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人血白蛋白免疫优势抗原表位的筛选及鉴定

国际药学研究杂志 2016年第5期43卷 1002-1007页

作者：李婷婷修冰水郭兴道张癸荣河北北方学院药学系张家口075000 总后勤部卫生部药品仪器检验所北京100071 军事医学科学院基础医学研究所北京100085

目的：筛选人血白蛋白（HSA）免疫优势抗原表位，为建立一种高特异性HSA制品快速检测方法提供基础。方法采用生物信息学方法比较人与其他物种（猪、马、牛、羊）白蛋白基因序列并预测其抗原表位，获得HSA免疫优势抗原表位；利用大肠杆... 详细信息

目的：筛选人血白蛋白（HSA）免疫优势抗原表位，为建立一种高特异性HSA制品快速检测方法提供基础。方法采用生物信息学方法比较人与其他物种（猪、马、牛、羊）白蛋白基因序列并预测其抗原表位，获得HSA免疫优势抗原表位；利用大肠杆菌优势密码子获得相应基因，插入PGEX-4T-2载体克隆表达得到重组HSA表位抗原；间接ELISA评价上述重组表位的特异性。结果筛选3个HSA抗原表位，分别位于H1〔126～162氨基酸（aa）〕、H2（314～355aa）、H3（373～424aa），获得相应基因片段；得到重组抗原的相对分子质量（Mr）分别为3.01×104、3.06×104和3.17×104；抗原活性检测显示373~424aa序列表位具有较高活性，其酶标抗体竞争抑制反应的IC50为1.635 mg/L，高于酶标HSA抗体。结论实验获得了特异性HSA免疫优势抗原表位，对研制一种快速、特异的HSA检测试剂具有重大意义。

关键词：人血白蛋白免疫优势抗原表位间接ELISA

丙型肝炎病毒第一高变区代表序列重组肽的交叉性研究

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军事医学科学院院刊 2002年第2期26卷 93-95,98页

作者：修冰水凌世淦宋晓国张贺秋陈坤朱翠侠军事医学科学院基础医学研究所北京100850

目的 :研究丙型肝炎病毒 (hepatitisCvirus ,HCV)第一高变区 (hypervariableregion 1,HVR1)抗原的交叉反应性 ,获得适合我国HCV感染株的高交叉反应性HVR1序列及其组合。方法 :对我国报道的HVR1序列 ,用计算机进行同源性分析 ,从中选出... 详细信息

目的 :研究丙型肝炎病毒 (hepatitisCvirus ,HCV)第一高变区 (hypervariableregion 1,HVR1)抗原的交叉反应性 ,获得适合我国HCV感染株的高交叉反应性HVR1序列及其组合。方法 :对我国报道的HVR1序列 ,用计算机进行同源性分析 ,从中选出可能具有高交叉反应的代表性HVR1序列 ,也选择文献报道的具有高交叉反应性的HVR1序列或HVR1模拟肽序列。用合成基因及重组表达技术 ,获得一系列重组HVR1肽 ,并用间接ELISA法研究这些重组HVR1对我国HCV阳性血清的交叉反应性。结果与结论 :本研究获得了 12条重组HVR1肽抗原 ,用随机选择的2 7份我国HCV阳性血清进行交叉反应性检测 ,发现每条重组HVR1均和不止一份的阳性血清有反应。选择其中 4条适合我国的交叉反应性较好的重组HVR1,其交叉反应率可覆盖 2 7份阳性血清的 2 5份 (92 .5 % ) 。

关键词：丙型肝炎病毒第一高变区交叉性 HVR1序列重组肽

HCV感染者第一高变区及部分膜区序列变异的分子进化分析

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中国输血杂志 2010年第11期23卷 926-928页

作者：张向颖修冰水张贺秋祁自柏安媛邱艳中国药品生物制品检定所北京100050 军事医学科学院基础医学研究所北京红十字血液中心

目的比较分析HCV第一高变区及包含第一高变区(HVR1)在内的部分膜区序列变异,从分子进化角度探讨献血者体内HCV变异。方法通过RT-PCR钓取5名HCV感染献血者体内含HVR1的部分膜区序列,选取10个克隆进行序列测定,并采用ClustalX软件,对获得... 详细信息

目的比较分析HCV第一高变区及包含第一高变区(HVR1)在内的部分膜区序列变异,从分子进化角度探讨献血者体内HCV变异。方法通过RT-PCR钓取5名HCV感染献血者体内含HVR1的部分膜区序列,选取10个克隆进行序列测定,并采用ClustalX软件,对获得的50条HVR1区和50条膜区序列进行了横断面的分子进化树分析。结果部分HCV感染者体内自身10条HVR1序列之间的亲缘关系较远;但感染者体内10条膜区序列之间亲缘关系较近,并呈现出一定的个体特异性。结论相比单纯分析HVR1区的变异情况,以含HVR1的膜区序列进行的进化分析更能体现出个体的差异,对于HCV的溯源更有意义。

关键词：丙型肝炎病毒第一高变区变异分子进化输血

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丙型肝炎病毒第一高变区HVR1的研究进展

国外医学（病毒学分册） 2000年第5期7卷 158-158,F004页

作者：修冰水凌世淦军事医学科学院基础医学研究所北京100850

HVR1含有丙型肝炎病毒 ( HCV)重要的中和性抗原表位 ,是疫苗研究的重要靶点。但由于其高度变异性 ,使 HVR1成为 HCV治疗和预防的瓶颈。本文从 HVR1的高变性、及引起宿主的体液免疫和细胞免疫反应 ,介绍国际上有关 HVR1的最新研究进展 ,... 详细信息

HVR1含有丙型肝炎病毒 ( HCV)重要的中和性抗原表位 ,是疫苗研究的重要靶点。但由于其高度变异性 ,使 HVR1成为 HCV治疗和预防的瓶颈。本文从 HVR1的高变性、及引起宿主的体液免疫和细胞免疫反应 ,介绍国际上有关 HVR1的最新研究进展 ,这对 HCV的防治。

关键词：丙型肝炎病毒变异性免疫应答

人CD81胞外大环在大肠杆菌中的克隆表达及活性研究

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军事医学科学院院刊 2001年第4期25卷 260-264页

作者：张国君凌世淦宋晓国张贺秋陈坤朱翠霞修冰水军事医学科学院基础医学研究所北京100850

目的 :构建人CD81分子胞外大环 (EC2 )的原核表达质粒 ,并研究胞外大环同HCVE2蛋白的结合性能。方法 :从人外周血淋巴细胞中经RT PCR克隆出CD81胞外大环序列 ,插入原核表达载体pBVIL1中 ,构建表达质粒pBVIL1 EC2并在大肠杆菌中表达。表... 详细信息

目的 :构建人CD81分子胞外大环 (EC2 )的原核表达质粒 ,并研究胞外大环同HCVE2蛋白的结合性能。方法 :从人外周血淋巴细胞中经RT PCR克隆出CD81胞外大环序列 ,插入原核表达载体pBVIL1中 ,构建表达质粒pBVIL1 EC2并在大肠杆菌中表达。表达产物经纯化后用间接ELISA法测定同E2蛋白的结合能力。结果 :经序列测定证明 ,CD81分子胞外大环正确插入载体。融合蛋白得到高效表达 ,以包涵体形式存在 ,经Q SepharoseFF阴离子交换柱得到有效纯化。初步结果表明 ,重组CD81胞外大环能同原核表达的截短的HCVE2 (384 661)蛋白结合。结论

关键词： CD81 EC2 肝炎病毒丙型克隆表达

丙型肝炎病毒不同功能区抗体与病毒核糖核酸的相关性

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中华肝脏病杂志 2003年第12期11卷 754-755页

作者：张贺秋王国华陈坤修冰水宋晓国刘荷中凌世淦军事医学科学院基础医学研究所分子病毒学研究室北京100850

目的探讨慢性丙型肝炎患者体内不同功能区抗体的免疫应答及与HCV RNA浓度的关系。方法克隆表达丙型肝炎病毒不同功能区优势表位抗原蛋白(HCV-C、NS_3、NS_4、NS_5和HVR1),建立单片段ELISA法检测抗HCV抗体,并以定量HCV RT—PCR法检测... 详细信息

目的探讨慢性丙型肝炎患者体内不同功能区抗体的免疫应答及与HCV RNA浓度的关系。方法克隆表达丙型肝炎病毒不同功能区优势表位抗原蛋白(HCV-C、NS_3、NS_4、NS_5和HVR1),建立单片段ELISA法检测抗HCV抗体,并以定量HCV RT—PCR法检测患者血清中HCV RNA浓度。结果慢性丙型肝炎患者体内HCV不同功能区抗体检出有较大的差异,HCV-C、HVR1检出最高,其次为NS_3、NS_4和NS_5。结论 HCV—C、NS_3、NS_4、和HVR1抗体滴度与HCV RNA浓度均有较好的相关性。

关键词：丙型肝炎病毒抗体病毒核糖核酸相关性免疫应答 ELISA法 RT-PCR法

慢性丙型肝炎患者第一高变区抗体的交叉反应性与抗病毒治疗早期病毒应答的关系

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中华检验医学杂志 2012年第7期35卷 630-633页

作者：惠威郭新会严艳修冰水张贺秋李卓首都医科大学附属北京佑安医院肝病内分泌科 100069 北京市肝病研究所军事医学科学院基础医学研究所

目的探讨慢性丙型肝炎患者血清第一高变区（HVR1）抗体的交叉反应性与抗病毒治疗早期病毒应答（EVR）的关系。方法用ELISA丙型肝炎病毒（HCV）HVR1抗体交叉反应性矩阵试剂检测抗HCV高变区抗体差异性，16条高变区抗原与患者血清交叉反应... 详细信息

目的探讨慢性丙型肝炎患者血清第一高变区（HVR1）抗体的交叉反应性与抗病毒治疗早期病毒应答（EVR）的关系。方法用ELISA丙型肝炎病毒（HCV）HVR1抗体交叉反应性矩阵试剂检测抗HCV高变区抗体差异性，16条高变区抗原与患者血清交叉反应性比较采用Fisher精确概率检验。同时对2009年1月至12月首都医科大学附属北京佑安医院46例慢性丙型肝炎患者抗病毒治疗前基线血清标本进行分析。用荧光定量逆转录（RT）．PCR检测46例患者在治疗前、聚乙二醇干扰素联合利巴韦林治疗12周、48周的血清HCVRNA水平，并进行基因分型。结果46例慢性丙型肝炎患者中，HCV2a型16例，1b型30例；治疗12周及结束时分别检测HCVRNA，其中，EVR组33例，非EVR组13例；2a型EVR发生率[93．8％（15／16）]高于1b型[60．0％（18／30），x2=4．316，P〈0．05]。HCV1b型慢性丙型肝炎患者中，EVR组平均多靶点HVR1抗原阳性反应数目为（12±4）个，明显高于非EVR组[（74-5）个，t=2．797，P〈0．01]。经Fisher精确概率法检验，HVR1抗原编号分别为001、003、009、013、016的5条抗原在EVR组患者基线血清的反应阳性率明显高于非EVR组（P均〈0．05）。结论HVR1抗体的交叉反应性可能是一项抗病毒治疗疗效的预测指标。

关键词：肝炎病毒,丙型第一高变区交叉反应性准种抗病毒治疗

SARS冠状病毒S蛋白表位合成肽抗原性的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2004年第7期24卷 556-558页

作者：王国华张贺秋于继云陈坤宋晓国许红莲阎瑾琦修冰水何竟邱艳凌世淦军事医学科学院基础医学研究所疫苗工程研究室北京100850

目的　研究SARS病毒合成肽疫苗。方法　根据目前已知SARS病毒的基因组序列及其编码的蛋白质 ,选择了SARS病毒编码的spike蛋白抗原表位蛋白质序列 ,运用计算机抗原表位预测技术 ,筛选抗原表位 ,以合成肽抗原表位。通过对SARS病人血清进... 详细信息

目的　研究SARS病毒合成肽疫苗。方法　根据目前已知SARS病毒的基因组序列及其编码的蛋白质 ,选择了SARS病毒编码的spike蛋白抗原表位蛋白质序列 ,运用计算机抗原表位预测技术 ,筛选抗原表位 ,以合成肽抗原表位。通过对SARS病人血清进行筛选确定与血清高交叉反应的 3个短肽 ,再合成多重抗原肽 (multipleantigenicpeptide ,MAP) ,与KLH偶联后免疫小鼠。结果　筛选的 3条与SARS病人血清反应强的肽 ,免疫小鼠均产生了高效价的抗体。结论　以合成肽为免疫原研究SARS病毒肽疫苗有着广阔前景。

关键词： SARS 冠状病毒 S蛋白表位合成肽抗原性严重急性呼吸综合征

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丙型肝炎病毒诊断参考品的研究进展

生物技术通讯 2009年第6期20卷 862-864页

作者：张向颖修冰水张贺秋祁自柏中国药品生物制品检定所北京100050 军事医学科学院基础医学研究所北京100850

体外诊断试剂的参考品是由逐一反复论证的一套样品所组成,用于全面控制试剂质量,它对于试剂应达到的各种指标提出了全面要求。目前国际上常用的丙型肝炎诊断试剂参考品为抗HCV抗体血清参考品和核酸检测参考品,我们简要综述了丙型肝炎病... 详细信息

体外诊断试剂的参考品是由逐一反复论证的一套样品所组成,用于全面控制试剂质量,它对于试剂应达到的各种指标提出了全面要求。目前国际上常用的丙型肝炎诊断试剂参考品为抗HCV抗体血清参考品和核酸检测参考品,我们简要综述了丙型肝炎病毒诊断试剂参考品的研制及发展。

关键词：丙型肝炎参考品诊断试剂