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重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗和鸡新城疫、禽流感(H9亚型)、禽腺病毒病(Ⅰ群4型)三联灭活疫苗联合免疫效果研究

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中国家禽 2024年第6期46卷 105-111页

作者：沈亚菊陶建丰冯高乐邵高姜永其黄杰偲倪征张存林瑞平平湖市畜牧兽医站浙江嘉兴314200 平湖市动物监督所浙江嘉兴314200 浙江群大畜牧养殖有限公司浙江嘉兴314200 浙江省农业科学院畜牧兽医研究所浙江杭州310000

为评价重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗和鸡新城疫、禽流感(H9亚型)、禽腺病毒病(Ⅰ群4型)三联灭活疫苗混合后的联合免疫效果,试验将120只11日龄健康商品代黄羽肉鸡随机分成4组,设混苗联合免疫组、分点免疫组和单苗免疫组,分别接种疫... 详细信息

为评价重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗和鸡新城疫、禽流感(H9亚型)、禽腺病毒病(Ⅰ群4型)三联灭活疫苗混合后的联合免疫效果,试验将120只11日龄健康商品代黄羽肉鸡随机分成4组,设混苗联合免疫组、分点免疫组和单苗免疫组,分别接种疫苗,检测免疫前和免疫后14、21、28和35 d鸡血清中特异性抗体水平,评估两种疫苗混合后联合免疫的安全性和免疫效果。结果显示:免疫后1周内各组鸡精神、食欲、呼吸等生理活动均无异常;混苗联合免疫组免疫后14 d,6种病原抗体滴度均升高,免疫后21 d均达到理想水平,免疫后28 d抗体滴度均高于5 log2;混苗联合免疫组抗体水平和抗体消长规律与其他组基本一致。研究表明,两种禽流感疫苗混合后联合免疫的安全性和免疫效果与单苗免疫相当,无干扰现象,可减少鸡群应激,节省人工,为养禽场免疫程序优化提供参考。

关键词：鸡新城疫禽流感禽腺病毒病联合免疫免疫效果

基于模式病毒评价商品化消毒剂对ASFV的消杀效果

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浙江农业科学 2024年

作者：倪征朱寅初孙冰冰云涛陈柳徐辉叶伟成华炯钢张存浙江省动物疫病预防控制中心浙江省农业科学院畜牧兽医研究所

为了解常用商品化消毒剂对ASFV的消杀效果，为其消毒剂的筛选提供参考。本研究利用PRV与ASFV病毒理化特征的相似性，以PRV作为替代标识毒株，建立了消毒剂细胞评价模型，于体外检测了3种市售消毒剂对生长在BHK-21细胞中PRV的灭活效果。... 详细信息

为了解常用商品化消毒剂对ASFV的消杀效果，为其消毒剂的筛选提供参考。本研究利用PRV与ASFV病毒理化特征的相似性，以PRV作为替代标识毒株，建立了消毒剂细胞评价模型，于体外检测了3种市售消毒剂对生长在BHK-21细胞中PRV的灭活效果。分别从3类消毒剂的不同方面对消毒剂抗病毒作用的影响进行消杀效果的评估。研究显示，有效含量为0.125 g·L-1的戊二醛癸甲溴铵溶液，以及有效含量为0.5 g·L-1的过氧乙酸溶液和二氯异氰脲酸钠，在室温作用30 min，均可有效灭活PRV。其中，过氧乙酸综合评价最优；戊二醛癸甲溴铵性价比最高，但所需消杀时间较长，受低温影响比较严重。本研究可为养殖场防控ASFV的感染提供消毒剂筛选的理论依据，并对ASFV的消毒标准提供参考。

关键词：消毒剂细胞评价模型 ASFV PRV 杀灭病毒效果

慢病毒介导的稳定表达鸭干扰素-γ细胞株的构建

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浙江农业科学 2024年第1期65卷 208-212页

作者：陈柳倪征刘可姝叶伟成华炯钢云涛朱寅初张存浙江省农业科学院畜牧兽医研究所浙江杭州310021

干扰素-γ是一种具有抗病毒活性和免疫调节能力的细胞因子之一。为了建立稳定表达鸭干扰素-γ(duIFN-γ)的细胞系,本研究优化并合成了duIFN-γ基因,插入到慢病毒表达载体plenti-GIII-CMV-GFP-2A-Puro,获得重组质粒plenti-IFN,将plenti-... 详细信息

干扰素-γ是一种具有抗病毒活性和免疫调节能力的细胞因子之一。为了建立稳定表达鸭干扰素-γ(duIFN-γ)的细胞系,本研究优化并合成了duIFN-γ基因,插入到慢病毒表达载体plenti-GIII-CMV-GFP-2A-Puro,获得重组质粒plenti-IFN,将plenti-IFN与辅助质粒共转染包装细胞293T,筛选出了携带duIFN-γ基因的重组慢病毒rlenti-IFN,将该病毒感染中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary, CHO)细胞,利用有限稀释法和抗性加压筛选法,筛选出了30个具有嘌呤霉素抗性基因的单克隆细胞系。利用RT-qPCR荧光定量法对这些单克隆细胞的duIFN-γ mRNA水平进行检测,筛选出了duIFN-γ mRNA水平最高的1个单克隆细胞,对其进行扩大培养,获得了1株稳定细胞系。Western blot检测结果表明,duIFN-γ稳定表达于该细胞系中。本研究获得了1株稳定表达duIFN-γ蛋白的细胞系,该研究为开展duIFN-γ生物学功能研究、建立duIFN-γ检测方法及生产廉价鸭(禽)用干扰素奠定了基础。

关键词：鸭干扰素-γ 慢病毒 CHO细胞稳定表达

外来务工家庭长子女负面情绪疏导的小组工作实务探索——以深圳市B社区为例

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外来务工家庭长子女负面情绪疏导的小组工作实务探索——以深圳市...

作者：倪征郑州大学

学位级别：硕士

改革开放以来,深圳因经济发展机遇较多吸引了大量的外来务工家庭。外来务工家庭中的长子女享受在大城市生活带来的便利的同时,由于弟妹出生导致的资源争夺、父母亲职行为中的负面思维与家庭教育倾向性的影响、以及家庭内外环境双重压力... 详细信息

改革开放以来,深圳因经济发展机遇较多吸引了大量的外来务工家庭。外来务工家庭中的长子女享受在大城市生活带来的便利的同时,由于弟妹出生导致的资源争夺、父母亲职行为中的负面思维与家庭教育倾向性的影响、以及家庭内外环境双重压力大等方面的原因,外来务工家庭长子女出现了复杂的负面情绪问题,如焦虑、愤怒等。因此,通过开展小组来缓解外来务工家庭中长子女的负面情绪就显得尤为重要。本文研究以认知行为理论为基本指导理论,以外来务工家庭长子女负面情绪疏导的小组工作探索为研究议题,以深圳市B社区的4对外来务工家庭中的亲子为服务对象设计与实施小组介入方案,在B社区党群服务中心开展了共计6次的“我的情绪小怪兽”小组活动,详细记录小组活动中组员的想法的前后变化。最终验证认知行为理论及其指导下的小组工作方法对外来务工家庭长子女负面情绪缓解的可适用性:长子女需要适应身份变化,父母应主导处理家庭冲突,加强亲子沟通有利于提升长子女的认知。总体而言,小组工作对外来务工家庭长子女负面情绪的疏导具有一定作用,能够帮助长子女在朋辈中获取理解与支持,能够鼓励长子女向父母合理表达自己的负面情绪。小组活动取得一定成效,但也存在不足之处有待完善。最后,研究提出了以下一些相关建议:增强长子女情绪认知能力,让长子女多关注积极家庭情景;鼓励子女多形式情绪抒发,尊重个人表达意愿;保留外来务工家庭的特性,同时积极融入当地;关注外来务工家庭的建设,强调家庭关怀等。希望通过本研究能更好地促进外来务工家庭长子女的健康成长。

关键词：外来务工家庭长子女负面情绪

浙江地区鹅星状病毒分离鉴定及衣壳蛋白多克隆抗体的制备

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浙江农业学报 2022年

作者：朱寅初王宏宇云涛华炯钢叶伟成倪征陈柳张存浙江省农业科学院畜牧兽医研究所南京农业大学动物医学院

鹅星状病毒(GAstV)是当前鹅养殖业的重要病原,易引起雏鹅内脏痛风症状并死亡,造成巨大经济损失。于浙江省内采集30份病料,进行核酸检测、病原分离和测序,并克隆其ORF2序列至pET-28a原核表达载体,转化BL21后经诱导获得衣壳蛋白,免疫新西...

鹅星状病毒(GAstV)是当前鹅养殖业的重要病原,易引起雏鹅内脏痛风症状并死亡,造成巨大经济损失。于浙江省内采集30份病料,进行核酸检测、病原分离和测序,并克隆其ORF2序列至pET-28a原核表达载体,转化BL21后经诱导获得衣壳蛋白,免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。结果显示,临床死亡雏鹅剖检发现均为典型内脏痛风症状,核酸检测鉴定为鹅星状病毒阳性,且出现不同基因型鹅星状病毒混合感染情况。共分离得到ZJC14和ZJLD20两个毒株,其中,ZJLD20在鹅胚和LMH细胞均中稳定增殖,但ZJC14并不能适应LMH细胞。病毒基因组测序显示,ZJC14与ZJLD20亲缘关系较远,ZJC14属于GAstV-I基因型,而ZJLD20为GAstV-Ⅱ基因型。重组表达载体pET28a-ORF2诱导后获得纯化目的蛋白,经免疫成功制备兔源多克隆抗体,该抗体可与目的蛋白结合。此外,间接免疫荧光和Western-blot试验结果显示,ZJLD20衣壳蛋白制备的多克隆抗体可与病毒结合反应。研究成果将有利于后续对该病原致病能力的研究,同时,试验制备的ORF2衣壳蛋白与多克隆抗体为鹅源星状病毒感染的诊断试剂开发奠定基础。

关键词：

新型鸭呼肠孤病毒σB蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定

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中国预防兽医学报 2022年第4期44卷 428-434页

作者：华炯钢叶伟成倪征陈柳朱寅初云涛张存浙江省农业科学院畜牧兽医研究所浙江杭州310021

B蛋白是新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)的外衣壳蛋白之一,可诱导宿主机体产生群特异性抗体。为制备NDRVσB蛋白的单克隆抗体(MAb),并鉴定其抗原表位,本研究利用原核表达后纯化的重组σB蛋白(rσB)免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与SP2/0细胞融合... 详细信息

B蛋白是新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)的外衣壳蛋白之一,可诱导宿主机体产生群特异性抗体。为制备NDRVσB蛋白的单克隆抗体(MAb),并鉴定其抗原表位,本研究利用原核表达后纯化的重组σB蛋白(rσB)免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与SP2/0细胞融合,以纯化的rσB为包被抗原,通过间接ELISA方法筛选出3株杂交瘤细胞,其分泌的MAb分别命名为10-A5、A1-A9和B7-E5。将NDRV ZJ00M株以MOI 0.01感染DF-1细胞72 h后收获细胞,通过western blot鉴定获得的MAb与天然表达的σB蛋白的反应性;分别将NDRV ZJ00M株、鸭经典呼肠孤病毒(CDRV)ZJ2000M株和鸡呼肠孤病毒(ARV)S1133株均以MOI 0.01感染DF-1细胞,48 h后经间接免疫荧光试验(IFA)鉴定MAb的交叉反应性。Western blot结果显示,3株MAb均在41 ku出现特异性条带,表明其均能够与NDRVσB蛋白发生特异性反应;IFA结果显示:3株MAb均与NDRV反应,而不与CDRV和ARV发生交叉反应。上述结果表明,本研究制备的MAb反应原性和特异性均较强。利用人工合成的37条NDRVσB蛋白多肽及其截短的多肽,采用肽扫描法结合间接ELISA方法对3株MAb识别的抗原表位进行鉴定,并通过抗原表位氨基酸序列比对,分析该抗原表位在禽正呼肠孤病毒各成员中的保守性。结果显示,3株MAb识别的最小抗原表位均为33DIEEFHTPDVI43,且该抗原表位氨基酸序列在不同地域和不同宿主来源的NDRV分离株间的保守性均较高。本研究首次制备了NDRVσB蛋白的MAb,并鉴定了其抗原表位及该表位的保守性,为NDRV检测方法和表位标记疫苗的研究奠定基础。

关键词：新型鸭呼肠孤病毒 σB蛋白单克隆抗体抗原表位

1株伪狂犬病病毒的基因变异及其对小鼠的致病性分析

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畜牧兽医学报 2023年第4期54卷 1766-1770页

作者：倪征叶伟成陈柳云涛华炯钢朱寅初张存浙江省农业科学院畜牧兽医研究所杭州310021

本研究旨在了解我国猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)流行毒株的分子遗传变异及毒力特点。对1株分离自1个接种了Bartha-K61疫苗的规模猪场的PRV ZJ株进行了主要糖蛋白基因序列(gB、gC和gE)的测定分析及对6周龄BALB/c小鼠的致病... 详细信息

本研究旨在了解我国猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)流行毒株的分子遗传变异及毒力特点。对1株分离自1个接种了Bartha-K61疫苗的规模猪场的PRV ZJ株进行了主要糖蛋白基因序列(gB、gC和gE)的测定分析及对6周龄BALB/c小鼠的致病性研究。遗传变异分析显示,该毒株与我国2012年后的流行毒株高度同源,具有变异毒株基因特征,但gE基因的510位氨基酸出现了不同于变异株的独特变化S^(510) G。ZJ株对小鼠具有较高的致病性,攻毒小鼠呈现典型的神经症状,以100 LD_(50)感染小鼠,第5天死亡率达100%。本研究为进一步探索该病毒的毒株变异特点与致病机理奠定基础。

关键词：伪狂犬病病毒变异株遗传变异致病性

浙江地区鹅星状病毒分离鉴定及其衣壳蛋白多克隆抗体的制备

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浙江农业学报 2022年第10期34卷 2149-2159页

作者：朱寅初王宏宇云涛华炯钢叶伟成倪征陈柳张存浙江省农业科学院畜牧兽医研究所浙江杭州310021 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

鹅星状病毒(GAstV)是当前鹅养殖业的重要病原,易引起雏鹅内脏痛风症状和死亡,造成巨大经济损失。于浙江省内采集30份病料,进行核酸检测、病原分离和测序,并克隆其ORF2序列至pET-28a原核表达载体,转化BL21菌株后经诱导获得衣壳蛋白,免疫... 详细信息

鹅星状病毒(GAstV)是当前鹅养殖业的重要病原,易引起雏鹅内脏痛风症状和死亡,造成巨大经济损失。于浙江省内采集30份病料,进行核酸检测、病原分离和测序,并克隆其ORF2序列至pET-28a原核表达载体,转化BL21菌株后经诱导获得衣壳蛋白,免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。结果显示,临床死亡雏鹅剖检均发现典型内脏痛风症状,核酸检测鉴定为鹅星状病毒阳性,且出现不同基因型鹅星状病毒混合感染情况。共分离得到ZJC14和ZJLD20两个毒株,其中,ZJLD20在鹅胚和LMH细胞中均稳定增殖,但ZJC14并不能适应LMH细胞。病毒基因组测序显示,ZJC14与ZJLD20亲缘关系较远,ZJC14属于GAstV-Ⅰ基因型,而ZJLD20为GAstV-Ⅱ基因型。重组表达载体pET28a-ORF2诱导后获得纯化目的蛋白,经免疫成功制备兔源多克隆抗体,该抗体可与目的蛋白结合。此外,间接免疫荧光和Western-blot试验结果显示,ZJLD20衣壳蛋白制备的多克隆抗体可与病毒结合反应。研究成果有利于后续对该病原致病能力的研究,同时,试验制备的ORF2衣壳蛋白与多克隆抗体为鹅源星状病毒感染的诊断试剂开发奠定了基础。

关键词：鹅星状病毒分离鉴定衣壳蛋白原核表达多克隆抗体

重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗和鸡新城疫、禽流感(H9亚型)、禽腺病毒病(Ⅰ群4型)三联灭活疫苗联合免疫效果研究

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中国家禽 2023年

作者：沈亚菊陶建丰冯高乐邵高姜永其黄杰偲倪征张存林瑞平平湖市畜牧兽医站浙江省农业科学院畜牧兽医研究所浙江群大畜牧养殖有限公司平湖市动物监督所

关键词：鸡新城疫禽流感禽腺病毒病联合免疫免疫效果