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HCV第一高变区的免疫学研究进展

中国医药生物技术 2009年第2期4卷 134-136页

作者：安媛修冰水章金刚邱艳军事医学科学院输血医学研究所北京100850 北京市红十字血液中心 100088 军事医学科学院基础医学研究所北京100850

HCV属黄热病毒科，感染人体后可引起机体免疫应答发生异常，导致组织损伤，形成慢性持续性感染，并能进一步发展为肝硬化甚至肝细胞肝癌。目前全世界约有1．7亿HCV感染者，约有75％左右的急性丙型肝炎患者转为慢性感染，其中10％～20％... 详细信息

HCV属黄热病毒科，感染人体后可引起机体免疫应答发生异常，导致组织损伤，形成慢性持续性感染，并能进一步发展为肝硬化甚至肝细胞肝癌。目前全世界约有1．7亿HCV感染者，约有75％左右的急性丙型肝炎患者转为慢性感染，其中10％～20％慢性丙型肝炎患者发展为肝硬化，1％～5％发展为肝癌。丙型肝炎在治疗和预防方面具有很强的局限性，这主要是由于HCV的高度变异性，其中位于E2NS1区N端第27位氨基酸的变异性最大，通常称之为第一高变区（hypervariable region 1，HVR1）。

关键词：第一高变区 HCV 慢性持续性感染免疫学丙型肝炎患者肝细胞肝癌机体免疫应答 region

结核分枝杆菌ESAT-6+CFP-10融合抗原克隆表达及其生物学活性

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军事医学 2016年第3期40卷 226-229页

作者：赵琰枫冯晓燕修冰水段翠密范雅文张贺秋温州医科大学浙江温州325035 军事医学科学院基础医学研究所北京100850 沈阳药科大学沈阳110016

目的克隆表达结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)融合抗原ESAT-6+CFP-10(EC),评价融合抗原EC刺激THP-1细胞培养上清中特定细胞因子分泌水平的变化。方法构建融合抗原EC原核表达载体,用纯化后的不同浓度融合抗原EC(10,20μg/... 详细信息

目的克隆表达结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)融合抗原ESAT-6+CFP-10(EC),评价融合抗原EC刺激THP-1细胞培养上清中特定细胞因子分泌水平的变化。方法构建融合抗原EC原核表达载体,用纯化后的不同浓度融合抗原EC(10,20μg/ml)刺激THP-1细胞,分别收集刺激12和24 h细胞培养上清,采用Bio-Plex ProTMAssays细胞因子测定试剂盒检测细胞培养上清中IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、GM-CSF、TNF-α和IFN-γ的分泌水平。结果成功克隆表达此菌EC融合抗原;经过融合抗原EC刺激THP-1细胞培养上清中IL-6、IL-8和TNF-α的分泌水平明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05),其余细胞因子的分泌水平在刺激前后没有显著变化。结论克隆表达的融合抗原EC具有生物学活性,能使THP-1细胞分泌的IL-6、IL-8及TNF-α水平升高。

关键词：分枝杆菌,结核 ESAT-6+CFP-10融合抗原 THP-1细胞细胞因子类

第4代Murex HCVAg/Ab联合检测试剂在血液筛查中的应用价值

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北京医学 2012年第4期34卷 329-332页

作者：冷婵邱艳修冰水龚晓燕郑静查祎王全立中国人民解放军军事医学科学院北京100850 北京市红十字血液中心检验科中国人民解放军军事医学科学院附属医院输血科

目的探讨第4代Murex HCVAg/Ab联合检测试剂在血液筛查中的应用价值。方法应用Murex HCVAg/Ab联合检测试剂与Murex HCVAb检测试剂,对987份血液筛查中HCV抗体初筛阳性和灰区标本及1份确认窗口期标本进行比较检测,应用RIBA、病毒核酸检测... 详细信息

目的探讨第4代Murex HCVAg/Ab联合检测试剂在血液筛查中的应用价值。方法应用Murex HCVAg/Ab联合检测试剂与Murex HCVAb检测试剂,对987份血液筛查中HCV抗体初筛阳性和灰区标本及1份确认窗口期标本进行比较检测,应用RIBA、病毒核酸检测试剂进行补充验证实验,并对结果进行统计学分析。结果 Murex HCVAg/Ab联合检测试剂与Murex HCVAb试剂阳性检出率分别为73.5%和75.4%,阴性检出率分别为95.8%和90.8%,总检出率分别为85.8%和84.0%,差异有统计学意义(P均﹤0.05)。Murex HCVAg/Ab与Murex HCVAb两种试剂的阳性符合率为76.7%,阴性符合率为94.5%,总符合率为87.6%。两种试剂检出不一致标本123份,其中5份RIBA-/RNA+标本,Murex HCVAg/Ab检出4份(包括确认窗口期标本),Murex HCVAb试剂检出1份;15份RIB-A+/RNA-标本,Murex HCVAg/Ab检出5份,Murex HCVAb试剂检出10份。结论 Murex HCVAg/Ab联合检测试剂对HCVRIBA-/RNA+标本有较高的检出率;与Murex HCVAb试剂相比符合率不高;MurexAg/Ab联合检测试剂和MurexAb试剂均存在抗体检测漏检的可能。联合使用不同的酶联免疫HCV试剂进行血液HCV两次检测,可以最大限度地防止经血HCV的传播。

关键词：丙型肝炎病毒 Murex HCV Ag/Ab联合检测试剂血液筛查

接种甲型H1N1流感疫苗献血者血清中血凝素IgG抗体的检测

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中国输血杂志 2010年第3期23卷 168-170页

作者：江小工修冰水王国华张向颖陈坤宋晓国杨君朱翠霞周友魏堤房涛张贺秋解放军第163医院输血科湖南长沙410003 军事医学科学院基础医学研究所中国药品生物制品检定所

目的研制甲型H1N1流感(甲型流感)血凝素(HA)IgG抗体(抗-HAIgG)检测试剂,并用于对献血人群中甲型流感疫苗(甲流疫苗)接种者的抗-HAIgG检测。方法克隆表达甲型流感HA表位抗原(18-243aa),制备出酶联免疫吸附法(ELISA)抗-HA试剂,并对106份... 详细信息

目的研制甲型H1N1流感(甲型流感)血凝素(HA)IgG抗体(抗-HAIgG)检测试剂,并用于对献血人群中甲型流感疫苗(甲流疫苗)接种者的抗-HAIgG检测。方法克隆表达甲型流感HA表位抗原(18-243aa),制备出酶联免疫吸附法(ELISA)抗-HA试剂,并对106份甲型流感流行前的献血者血清(甲型流感前组)、97份接种甲流疫苗后的献血者血清(接种甲流疫苗组)做抗-HAIgG检测。结果甲型流感前组:4例抗-HAIgG为阳性,102例阴性,阳性率为3.77%(4/106);甲流疫苗组:78例抗-HAIgG为阳性,19例阴性,阳性率为80.41%(78/97)。结论ELISA法检测甲型流感抗-HAIgG试剂具有较高的特异性、灵敏度和安全性,其在献血人群中的甲型H1N1病毒感染的流行病学调查、疫苗免疫血浆的筛选方面,具有一定的应用价值。

关键词：甲型H1N1流感献血者血凝素酶联免疫吸附试验疫苗接种者血浆被动免疫

慢性丙型肝炎患者HCV不同功能区抗体的随访研究

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中国输血杂志 2004年第6期17卷 397-399页

作者：张贺秋王国华陈坤宋晓国修冰水凌世淦军事医学科学院基础医学研究所疫苗工程研究室北京100850

目的　探讨慢性丙型肝炎患者不同功能区抗体的免疫应答。方法　利用基因重组克隆表达丙型肝炎病毒HCV c、NS3、NS4、NS5和HVR1抗原 ,分别包被酶联板 ,以间接ELISA法检测 1991～ 2 0 0 2年采集的 5 8名丙型肝炎患者的 14 4份血清不同功... 详细信息

目的　探讨慢性丙型肝炎患者不同功能区抗体的免疫应答。方法　利用基因重组克隆表达丙型肝炎病毒HCV c、NS3、NS4、NS5和HVR1抗原 ,分别包被酶联板 ,以间接ELISA法检测 1991～ 2 0 0 2年采集的 5 8名丙型肝炎患者的 14 4份血清不同功能区抗 HCV。结果　其中 5 0名 (86 .2 0 % )慢性丙型肝炎患者血清 5种相应抗 HCV呈持续阳性。结论　慢性丙型肝炎患者体内HCV c、NS3、NS4、、NS5和HVR1抗体无明显变化 ,未发现这 5种抗体与自愈的关系。

关键词：丙型肝炎,慢性不同区,抗-HCV 随访研究

慢性丙型肝炎患者抗-HCV不同功能区抗体的随访研究

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慢性丙型肝炎患者抗-HCV不同功能区抗体的随访研究

三阴性乳腺癌细胞CAL-51对多西他赛的耐药机制

第6次全国微生物学与免疫学大会

作者：张贺秋王国华陈坤宋晓国修冰水凌世淦军事医学科学院基础医学研究所疫苗工程研究室

丙型肝炎病毒(HCV)是引起输血后肝炎的重要病原体,国内外对输血后HCV感染的研究证明,75-85%的HCV感染者将会导致慢性化。并呈现3种临床演变过程,病情持续进展,病情稳定但病毒持续存在及病情进行性进展;有关感染后影响慢性化的因素较多,...

丙型肝炎病毒(HCV)是引起输血后肝炎的重要病原体,国内外对输血后HCV感染的研究证明,75-85%的HCV感染者将会导致慢性化。并呈现3种临床演变过程,病情持续进展,病情稳定但病毒持续存在及病情进行性进展;有关感染后影响慢性化的因素较多,包括:病毒量,病毒基因型,准种的特性及宿主因素等,但关于慢性化的机理尚不完全清楚。我们结合承担的“十五”国家科技攻关课题“我国输血后丙型肝炎病毒感染的慢性化规律和致癌作用研究”,对91-2002年感染HCV的慢性病人的系列血清中不同功能区抗体进行了检测,包括抗HCV核心区(HCV-C),非结构区NS3、NS4、NS5及膜区E2的高变区1(hypervariable region 1,HVR1.,探讨抗HCV不同区抗体在丙型肝炎慢性化中的变化。

关键词：

来源： cnki会议评论

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国际药学研究杂志 2016年第5期43卷 915-921页

作者：范雅文张旭辉修冰水杨锡琴刘志强段翠密张贺秋张嵘冯晓燕沈阳药科大学沈阳110016 军事医学科学院基础医学研究所六室北京100850

目的通过比较分析多西他赛(多西紫杉醇,docetaxel)对三阴性乳腺癌细胞系CAL-51和非三阴乳腺癌细胞系T47D的杀伤敏感性差异,探讨CAL-51对多西他赛耐药的可能机制。方法 MTT法测定不同剂量多西他赛对CAL-51和T47D细胞生长的影响并计算IC_(... 详细信息

目的通过比较分析多西他赛(多西紫杉醇,docetaxel)对三阴性乳腺癌细胞系CAL-51和非三阴乳腺癌细胞系T47D的杀伤敏感性差异,探讨CAL-51对多西他赛耐药的可能机制。方法 MTT法测定不同剂量多西他赛对CAL-51和T47D细胞生长的影响并计算IC_(50)值;瑞氏-吉姆萨染色分析多西他赛作用后对两种细胞形态的变化;流式细胞仪(FCM)分析多西他赛对细胞周期的分布及凋亡情况的影响;荧光定量PCR检测分析多个基因在两种细胞中的差异表达;Western印迹法检测抗凋亡蛋白Bcl-2和胱天蛋白酶(caspase)家族蛋白在两种细胞中表达水平的差异。结果 T47D细胞经多西他赛处理后,形态出现显著变化;流式细胞检测显示,多西他赛能明显诱导非三阴乳腺癌细胞系T47D凋亡,与三阴性乳腺癌细胞系CAL-51相比具有显著性差异(P<0.01);定量PCR结果显示,CAL-51中抗凋亡基因Bcl-2高表达,与T47D相比具有显著性差异(P<0.05);蛋白质印迹法显示加药后两种细胞皆能活化内源性凋亡途径,但下游效应caspase的活化途径有所不同。结论多西他赛诱导2种细胞产生凋亡的内源性途径有所不同,Bcl-2的高表达可能是CAL-51细胞对多西他赛耐药的机制之一。

关键词：三阴性乳腺癌非三阴乳腺癌多西他赛耐药性

肺炎支原体黏附蛋白表位抗原的筛选、克隆表达及初步应用

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肺炎支原体黏附蛋白表位抗原的筛选、克隆表达及初步应用

2012全国临床微生物与感染免疫学术研讨会

作者：张奇舒修冰水陈坤王国华宋晓国张贺秋军事医学科学院基础医学研究所

目的利用生物信息学分析筛选肺炎支原体三个黏附蛋白的优势诊断抗原表位,克隆表达多种表位抗原,建立酶联免疫检测方法,初步用于肺炎支原体的抗体检测。方法 BioStm生物学软件分别预测肺炎支原体三个黏附蛋白抗原B细胞表位,利用大肠杆菌... 详细信息

目的利用生物信息学分析筛选肺炎支原体三个黏附蛋白的优势诊断抗原表位,克隆表达多种表位抗原,建立酶联免疫检测方法,初步用于肺炎支原体的抗体检测。方法 BioStm生物学软件分别预测肺炎支原体三个黏附蛋白抗原B细胞表位,利用大肠杆菌优势密码子优化设计其对应核苷酸序列,分片段克隆并原核表达,采用亲和层析法纯化融合抗原,应用ELISA法对纯化的抗原活性进行测定。结果获得高纯度重组表位抗原,经ELISA法检测,融合抗原P1与商品试剂盒有相同的检出率78.26%,一致性可达69.56%,P30和P116与其有一定互补性。结论利用密码子优化基因合成技术实现了Mp三种主要黏附蛋白优势表位区段在大肠杆菌中的高效表达,筛选获得的基因工程重组优势诊断表位抗原与临床肺炎支原体患者血清样本反应良好,为Mp检测的诊断试剂的研究提供了重要参考。

关键词：肺炎支原体Mp 表位筛选优势密码子 EL1SA

来源： cnki会议评论

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丙型肝炎病毒重组联合疫苗的实验研究

中国免疫学杂志 2009年第8期25卷 687-691页

作者：曾瑞红李广学张贺秋凌世淦姚智燕修冰水贺峰杨建岭魏林河北医科大学免疫教研室石家庄050017 邢台医学高等专科学院邢台054000 军事医学科学院基础医学研究所北京100850

目的:研究一种基于丙型肝炎病毒(HCV)多个抗原的重组联合疫苗。方法:将三种HCV重组抗原F4HVR1、HCV-T和HCV-E1混合,联合免疫BALB/c小鼠,用ELISA检测血清抗体滴度;第三次免疫后10天杀死一半小鼠,取脾细胞,用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测细... 详细信息

目的:研究一种基于丙型肝炎病毒(HCV)多个抗原的重组联合疫苗。方法:将三种HCV重组抗原F4HVR1、HCV-T和HCV-E1混合,联合免疫BALB/c小鼠,用ELISA检测血清抗体滴度;第三次免疫后10天杀死一半小鼠,取脾细胞,用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测细胞毒性T淋巴细胞(CTL)活性;用ELISPOT法检测分泌IFN-γ和IL-4的细胞;用流式细胞仪检测CD4+T和CD8+T细胞;最后一次免疫后2周,在免疫小鼠的背部皮下注射1.0×106个SP2/0-NS3细胞,考察联合免疫对小鼠的保护作用。结果:F4HVR1+HCV-T+HCV-E1联合免疫诱导了高滴度的HCV-E1和F4HVR1特异性的IgG抗体以及高水平的CTL活性;与单独免疫相比,联合免疫诱导了平衡的Th1/Th2免疫应答;而且联合免疫后能显著预防SP2/0-NS3对小鼠的攻击。结论:F4HVR1+HCV-T+HCV-E1诱导了保护性的体液免疫和细胞免疫应答,有望开发为一种有效的重组HCV联合疫苗。

关键词：丙型肝炎病毒联合疫苗体液免疫细胞免疫保护作用