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白血病细胞来源的树突状细胞介导的CTL细胞的肿瘤杀伤效应研究

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白血病细胞来源的树突状细胞介导的CTL细胞的肿瘤杀伤效应研究

作者：俞志勇中国人民解放军军事医学科学院

学位级别：硕士

研究目的：免疫治疗是继手术治疗、放疗、化疗及生物治疗之后肿瘤治疗的又一新方法，其技术、方法日趋成熟，治疗过程的安全性逐步提高。但是如何进一步提高治疗效率、降低复发率及各种并发症，提高患者生存质量已成为肿瘤免疫治... 详细信息

研究目的：免疫治疗是继手术治疗、放疗、化疗及生物治疗之后肿瘤治疗的又一新方法，其技术、方法日趋成熟，治疗过程的安全性逐步提高。但是如何进一步提高治疗效率、降低复发率及各种并发症，提高患者生存质量已成为肿瘤免疫治疗领域的一项重要研究内容。树突状细胞(Dendritic cell，DC)是目前已知的功能最强的抗原递呈细胞，它具有强大的T细胞激活能力，并能活化初始型T细胞、刺激B淋巴细胞增殖成熟、刺激Th细胞及NK细胞活性。它不仅能够激活自体的抗肿瘤免疫，同样能够提高异体免疫组织的抗肿瘤效应。基于DC的抗肿瘤免疫治疗已在临床上逐步出现，并以其介导抗肿瘤效应的确实疗效及安全、有效性而为临床工作者称道。但如何进一步增强DC介导肿瘤抗原的特异性一直是人们关注的问题。研究从白血病细胞诱导分化发育而来的DC，利用其细胞本身带有的原始肿瘤细胞的特异性抗原来进一步提高CTL细胞的肿瘤杀伤效应，可以较好的解决这个问题，同时也为白血病的免疫治疗开辟了一个新的方向。研究内容：一、白血病细胞来源的DC诱导培养及鉴定利用髓性白血病(包括慢性粒细胞白血病、急性早幼粒细胞白血病、急性粒、单核细胞白血病)细胞诱导培养DC，观察其光镜、扫描电镜及透射电镜影像，DC的流式检测及免疫组织化学染色确定其特征性免疫表型，做DC染色体检测确定其肿瘤细胞来源，同时检测其分化效率并绘制生长曲线，最后进行DC冻存及解冻的性状对比研究。二、DC介导的CTL的肿瘤杀伤效应研究缓解期病人外周血CTL细胞培养、鉴定，DC与CTL、肿瘤细胞共同孵育后，军事医学科学院硕士学位论文加入LDH底物液、显色液，用酶联仪测定57Onm处的光密度值，来检测对肿瘤细胞的杀伤作用。结果: 所做的3例慢性粒细胞白血病(CML)患者的4份标本均观察到典型的DC光镜、扫描电镜及透射电镜影像，流式检测及免疫组织化学染色确定为DC特征性免疫表型，做Dc染色体检测确定为CML细胞来源，DC冻存后再次解冻，其形态、性状、活性基本没有改变。另外所作的2例A毗讯3、AML一麒细胞也均培养出了典型的DC。杀伤试验结果表明肿瘤细胞来源的DC能明确提高CTL细胞的肿瘤杀伤效应，并且随着DC加入比例的增加，其提高的CTL细胞的肿瘤杀伤效应也越强，统计学分析也充分证明了这一点。结论: 1.白血病细胞在多种细胞因子的作用下可以向DC转化。 2.白血病细胞来源的DC保留了其原始肿瘤细胞的特异性肿瘤抗原。 ***冻存对其形态、性状、活性改变不大，便于今后临床批量生产、使用。 4.白血病细胞来源的DC能够明确增强自体CTL细胞的肿瘤杀伤效应，且DC 数量与刺激作用有明确的正相关关系。

关键词：树突状细胞白血病抗原递呈细胞细胞毒性T淋巴细胞

白介素15在小鼠心脏移植物中的表达及CsA与FK506对其的抑制作用

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白介素15在小鼠心脏移植物中的表达及CsA与FK506对其的抑制作用

作者：俞志勇浙江大学

学位级别：硕士

背景众所周知，器官移植已逐渐成为终末期器官功能衰竭病人最佳甚至唯一的治疗方案。而同种异体排斥反应是一个长久以来一直困扰着器官移植领域的难题。虽然，随着外科技术的改进、新型器官保存液的研发，尤其是新型免疫抑制剂的... 详细信息

背景众所周知，器官移植已逐渐成为终末期器官功能衰竭病人最佳甚至唯一的治疗方案。而同种异体排斥反应是一个长久以来一直困扰着器官移植领域的难题。虽然，随着外科技术的改进、新型器官保存液的研发，尤其是新型免疫抑制剂的应用，临床同种异体排斥反应的发生率已大大减低，临床器官移植的长期存活率已经得到一定改善。但是，尽管临床器官移植患者长期、正规地应用免疫抑制剂，却仍有相当一部份病人在移植术后发生了同种异体排斥反应，而致移植器官失功。因此，同种异体排斥反应以前是、现在仍然是器官移植的主要障碍。同种异体排斥反应的实质是T细胞活化。白介素2(Interleukin-2，IL-2)作为T细胞生长因子，在T细胞活化的一系列事件中起着关键的作用，长期以来一直认为是T细胞活化不可缺少的。然而，最近的一些研究发现，即使在IL-2／IL-2受体(IL-2R)信号传导通路被完全阻断后，同种异体移植器官中排斥反应仍可发生。有人以IL-2基因敲除(knockout)小鼠进行研究，亦得到了相同结果。于是，有人大胆推测，可能存在一种独立于IL-2／IL-2R信号传导通路以外的细胞因子，亦能够活化T细胞，进而导致排斥反应的发生。 IL-15是一种近年刚发现的非淋巴细胞源性细胞因子，在结构或生物学功能上都与IL-2很相似，可以通过IL-2R β及γ传递信号，也能促进T细胞增殖，对T细胞也有趋向作用等。与IL-2不同的是，IL-15并非来自活化的T细胞，它的来源浙江大学硕士学位论文相当广泛，如上皮细胞、单核细胞、骨骼肌细胞及胎盘中均可检测到高小平的 IL一巧mRNA，心、肺、肝和肾等组织中也有一定水平的IL一巧mRNA表达.其中，产生IL一15最多的细胞是外周血单核细胞(peripheral blood mononuelear eell， PBMC)、上皮细胞及成纤维细胞.IL一15在炎症反应尤其是自身免疫反应中的重要作用已被充分证明.最近有研究发现在IL一2月L一ZR信号传导通路已被完全阻断但仍发生了排斥反应的移植物中发现了高水平的IL一15mRNA.因此，IL一巧极有可能在IL一2八L一ZR信号传导通路被阻断后，替代了IL一2的角色，激活了T细胞，进而导致排斥反应的发生.为了验证这一假设，本研究应用小鼠腹腔内异位心胜移植模型，通过应用病理学、RT一PcR、westem一blotting等分子生物学实验枝术手段，探索IL一巧分子途径在同种异体移植物急性排斥反应中的表达情况及其意义. 同时探索免疫抑制剂环抱霉素A(CyclosporineA，csA)和他克莫司(Tacrolimus， FK506)，能否有效抑制急性排斥反应时小鼠心脏移植物中IL一巧分子的表达。方法 C57BL/6和Balb/c小鼠作为移植供体，Balb/。小鼠作为移植受体，建立小鼠腹腔内异位，‘脏移植模型。按移植前后处理方法不同，随机分为4组:A组为 Balb/c一Balb/c同基因对照组，移植前后未作处理;B组为C57BL瓜Baib/c急性排斥组，移植前后未作处理;C组为C57BU6一Balb/c异基因移植csA组 (e57B珑一Balbze+es助，移植日开始给予环抱霉素A(es^)***·kg’’·‘，腹腔注射/14天;D组为C57BL/6一Balb/c异基因移植FK506组(C57BL/6一Balblc+ FK5o6)，移植日开始给予他克莫司(Tacrolimus，FK5o6)***·kg.，·d一，天复腔注射、14天.移植后1、3、5、7天切取移植心脏用于病理学检测、移植心脏组织中基因产物及蛋白产物IL一15、IL一2、TNF一a、IFN一Y等使用逆转录聚合酶链式反应(RT一PcR)及蛋白印迹法(westem一blo衍ng)分析.另外设亚组观察移植术后一般情况和移植心存活时间。实验所得数据的统计学处理用SPSSIO.0软件完成。各组受体移植心脏存活时间的组间比较以Kaplan一Meier法检验，其它参数作Inde伴ndent-leT检验及 One一wayANovA分析，p<0 .05为差异有显著性. 浙江大学医学院附属第一医院浙江大学硕士学位论文结果 Balb/c一Balb/c组小鼠及移植心均获长期存活(大于100天)，C57BL/6一Balb/c 组移植，心存活时间8士0.816天，C57BL/6一Balb/e+CsA和C57BL/6一Balb/e+FK506组移植心存活时间分别为20.167土4.355天

关键词：心脏移植排斥反应 IL-15 免疫抑制剂

树突状细胞肿瘤疫苗的制备及临床应用面临的问题

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中国实验血液学杂志 2004年第3期12卷 397-400页

作者：俞志勇陈虎冯凯军事医学科学院附属医院造血干细胞移植科

树突状细胞 (DC)是目前发现的功能最强的抗原呈递细胞 ,其在肿瘤免疫临床治疗中的应用受到越来越多的关注。目前 ,通过各种方法提取肿瘤抗原来冲击致敏DC ,再将已培养成熟的DC回输到病人体内 ,以激发机体产生明确的抗肿瘤免疫应答 ,已... 详细信息

树突状细胞 (DC)是目前发现的功能最强的抗原呈递细胞 ,其在肿瘤免疫临床治疗中的应用受到越来越多的关注。目前 ,通过各种方法提取肿瘤抗原来冲击致敏DC ,再将已培养成熟的DC回输到病人体内 ,以激发机体产生明确的抗肿瘤免疫应答 ,已成为有效的临床抗肿瘤治疗手段 ,也为肿瘤临床继手术切除、放化疗及其它综合治疗后又开辟了一个新的治疗途径。本文就DC的生物学特性、体外培养及其临床应用作一综述。

关键词：树突状细胞肿瘤疫苗免疫递呈细胞细胞毒性淋巴细胞

基于受激布里渊散射效应的变形分布式测量研究

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基于受激布里渊散射效应的变形分布式测量研究

作者：俞志勇中国计量大学

学位级别：硕士

防洪是堤坝最重要的功能,一旦决堤,必将导致严重的灾害。为了避免伤亡和经济损失,除了研究决堤的机理,探寻新的堤坝材料,改进堤坝的结构外,对堤坝进行健康监测,及时提供灾前预警,具有重要的研究意义和应用价值。随着科技的进步,电磁堤... 详细信息

防洪是堤坝最重要的功能,一旦决堤,必将导致严重的灾害。为了避免伤亡和经济损失,除了研究决堤的机理,探寻新的堤坝材料,改进堤坝的结构外,对堤坝进行健康监测,及时提供灾前预警,具有重要的研究意义和应用价值。随着科技的进步,电磁堤坝渗漏检测仪、频率域电磁法、探地雷达等一系列新的堤坝探测仪器被研制出来,但这些都属于点式测量,存在漏检、抗干扰性差和测量距离短等缺点,难以胜任监测堤坝的需求。针对以上监测方法的不足,采用基于受激布里渊散射效应的分布式光纤传感技术对堤坝微小变形的测量进行了研究,从而可对堤坝在全寿命期内的变形状态进行监测,这既可对堤坝的维护保养提供数据,又可对极端状态预警。首先分析了受激布里渊散射效应的传感机理,推导了光纤的布里渊频移和应变之间的关系。接着使用迈克尔逊干涉仪,验证了光纤的布里渊频移和应变之间的线性关系。然后研制了基于PID的流量控制装置,为堤坝提供精准的水流量。最后搭建了堤坝实验平台,将传感光纤布设到堤坝中,检测堤坝在不同水压下的变形状态。研究表明,光纤的布里渊频移能够准确地反映出堤坝的变形情况,基于受激布里渊散射效应的分布式光纤传感技术应用于堤坝健康监测能实现良好的预警效果。

关键词：堤坝健康监测分布式测量光纤传感器变形

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精密减速器回差试验台的精度特性

光学精密工程 2023年第16期31卷 2372-2382页

作者：俞志勇石照耀程慧明于渤张临涛北京工业大学材料与制造学部北京市精密测控技术与仪器工程技术研究中心

精密减速器回差试验台是非标设备，迄今对其精度特性缺乏系统性研究以至于还没有检定规程去评定该类测试设备的计量性能。为了评估精密减速器回差试验台的精度特性，提出了试验台精度的评定方法。首先，分析了精密减速器回差试验台的结... 详细信息

精密减速器回差试验台是非标设备，迄今对其精度特性缺乏系统性研究以至于还没有检定规程去评定该类测试设备的计量性能。为了评估精密减速器回差试验台的精度特性，提出了试验台精度的评定方法。首先，分析了精密减速器回差试验台的结构，确定了转矩传感器测量误差、角度传感器测量误差、转矩测量链摩擦转矩以及角度测量链弹性扭转角这四个因素是影响试验台精度的主要误差源。接着，研究了误差源的作用机理，提出了通过滞回曲线将转矩类误差转换为角度类误差的方法，统一了误差的类型。然后，提出了滞回曲线局部线性化的概念，实现了转矩类误差转换为角度类误差的简便计算。最后，根据回差的表达式给出了试验台精度的评定方法，并进行了测试实践。结果表明：几何回差的测试误差为±0.04′；弹性回差的测试误差为±0.06′；总回差的测试误差为±0.04′，回差试验台精度满足要求，本文提出的方法对评定试验台精度是有效的。另外，对精密减速器输出端一转范围内多处测试，能提升测试精度。

关键词：精密减速器试验台回差精度特性滞回曲线

来源：博看期刊

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精密减速器试验台的精度性能评价体系

机械工程学报 2024年第16期60卷 62-72页

作者：石照耀俞志勇程慧明于渤左广祥北京工业大学北京市精密测控技术与仪器工程技术研究中心北京100124

精密减速器是机器人的核心部件,其传动精度决定了机器人的运动精度。精密减速器试验台是测试精密减速器传动精度的基础装备。然而,迄今对精密减速器试验台的精度特性缺乏系统性研究,以至于还没有专门的检定规程去评定该类测试设备的精... 详细信息

精密减速器是机器人的核心部件,其传动精度决定了机器人的运动精度。精密减速器试验台是测试精密减速器传动精度的基础装备。然而,迄今对精密减速器试验台的精度特性缺乏系统性研究,以至于还没有专门的检定规程去评定该类测试设备的精度性能,导致对精密减速器试验台的精度评定出现方法不统一、结果不准确等问题。为准确评价精密减速器试验台的精度性能,构建试验台全生命周期的精度评价体系。将试验台精度性能溯源为测试条件稳定性、测量链精度和频域状态三个方面,针对每一方面定义相应的特征量,提出面向生产现场的特征量快速提取方法,建立特征量与试验台精度之间的关系,确定试验台精度失效判定准则。基于课题组研制的精密减速器综合性能试验台,进行持续5年的测试实践。结果表明:特征量的数值与试验台的实际精度保持一致,验证了试验台全生命周期精度评价体系的有效性和可靠性。

关键词：精密减速器试验台传动精度全生命周期精度评价体系

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减速器回差的动态特性研究

航空动力学报 2024年第9期39卷 311-318页

作者：石照耀程慧明俞志勇左广祥于渤北京工业大学北京市精密测控技术与仪器工程技术研究中心

基于传动误差对回差的动态特性展开研究，综合考虑转矩、加载速率和转速的影响，解析了回差与传动误差的关系，论证了回差的动态特性，研究发现可通过正反向传动误差相减得到回差。探讨了回差的分类，可分为动态回差、准静态回差和静态... 详细信息

基于传动误差对回差的动态特性展开研究，综合考虑转矩、加载速率和转速的影响，解析了回差与传动误差的关系，论证了回差的动态特性，研究发现可通过正反向传动误差相减得到回差。探讨了回差的分类，可分为动态回差、准静态回差和静态回差。给出了回差的测试方法，动态回差可通过双向传动误差法得到，准静态回差和静态回差可以通过滞回曲线法获得。以小型减速器和大型减速器为例，进行了回差的试验研究，验证了回差的动态特性；研究发现动态回差和准静态回差是动态变化的，而静态回差不受加载速率依赖性的影响，试验结果与理论分析一致。最后指出了该研究在理论和工程应用方面的价值。

关键词：减速器动态回差双向传动误差动态特性滞回曲线

非T细胞来源细胞因子在小鼠心脏移植急性排斥反应模型中的表达

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中华医学杂志 2006年第1期86卷 26-30页

作者：梁廷波俞志勇郑树森浙江大学医学院附属第一医院器官移植中心杭州310003

目的研究急性排斥反应性细胞因子在小鼠心脏移植中的表达状况,进一步阐明器官移植急性排斥反应的复杂发生机制。方法采用C57BL/6和Balb/c近交系小鼠,建立小鼠腹腔异位心脏移植模型。随机分为Balb/c-Balb/c同基因对照组(A组)和C57BL/6-Ba... 详细信息

目的研究急性排斥反应性细胞因子在小鼠心脏移植中的表达状况,进一步阐明器官移植急性排斥反应的复杂发生机制。方法采用C57BL/6和Balb/c近交系小鼠,建立小鼠腹腔异位心脏移植模型。随机分为Balb/c-Balb/c同基因对照组(A组)和C57BL/6-Balb/c急性排斥反应组(B组)两组,每组26只。分别于移植术后1、3、5、7 d各处死5只小鼠留取移植心脏标本,采用RT-PCR及W estern印迹方法动态检测组织中IL-15、IL-2、TNF-α及IFN-γ的表达状况,同时行HE染色检测。另外,A、B两组各保留6只小鼠设为亚组,观察移植心脏存活时间。结果A组移植心均获长期存活(>100 d),B组移植心存活时间为8.0 d±0.9 d(t=251.95,P<0.01)。A组各个时间点移植心均未发现排斥现象,B组术后第3天开始出现排斥反应。A组各时间点IL-15 mRNA与TNF-αmRNA呈弱表达,IL-2 mRNA与IFN-γmRNA无表达。B组IL-15 mRNA、TNF-αmRNA、IL-2 mRNA及IFN-γmRNA均明显升高,于第5天达到高峰。A组各时间点可见IL-15、TNF-α、IFN-γ和IL-2蛋白的低水平表达;B组IL-15与IL-2自术后第3天始、TNF-α与IFN-γ自术后第1天始,蛋白表达水平开始升高。结论多种细胞因子,包括非T细胞来源细胞因子,参与了同种异体急性排斥反应的发生。

关键词：移植物排斥心脏移植小鼠细胞因子

肝脏移植对23例肝细胞性肝癌的治疗价值研究

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中华普通外科杂志 2002年第9期17卷 526-528页

作者：梁廷波俞志勇郑树森浙江大学医学院附属第一医院肝胆胰外科及器官移植中心杭州310003

目的进一步探讨肝细胞性肝癌肝移植治疗的疗效 ,评价其应用价值。方法对 1999年 2月～ 2 0 0 2年 3月连续实施的 95例肝移植中的 2 3例肝细胞肝癌患者进行随访和回顾性分析 ,探讨肝细胞性肝癌临床病理学因素对肝移植术后生存率和肝癌复... 详细信息

目的进一步探讨肝细胞性肝癌肝移植治疗的疗效 ,评价其应用价值。方法对 1999年 2月～ 2 0 0 2年 3月连续实施的 95例肝移植中的 2 3例肝细胞肝癌患者进行随访和回顾性分析 ,探讨肝细胞性肝癌临床病理学因素对肝移植术后生存率和肝癌复发的影响。结果本组肝细胞性肝癌总的复发率为 6 5 % (15 /2 3) ,6个月、12个月的无癌生存率分别为 75 %、5 8%。多元分析表明 ,肝细胞性肝癌的直径与它的复发率有相关性 (P =0 0 2 4 ) ,而其他的临床病理学因素未显示有统计学意义(Wald =5 113,P =0 0 2 4 )。而年龄、性别、癌灶数目、门静脉癌栓形成、TNM分期、术前AFP水平、术前治疗、合并肝硬化等病理学因素则在统计学上未显示有显著意义 (P >0 0 5 )。结论大肝癌是肝移植的相对禁忌证。

关键词：肝细胞癌肝移植局部肿瘤复发治疗