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高校实验室管理研究

兰州教育学院学报 2015年第5期31卷 43-44页

作者：傅雅娟福建师范大学南方生物医学研究中心福建福州350108

随着近年来我国高等教育的飞速发展,高校实验室的管理也需不断改革创新,与时俱进。本文探讨了实验室管理体制和机构改革、仪器设备管理、实验技术人员队伍建设、信息化管理平台建设等内容,以期建立更加科学、有效的实验室管理运行机制。

关键词：高校实验室管理实验室建设

低温电转联合Sleeping beauty转座子系统增强CAR-T修饰效率

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中国细胞生物学学报 2019年第12期41卷 2368-2378页

作者：赵军红郑立群傅雅娟蔡少丽福建师范大学南方生物医学研究中心福州350117 福建省天然免疫生物学重点实验室福州350117

嵌合抗原受体T淋巴细胞(chimeric antigen receptor T cells,CAR-T cells)在恶性B淋巴细胞瘤治疗上取得了显著成效。CAR-T治疗通过分离病人外周血单个核细胞PBMC,经适当的基因编辑手段表达CAR结构,令T细胞获得靶向肿瘤细胞的能力,扩增... 详细信息

嵌合抗原受体T淋巴细胞(chimeric antigen receptor T cells,CAR-T cells)在恶性B淋巴细胞瘤治疗上取得了显著成效。CAR-T治疗通过分离病人外周血单个核细胞PBMC,经适当的基因编辑手段表达CAR结构,令T细胞获得靶向肿瘤细胞的能力,扩增后过继到体内完成对肿瘤的杀伤。该文主要探索在低温状态将含有睡美人(Sleeping beauty)转座子/转座酶系统的质粒电转进PBMC内表达CD19-CAR制备CAR-T细胞,并添加特定细胞因子进行增殖,并验证CAR表达、细胞活性与杀伤能力。结果表明,转染效率高达58.8%±4.1%,增殖后的CAR-T细胞能够整合并表达CAR基因,在与靶细胞共培养后,表现出与慢病毒制备的CD19-CAR相似的细胞活性和毒性。该文确定了一种基于Sleeping beauty转座子/转座酶和电转制备CAR-T细胞的方法,为临床CAR-T治疗提供了新的思路。

关键词：嵌合抗原受体 CD19 电转T淋巴细胞睡美人转座子慢病毒

DNA-PK抑制剂在头颈部鳞癌中提高联合放疗和免疫检查点抑制剂的抗肿瘤活性

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DNA-PK抑制剂在头颈部鳞癌中提高联合放疗和免疫检查点抑制剂的抗...

利用电转的方法对T细胞TET2基因敲除并探讨TET2对T细胞增殖的影响

第十四届全国免疫学学术大会

作者：甘林川傅雅娟陈骐福建师范大学南方生物医学研究中心

研究背景:近年来,免疫检查点抑制剂(ICIs)已被证实对晚期HNSCC患者有积极的治疗作用,然而其疾病控制率只约为20%。HNSCC对放射治疗较敏感,根治性放疗能够有效控制早期HNSCC进程,但是很多患者确诊室已经是晚期或是局部晚期,而且在接受放... 详细信息

研究背景:近年来,免疫检查点抑制剂(ICIs)已被证实对晚期HNSCC患者有积极的治疗作用,然而其疾病控制率只约为20%。HNSCC对放射治疗较敏感,根治性放疗能够有效控制早期HNSCC进程,但是很多患者确诊室已经是晚期或是局部晚期,而且在接受放疗治疗后仍让有复发和远处迁移的可能。越来越多的临床前研究表明,放射治疗联合ICIs可以提高包括HNSCC在内的多种癌症的控制率,降低复发率。因此,放射治疗和ICIs联合治疗可能成为未来晚期HNSCC的一种有效的治疗手段。研究目的:本课题旨在研究DNA-PK抑制剂是否能提高放疗和免疫检查点抑制剂的抗肿瘤活性及其作用机制。研究方法:***7细胞构建皮下种植瘤模型,分为对照组、PD-1单抗单药组、DNA-PK抑制剂组、放疗组、PD-1单抗+放疗组、DNA-PK抑制剂+PD-1单抗组、DNA-PK抑制剂+PD-1单抗+放疗组。小鼠的肿瘤体积和体重每3天测量,21天后收取肿瘤称量湿重。2.在上述不同分组肿瘤组织免疫荧光法直接标记FITC-gH2AX,检测DNA断裂情况;标记DC细胞,杀伤性CD8+T细胞,检测淋巴细胞浸润和分布。3.通过免疫共聚焦检测肿瘤组织中细胞质中dsDNA数量。4.实时荧光定量PCR检测上述各组小鼠肿瘤组织cGAS-STING通路相关因子mRNA表达水平。5.蛋白质免疫印迹杂交检测上述各组小鼠肿瘤组织cGAS-STING通路cGAS、STING、p-TBK1、TBK1、p-IRF3、IRF3结果:1.三因素联合治疗组的治疗效果显著优于单一治疗或者两两联合治疗2.在DNA-PK抑制剂存在的条件下,肿瘤细胞中gH2AX明显增多,而且随着计量递增;同时DNA-PK抑制剂+PD-1单抗+放疗组肿瘤组织中淋巴细胞浸润数量增加。3.三因素联合治疗组细胞质中dsDNA数量明显增加。4.联合治疗组中各种ISGs表达升高,在DNA-PK抑制剂+PD-1单抗+放疗组尤为明显。5.在联合治疗的情况下p-TBK1、p-IRF3等蛋白在WB实验中都明显增强。结论:DNA-PK抑制剂能提高放疗和免疫检查点抑制剂的抗肿瘤活性;抑制DNA-PK会导致胞质dsDNA的增加,从而激活天然免疫cGAS-STING通路,释放各种ISGs;联合治疗组肿瘤组织中各种效应免疫细胞浸润增加,促进效应免疫细胞杀伤肿瘤细胞。

关键词： DNA-PK cGAS-STING HNSCC 免疫检查点抑制剂放疗

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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生物技术通报 2020年第1期36卷 229-237页

作者：杨雷叶洲杰李兆龙沈阳坤傅雅娟福建师范大学南方生物医学研究中心福州350117 福建省儿童医院中心实验室福州350005 福建省农业科学院畜牧兽医研究所福州350013

近年来,利用重组病毒对T细胞进行基因编辑用于免疫治疗,受到了广泛重视。然而,重组病毒因存在随机整合,制备耗时长且昂贵的缺点制约了其应用。与此同时,电转染技术的应用能够快速将外源DNA带入细胞内,有助于提高T细胞基因编辑效率。TET(... 详细信息

近年来,利用重组病毒对T细胞进行基因编辑用于免疫治疗,受到了广泛重视。然而,重组病毒因存在随机整合,制备耗时长且昂贵的缺点制约了其应用。与此同时,电转染技术的应用能够快速将外源DNA带入细胞内,有助于提高T细胞基因编辑效率。TET(Ten-eleven translocation)家族蛋白可以催化5-甲基胞嘧啶(5mC)转化为5-羟甲基胞嘧啶(5hmC),5hmC作为细胞中的DNA去甲基化酶,在细胞基因组表观遗传学中起着重要调控作用。研究表明TET2基因的缺失能够促进CAR-T细胞的快速繁殖,产生强力的CAR-T细胞。该研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术对TET2基因进行敲除。首先对sgRNA进行体外转录,与大肠杆菌诱导表达的Cas9蛋白孵育形成Cas9:gRNA核糖核蛋白复合物(RNP),并在体外酶切验证sgRNA的活性。接着利用电转染技术将Cas9:gRNA核糖核蛋白复合物(RNP)带入细胞内,并检测T细胞基因编辑效率。最后利用流式细胞分析技术检测T细胞的增殖情况。基因测序与T7EⅠ酶切结果表明,T细胞中的TET2基因被成功敲除,T细胞活力和功能并未受到影响。流式细胞技术,CCK-8以及台盼蓝细胞活率检测结果显示缺失Tet2蛋白后,T细胞的增殖速率明显快于野生型T细胞。该研究为非病毒载体替代传统的慢病毒载体构建携带嵌合抗原T细胞奠定了基础,具有制备周期短,安全性高的特点。同时TET2缺失促进了CAR-T细胞的增殖,使其能够引发有效的抗肿瘤反应,为CAR-T细胞免疫治疗提供了新的思路。

关键词： Cas9核糖核蛋白(Cas9 RNP) TET2 电转染基因敲除 T细胞增殖

从单个兔B细胞获得抗人cGAS蛋白单克隆抗体

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福建师范大学学报（自然科学版） 2019年第6期35卷 75-80页

作者：傅雅娟陈苏星蔡少丽林莉莉林清强福建师范大学南方生物医学研究中心福建福州350117 福建师范大学生命科学学院福建福州350117

为研究环鸟苷酸-腺苷酸合成酶入核的机制,利用兔外周血B细胞筛选抗人cGAS蛋白单克隆抗体.针对已三次免疫人cGAS(161-522)蛋白的新西兰兔,运用流式细胞术得到阳性效应B细胞,在单管里对单细胞裂解,得到总RNA,逆转录生成cDNA,两步巢式PCR... 详细信息

为研究环鸟苷酸-腺苷酸合成酶入核的机制,利用兔外周血B细胞筛选抗人cGAS蛋白单克隆抗体.针对已三次免疫人cGAS(161-522)蛋白的新西兰兔,运用流式细胞术得到阳性效应B细胞,在单管里对单细胞裂解,得到总RNA,逆转录生成cDNA,两步巢式PCR扩增同一个B细胞来源的抗体重链和轻链可变区序列,抗体基因扩增成功率高达80%以上.293T重组表达兔抗人cGAS蛋白单克隆抗体并鉴定,获得1个具有较好结合特异性的兔抗人cGAS蛋白单克隆抗体,ELISA检测结果显示抗体的效价达1∶10 000.

关键词： cGAS 单细胞 B细胞抗体

叠氮化钠诱导细胞线粒体损伤及mtDNA的释放

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现代盐化工 2019年第6期46卷 1-4页

作者：胡好江亭方义军傅雅娟福建师范大学福建福州350100 广州中科蓝华生物科技有限公司广东广州510700

线粒体是真核细胞中具有重大作用的细胞器,在调控细胞凋亡等方面也发挥着重要作用。一旦线粒体受到损伤且无法发挥其正常功能,将会导致细胞内环境变化,最终导致组织、器官损伤病变,尤其对能量要求较高的一些组织或者器官影响很大。希望... 详细信息

线粒体是真核细胞中具有重大作用的细胞器,在调控细胞凋亡等方面也发挥着重要作用。一旦线粒体受到损伤且无法发挥其正常功能,将会导致细胞内环境变化,最终导致组织、器官损伤病变,尤其对能量要求较高的一些组织或者器官影响很大。希望探索线粒体损伤机制,减少线粒体损伤及其影响。通过叠氮化钠建立线粒体损伤模型,并通过检测叠氮化钠刺激后细胞中腺嘌呤核苷三磷酸水平以及线粒体膜电位变化情况等方法证实建立的线粒体损伤模型是有效的,可用于线粒体损伤机制的研究。成功使用叠氮化钠刺激L929细胞系建立线粒体损伤模型,并在离体线粒体损伤中检测到mtDNA的释放。叠氮化钠使用的最佳质量浓度会对线粒体产生损伤,并影响其正常功能,且对细胞活率影响不大。

关键词：叠氮化钠线粒体损伤线粒体

LAG-3抗体与免疫调节剂cGAMP联合治疗在肿瘤免疫治疗中的作用

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LAG-3抗体与免疫调节剂cGAMP联合治疗在肿瘤免疫治疗中的作用

高致病性禽流感病毒广谱嵌合抗体的构建表达及活性研究

第十四届全国免疫学学术大会

作者：任慕昀黄保婷方义军赵向前沈阳坤傅雅娟陈骐福建省天然免疫生物学重点实验室、福建师范大学南方生物医学研究中心

cGAMP是STING的天然配体,能活化STING接头蛋白形成二聚体,继而招募TBK1激活IRF3形成蛋白复合物诱导IFN-β产生。LAG-3被认为是一个具有吸引力的抗肿瘤靶点之一,与LAG-3靶点药物联合治疗的免疫相关临床研究已不在少数,但LAG-3抗体的抗肿... 详细信息

cGAMP是STING的天然配体,能活化STING接头蛋白形成二聚体,继而招募TBK1激活IRF3形成蛋白复合物诱导IFN-β产生。LAG-3被认为是一个具有吸引力的抗肿瘤靶点之一,与LAG-3靶点药物联合治疗的免疫相关临床研究已不在少数,但LAG-3抗体的抗肿瘤作用与cGAS-STING通路是否相关还未有报道,cGAMP与LAG-3抗体联用的效果也尚不明确。此外对cGAS-STING先天免疫通路参与LAG-3抑制性信号通路调控机制的理解显得尤为重要。目前,我们构建了cGAS、STING、IRF3敲除的L929,MC38细胞系,并通过刺激激活其与未敲除细胞中cGAS-STING通路,再通过流式细胞术检测LAG-3表达量的变化。结果推测cGAS-STING通路的激活对LAG-3的表达尤为重要。我们的工作通过Expi293FTM真核表达系统表达LAG-3抗体、原核表达系统表达cGAS蛋白,生物合成法合成cGAMP、构建小鼠肿瘤模型来探究LAG-3抗体与cGAMP联合治疗的效果。结果显示,cGAMP与LAG-3抗体联合治疗比任一单一治疗更为有效的减缓了小鼠结肠癌肿瘤的生长速率。为肿瘤的联合治疗方法及LAG-3与cGAS-STING通路的关系做了一个初步探索,为后续相关研究提供了思路。

关键词： LAG-3 肿瘤免疫治疗免疫检查点肿瘤联合治 cGAS-STING通路

来源： cnki会议评论

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厦门大学学报（自然科学版） 2010年第6期49卷 845-849页

作者：夏琳罗文新吴君刘彦宁傅雅娟陈毅歆陈鸿霖金鑫夏宁邵厦门大学国家传染病诊断试剂及疫苗工程技术研究中心生命科学学院厦门大学医学院福建厦门361005

高致病性禽流感病毒高度变异且缺乏有效的治疗药物.在前期研究工作中,本课题组发现一株鼠源广谱中和单抗13D4,在动物实验中显示出对H5N1禽流感病毒具有广谱治疗效果.在本研究中,从分泌13D4单克隆抗体的杂交瘤细胞株中抽提总RNA,经RT-PC... 详细信息

高致病性禽流感病毒高度变异且缺乏有效的治疗药物.在前期研究工作中,本课题组发现一株鼠源广谱中和单抗13D4,在动物实验中显示出对H5N1禽流感病毒具有广谱治疗效果.在本研究中,从分泌13D4单克隆抗体的杂交瘤细胞株中抽提总RNA,经RT-PCR扩增出轻重链可变区DNA序列,并分别与人IgG1的轻重链恒定区基因序列拼接,构建人-鼠嵌合抗体.筛选出稳定表达嵌合抗体的CHO细胞株,从培养上清中纯化出嵌合抗体.竞争Elisa结果表明,嵌合抗体与鼠源单抗能够识别同一个抗原表位并具有相似的亲和力.血凝抑制反应和中和活性测定结果证明,13D4嵌合抗体保留了对不同亚型H5N1病毒的广谱反应性,并且对两株H5N1病毒具有中和活性.本研究获得的13D4嵌合抗体将具有潜在的治疗价值.

关键词： H5N1 嵌合抗体广谱活性

临床医学专业硕士教学模式探讨——基于SEMINAR上BOPPPS联合PAL教学模式

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现代商贸工业 2025年第1期 250-252页

作者：邹洁雅杨晓娟杨庄青昆明医科大学第三附属医院(云南省肿瘤医院)乳腺外三科云南昆明650018

目的临床医学专业学位硕士研究生参与住院医师规范化培训,在此“双轨合一”模式下,探讨基于SEMINAR上BOPPPS联合PAL教学模式的作用和意义。方法入组我院2022年8月—2023年2月至科室规培轮转时长大于2月的50名研究生,1∶1随机分为2组,对... 详细信息

目的临床医学专业学位硕士研究生参与住院医师规范化培训,在此“双轨合一”模式下,探讨基于SEMINAR上BOPPPS联合PAL教学模式的作用和意义。方法入组我院2022年8月—2023年2月至科室规培轮转时长大于2月的50名研究生,1∶1随机分为2组,对照组进行传统培养,试验组采取新型教学模式。轮转结束后学员进行专题讲座或文献PPT汇报,MINI-CEX考试,填写满意度问卷调查表。结果试验组和对照组使用PPT汇报后评分,差异具有统计学意义(P0.05)。结论住院医师规范化培训与临床医学专业学位硕士研究生教育“双轨合一”模式下,基于SEMINAR上BOPPPS+PAL教学模式更有利于培养学生主动学习、表达、使用工具等能力。

关键词： SEMINAR教学法 BOPPPS联合PAL教学模式临床医学专业硕士 “双轨合一”模式