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类鼻疽伯克霍尔德菌AraC转录因子基因的原核表达及纯化

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中国病原生物学杂志 2022年第7期17卷 761-765页

作者：曾慧黄玮晨高洁江昱颖胡琪修皓海南医学院热带医学院海南海口571199

目的从海南类鼻疽伯克霍尔德菌菌株BPHN001中克隆得到AraC转录因子基因,构建类鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderia pseudomallei)AraC转录因子基因原核表达质粒,对该转录因子基因进行原核表达,并对表达产物进行纯化。方法根据AraC转录因子... 详细信息

目的从海南类鼻疽伯克霍尔德菌菌株BPHN001中克隆得到AraC转录因子基因,构建类鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderia pseudomallei)AraC转录因子基因原核表达质粒,对该转录因子基因进行原核表达,并对表达产物进行纯化。方法根据AraC转录因子基因设计特异性扩增引物,将PET-28a(+)质粒和扩增得到的AraC转录因子基因产物同时用BamHⅠ和HindⅢ双酶切,构建带His标签的重组质粒。经测序验证后,将重组质粒转化至大肠埃希菌BL21(DE3),采用最佳浓度IPTG进行诱导,采用SDS-PAGE鉴定重组蛋白的表达情况。通过Ni^(2+)柱纯化目的蛋白,采用Western blot检测纯化蛋白的免疫反应性。结果特异性引物扩增得到的产物大小约为1000 bp,与目的基因片段1032 bp基本一致。将扩增产物与PET-28a(+)载体连接后测序,与预期完全一致。重组载体转化BL21(DE3)后用最适IPTG浓度(0.5 mmol/L)诱导过夜(约16 h),SDS-PAGE检测表达产物分子质量在40~55 ku之间,与预期相符。表达蛋白纯化后进行Western blot,能被相应抗体识别。结论成功克隆得到AraC转录因子基因,,构建的含AraC转录因子基因原核表达载体转化DE3后经IPTG诱导可表达出融合蛋白,经Ni^(2+)柱纯化得到具有免疫反应原性的AraC转录因子蛋白,为AraC转录因子的功能研究奠定了基础。

关键词：类鼻疽伯克霍尔德菌 AraC转录因子原核表达

1株类鼻疽伯克霍尔德菌噬菌体的生物学特性和杀菌能力评估

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中国兽医杂志 2023年第5期59卷 48-52页

作者：刘睿牛路丹钟梦李雨燕龙凯军修皓孙庆惠海南医学院热带医学院海南海口571199 海南大学中国热带农业科学院环境与植物保护研究所海南海口571199 海南医学院第一附属医院海南海口571199

为探究类鼻疽伯克霍尔德菌噬菌体的生物学特性,本试验采用双层平板法分离筛选类鼻疽伯克霍尔德菌噬菌体;采用形态学、一步生长曲线、宿主范围测定分析该噬菌体的生物学特性;通过小鼠体内杀菌试验和体外消毒能力检测评估该噬菌体的疗效... 详细信息

为探究类鼻疽伯克霍尔德菌噬菌体的生物学特性,本试验采用双层平板法分离筛选类鼻疽伯克霍尔德菌噬菌体;采用形态学、一步生长曲线、宿主范围测定分析该噬菌体的生物学特性;通过小鼠体内杀菌试验和体外消毒能力检测评估该噬菌体的疗效。结果显示,成功分离出1株类鼻疽伯克霍尔德菌噬菌体,命名为HNS1。形态学观察显示,噬菌体头部为正二十面体,直径为(62.8±3.0)nm,尾部长为(54.9±5.0)nm,根据命名法则该噬菌体属于肌尾噬菌体。一步生长曲线测定结果显示,该噬菌体的潜伏期约为32 min,释放量约为8.04 PFU/infection center。宿主范围测定结果显示,该噬菌体的裂解率达到73.3%(11/15)。小鼠体内杀菌试验和体外消毒能力检测结果显示,该噬菌体能够有效在小鼠体内和环境中裂解类鼻疽伯克霍尔德菌。结果表明,筛选得到的噬菌体具有较广的裂解谱,可能成为治疗类鼻疽伯克霍尔德菌感染的潜在抗菌剂。

关键词：类鼻疽伯克霍尔德菌噬菌体肌尾噬菌体抗菌活性

Mini-CEX改良模式在海南省眼科规范化培训中的应用与探索

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卫生职业教育 2022年第18期40卷 69-71页

作者：赵楠楠黄雄高曲国欣修皓陈执李雷海南医学院第一附属医院海南海口570102 海南省医学院热带医学与检验医学院海南海口570216 海南省人民医院海南海口570311

通过制订专科细化的Mini-CEX评价表,凸显眼科专业特色,完善眼科学规范化培训临床能力考核体系,并针对Mini-CEX实施细则开展师资培训,进一步提升眼科住院医师规范化培训质量。

关键词： Mini-CEX 海南省眼科规范化培训

微生物实验教学中氧化酶试验准确性和稳定性的探讨

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实验科学与技术 2023年第6期21卷 122-126页

作者：权云帆曾颖斐李金谦符婷婷孙庆惠修皓崔秀吉海南医学院热带医学院海口571199 海南医学院基础医学与生命科学学院海口571199

为提高实验教学操作中氧化酶试验的准确性和稳定性,减少和避免学生在操作中出现假阳性或假阴性的情况,尝试采用优化实验方法和铜绿假单胞菌培养基的手段。通过测试多种培养基和多种氧化酶试纸(试剂),选择稳定可靠的适用于学生实验的氧... 详细信息

为提高实验教学操作中氧化酶试验的准确性和稳定性,减少和避免学生在操作中出现假阳性或假阴性的情况,尝试采用优化实验方法和铜绿假单胞菌培养基的手段。通过测试多种培养基和多种氧化酶试纸(试剂),选择稳定可靠的适用于学生实验的氧化酶试验方法。以灭菌竹签或玻璃棒取菌或直接用试纸蘸取菌落,取自普通营养琼脂斜面培养基上的铜绿假单胞菌氧化酶试验结果假阴性较多;取自普通营养琼脂平板或血琼脂平板培养基上的铜绿假单胞菌氧化酶试验结果均为阳性。实验结果表明,氧化酶试验以血琼脂平板培养基培养物效果最佳,采用氧化酶试纸或盐酸二甲基对苯二胺化学释放剂试纸均可。

关键词：氧化酶试验铜绿假单胞菌血琼脂平板培养基稳定性

高糖对人角膜上皮细胞创伤修复中Cyclin D1蛋白表达的影响

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国际眼科杂志 2020年第9期20卷 1504-1508页

作者：赵楠楠陈梨萍修皓郑振优唐平籍雪颖海南医学院第一附属医院眼科中国海南省海口市570100 海南医学院热带医学与检验医学院中国海南省海口市571199

目的:研究高糖环境对人角膜上皮细胞损伤修复的影响,初步探讨Cyclin D1蛋白在高糖培养的角膜上皮细胞创伤愈合中表达的意义。方法:模拟糖尿病角膜病变的高糖微环境,人角膜上皮细胞经复苏、培养传代后,分别设置等体积蒸馏水的DMEM完全培... 详细信息

目的:研究高糖环境对人角膜上皮细胞损伤修复的影响,初步探讨Cyclin D1蛋白在高糖培养的角膜上皮细胞创伤愈合中表达的意义。方法:模拟糖尿病角膜病变的高糖微环境,人角膜上皮细胞经复苏、培养传代后,分别设置等体积蒸馏水的DMEM完全培养基的正常对照组和含25mmol/L葡萄糖的DMEM完全培养基高糖处理组的两组细胞,细胞长满后进行划伤刺激,倒置相差显微镜下观察比较各组细胞生长状况及其变化,于不同时间点(0、12、24、48和72h)利用Western blot检测分析高糖培养的角膜上皮细胞中Cyclin D1蛋白的表达,qRT-PCR检测Cyclin D1 mRNA水平相对表达情况。结果:体外高糖处理条件下,人角膜上皮细胞划伤后修复速度减慢,漂浮细胞增多,细胞重新贴壁少,细胞间距增加,随着高糖处理时间的延长,细胞状态变差,生长速度慢;正常组细胞损伤修复较快,细胞密度增大,且形态规则,细胞膜光滑。Western blot检测划伤刺激上调Cyclin D1的表达,但随着时间延长上调作用呈逐渐减弱,两组Cyclin D1最高表达量均出现在12h。高糖处理组Cyclin D1表达量低于正常对照组。qRT-PCR结果显示:高糖处理后,Cyclin D1 mRNA表达呈上调趋势,但随着高糖处理时间延长,上调作用减弱,且在48h处mRNA水平恢复至与对照组同一水平。结论:在角膜上皮细胞创伤愈合过程中,高糖呈负性调节,抑制Cyclin D1蛋白的表达,且与角膜上皮细胞增殖能力下降及凋亡相关。

关键词：高糖人角膜上皮细胞 Cyclin D1蛋白创伤

海南地区类鼻疽伯克霍尔德菌的多位点序列分型

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中国人兽共患病学报 2019年第6期35卷 514-517,524页

作者：刘琳孙庆惠裴华陈垂这修皓张楠赫娜夏乾峰海南医学院热带医学与检验医学院海口571101 海南医学院热带生物医学技术实验室海口571101 海南医学院第二附属医院检验科海口571101

目的研究海南省类鼻疽伯克霍尔德菌多位点序列类型(STs)多态性,了解该省与其他类鼻疽流行地区菌株间的遗传背景差异.方法选取7个管家基因位点ace、gltB、gmhD、lepA、lipA、narK、ndh进行PCR扩增、测序,与MLST数据库中的等位基因序列进... 详细信息

目的研究海南省类鼻疽伯克霍尔德菌多位点序列类型(STs)多态性,了解该省与其他类鼻疽流行地区菌株间的遗传背景差异.方法选取7个管家基因位点ace、gltB、gmhD、lepA、lipA、narK、ndh进行PCR扩增、测序,与MLST数据库中的等位基因序列进行比对,确定菌株的序列型.结果18株类鼻疽伯克霍尔德菌属于12个不同的STs,其中ST50有4株,检出率占22.2%,ST58、ST232、ST1094各检出2株,发现一株新STs命名为ST1676.结论海南省类鼻疽伯克霍尔德菌具有高度遗传多样性,gmhD是7个管家基因中变异最大的等位基因,表明gmhD突变可能是该地区菌株STs多样性的原因.

关键词：类鼻疽病类鼻疽伯克霍尔德菌多位点序列分型

高糖培养人晶状体上皮细胞创伤后Cyclin D1的表达

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国际眼科杂志 2020年第10期20卷 1699-1703页

作者：陈晨赵楠楠符丽君朱振华阎冲祝家昌修皓海南医学院热带医学与检验医学院中国海南省海口市571199 海南医学院第一附属医院眼科中国海南省海口市570102

目的:观察高糖培养的人晶状体上皮细胞在创伤刺激后Cyclin D1的表达情况。方法:采用MTT法观察不同浓度葡萄糖对体外培养的人晶状体上皮细胞(HLEB3)作用24h后细胞增殖活性的影响,确定最适葡萄糖作用浓度。将HLEB3细胞分为高糖预处理组(... 详细信息

目的:观察高糖培养的人晶状体上皮细胞在创伤刺激后Cyclin D1的表达情况。方法:采用MTT法观察不同浓度葡萄糖对体外培养的人晶状体上皮细胞(HLEB3)作用24h后细胞增殖活性的影响,确定最适葡萄糖作用浓度。将HLEB3细胞分为高糖预处理组(高糖培养基预处理24h后再更换高糖培养基培养)和非高糖预处理组(正常培养基培养24h后再更换高糖培养基培养),根据更换高糖培养基时是否进行划伤处理将细胞分为对照组和划伤组,分别采用qRT-PCR和Western blot法检测各组细胞创伤后不同时间点Cyclin D1 mRNA和蛋白的表达情况。结果:一定浓度范围的葡萄糖能够增强细胞增殖活性,25.5mmol/L葡萄糖处理时细胞活性最强。高糖预处理细胞Cyclin D1表达在一定时间范围内呈时间依赖性表达下调;非高糖预处理细胞Cyclin D1表达呈不规律性,在12h和48h处表达上调;划伤处理可在一定程度上刺激细胞Cyclin D1表达上调。结论:葡萄糖对人晶状体上皮细胞活性及Cyclin D1表达的影响呈现不规律性,创伤处理可在一定程度上上调细胞Cyclin D1的表达。

关键词：人晶状体上皮细胞高糖 Cyclin D1 创伤糖尿病性白内障

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差分空间调制系统的低复杂度检测算法研究

差分空间调制系统的低复杂度检测算法研究

作者：修皓天电子科技大学

学位级别：硕士

差分空间调制（Differential Spatial Modulation,DSM）是一种利用天线激活索引实现额外数据传输的多输入多输出（Multiple Input Multiple Output,MIMO）无线传输技术。作为空间调制（Spatial Modulation,SM）与差分编码技术相结合的产... 详细信息

差分空间调制（Differential Spatial Modulation,DSM）是一种利用天线激活索引实现额外数据传输的多输入多输出（Multiple Input Multiple Output,MIMO）无线传输技术。作为空间调制（Spatial Modulation,SM）与差分编码技术相结合的产物,DSM继承了SM系统空时块（Space Time Block,STB）结构的稀疏特性,完全避免了信道间串扰（Interchannel Interference,ICI）对系统检测性能的不利影响。同时,DSM差分编码结构的使得其接收端使用非相干检测成为可能,不再需要像SM系统一样依赖于导频序列进行检测,从而避免了传输导频序列所需额外开销,以及估计的信道增益老化的问题。目前,DSM系统面临的主要问题在于接收端的检测复杂度过高,实现困难,且检测算法对信道环境的要求较高。为解决以上问题,本文将决策反馈差分检测（Decision Feedback Differential Modulation,DFDD）算法应用于DSM系统,提出了低复杂度反馈差分检测（Low Complexity Feedback Differential Detection,LCFDD）算法。该算法应用于平坦瑞利衰落信道下的重排的振幅移相键控-差分空间调制（Reordered Amplitude Phase Shift Keying aided Differential Spatial Modulation,RAPSK-DSM）系统,其主要创新性在于:通过对DFDD算法步骤的分解,将算法中高复杂度的部分分离出来并预计算;将检测算法的搜索空间分解,以有效降低搜索步数。该算法在DSM系统中实现了与DFDD算法等效的检测性能,并有效地降低了检测的复杂度,解决DSM系统检测对信道要求高和检测复杂度高的问题。随后,本文将所提LCFDD算法应用于空时块编码-差分空间调制（SpaceTime Block Coded Differential Spatial Modulation,STBC-DSM）系统中,并与该系统的结构特点相结合,在获得STBC的分集增益的同时,在星座点判决步骤上进一步降低了算法的复杂度。接着,本文针对衰落信道下,传统DSM系统的传输模型存在的对信道状态描述的准确性不足的问题,提出了一种改进的DSM传输模型,该模型与传统传输模型相比,可以更加准确地刻画衰落信道中DSM系统各个时隙下的信道增益的值。基于该模型,本文将所提LCFDD算法作出了相应的改进,使其获得了衰落信道下的检测性能提升。

关键词：差分空间调制计算复杂度非相干检测决策反馈差分检测

基于创新创业项目对大学生创新创业教育的思考——以海南医学院药学院创新创业项目为例

同方学位论文库评论

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同方学位论文库

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科教文汇 2019年第2期 14-15页

作者：侯杰赵珂刘辰鹏修皓海南医学院药学院海南海口571199 海南医学院热带医学与检验医学院海南海口571199

创新创业项目对推动高校创新型人才的培养意义重大,本文分析和总结了创新创业项目实施过程中存在的问题,认为加强创新创业项目实施应:(1)注重指导教师队伍建设,强化导师的责任心和奉献精神;(2)应加强项目管理,为学生项目开展提供场地;(3... 详细信息

创新创业项目对推动高校创新型人才的培养意义重大,本文分析和总结了创新创业项目实施过程中存在的问题,认为加强创新创业项目实施应:(1)注重指导教师队伍建设,强化导师的责任心和奉献精神;(2)应加强项目管理,为学生项目开展提供场地;(3)着重科学研究方法和实践能力训练,重在过程;(4)成立帮扶组织机构,培养学生的创新意识,激发学生的主动性。

关键词：创新创业项目管理创新意识