tTG)对人乳腺癌细胞的侵袭转移能力作用及可能的机制。方法构建TGM2的特异性慢病毒干扰载体(TGM2-RNAi-LV),稳定转染至乳腺癌MDA-MB-231细胞,实验设TGM2干扰组(RNAi)、空白组(Con)和阴性对照组(NC)。实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测细胞TGM2mRNA表达。细胞侵袭迁移实验(Transwell)检测细胞侵袭迁徙能力改变。蛋白质印迹检测MDA-MB-231细胞TG2、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloprotein 9,MMP-9)和波形蛋白(Vimentin)的表达。选择2012-05-10-2014-07-29广西医科大学第一附属医院(46例)和江西省肿瘤医院(35例)病理确诊的81例乳腺浸润性导管癌患者,采用免疫组化检测TG2表达水平,分析其与淋巴结转移关系。结果 RT-PCR检测结果显示,Con组TGM2mRNA表达量为1,RNAi组TGM2mRNA表达量为0.21±0.03,明显低于Con组的1,z=-2.087,P=0.036 9;明显低于NC组的0.94±0.05,z=-1.964,P=0.049 5。细胞侵袭实验显示,侵袭到滤膜下的细胞数RNAi组为42.33±4.04,低于Con组的93.50±7.42和NC组的87.25±5.74,z值均为-2.121,P值均为0.033 9。迁移到滤膜下的细胞数RNAi组为66.13±4.59,低于Con组116.75±7.82和NC组109.00±7.79(z值均为-2.309,P值均为0.020 9)。蛋白质印迹检测结果显示,RNAi组、NC组和Con组TG2蛋白相对表达量分别为0.34±0.06、0.87±0.10和0.95±0.03,F=66.55,P0.05;而与淋巴结转移(χ2=14.750,P<0.001)、ER表达水平(χ2=11.632,P=0.001)和TNM分期(χ2=13.506,P<0.001)相关。Spearman相关分析显示,TG2与Vimentin(r=0.337,P=0.002)和MMP-9(r=0.358,P=0.001)表达水平呈正相关。结论 TG2可能具有促进乳腺癌的侵袭转移作用,下调TG2表达水平可能是治疗肿瘤转移的新靶点。

关键词：乳腺癌组织型转谷氨酰胺酶侵袭转移波形蛋白基质金属蛋白酶-9

STAT3基因沉默对乳腺癌阿霉素耐药性的影响

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实用医学杂志 2015年第11期31卷 1748-1751页

作者：全军利贺文兴吴斯敏李健林刘志明广西医科大学第一附属医院胃肠腺体外科

目的:观察STAT3短发夹RNA慢病毒载体(LV-sh RNA-STAT3)对乳腺癌耐药株MCF-7/ADR阿霉素敏感性的影响。方法:Western blot检测MCF-7/ADR及亲本细胞MCF-7中STAT3和p-STAT3蛋白表达;LVsh RNA-STAT3感染MCF-7/ADR(STAT3-RNAi组),同时感染无义序列Scramble-sh RNA作为阴性对照(NC组),空白组不作处理(Con组),荧光显微镜观察转染效率,q RT-PCR及Western blot检测STAT3 m RNA和蛋白、p-STAT3蛋白表达;不同浓度阿霉素处理各组细胞48h,MTT法检测细胞生长抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:STAT3、p-STAT3蛋白在MCF-7/ADR中表达较MCF-7增强(P<0.05);STAT3-RNAi组STAT3 m RNA和蛋白、p-STAT3蛋白表达与Con组、NC组比较明显减弱,差异具有统计学意义(P<0.05);阿霉素对Con组、NC组和STAT3-RNAi组细胞的IC50分别为(56.1±3.00)μg/m L、(54.9±11.9)μg/m L和(7.6±0.2)μg/m L;Con组、NC组和STAT3-RNAi组的细胞凋亡率分别为(10.5±0.7)%、(11.7±0.7)%和(34.0±3.1)%。结论 :LVsh RNA-STAT3可显著抑制STAT3基因表达,有效增强乳腺癌对阿霉素的敏感性,其机制与促进细胞凋亡有关。

关键词：乳腺肿瘤 STAT3 阿霉素化疗敏感性

数字医学技术在儿童腹部实质脏器损伤诊治中的临床应用效果

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深圳中西医结合杂志 2023年第12期33卷 12-14页

作者：龙雪峰李强辉全军利陈培升周维模吴昌耀农振良廖恒渐广西医科大学第八附属医院、贵港市人民医院广西贵港537100

目的:探讨儿童腹部实质脏器损伤诊治中应用数字医学技术的效果。方法:选取2016年1月至2022年8月贵港市人民医院采用数字医学技术指导期间诊治的100例腹部实质脏器损伤患儿作为观察组,另选取2012年1月至2015年12月未采用数字医学技术指... 详细信息

目的:探讨儿童腹部实质脏器损伤诊治中应用数字医学技术的效果。方法:选取2016年1月至2022年8月贵港市人民医院采用数字医学技术指导期间诊治的100例腹部实质脏器损伤患儿作为观察组,另选取2012年1月至2015年12月未采用数字医学技术指导期间诊治的100例腹部实质脏器损伤患儿作为对照组,比较两组患儿中,不同创伤类型患儿在保守治疗中的输血量、住院时间、保守治疗成功率;以及不同创伤类型的患儿中转手术治疗的术中出血量、手术时间及术后并发症情况。结果:选择保守治疗的患儿中,观察组肝损伤、脾损伤、肾损伤患儿的保守治疗成功率均高于对照组,输血量均少于对照组,住院时间均短于对照组,差异均具有统计学意义(P0.05)。结论:数字医学技术应用在儿童腹部实质脏器损伤诊治中,可为治疗方案的选择提供准确的指导,有助于提高治疗方案的效果,改善患儿临床指标,缩短住院时间。

关键词：腹部实质脏器损伤数字医学技术儿童

隐丹参酮对乳腺癌MDA-MB-231细胞自噬和侵袭迁移的影响

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广西医科大学学报 2015年第1期32卷 23-26页

作者：全军利贺文兴吴斯敏李健林刘志明广西医科大学第一附属医院胃肠腺体外科南宁530021

目的:研究隐丹参酮对乳腺癌MDA-MB-231细胞自噬、增殖和侵袭迁移的作用,初步探讨其抗肿瘤的作用机制。方法:用不同浓度隐丹参酮处理MDA-MB-231细胞24,48,72h,MTT法检测细胞活性,计算24h半数抑制浓度(IC50);20μmol/L隐丹参酮处理细胞24h... 详细信息

目的:研究隐丹参酮对乳腺癌MDA-MB-231细胞自噬、增殖和侵袭迁移的作用,初步探讨其抗肿瘤的作用机制。方法:用不同浓度隐丹参酮处理MDA-MB-231细胞24,48,72h,MTT法检测细胞活性,计算24h半数抑制浓度(IC50);20μmol/L隐丹参酮处理细胞24h,吖啶橙染色检测细胞酸性自噬囊泡;Western blot检测自噬标志蛋白LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ(微管相关蛋白1轻链3)及Beclin 1的表达;Transwell小室观察细胞侵袭力;划痕实验检测细胞迁移力。结果:隐丹参酮呈时间-浓度依赖性抑制MDA-MB-231细胞增殖(P<0.05);与未加药组相比,隐丹参酮处理组细胞酸性自噬囊泡增多,Beclin 1蛋白表达增多且LC3Ⅱ/LC3Ⅰ值增高(P<0.05);transwll小室及划痕实验发现,经隐丹参酮处理的MDA-MB-231细胞穿膜数及迁移数均较未加药组少,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:隐丹参酮可诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞自噬,从而抑制其增殖和侵袭迁移的潜能。

关键词：隐丹参酮乳腺癌自噬侵袭迁移

缺氧微环境下HIF-1α对乳腺癌上皮间质转化及侵袭迁移的影响

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广西医科大学学报 2015年第3期32卷 410-413页

作者：吴斯敏刘志明贺文兴全军利李健林陈皓广西医科大学第一附属医院胃肠腺体外科南宁530021

目的:探讨在缺氧微环境中,缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)对乳腺癌发生上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)及侵袭迁移的影响。方法:选取我院手术治疗的乳腺癌患者100例,采用酶联免疫吸附法、免疫组织化学法检测乳腺癌患... 详细信息

目的:探讨在缺氧微环境中,缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)对乳腺癌发生上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)及侵袭迁移的影响。方法:选取我院手术治疗的乳腺癌患者100例,采用酶联免疫吸附法、免疫组织化学法检测乳腺癌患者血液、癌组织及癌旁正常组织中HIF-1α及EMT相关蛋白E-钙黏素(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)的表达。结果:HIF-1α、E-cadherin、Vimentin在乳腺癌组织中的表达水平高于癌旁正常组织(P0.05)。有腋窝淋巴结转移者、TNM分期高、组织学级别高、ER、PR阴性表达的乳腺癌患者HIF-1α、Vimentin阳性率增高,E-cadherin阳性率降低。结论:HIF-1α的表达与乳腺癌EMT及侵袭迁移可能有关。

关键词：乳腺癌 HIF-1α EMT E-cadherin Vimentin