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尿液蛋白质组学研究进展

山东大学学报（医学版） 2007年第2期45卷 214-216页

作者：侯香华关广聚山东大学第二医院肾内科山东济南250033

在蛋白质组学广泛深入到医学界各个研究领域的同时,尿液蛋白质组学也取得了较大进展,在寻找各种泌尿系统及其它系统疾病早期诊断性标志物、探索疾病发生发展的机制方面取得了重要的研究成果。本文着重从蛋白质组学分析的角度,追踪尿液... 详细信息

在蛋白质组学广泛深入到医学界各个研究领域的同时,尿液蛋白质组学也取得了较大进展,在寻找各种泌尿系统及其它系统疾病早期诊断性标志物、探索疾病发生发展的机制方面取得了重要的研究成果。本文着重从蛋白质组学分析的角度,追踪尿液蛋白质组学研究的最新进展,对其研究方法和几种主要的实验技术及其对疾病诊断及临床应用中的研究进展做一概述。

关键词：蛋白质组尿液肾疾病早期诊断

霉酚酸酯对高糖所致大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响

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中华肾脏病杂志 2006年第9期22卷 572-573页

作者：张燕关广聚陈兵刘海英侯香华山东大学第二医院肾内科济南250033

霉酚酸酯（MMF）是一种新型的免疫抑制剂。本研究旨在探讨MMF对不同浓度葡萄糖所致的系膜细胞增殖及细胞外基质增多是否有抑制作用。

关键词：肾小球系膜细胞增殖霉酚酸酯大鼠高糖免疫抑制剂细胞外基质抑制作用葡萄糖

变异链球菌腺苷磷酸硫酸酶的原核表达及功能研究

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中国病原生物学杂志 2012年第10期7卷 724-727页

作者：张加勤侯香华宋秀宇厦门大学附属第一医院检验科福建厦门361003

目的构建变异链球菌aps基因原核表达载体,表达纯化目的蛋白,继而对其生物学功能进行初步鉴定。方法以变异链球菌UA159株基因组DNA为模板PCR扩增变异链球菌aps基因编码区,插入原核表达载体pASK-IBA43plus,转化*** Top 10,无水四环素诱导H... 详细信息

目的构建变异链球菌aps基因原核表达载体,表达纯化目的蛋白,继而对其生物学功能进行初步鉴定。方法以变异链球菌UA159株基因组DNA为模板PCR扩增变异链球菌aps基因编码区,插入原核表达载体pASK-IBA43plus,转化*** Top 10,无水四环素诱导His-APS蛋白表达,经Ni-NTA纯化后,检测His-APS蛋白腺苷磷酸硫酸酶活性及核糖核酸酶活性。结果 PCR扩增出933bp的aps基因开放读码框,成功构建aps基因原核表达载体pASK-aps,并在*** Top 10中诱导表达,SDS-PAGE检测重组His-APS蛋白分子质量单位为38ku,该蛋白在Mg2+及Mn2+存在条件下能水解pAp,且呈时间及浓度依赖性,但不能降解Cy5标记的随机6nt寡核苷酸探针。结论重组His-APS蛋白具有腺苷磷酸硫酸酶活性,呈时间及浓度依赖性,但不具有核糖核酸酶活性。

关键词：变异链球菌腺苷磷酸硫酸酶核糖核酸酶

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氯沙坦防治糖尿病肾病的比较研究

中国老年学杂志 2006年第9期26卷 1159-1161页

作者：柳刚关广聚赵敬杰吕学爱陈兵侯香华山东大学第二医院肾内科分子生物学实验室山东济南250033

目的观察在微量白蛋白尿发生前后应用氯沙坦对糖尿病肾病(DN)的治疗作用及其机制。方法单侧肾切除的链脲霉素(STZ)糖尿病大鼠,随机分为正常对照组、DN组、早期治疗组和晚期治疗组。早期治疗和晚期治疗组分别于糖尿病模型建立后即刻或第... 详细信息

目的观察在微量白蛋白尿发生前后应用氯沙坦对糖尿病肾病(DN)的治疗作用及其机制。方法单侧肾切除的链脲霉素(STZ)糖尿病大鼠,随机分为正常对照组、DN组、早期治疗组和晚期治疗组。早期治疗和晚期治疗组分别于糖尿病模型建立后即刻或第9周起开始给予氯沙坦20 ***-1.d-1灌胃,疗程均为8 w。第16周时,观测肾组织形态学及肾功能变化,并采用荧光实时定量RT-PCR检测肾脏转化生长因子β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)、;纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)等细胞因子的表达情况。结果DN组大鼠尿微量白蛋白排泄率(UAER)持续上升;血肌酐(Scr)、肾脏肥大指数(KW/BW)、肾小球平均体积(MGV)、系膜面积比(FMA)以及肾脏TGF-β1、CTGF、PAI-1和纤维连接蛋白(FN)的mRNA表达均明显升高,而肌酐清除率(Ccr)已开始下降。早期治疗和晚期治疗组以上指标均明显改善,但两组之间无显著差异。结论氯沙坦可通过下调肾脏细胞因子基因表达,起到肾脏保护作用;但在微量白蛋白尿出现之前进行干预并不比在微量白蛋白尿出现之后进行治疗的效果更好。

关键词：糖尿病肾病转化生长因子结缔组织生长因子纤溶酶原激活物抑制剂-1 氯沙坦

弓形虫乳酸脱氢酶LDH2基因启动子的克隆及鉴定

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中国人兽共患病学报 2013年第4期29卷 349-353,365页

作者：张加勤侯香华宋秀宇厦门大学附属第一医院检验科厦门361003

目的克隆弓形虫乳酸脱氢酶LDH2基因启动子并进行初步鉴定。方法 PCR扩增出LDH2基因5′侧翼序列系列截短突变体,定向插入载体pTX3–basic的Kpn I/Xhol I酶切位点之间,转化大肠埃希菌Top 10,氨苄西林筛选,建立重组LDH2基因5′侧翼序列系... 详细信息

目的克隆弓形虫乳酸脱氢酶LDH2基因启动子并进行初步鉴定。方法 PCR扩增出LDH2基因5′侧翼序列系列截短突变体,定向插入载体pTX3–basic的Kpn I/Xhol I酶切位点之间,转化大肠埃希菌Top 10,氨苄西林筛选,建立重组LDH2基因5′侧翼序列系列截短突变体荧光素酶表达载体。转染刚地弓形虫速殖子,利用荧光素酶检测试剂盒测定所克隆片段的启动转录活性。结果成功扩增出LDH2基因5′侧翼序列系列突变体;系列重组荧光素酶表达质粒经PCR、酶切及测序鉴定正确无误;系列重组荧光素酶表达质粒在弓形虫速殖子中的相对活性与阴性对照pTX3-basic基本相同,而在弓形虫缓殖子中,除pTX3-293和pTX3-193外,其他重组荧光素酶活性均是阴性对照pTX3-basic的40～50倍之多,是阳性对照pTX3-control的1.2～1.5倍,说明插入片段具有较强的启动子活性。结论成功定位并克隆弓形虫LDH2基因启动子,为今后研究LDH2基因上游调控序列提供试验和理论依据。

关键词：弓形虫乳酸脱氢酶启动子荧光素酶

福建省慢性肾衰竭患者血清铝负荷及相关因素分析

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福建省慢性肾衰竭患者血清铝负荷及相关因素分析

缬沙坦联合霉酚酸酯对糖尿病大鼠肾脏TRAIL及NF-KB的影响

第一次全国中西医结合检验医学学术会议暨中国中西医结合学会检验医学专业委员会成立大会

作者：张加勤侯香华厦门大学附属第一医院检验科

目的:维持血液透析患者铝中毒不容忽视,慢性铝中毒主要表现为骨软化症、骨营养不良、铝中毒性骨病、难治性贫血、免疫功能下降、甲状腺功能减退等。铝还可通过血脑屏障进入脑组织,引起神经元损伤,影响智力发育,可引起学习、记忆能力下... 详细信息

目的:维持血液透析患者铝中毒不容忽视,慢性铝中毒主要表现为骨软化症、骨营养不良、铝中毒性骨病、难治性贫血、免疫功能下降、甲状腺功能减退等。铝还可通过血脑屏障进入脑组织,引起神经元损伤,影响智力发育,可引起学习、记忆能力下降、运动失调等严重的神经毒作用。大量研究表明,铝所导致的神经系统功能障碍,是一个长期的慢性病理过程,涉及脑发育的各个阶段,许多神经系统疾病,如阿尔茨海默病(Alzheimers Disease,AD)、透析性痴呆、帕金森病(Parkinsons Disease,PD)等均与慢性铝蓄积有关。准确而及时的铝负荷测定是诊断和治疗铝中毒,避免铝在体内蓄积引起不良事件的基础。然而目前对国内慢性肾衰竭患者血清铝水平的临床调查及相关影响因素分析的报道尚不多见。为此我们检测福建省慢性肾衰竭患者血清铝水平,探讨慢性肾衰竭患者血清铝的影响因素。方法:收集福建省内5个城市的15所医院肾内科病房、透析中心自2012年1月至2013年12月之间慢性肾衰竭患者和健康体检者血清标本。用美国PE公司AA800原子吸收光谱仪检测血清中铝含量。取样品、质控品或标准品20μL与基底改进剂5μL混匀后自动上样,检测条件为波长309.3nm,灯电流80mA;狭缝0.7 nm,进样量20μL;保护气为氩气(Ar),原子化时停气;两步干燥,斜坡升温。由仪器自带程序计算样品铝含量。数据处理用SPSS 16.0软件包完成。计数资料分别赋值,例如:性别(女=0,男=1)、是否接受VitD、EPO、磷结合剂及输血等治疗(未服用=0,服用=1)等;计量资料以原始数据为统计量,经正态性检验及方差齐性检验,结果以均数±标准差表示,两者比较采用t检验,多组比较采用方差分析,其中两两比较采用LSD法;对所得数据和资料进行统计学处理,多元线性回归分析筛选慢性肾衰竭患者血清铝的影响因素。P<0.05为差异有统计学意义。结果:共530名慢性肾功能衰竭患者进入调查,平均年龄为53.27±14.28岁。262名健康体检者作为对照,平均年龄为49.15±12.34岁。福建省慢性肾衰竭患者血清铝平均水平为17.33±5.15μg/L,显著高于正常人血清铝水平1.57±0.45μg/L(P<0.001);慢性肾衰竭患者血清铝水平与性别、身高、体重、血压无显著相关,与透析频率、24h尿量呈显著负相关,与年龄呈显著正相关,与使用VitD、EPO和磷结合剂、近期接受输血、透析方式显著相关。腹膜透析患者血清铝水平(28.22±10.02μg/L)显著高于血液透析患者血清铝水平(18.30±4.58μg/L),P<0.05。饮食中肉类占10%0%的慢性肾功能衰竭患者血清铝含量为9.01±3.00μg/L,显著低于肉食比例≤10%及≥20%的患者(P<0.05)。结论:福建省慢性肾衰竭患者血清铝水平仍较高,肾功能下降、饮食习惯、治疗措施及透析情况影响患者血清铝水平。故有必要对慢性肾衰竭患者血清铝水平进行系统、规律地监测,同时减少含铝食物的摄取,停止使用含铝制剂,适当的进食肉类食物,合理使用VitD、EPO及尽量避免输血,充分透析以降低慢性肾功能衰竭患者血清铝负荷,警惕医源性铝中毒。

关键词：血清铝慢性肾功能衰竭影响因素

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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中华医学杂志 2008年第8期88卷 540-545页

作者：陈兵张燕柳刚关广聚侯香华李学刚刘军莉山东大学第二医院肾内科济南250033 山东大学第二医院分子生物学实验室济南250033

目的探讨肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（TRAIL）及其核因子-kB（NF-kB）在糖尿病大鼠肾组织的表达及其联合应用缬沙坦（valsartan）和霉酚酸酯（MMF）对糖尿病大鼠肾组织TRAIL及其NF-kB的影响。方法采用一侧肾切除腹腔注射STZ（55mg... 详细信息

目的探讨肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（TRAIL）及其核因子-kB（NF-kB）在糖尿病大鼠肾组织的表达及其联合应用缬沙坦（valsartan）和霉酚酸酯（MMF）对糖尿病大鼠肾组织TRAIL及其NF-kB的影响。方法采用一侧肾切除腹腔注射STZ（55mg／kg）建立糖尿病大鼠模型，将80只Wistar大鼠随机分为：对照组（NC）、糖尿病组（DM）、缬沙坦治疗组（DM＋V）、霉酚酸酯治疗组（DM＋M）、联合治疗组（DM＋V＋M）。取材，检测各项生化指标，并采用荧光实时定量RQ—PCR方法检测肾皮质TRAIL及其NF-kB的mRNA的表达。免疫组织化学测定肾组织TRAIL及其NF-kB蛋白的表达。结果①DM组24h尿蛋白和肾重／体重比均高于NC组（均P〈0．05），并随糖尿病时程延长逐渐增高，于DM12周时达到最大值；血白蛋白在DM8周组开始下降（P〈0，01），并逐渐降低；血肌酐、尿素氮于DM16周组开始下降（P〈0．01）。各治疗组与DM8周组相比较，肾重／体重比变小（P〈0.05），24h尿蛋白总量降低（均P〈0．05），血白蛋白回升（P〈0．05）。以联合组最为明显。②荧光定量PCR显示TRAIL在12周前表达降低（均P〈0．01），16周时其表达量明显升高（P〈0．01）。各治疗组与DM8周组比较表达增加（P〈0．05），以霉酚酸酯组和联合组最为明显（P〈0．01）。DM组NF-kB的mRNA表达随时间延长逐渐增强（P〈0．01），各治疗组与DM8周组比较表达均降低（均P〈0．05），以联合组最为明显。③免疫组化显示TRAIL主要在肾曲小管表达，肾小球和脉管系统没有表达。DM各组在12周前表达均降低（均P〈0．05），差异有统计学意义；16周后表达明显增强（均P〈0．01）。各治疗组阳性细胞数明显增加（均P〈0．05）。NF-kB在肾小球和肾小管均有表达，DM各组NF-kB表达量随时间逐渐增高，各治疗组可显著降低NF-kB表达。结论TRAIL作为自身免疫系统的一个重要监控因子，其在糖尿病大鼠肾脏中的表达说明其密切参与了糖尿病肾病的发生发展，机制可能由NF-kB调节。早期缬沙坦和霉酚酸酯联合干预治疗可通过来增强TRAIL的表达，对肾脏产生保护作用。

关键词：霉酚酸糖尿病肾病 NF-KB 肿瘤坏死因子

单纯低钾饮食和低钾饮食联合小剂量聚苯乙烯磺酸钙治疗维持性血液透析患者高钾血症的疗效比较

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中国全科医学 2016年第27期19卷 3351-3355页

作者：周凌辉裴娟侯香华张恒远张燕林厦门大学附属第一医院肾内科福建省厦门市361003

背景高钾血症是维持性血液透析患者常见的并发症,血液透析间期血钾波动幅度过大易增加不良心血管事件的发生风险,因此如何维持血液透析间期的血钾水平稳定十分重要。目的比较单纯低钾饮食和低钾饮食联合小剂量聚苯乙烯磺酸钙治疗维持性... 详细信息

背景高钾血症是维持性血液透析患者常见的并发症,血液透析间期血钾波动幅度过大易增加不良心血管事件的发生风险,因此如何维持血液透析间期的血钾水平稳定十分重要。目的比较单纯低钾饮食和低钾饮食联合小剂量聚苯乙烯磺酸钙治疗维持性血液透析患者高钾血症的临床疗效。方法回顾性选取2015年12月—2016年1月在厦门大学附属第一医院血液透析室行维持性血液透析且符合纳入标准的患者52例,血液透析前血钾≥5.0 mmol/L,按照患者用药情况分为对照组21例和研究组31例。对照组患者给予单纯低钾饮食,研究组患者在对照组基础上给予小剂量聚苯乙烯磺酸钙口服治疗。两组患者均行连续治疗,治疗1个月行相关检查。记录两组患者治疗前后血液透析前后血钾水平及其差值和血液透析前血钙、清蛋白(Alb)水平。结果治疗后所有患者血液透析前后血钾水平及其差值均低于治疗前(P0.05)。两组患者治疗前血液透析前后血钾水平及其差值和血液透析前血钙、Alb水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);研究组患者治疗后血液透析前血钾水平、血液透析前后血钾差值低于对照组(P0.05)。治疗后对照组患者血液透析前血钾水平、血液透析前后血钾差值均低于治疗前(P0.05);治疗后研究组患者血液透析前后血钾水平及其差值低于治疗前(P0.05)。结论单纯低钾饮食或低钾饮食联合小剂量聚苯乙烯磺酸钙均能降低持续性血液透析患者血液透析前血钾水平,并能缩小血液透析前后血钾波动幅度,且低钾饮食联合小剂量聚苯乙烯磺酸钙的降钾效果优于单纯低钾饮食,不增加患者的钙负荷。

关键词：肾透析高钾血症饮食习惯聚苯乙烯磺酸钙

肾淋巴循环障碍致肾小管间质纤维化及对转化生长因子β1和Smad2／3表达的影响

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中华肾脏病杂志 2007年第6期23卷 388-393页

作者：张桃艳关广聚陈兵柳刚李学刚侯香华山东大学第二医院肾内科济南250033

目的探讨肾淋巴循环障碍对大鼠肾小管间质纤维化的作用及其与TGF-β1、Smad2/3表达变化的关系。方法雄性Wistar大鼠48只,随机分为淋巴循环障碍模型组和假手术对照组各24只。分别在术后1、2、4、8周每组各处死6只。测定尿蛋白量（24h）和... 详细信息

目的探讨肾淋巴循环障碍对大鼠肾小管间质纤维化的作用及其与TGF-β1、Smad2/3表达变化的关系。方法雄性Wistar大鼠48只,随机分为淋巴循环障碍模型组和假手术对照组各24只。分别在术后1、2、4、8周每组各处死6只。测定尿蛋白量（24h）和Scr。PAS和Masson染色观察肾组织病理改变。用实时PCR检测TGF-β1、Smad2/3、Ⅰ型胶原（ColⅠ）mRNA的表达量。用免疫组化和（或）Western印迹方法检测肾组织ColⅠ、TGF-β1、Smad2/3和磷酸化Smad2/3（p-Smad2/3）的蛋白表达量及主要表达部位。结果模型组大鼠尿蛋白显著增加,随着时间推移肾功能逐渐减退,并出现明显的组织病理改变,小管间质损伤指数明显高于对照组（P＜0．05或P＜0．01）,并随时间延长而逐渐加重。肾组织中ColⅠ、TGF-β1、Smad2/3、p-Smad2/3的蛋白和（或）基因表达水平也明显增高（P＜0．01）,且主要表达在肾小管上皮细胞及肾间质。结论肾淋巴循环障碍可导致大鼠肾脏功能及小管间质的损害,并随着时间的延长而加重。其作用机制可能与激活TGF-β-Smad途径,导致肾小管间质纤维化有关。

关键词：淋巴肾炎,间质性纤维化转化生长因子β1 Smad