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缺氧预处理对脐带间充质干细胞血管生长因子表达的影响

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缺氧预处理对脐带间充质干细胞血管生长因子表达的影响

作者：侯跃龙天津医科大学

学位级别：硕士

目的探讨人脐带间充质干细胞分离、培养的方法,研究氯化钴(CoCl2)缺氧处理对脐带间充质干细胞生物学特性的影响,探讨CoCl2模拟缺氧预处理对脐带间充质干细胞中碱性成纤维生长因子(bFGF)和血管内皮生长因子(VEGF)基因表达及蛋白分泌的影... 详细信息

目的探讨人脐带间充质干细胞分离、培养的方法,研究氯化钴(CoCl2)缺氧处理对脐带间充质干细胞生物学特性的影响,探讨CoCl2模拟缺氧预处理对脐带间充质干细胞中碱性成纤维生长因子(bFGF)和血管内皮生长因子(VEGF)基因表达及蛋白分泌的影响。方法无菌条件下收集剖宫产新生儿脐带,利用PBS冲洗脐动脉、静脉,将血液冲洗干净,将其剪碎至1mm3后,加入0.1%Ⅳ型胶原酶,置37℃恒温振荡仪振荡消化60min,加入0.25%胰酶,再次恒温振荡30min,PBS稀释后滤网过滤,收集细胞滤液,离心去除上清液,PBS洗涤2遍,DMEM/F12重悬细胞,调整细胞密度为5×106/ml,接种于75cm培养瓶,置37。C、5%CO2、饱和湿度培养箱内培养,48h后换液,去除悬浮细胞。以后每7d换液1次,细胞生长至80%～90%融合时,用0.25%胰蛋白酶消化,按1：3传代,应用倒置相差显微镜隔日观察细胞生长形态,取第3代的UC-MSCs流式细胞仪检测其表面标志(CD34、CD45、CD90、CD105、CD29及CD49);MTT法检测不同浓度(0、50、100、150、200、250μmol/L) CoCl2对UC-MSCs活力及增殖的影响;运用含150μmol/L的CoCl2培养液培养细胞72 h,用流式细胞仪检测缺氧对UC-MSCs表面标志物(CD34、CD45、CD90、CD105、CD29及CD49);依据CoCl2的浓度(0、50、100μmol/L及150μmol/L)将UC-MSCs分为4个组,即对照组、低、中、高CoCl2组,每个组处理24 h、48 h和72 h。用SYBRGREN荧光定量RT-PCR检测bFGF、VEGF mRNA的表达,用ELISA法检测bFGF和VEGF蛋白的表达。结果利用胶原酶及胰酶两步消化法能充分消化脐带,易于获得间充质干细胞,倒置显微镜观察显示：培养24h后,可见散在的细胞贴壁,贴壁细胞呈长梭形或不规则形;培养4～5d后,贴壁细胞明显增多,胞体中央膨大,细胞呈长梭形或不规则形;培养8～9d后,细胞铺满培养瓶底面,呈漩涡状或辐射状生长,细胞传代后,观察细胞形态仍为长梭形,不规则形,呈漩涡样生长;经含150μmol/L CoCl2的培养液缺氧预处理,UC-MSCs仍高表达CD90、CD29、CD49及CD105,低表达CD34和CD45,倒置相差显微镜观察,细胞形态仍为长梭形或不规则形;未加CoCl2组(对照组)细胞生长曲线呈“S”形。经CoCl2处理后,各组细胞生长曲线呈不太明显的“S”形,对数生长期提前,缺氧的前1～3d细胞增殖速度加快,对数期比对照组缩短,第3天之后增殖速度减慢,提前达到饱和密度,进入平台期,第4-5天甚至呈逐渐降低趋势,使平台期不明显,CoCl2浓度较高(200、250μmol/L)时,细胞生长曲线趋于低平;bFGF、VEGF基因的表达具有时间和剂量依赖性。bFGF mRNA表达水平在各时点均明显高于对照组(0μmol/L组),差异有统计学意义(P<0.05);50μmol/L CoCl2处理后,24、48、72h三个时点mRNA表达水平无显著差异;100μmol/L CoCl2处理后,随时间延长,mRNA表达水平逐渐增高(P<0.05);150μmol/L CoCl2处理后,48h时点mRNA表达水平明显高于24h时点,但72h时点mRNA表达水平明显低于48h时点。bFGF的蛋白表达与基因表达一致,但50μmol/L CoCl2处理组在各时点没有显著差异;VEGF mRNA的表达各时点均明显高于对照组(0μmol/L组),差异有统计学意义(P<0.05),50μmol/L CoCl2处理后,24、48、72h三个时点mRNA表达水平无显著差异(P<0.05);100μmol/L及150μmol/L CoCl2处理后,随时间延长,mRNA表达水平逐渐增高(P<0.05),均在48h达到高峰;在48h时点,150μmol/L组明显高于100μmol/L组,差异有统计学意义(P<0.05),bFGF、VEGF的蛋白表达与基因表达一致。结论适当浓度的CoCl2(<150μmol/L)对UC-MSCs的生物学功能影响轻微。CoCl2可用于细胞的模拟缺氧,缺氧预处理对人UC-MSCs bFGF、VEGF的分泌具有促进作用,以含150μmol/L CoCl2的培养液培养48 h,为促进bFGF、VEGF基因和其蛋白表达的最适条件。

关键词：脐带间充质干细胞细胞低氧氯化钴

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二元氧化物微纳材料制备及其电学性能研究

二元氧化物微纳材料制备及其电学性能研究

作者：侯跃龙沈阳工业大学

学位级别：硕士

在所有的商用储能设备中，锂离子电池代表了最先进的技术。在市场上占据主要位置，并且由此带来了多元化的应用范围，从便携式电子设备（如笔记本电脑、平板电脑和手机）到电动车和混合动力电车。然而，这些领域的快速发展对锂离子电池... 详细信息

在所有的商用储能设备中，锂离子电池代表了最先进的技术。在市场上占据主要位置，并且由此带来了多元化的应用范围，从便携式电子设备（如笔记本电脑、平板电脑和手机）到电动车和混合动力电车。然而，这些领域的快速发展对锂离子电池的能量/功率密度和长循环寿命提出了更高的要求。目前，商业化锂离子电池负极使用的是碳材料。但是它的较低理论容量（372mAh g-1）在某种程度上不能满足它在高能量设备上的广泛利用。开发高容量负极材料是解决该问题的有效途径。由于过渡金属氧化物材料具有较高的理论容量，所以很多研究者对材料的能量密度、循环和库伦效率等性能进行了相关的研究。普通的体形氧化物材料在充放电过程中由于产生体积膨胀带来了较大应力，活性组分在此过程中破碎脱离集流体，最终导致性能和容量快速降低。近年来，微纳米结构材料在新能源领域的应用越来越受到重视，尤其是作为锂离子电池的电极材料更是被广泛研究。针对上述研究热点，在本论文中我们利用低温化学法合成了几种锰、锡基氧化物微纳结构负极材料。本论文主要研究内容分以下三个方面：（1）合成规则二维片层状二氧化锡：利用柠檬酸三钠和十六烷基三甲基溴化铵为表面活性剂，在室温条件下合成二维片层微纳氧化锡前驱体材料，后期进一步进行热处理，产物形貌结构并不发生改变。产物形貌易于控制，合成条件简便。将这种片层材料作为锂离子电池负极材料进行电化学性能测试，在电流密度0.5C条件下，经过600℃热处理的电极材料充放电循环50次后可以得到580mAh g-1的比容量。（2）合成六边形结构氧化锰材料：在聚乙二醇和乙醇混合溶剂体系中，以MnCl2·4H2O为锰源，通过水解过程制得六边形结构的草酸锰前驱物。该前驱物分别在O2和N2氛围中热处理，分别得到多孔结构的Mn2O3和MnO材料。通过对两种微纳结构进行电化学性能测试表明都得到较高的比容量。（3）合成氧化锰和碳纤维复合材料：利用原位生长方法在棉纤维布表面生长纳米片层结构氧化锰，后期在N2保护下热处理，得到氧化锰和碳复合材料。由于氧化锰原位生长在碳布表面，具有较高的接触面积;碳化后的柔性基质有效解决电极材料导电率低的问题。制备的材料可以直接作为电极材料组装成电池使用，不需要胶黏剂和炭黑。当该材料作为锂离子电池负极材料测试时具有优良的充放电性能。

关键词：锂离子电池纳米材料二氧化锡氧化锰负极

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粗糙带对细长体大迎角流动非对称性的影响

空气动力学学报 2005年第3期23卷 284-288,316页

作者：王元靖范召林侯跃龙贺中中国空气动力研究与发展中心四川绵阳621000

通过模型表面压力分布测量和表面油流图谱显示等试验手段,在低湍流度风洞中探讨了模型头部不同形式的粗糙带对细长体大迎角条件下流动非对称性的影响。结果表明:“条型”粗糙带可以有效改善流动非对称性、降低当地侧向力;“环型”粗糙... 详细信息

通过模型表面压力分布测量和表面油流图谱显示等试验手段,在低湍流度风洞中探讨了模型头部不同形式的粗糙带对细长体大迎角条件下流动非对称性的影响。结果表明:“条型”粗糙带可以有效改善流动非对称性、降低当地侧向力;“环型”粗糙带可以改善模型表面的分离状态,但是却增强了流动非对称性;“条型+环型”粗糙带对于表面流谱的影响较为复杂。但是这些形式的粗糙带都不能完全消除流动非对称性所产生的侧向力。试验结果还展示出了大迎角状态下,流动非对称性的存在形式与表现特征。

关键词：大迎角流动非对称性细长旋成体

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细长旋成体大迎角非对称流动特性的试验研究

流体力学实验与测量 2003年第3期17卷 8-12,17页

作者：范召林王元靖侯跃龙白存儒中国空气动力研究与发展中心四川绵阳621000 西北工业大学西安710072

简要介绍了细长体大迎角流动非对称性的试验结果,分析了Re数、湍流度和安装条件等因素对大迎角流动非对称性的影响,探讨了大迎角流动非对称性的产生机制。文章最后着重阐述了该研究得出的一些支持细长体大迎角流动非对称性产生机制的空... 详细信息

简要介绍了细长体大迎角流动非对称性的试验结果,分析了Re数、湍流度和安装条件等因素对大迎角流动非对称性的影响,探讨了大迎角流动非对称性的产生机制。文章最后着重阐述了该研究得出的一些支持细长体大迎角流动非对称性产生机制的空间动力不稳定性观点的理由。

关键词：细长旋成体大迎角非对称流动试验研究飞行器影响

缺氧预处理对脐带间充质干细胞bFGF分泌的影响

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解放军医学杂志 2010年第3期35卷 297-300页

作者：侯跃龙李彤严晓晔张臣高英堂朱争艳天津医科大学三中心临床学院天津300170 天津市第三中心医院心脏外科天津300170 天津市人工细胞重点实验室

目的探讨氯化钴(CoCl2)模拟缺氧预处理对人脐带间充质干细胞(UC-MSCs)碱性成纤维生长因子(bFGF)分泌的影响。方法分离、培养人UC-MSCs,显微镜观察其形态学特征,并运用流式细胞仪检测其表面标志物的表达;选取P3代健康人UC-MSCs,MTT法检... 详细信息

目的探讨氯化钴(CoCl2)模拟缺氧预处理对人脐带间充质干细胞(UC-MSCs)碱性成纤维生长因子(bFGF)分泌的影响。方法分离、培养人UC-MSCs,显微镜观察其形态学特征,并运用流式细胞仪检测其表面标志物的表达;选取P3代健康人UC-MSCs,MTT法检测不同浓度(0、50、100、150、200、250μmol/L)CoCl2对UC-MSCs活力及增殖的影响,然后将细胞分为4组,分别采用0、50、100、150μmol/L CoCl2处理,于24、48、72h后检测bFGF蛋白及mRNA的表达并分析各组间的差异。结果经适当浓度(≤150μmol/L)CoCl2处理后,UC-MSCs生长加快,平台期提前,而高浓度(>200μmol/L)CoCl2对细胞活力有负面影响。经50、100、150μmol/L CoCl2处理后,各组bFGF蛋白分泌水平均明显高于0μmol/L CoCl2处理组(P<0.05),且48、72h时点均高于24h时点(P<0.05),150μmol/L CoCl2处理组72h时点bFGF蛋白表达水平明显低于48h(P<0.05),100μmol/L CoCl2处理组72h时点bFGF蛋白表达水平明显高于48h(P<0.05),而50μmol/L CoCl2处理组72h时点与48h时点比较无显著差异。bFGF mRNA表达改变与蛋白基本相一致,但50μmol/LCoCl2处理组在各时点没有显著差异。结论适当浓度(≤150μmol/L)的CoCl2对UC-MSCs增殖能力影响较小,可用于细胞模拟缺氧;缺氧预处理对人UC-MSCs的bFGF分泌有一定促进作用。

关键词：成纤维细胞生长因子2 细胞低氧氯化钴

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还山于民还权于民赋予农民更多财产权利

内蒙古林业 2014年第5期 14-15页

作者：侯跃龙敖汉旗林业局

敖汉旗林业用地面积600万亩,占全旗总土地面积的半壁江山,是典型的林业建设大旗。在几十年的生态建设中,敖汉旗取得了巨大成就,先后被国家相关部委授予＂‘三北’防护林体系一、二、三期工程建设先进单位＂、＂全国治沙先进单位＂、＂... 详细信息

敖汉旗林业用地面积600万亩,占全旗总土地面积的半壁江山,是典型的林业建设大旗。在几十年的生态建设中,敖汉旗取得了巨大成就,先后被国家相关部委授予＂‘三北’防护林体系一、二、三期工程建设先进单位＂、＂全国治沙先进单位＂、＂全国造林绿化先进单位＂等荣誉称号。2002年,联合国环境规划署授予敖汉旗＂全球500佳＂环境奖;2003年,全国绿化委员会、

关键词：财产权利联合国环境规划署农民三期工程建设林业建设造林绿化防护林体系敖汉旗

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敖汉旗:新理念推动林业实现新突破

内蒙古林业 2016年第11期 6-7页

作者：侯跃龙内蒙古敖汉旗林业局

“十二五”时期是敖汉旗林业转型升级、爬坡过坎的关键时期。5年来，在全旗广大干部群众的共同努力下，该旗逐步形成了新的发展理念，构建了新的发展模式。总结敖汉旗“十二五”林业发展的新突破，对丰富和发展新时期敖汉林业发展理论... 详细信息

“十二五”时期是敖汉旗林业转型升级、爬坡过坎的关键时期。5年来，在全旗广大干部群众的共同努力下，该旗逐步形成了新的发展理念，构建了新的发展模式。总结敖汉旗“十二五”林业发展的新突破，对丰富和发展新时期敖汉林业发展理论，开创“十三五”林业发展新局面具有十分重要的意义。

关键词：林业发展敖汉旗产业发展模式林业保护

血清多肽组学作为Ⅰ期-Ⅱb期非小细胞肺癌标志物的初步研究

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中国肺癌杂志 2019年第1期22卷 20-25页

作者：侯跃龙郭洪琦郭永宽张玉坤韩洪利天津市第三中心医院胸外科天津300170

背景与目的非小细胞肺癌是发病率最高的一种肺恶性肿瘤,早发现、早诊断、早治疗是其治疗原则,因其发病隐匿,缺乏早期筛查的特异性标志物,多数患者就诊时已处于晚期阶段,导致其5年生存率较低,预后不理想。探索一种敏感的生物学标志物,是... 详细信息

背景与目的非小细胞肺癌是发病率最高的一种肺恶性肿瘤,早发现、早诊断、早治疗是其治疗原则,因其发病隐匿,缺乏早期筛查的特异性标志物,多数患者就诊时已处于晚期阶段,导致其5年生存率较低,预后不理想。探索一种敏感的生物学标志物,是目前肺癌诊疗的重点。本文基于差异多肽组学技术,旨在筛选I期-IIb期非小细胞肺癌的血清生物标志物。方法利用纳升超高效液相色谱联合四级杆轨道阱质谱技术,比较和筛选正常健康人群、肺部良性病变患者、非小细胞肺癌患者血清中的差异多肽片段,通过对目标肽段的鉴别和定量分析,探寻非小细胞肺癌早期诊断的肿瘤生物标志物。结果通过与人类蛋白质组数据库进行比对,共鉴定到545个多肽,分别来自118个蛋白。将各组样本中肽段的谱图数进行比较,共筛选出201个差异多肽,经定量分析发现峰面积的变异系数(coefficient of variation, CV)≤30%的目标肽段共计7个,其中在各组间呈趋势变化的有2条肽段,分别是肺癌组中表达下调的肽段QGAKIPKPEASFSPR和肺癌组中表达上调的肽段CDDYRLC,它们分别来自于中间α球蛋白抑制因子H4蛋白(ITIH4)和基质γ-羧基谷氨酸蛋白(MGP)。结论将血清多肽组学用于筛选肿瘤标志物的研究,可为非小细胞肺癌的早期诊断提供新线索,其中ITIH4与MGP蛋白水解的特异性肽段是潜在早期非小细胞肺癌患者的血清标志物。

关键词：血清多肽组肺肿瘤肿瘤标志物早期诊断

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推进沟道治理发展沟道经济

内蒙古林业 2012年第5期 6-7页

作者：侯跃龙敖汉旗林业局

敖汉旗位于赤峰市东南部，总土地面积1245万亩，辖17个乡镇（苏木、办事处），总人口60万人。地貌特征为“南山、中丘、北沙”，2000-2009年，全旗年平均降水量为345．2毫米，属于典型的干旱、半干旱地区。经过几代人几十年的艰苦奋斗... 详细信息

敖汉旗位于赤峰市东南部，总土地面积1245万亩，辖17个乡镇（苏木、办事处），总人口60万人。地貌特征为“南山、中丘、北沙”，2000-2009年，全旗年平均降水量为345．2毫米，属于典型的干旱、半干旱地区。经过几代人几十年的艰苦奋斗，全旗生态条件发生了根本性的改变，现有林面积达566万亩，森林覆盖率为43．1％。

关键词：沟道治理半干旱地区经济年平均降水量土地面积森林覆盖率地貌特征生态条件