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军事医学科学院院刊 2008年第4期32卷 332-334页

作者：修冰水王国华张贺秋凌世淦宋晓国陈坤柴文菡冯晓燕何竞朱翠霞邱艳王袆高波查袆军事医学科学院基础医学研究所北京100850 北京红十字血液中心北京100088

目的:研究丙型肝炎病毒(HCV)感染者在慢性致病过程中抗HVR1抗体的变化规律。方法:分别利用融合HVR1抗原和多靶点HVR1抗原组合包被酶联板,采用间接酶联免疫法,检测不同阶段慢性HCV感染者体内HVR1抗体存在情况及HVR1抗体的异质程度。结果:... 详细信息

目的:研究丙型肝炎病毒(HCV)感染者在慢性致病过程中抗HVR1抗体的变化规律。方法:分别利用融合HVR1抗原和多靶点HVR1抗原组合包被酶联板,采用间接酶联免疫法,检测不同阶段慢性HCV感染者体内HVR1抗体存在情况及HVR1抗体的异质程度。结果:在42份无临床症状、41份慢性肝病变、38份肝硬化患者中HVR1抗体的检出率分别为90.5%、95.1%和94.7%,并无显著差异(P>0.05);而这3组患者血清中HVR1抗体异质程度分别为5.39±3.75、11.74±3.29和10.61±4.09;慢性肝病变和肝硬化患者组的抗体异质程度要显著高于急性患者组(P<0.01)。结论:HCV慢性感染的严重程度与HVR1抗体的异质程度相关,但与HVR1抗体的存在情况无关。

关键词：丙型肝炎病毒第一高变区异质性

Evaluation and application of immunoassay in Human Parvovirus B19 VP1 protein

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Evaluation and application of immunoassay in Human Parvoviru...

型别特异性丙型肝炎病毒嵌合抗原在血清分型中的应用

中华医学会2014全国微生物学与免疫学学术年会

作者：修冰水王晓丹李鹏飞张贺秋军事医学科学院基础医学研究所六室

Objective Human Parvovirus B19 infection cause erythema infectiosum,arthropathies,aplastic anemia,fetal hydrops,and even result in death in immunocompromised patients.B19 could spread through the respiratory tract or blood *** 1990,China confirmed the existing and spreading of B19 which cause high morbidity *** the B19 virus could not be inactivated

关键词：

来源： cnki会议评论

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临床输血与检验 2011年第4期13卷 297-300页

作者：杨锡琴修冰水李卓王国华宋晓国陈堃冯晓燕何竞白冠中张贺秋军事医学科学院基础医学研究所北京100850 首都医科大学附属北京佑安医院肝炎研究所

目的克隆表达型别特异性丙型肝炎病毒HCV 1b、2a嵌合抗原,并用于HCV血清分型检测。方法分别对HCV 1b、2a的C区和NS4区进行表位预测,选取优势表位序列连接后,于PGEX-4T-2载体中克隆表达嵌合的HCV 1b、2a抗原,应用竞争抑制酶联法对44份HCV... 详细信息

目的克隆表达型别特异性丙型肝炎病毒HCV 1b、2a嵌合抗原,并用于HCV血清分型检测。方法分别对HCV 1b、2a的C区和NS4区进行表位预测,选取优势表位序列连接后,于PGEX-4T-2载体中克隆表达嵌合的HCV 1b、2a抗原,应用竞争抑制酶联法对44份HCV 1b和18份2a血清进行血清分型检测。结果 62例血清样品中50例能分型,其中1b型34例,2a型16例,其分型率为80.6%(50/62),与基因型的符合率为90.0%(45/50)。结论丙型肝炎病毒HCV 1b、2a嵌合抗原用于HCV的血清分型检测,具有较高的准确率和分型率,可用于HCV血清分型检测。

关键词：丙型肝炎病毒血清分型竞争抑制酶联法

肺炎支原体黏附蛋白P30的高效表达及初步应用

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生物技术通讯 2014年第6期25卷 821-823页

作者：王成红于传亭张奇舒李鹏飞王晓丹修冰水张贺秋烟台市烟台山医院检验科山东烟台264000 军事医学科学院基础医学研究所北京100850

目的:克隆表达肺炎支原体黏附蛋白P30,为临床诊断试剂和疫苗研制打下基础。方法:采用大肠杆菌优势密码子设计P30蛋白优化基因序列,采用Genscript软件评价设计基因的密码子适应指数(CAI),并利用载体p BVIL1实现P30优势表位基因在大肠杆... 详细信息

目的:克隆表达肺炎支原体黏附蛋白P30,为临床诊断试剂和疫苗研制打下基础。方法:采用大肠杆菌优势密码子设计P30蛋白优化基因序列,采用Genscript软件评价设计基因的密码子适应指数(CAI),并利用载体p BVIL1实现P30优势表位基因在大肠杆菌中的表达,采用ELISA法对纯化的P30抗原活性进行测定。结果:野生P30基因的CAI为0.59,优化P30基因的CAI为0.84;在大肠杆菌中表达的IL1-P30融合蛋白的相对分子质量为43.5×103,纯化后的重组抗原能与肺炎支原体感染者血清发生特异性免疫反应,灵敏度和特异性分别为82.35%和89.36%,ROC曲线下面积为0.9088。结论:采用密码子优化技术实现了肺炎支原体黏附蛋白P30在大肠杆菌中的高效表达,获得的重组P30蛋白具有很好的抗原性,可用于肺炎支原体诊断试剂的研究。

关键词：肺炎支原体 P30黏附蛋白优势密码子原核表达

HCV IgM抗体检测试剂的研制及其在丙型肝炎检测中的应用

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现代检验医学杂志 2010年第5期25卷 56-58页

作者：陈堃王国华宋晓国冯晓燕朱翠侠何竞修冰水张贺秋军事医学科学院基础医学研究所北京100850

目的建立生物素标记HCV多表位嵌合抗原HCV IgM抗体捕获检测方法,探讨在急、慢性丙型肝炎检测中的意义.方法克隆表达HCV多表位嵌合抗原并标记生物素,链酶亲和素标记HRP,以抗人IgM单克隆抗体包被酶联板,研制出BA-ELISA HCV IgM捕获检测... 详细信息

目的建立生物素标记HCV多表位嵌合抗原HCV IgM抗体捕获检测方法,探讨在急、慢性丙型肝炎检测中的意义.方法克隆表达HCV多表位嵌合抗原并标记生物素,链酶亲和素标记HRP,以抗人IgM单克隆抗体包被酶联板,研制出BA-ELISA HCV IgM捕获检测试剂.同时检测68例急性丙型肝炎和20例15～25年慢性丙型肝炎患者及34例健康献血员血清IgG和IgM.结果 68例急性丙型肝炎IgG和IgM检出率分别为97.05%（66/68）和48.53%（33/68）;20例慢性丙型肝炎IgG和IgM检测率分别为100%（20/20）和95%（19/20）.慢性丙型肝炎IgG和IgM 两种检测方法比较差异无统计学意义（P＞0.05）;34例健康献血员血清IgG和IgM特异度均为100%.结论研制的新型抗HCV IgM检测试剂可用于急、慢性丙型肝炎检测,具有较高的敏感度和特异度.抗-HCV IgM不能作为HCV感染的早期诊断指标,不能区分近期与既往感染,IgM存在时间至少25年.

关键词：生物素标记HCV 丙型肝炎 HCV IgM

结核分枝杆菌抗体双抗原夹心ELISA检测方法的建立及初步应用

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生物技术通讯 2015年第5期26卷 678-681页

作者：蒋纾芳郭兰芹宗克亮杨锡琴刘志强赵照修冰水段翠密陈堃张旭辉张嵘冯晓燕张贺秋军事医学科学院基础医学研究所北京100850 沈阳药科大学辽宁沈阳110016 华北石油总医院河北任丘062552 风帆集团职工医院河北保定071000 首都师范大学数学科学学院北京100148

目的:建立2种结核分枝杆菌(Mtb)抗体的双抗原夹心ELISA检测方法,并初步评价其在Mtb血清学临床辅助诊断中的应用价值。方法:采用Mtb融合抗原38k D+ESAT6+CFP10作为包被抗原,分别以辣根过氧化物酶(HRP)和生物素(Bio)标记的38k D+ESAT6+CF... 详细信息

目的:建立2种结核分枝杆菌(Mtb)抗体的双抗原夹心ELISA检测方法,并初步评价其在Mtb血清学临床辅助诊断中的应用价值。方法:采用Mtb融合抗原38k D+ESAT6+CFP10作为包被抗原,分别以辣根过氧化物酶(HRP)和生物素(Bio)标记的38k D+ESAT6+CFP10作为标记抗原,建立2种Mtb双抗原夹心ELISA法,即HRP-ELISA法和Bio-ELISA法;采用所建立的2种方法对结核患者和健康对照血清进行检测。结果:经过一系列的反应条件优化,确定HRP-ELISA法和Bio-ELISA法的最佳抗原包被浓度分别为2、0.25μg/m L,最适加样量均为100μL血清原液,最佳标记抗原稀释率分别为1∶500、1∶2000,检测的灵敏度分别为43.66%、52.11%,特异性均为100%。结论:建立了2种Mtb双抗原夹心ELISA法,它们均适用于Mtb血清学的临床辅助诊断。

关键词：结核分枝杆菌融合抗原38k D+ESAT6+CFP10 双抗原夹心ELISA

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HCV血清分型方法的建立及其评价

传染病信息 2012年第2期25卷 91-92,103页

作者：杨锡琴修冰水王国华陈堃宋晓国李卓严艳张贺秋彭瑞云军事医学科学院基础医学研究所北京100850 首都医科大学附属北京佑安医院肝炎研究所军事医学科学院辐射与放射医学研究所北京100850

目的建立HCV血清分型方法,评价其在慢性丙型肝炎(丙肝)抗体阳性标本中的分型率及血清型与基因型的相关性。方法克隆表达HCVCore、非结构蛋白(non-structural protein,NS)4两个区段的型别特异性表位嵌合抗原,并应用酶联免疫竞争抑制法建... 详细信息

目的建立HCV血清分型方法,评价其在慢性丙型肝炎(丙肝)抗体阳性标本中的分型率及血清型与基因型的相关性。方法克隆表达HCVCore、非结构蛋白(non-structural protein,NS)4两个区段的型别特异性表位嵌合抗原,并应用酶联免疫竞争抑制法建立血清分型方法。分别应用酶联免疫吸附试验和聚合酶链反应法检测200例慢性丙肝患者的血清抗体和HCVRNA,并用建立的方法进行血清分型。同时采用该方法检测90例乙型肝炎患者、11例戊型肝炎患者和16例其他肝病患者的血清,评价其特异性。结果在200例慢性丙肝患者的血清标本中,基因1b型128例,2a型72例,型别特异性抗体阳性157例,分型率为78.50%,与基因型一致率为98.09%。而在另外117例乙型肝炎、戊型肝炎和其他肝病患者的血清中,均未检测出HCV型别特异性抗体。结论建立的HCV血清分型方法具有较高的分型率和特异性,可用于HCV抗体的血清学分型和预测干扰素疗效。

关键词：丙型肝炎病毒血清分型基因型

新型布尼亚病毒抗体检测方法的建立及初步应用

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生物技术通讯 2014年第1期25卷 100-101页

作者：陈堃何竞修冰水王国华宋晓国朱翠侠杨锡琴冯晓燕张贺秋军事医学科学院基础医学研究所北京100850

目的:建立新型布尼亚病毒IgG抗体ELISA检测方法。方法:用基因工程重组表达的新型布尼亚病毒NP抗原包被酶联板,建立间接ELISA法检测新型布尼亚病毒IgG抗体,并进行特异性和灵敏度评价,健康人群中检测结果计算临界值(均值+3标准差)。检测7... 详细信息

目的:建立新型布尼亚病毒IgG抗体ELISA检测方法。方法:用基因工程重组表达的新型布尼亚病毒NP抗原包被酶联板,建立间接ELISA法检测新型布尼亚病毒IgG抗体,并进行特异性和灵敏度评价,健康人群中检测结果计算临界值(均值+3标准差)。检测70例发热伴血小板减少综合征患者恢复血清和69份健康人血清样品。结果:在70份患者血清样品中,检测出新型布尼亚病毒IgG抗体阳性51例,阳性率为72.14%(51/70);69份健康人血清样品中,检测出1份阳性,特异性为98.6%(1/69)。结论:建立的新型布尼亚病毒IgG抗体ELISA检测方法特异性强、灵敏度高,可用于新型布尼亚病毒感染的检测及流行病学调查。

关键词：新型布尼亚病毒 IgG抗体酶联免疫检测方法

新型布尼亚病毒抗原ELISA检测方法建立及初步评价

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现代检验医学杂志 2013年第5期28卷 19-21页

作者：陈堃何竞修冰水王国华宋晓国朱翠侠杨锡琴冯晓燕张贺秋军事医学科学院基础医学研究所北京100850

目的建立发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒抗原检测方法,并进行初步临床评价.方法克隆表达新型布尼亚病毒核蛋白（NP）,分别免疫家兔和小鼠,制备多抗和单抗,以单抗包被酶联反应板,多抗偶联辣根过氧化物酶（HRP）,建立双抗体夹心免疫... 详细信息

目的建立发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒抗原检测方法,并进行初步临床评价.方法克隆表达新型布尼亚病毒核蛋白（NP）,分别免疫家兔和小鼠,制备多抗和单抗,以单抗包被酶联反应板,多抗偶联辣根过氧化物酶（HRP）,建立双抗体夹心免疫酶联方法,将获得的NP蛋白进行系列稀释,制作标准曲线,评价其检测灵敏度.分别检测48份临床发热伴血小板减少综合征和48份健康献血员血清.结果建立的发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒抗原检测方法检测灵敏度为1 pg/ml,48份临床疑似病人检出阳性7例（14.58%）,48份健康血清样品1例阳性,特异度98%.结论建立发热伴血小板减少综合征新型布尼亚病毒抗原检测方法可用于发热伴血小板减少综合征新型布尼亚病毒早期检测.

关键词：发热伴血小板减少综合征新型布尼亚病毒双抗体夹心酶联免疫方法