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Expression of vascular endothelial growth factor and its fetal liver kinase-1 receptor in spinal cord and dorsal root ganglia after neurotomy of sciatic nerve in rats

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Chinese Journal of Traumatology 2005年第1期8卷 17-22页

作者：傅重洋洪光祥王发斌 Department of Hand Surgery Union Hospital Tongji Medical College Huazhong University of Science and Technology Wuhan 430022 China

Objective: To investigate the expression and pattern of vascular endothelial growth factor (VEGF) and its fetal liver kinase-1 (Flk-1) receptor in spinal cord and dorsal root ganglia after neurotomy of sciatic nerve in rats. Methods: Forty-five adult male Wistar rats were divided randomly into a control group (n=5) and an experimental group (n=40). The bilateral sciatic nerves of the rats in the experimental group underwent neurotomy and the L 4-L 6 spinal cord and the corresponding dorsal root ganglia were harvested respectively at 8 hours, and 1, 3, 5, 7, 10, 14 and 21 days (8 subgroups with 5 rats each) after operation. The rats in the control group only underwent an exposure of sciatic nerve without neurotomy. Immunohistochemistry and image analysis were used to study the expression of VEGF and its Flk-1 receptor. Results: Both VEGF and Flk-1 receptor expressed in the normal rat spinal cord and dorsal root ganglia. In response to neurotomy, their expression reached a higher level and persisted for a short time then declined to the normal level rapidly. Besides, positive staining of Flk-1 was observed in both glial cells and nerve fibers, which located in the white matter of the spinal ***: VEGF can promote the regeneration of peripheral nerves from the angle of central neurons, which establishes the experimental and theoretical foundation for VEGF treating peripheral nerve injuries.

关键词： Vascular endothelial growth factors Nerve regeneration Spinal cord Ganglia, spinal Rats

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应用双津下缝合法修复跟腱断裂疗效分析

中国修复重建外科杂志 2011年第10期25卷 1214-1217页

作者：傅重洋曲巍程超鲁明蒋华军吕德成大连医科大学附属第一医院骨外科辽宁大连116027

目的探讨采用0号可吸收普迪思圈套线(PDS-Ⅱ线)双津下缝合法修复跟腱断裂的临床疗效。方法 2005年1月-2008年12月,收治36例跟腱断裂患者。男29例,女7例;年龄21～50岁,平均36岁。运动损伤25例,摔伤4例,锐器割伤6例,其他伤1例。新鲜闭合损... 详细信息

目的探讨采用0号可吸收普迪思圈套线(PDS-Ⅱ线)双津下缝合法修复跟腱断裂的临床疗效。方法 2005年1月-2008年12月,收治36例跟腱断裂患者。男29例,女7例;年龄21～50岁,平均36岁。运动损伤25例,摔伤4例,锐器割伤6例,其他伤1例。新鲜闭合损伤22例,新鲜开放损伤6例,伤后至入院时间1～10 d,平均6 d;陈旧性闭合损伤8例,伤后至入院时间43～63 d,平均51 d。提踵试验及Thopmson征均呈阳性。患者均采用0号可吸收PDS-Ⅱ线双津下缝合法修复。术后于踝跖屈30°位短腿石膏固定6周后,开始功能锻炼。结果术后2例陈旧性跟腱断裂患者切口愈合不良,经对症治疗后切口愈合;其余切口均Ⅰ期愈合。患者均获随访,随访时间12～24个月,平均15个月。随访期间均未发生跟腱再次断裂及反射性交感神经营养不良。患者踝关节活动度与健侧相比,7例无减少,16例减少1～10°,12例减少10～20°,1例减少25°。根据Termann跟腱损伤临床评价标准,评分为74～96分,平均90分;获优24例,良11例,可1例,优良率为97.2%。结论双津下缝合法手术操作简便,缝线在腱内无横行交叉,修复断裂跟腱后对其血运影响小。PDS-Ⅱ线可提供高强度张力,并可完全吸收,不易发生局部粘连。采用该方法修复跟腱断裂术后并发症发生率较低,可获得较好疗效。

关键词：跟腱断裂双津下缝合法可吸收普迪思圈套线跟腱修复

局部注射血管内皮生长因子基因促进大鼠坐骨神经再生:组织学与电生理指标的评估

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中国组织工程研究与临床康复 2007年第19期11卷 3715-3718页

作者：傅重洋洪光祥王发斌大连医科大学附属第一医院骨外科辽宁省大连市116011 华中科技大学同济医学院附属协和医院手外科湖北省武汉市430022

目的:局部应用血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白可加速神经再生,促进其功能恢复。探讨局部注射pHVEGF165质粒对周围神经再生的作用。方法:实验于2004-03/06在武汉协和医院手外科实验室完成。实验动物:成... 详细信息

目的:局部应用血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白可加速神经再生,促进其功能恢复。探讨局部注射pHVEGF165质粒对周围神经再生的作用。方法:实验于2004-03/06在武汉协和医院手外科实验室完成。实验动物:成年雄性Wistar大鼠45只。实验分组:随机分成3组,每组15只。即对照组、pHVEGF165质粒25μg和50μg组。实验方法:①制备pHVEGF165质粒。②制成双侧坐骨神经损伤动物模型,于神经断端间及周围肌肉内对照组局部注射生理盐水,pHVEGF165质粒25μg组和50μg组局部分别注射pHVEGF16525μg,50μg。实验评估:①术后4,6和8周行腓肠肌湿重检测与组织形态学观察。②术后6,8周行神经断面图象分析,测量有髓纤维密度、平均轴突直径、髓鞘厚度与有髓纤维总数。③术后8周通过电生理检测记录复合肌肉动作电位波幅,潜伏期,计算出运动神经传导速度。统计分析以上数据比较各组大鼠坐骨神经再生情况。结果:45只大鼠全部进入结果分析。①坐骨神经组织学检查结果:术后4周,各组大鼠神经均以大量变性的髓鞘为主;6,8周时,对照组神经断面仍可见到一些变性神经纤维,再生之神经纤维数量少,pHVEGF165质粒组的再生神经纤维数量增多也更加成熟,且pHVEGF165质粒50μg组再生神经纤维已接近正常神经组织。②腓肠肌湿重:神经损伤6周及8周,pHVEGF165质粒50μg组均明显优于对照组、pHVEGF165质粒25μg组[6周:(733.64±41.69),(491.82±40.21),(680.08±48.70)mg,8周:(906.68±35.03),(577.26±57.22),(772.74±61.14)mg,P<0.05]。③坐骨神经图象分析:6周和8周,pHVEGF165质粒25μg组、50μg组明显优于对照组(P<0.05),pHVEGF165质粒50μg组最优(P<0.05)。④电生理检测结果:术后8周,pHVEGF165质粒50μg组运动神经传导速度、复合肌肉动作电位波幅及潜伏期指标显示明显优于pHVEGF165质粒25μg组和对照组(P<0.05),pHVEGF165质粒25μg组居中。结论:局部注射phVEGF165质粒治疗周围神经损伤具有可行性,可促进神经轴突再生,加速神经功能恢复。并且这种作用可能存在剂量依赖性。

关键词：血管内皮生长因子神经再生周围神经/损伤组织构建

血管内皮生长因子受体在大鼠脊髓组织中的表达与分布(英文)

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中国组织工程研究与临床康复 2007年第23期11卷 4638-4641页

作者：傅重洋洪光祥王发斌大连医科大学附属第一医院骨外科辽宁省大连市116011 华中科技大学同济医学院附属协和医院手外科湖北省武汉市430022

背景:血管内皮生长因子具有特异性促内皮细胞分裂原的作用,可促进新生血管生长,其受体在大鼠脊髓组织中的表达与分布有待观察。目的:观察血管内皮生长因子受体1与血管内皮生长因子受体2在大鼠脊髓组织的表达与分布。设计:随机对照观察... 详细信息

背景:血管内皮生长因子具有特异性促内皮细胞分裂原的作用,可促进新生血管生长,其受体在大鼠脊髓组织中的表达与分布有待观察。目的:观察血管内皮生长因子受体1与血管内皮生长因子受体2在大鼠脊髓组织的表达与分布。设计:随机对照观察。单位:大连医科大学附属第一医院骨外科;华中科技大学同济医学院附属协和医院手外科。材料:选用10只清洁级成年雄性Wistar大鼠,体质量180～200g,由华中科技大学同济医学院动物试验中心提供。免疫组化一抗购于SantaCruz公司,二抗三抗均购于北京中山公司。逆转录-聚合酶链式反应试剂盒为Promega产品,Trizol试剂购于Invitrogen公司,血管内皮生长因子受体1和血管内皮生长因子受体2抗体(1∶400,Santa Cruz Biotechnology),血管内皮生长因子受体1及血管内皮生长因子受体-2引物由北京奥克公司设计。方法:实验于2004-03/06在武汉协和医院手外科实验室完成。①脊髓前角血管内皮生长因子受体表达的检测:100g/L水合氯醛腹腔麻醉大鼠,取腰4～6段脊髓入固定液中4℃固定过夜,常规脱水,透明,石蜡包埋,连续切片约5μm厚,进行免疫组织化学染色观察血管内皮生长因子受体表达分布。②脊髓血管内皮生长因子受体mRNA的表达检测:取5只大鼠,各取腰4～6段脊髓组织50mg,离心,紫外分光光度计检测总RNA含量,对合成得到的cDNA进行PCR扩增,取10μLPCR产物在20g/L琼脂糖凝胶上电泳,0.1mg/L溴乙锭染色,紫外灯下观察记录结果并照相。凝胶成像分析系统上扫描定量,读取各条带的灰度值,以β-actin条带的灰度值为1,其它目的片段灰度值与其相比较,记录灰度比,分析目的片段的表达水平。主要观察指标:①大鼠脊髓前角血管内皮生长因子受体1及血管内皮生长因子受体2蛋白的表达分布。②脊髓血管内皮生长因子受体mRNA的表达检测结果。结果:①血管内皮生长因子的两种受体蛋白在大鼠正常脊髓组织的微血管均有表达,并且血管内皮生长因子受体2更主要的表达于脊髓运动神经元、胶质细胞及周边白质中的神经纤维。②凝胶成像分析系统扫描结果示正常脊髓组织中血管内皮生长因子受体-2的含量明显高于血管内皮生长因子受体1的含量(0.874±0.222,0.486±0.181,P<0.05)。结论:血管内皮生长因子通过血管内皮生长因子受体1、血管内皮生长因子受体2两种受体共同作用促进脊髓微血管的形成,维持神经内环境的稳定;通过血管内皮生长因子受体2发挥神经营养和神经保护作用。

关键词：血管内皮生长因子受体脊髓大鼠神经再生

利用神经再生室观察FK506促进神经再生的实验研究

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中华医学杂志 2005年第28期85卷 1978-1981页

作者：吕德成袁先厚张卫国傅重洋武汉大学附属中南医院外科 430060 大连医科大学附属第一医院

目的探讨免疫抑制剂FK506促神经再生的作用及药物应用方法。方法将雄性SD大鼠60只随机分成3组,每组20只,切断双侧坐骨神经制成坐骨神经再生室模型。A组在再生室内注入生理盐水;B组在再生室内注入盐水,颈后皮下注射FK5061mg/kg,连续14d;... 详细信息

目的探讨免疫抑制剂FK506促神经再生的作用及药物应用方法。方法将雄性SD大鼠60只随机分成3组,每组20只,切断双侧坐骨神经制成坐骨神经再生室模型。A组在再生室内注入生理盐水;B组在再生室内注入盐水,颈后皮下注射FK5061mg/kg,连续14d;C组在再生室内注入1μg/mlFK506。观察神经损伤局部的免疫反应、检测腓肠肌湿重、组织形态学及图像分析、电生理学。结果B、C组大鼠神经损伤局部淋巴细胞浸润程度较A组轻微。6周时大鼠腓肠肌湿重为:A组平均579mg,B组平均725mg,C组平均761mg,B、C组大鼠腓肠肌湿重明显优于A组;组织形态学观察与图像分析显示,有髓神经纤维总数为:A组平均720根,B组平均778根,C组平均772根,在有髓神经纤维密度、平均轴突直径、髓鞘厚度等指标中,B组结果明显优于A组。结论(1)大鼠全身应用FK506后具有神经保护和神经营养作用,可加快神经功能的恢复。(2)局部应用FK506对早期损伤神经有一定的保护作用。

关键词：神经再生 FK506 实验研究动物模型免疫抑制剂

壳聚糖复合他克莫司缓释鞘管促进大鼠坐骨神经再生的实验研究

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中华医学杂志 2006年第15期86卷 1065-1068页

作者：张卫国吕德成傅重洋曲巍大连医科大学附属第一医院骨科 116011

目的观察壳聚糖复合他克莫司(FK506)缓释鞘管结合3mm小间隙桥接神经对神经再生的影响。方法将45只雄性SD大鼠,随机分成3组,切断双侧坐骨神经制成坐骨神经再生室模型,并保留断端间隙为3mm。实验所用得桥接材料分别是:硅胶管、壳聚糖鞘管... 详细信息

目的观察壳聚糖复合他克莫司(FK506)缓释鞘管结合3mm小间隙桥接神经对神经再生的影响。方法将45只雄性SD大鼠,随机分成3组,切断双侧坐骨神经制成坐骨神经再生室模型,并保留断端间隙为3mm。实验所用得桥接材料分别是:硅胶管、壳聚糖鞘管、壳聚糖复合FK506缓释鞘管。分别于术后6、8、12周观察桥接材料周围的瘢痕形成及吸收情况,并行神经电生理、组织学观察、图象分析、腓肠肌湿重检测比较各组大鼠坐骨神经的再生与功能恢复情况。结果术后大体标本观察显示:对照组再生室与周围组织粘连较重;壳聚糖鞘管组、壳聚糖复合FK506鞘管组神经桥接处较易与周围组织剥离,粘连轻微。6周时各组再生室均尚存;8周时壳聚糖鞘管组、壳聚糖复合FK506鞘管组桥接材料开始吸收;12周时壳聚糖鞘管组、壳聚糖复合FK506鞘管组桥接材料不完整或仅有碎片残留,神经连续性建立,且与周围组织无明显粘连。评估神经再生的运动神经传导速度、复合肌肉动作电位、潜伏期检测指标,壳聚糖复合FK506鞘管组(10.2m/s±0.8m/s、4.3mV±0.3mV、1.9ms±0.4ms)明显优于对照组(4.2ms±0.5ms、1.2mV±0.3mV、7.5ms±0.4mV)、壳聚糖鞘管组(9.5ms±0.3ms、2.7mV±0.3mV、3.1ms±0.4ms),P<0.05。壳聚糖鞘管组虽然各指标均数优于对照组,但之间差异无统计学意义。结论应用壳聚糖复合FK506缓释鞘管桥接大鼠坐骨神经,在体内稳定2个月以上开始降解,能够明显促进神经再生与功能恢复,且降解产物为多糖类,不影响神经再生微环境。

关键词：神经再生周围神经迟效制剂他克莫司壳聚糖

应用注射器针导引掌侧经皮Bold空心螺钉固定腕舟骨骨折

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中华手外科杂志 2014年第3期30卷 188-190页

作者：傅重洋丁晖原赵巍蒋华军曲巍大连医科大学附属第一医院手显微外科 116011

目的探讨利用50ml注射器针作为导向器掌侧经皮3．0mmBold空心螺钉固定腕舟骨骨折的临床疗效。方法选择2006年7月至2011年3月治疗的腕舟骨骨折患者24例。骨折根据Herbert分型为A2型3例，B1型2例，B2型11例，C型骨折5例，D1型3例。术中C... 详细信息

目的探讨利用50ml注射器针作为导向器掌侧经皮3．0mmBold空心螺钉固定腕舟骨骨折的临床疗效。方法选择2006年7月至2011年3月治疗的腕舟骨骨折患者24例。骨折根据Herbert分型为A2型3例，B1型2例，B2型11例，C型骨折5例，D1型3例。术中C臂机透视定位，用50ml注射器针经舟骨多角骨关节穿刺，到达舟骨远极骨面。C臂机透视确定注射器针轴线与舟状骨轴线一致，经其打入导针。测深后旋入直径3．0mm Bold空心螺钉。术后腕关节石膏固定2周，循序渐进行功能锻炼。结果所有患者均获得随访，平均15个月（6～24个月）。1例D1型骨折患者骨折未愈合，经再次植骨内固定处理后愈合。其余患者骨折平均愈合时间为18周（8～32周）。所有患者术后均无感染、瘢痕形成、创伤性关节炎及血管神经损伤等并发症。根据Cooney腕关节评分系统，平均得分为91．4分（76～100分）；优14例、良8例、可2例，优良率为91．7％。结论利用注射针作为导向器掌侧经皮Bold空心螺钉固定腕舟骨骨折，使导针打人更加容易、准确，操作更加简便；内固定安全有效，切口小，软组织剥离少，是治疗HerbertA2、B1、B2、C型腕舟骨骨折的理想术式。

关键词：舟骨骨折注射器针掌侧经皮固定空心螺钉

miR-152通过调控CAND1基因促进雪旺细胞迁移的实验研究

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中华手外科杂志 2021年第5期37卷 369-374页

作者：韩峰刘司达姜培龙蒋华军傅重洋曲巍大连医科大学附属第一医院手显微外科大连116011

目的探讨miR-152对雪旺细胞(Schwann cells,SCs)迁移作用的影响。方法构建大鼠坐骨神经损伤模型,分别于损伤后1、4、7、14 d采用qRT-PCR检测miR-152和CAND1基因在损伤神经中的表达情况;Western blot和qRT-PCR检测miR-152和CAND1在SCs中... 详细信息

目的探讨miR-152对雪旺细胞(Schwann cells,SCs)迁移作用的影响。方法构建大鼠坐骨神经损伤模型,分别于损伤后1、4、7、14 d采用qRT-PCR检测miR-152和CAND1基因在损伤神经中的表达情况;Western blot和qRT-PCR检测miR-152和CAND1在SCs中的表达;Transvvell法测定SCs迁移能力;以焚光素酶报告基因和RNA免疫沉淀法(RNA binding protein immunoprecipitation,RIP)证实miR-152与CAND1的相关性。结果损伤神经近端和远端神经组织中miR-152水平显著升高,miR-152的过度表达促进了SCs迁移,而miR-152抑制剂转染的SCs则明显抑制了细胞迁移。结果提示CAND1是miR-152的靶基因,此外miR-152对CAND1的表达具有负调控作用,CAND1表达上调阻断了miR-152介导的促进SCs迁移作用。结论周围神经损伤后,miR-152可以通过抑制CAND1的表达促进SCs迁移作用。

关键词：周围神经动物实验微小RNAs 雪旺细胞 CAND1

血管内皮生长因子对神经系统血管再生与神经营养作用研究进展

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国外医学（骨科学分册） 2005年第5期26卷 280-283页

作者：傅重洋洪光祥华中科技大学同济医学院附属协和医院手外科武汉430022

近年来一系列研究表明,血管内皮生长因子除了具有促进新生血管形成的主要作用外,还可以直接作用于神经元及神经胶质细胞,刺激它们生长、存活,促进轴突再生。因为这种双重特性,它在一些神经系统疾病,如脊髓损伤、周围神经损伤、糖尿病性... 详细信息

近年来一系列研究表明,血管内皮生长因子除了具有促进新生血管形成的主要作用外,还可以直接作用于神经元及神经胶质细胞,刺激它们生长、存活,促进轴突再生。因为这种双重特性,它在一些神经系统疾病,如脊髓损伤、周围神经损伤、糖尿病性神经病变、急慢性缺血性神经病变、神经退行性病变中起着重要的作用。该文就血管内皮生长因子的生物学特点、信号传导及在神经营养与保护方面的近年研究进展作一简要综述。

关键词：血管内皮生长因子 VEGF受体神经营养神经再生神经营养作用神经系统疾病血管再生糖尿病性神经病变缺血性神经病变神经退行性病变