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IBDV VP2/4/3、ChIL-18共表达载体的构建及在Vero细胞上的表达

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浙江大学学报（农业与生命科学版） 2010年第1期36卷 1-8页

作者：侯贤宏魏永伟章晓栋于涟浙江大学动物科学学院浙江省动物预防医学重点实验室/农业部动物疫病病原学与免疫控制重点实验室浙江杭州310029

为提高传染性法氏囊病病毒(IBDV)多聚蛋白(VP2/4/3)DNA疫苗的免疫效果,应用重叠延伸剪切技术(splicing by overlapping extension)将IBDV VP2/4/3基因与鸡白细胞介素18(ChIL-18)基因分别经3次PCR获得融合基因片段VP2/4/3-ChIL-18和ChIL-18-VP2/4/3,将融合基因片段定向插入真核表达载体pCI中,获得重组质粒pCI-VP2/4/3-ChIL-18和pCI-ChIL-18-VP2/4/3;应用PCR法,在本实验室已成功构建的重组真核表达载体pCI-VP2/4/3和pCI-ChIL-18的基础上,构建VP2/4/3基因和ChIL-18基因的共表达载体co-pCI-VP2/4/3-ChIL-18。在脂质体介导下将上述重组真核表达载体转染Vero细胞,间接免疫荧光证实重组质粒能正常表达目的蛋白,表达的蛋白具有免疫反应性。这为进一步研究ChIL-18的分子免疫佐剂作用及研制高效、价廉的IBDV DNA疫苗提供了实验依据。

关键词： IBDV 基因融合共表达 DNA疫苗间接免疫荧光

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白细胞白介素2的应用

白细胞白介素2的应用

IBDV VP2/4/3与ChIL-18融合基因真核表达质粒和基因共表达质粒的免疫原性比较

浙江省免疫学会第六次学术研讨会

作者：侯贤宏于涟浙江大学动物预防医学研究所浙江省动物预防医学重点实验室

细胞白介素2(Interleukin-2,IL-2)主要是由 T 淋巴细胞或 T 淋巴细胞系产生的一类最有利的 T 细胞生长因子,属于 Th1型细胞因子,在抗肿瘤、抗毒素免疫调节及感染性疾病的治疗中具有重要作用。它能够有效的提高免疫功能:促进 T、B 淋巴... 详细信息

细胞白介素2(Interleukin-2,IL-2)主要是由 T 淋巴细胞或 T 淋巴细胞系产生的一类最有利的 T 细胞生长因子,属于 Th1型细胞因子,在抗肿瘤、抗毒素免疫调节及感染性疾病的治疗中具有重要作用。它能够有效的提高免疫功能:促进 T、B 淋巴细胞增殖;增强 NK 细胞、单核细胞等的杀伤活性;也可促进其他细胞因子的分泌以及刺激 T 细胞在体外的生长。在免疫应答系统中起着极其重要的调节作用,是一种天然的免疫增强剂和治疗剂。 IL-2的应用

关键词： IL-2 亚单位疫苗免疫增强剂免疫佐剂

来源： cnki会议评论

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中国预防兽医学报 2010年第10期32卷 785-789页

作者：侯贤宏魏永伟章晓栋于涟浙江大学动物科学学院/浙江省动物预防兽医学重点实验室浙江杭州310029 浙江省台州市椒江区畜牧兽医局浙江台州318000

为比较已构建的鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)重组质粒的免疫原性、进一步研究ChIL-18的分子免疫佐剂作用,本研究将2周龄SPF鸡随机分为6组,以200μg/羽剂量首免:A组免疫重组真核表达重组质粒pCI-VP2/4/3-ChIL-18,B组免疫pCI-ChIL-18-VP2/4... 详细信息

为比较已构建的鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)重组质粒的免疫原性、进一步研究ChIL-18的分子免疫佐剂作用,本研究将2周龄SPF鸡随机分为6组,以200μg/羽剂量首免:A组免疫重组真核表达重组质粒pCI-VP2/4/3-ChIL-18,B组免疫pCI-ChIL-18-VP2/4/3,C组免疫pCI-co-VP2/4/3-ChIL-18,D组免疫pCI-VP2/4/3,E组免疫pCI-ChIL-18和pCI-VP2/4/3,F组为空白对照,2周后以相同剂量二免,通过观察外周血淋巴细胞增殖效果,测定血清IBDV中和抗体水平、血清ELISA抗体水平和攻毒保护试验等,比较各试验组IBDV DNA疫苗的免疫原性。试验发现:重组质粒pCI-co-VP2/4/3-ChIL-18的保护效果最好,保护率达93.3%;pCI-VP2/4/3-ChIL-18免疫效果次之,保护率达80.0%;pCI-ChIL-18-VP2/4/3与pCI-ChIL-18和pCI-VP2/4/3的免疫效果无显著差异,保护率均为73.3%;但均优于单独使用重组质粒pCI-VP2/4/3组,保护率为60.0%。本实验为进一步研究ChIL-18的分子免疫佐剂作用及研制高效、价廉的IBDV DNA疫苗提供了实验依据。

关键词：真核表达载体 DNA疫苗免疫原性免疫效果

基于T7 RNA聚合酶的传染性法氏囊病病毒反向遗传系统的建立

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浙江大学学报：农业与生命科学版 2008年第6期34卷 602-607页

作者：魏永伟章晓栋侯贤宏徐弘于涟浙江大学动物科学学院浙江省动物预防医学重点实验室浙江杭州310029

为了建立传染性法氏囊病病毒反向遗传系统,应用PCR法在鸡传染性法氏囊病病毒基因组A、B两节段的5末端和3末端分别引入T7启动子和核酶HDV序列,然后分别将含有T7启动子和核酶HDV序列的A、B节段构建到载体PT-Pluc当中,构建感染性载体PT-mA... 详细信息

为了建立传染性法氏囊病病毒反向遗传系统,应用PCR法在鸡传染性法氏囊病病毒基因组A、B两节段的5末端和3末端分别引入T7启动子和核酶HDV序列,然后分别将含有T7启动子和核酶HDV序列的A、B节段构建到载体PT-Pluc当中,构建感染性载体PT-mA和PT-mB.在脂质体介导下将PT-mA和PT-mB共转染经痘病毒vTF7-3(含T7 RNA聚合酶基因,能稳定表达T7 RNA聚合酶)预先感染1 h的vero细胞.细胞病变观测、间接免疫荧光试验、电镜观察和分子标记检测证实成功实现了鸡传染性法氏囊病病毒的遗传拯救.

关键词： IBDV 反向遗传 T7 RNA聚合酶

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猪O型口蹄疫合成肽苗的临床免疫效果分析

中国猪业 2011年第4期5卷 29-30页

作者：林建平侯贤宏浙江省台州市椒江区畜牧兽医局

口蹄疫(FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的偶蹄动物的一种急性、热性和高度接触性的传染病。世界上许多国家和地区都有该病的流行与发生,严重威胁着畜牧业的发展,造成了巨大

关键词：口蹄疫日龄牲畜五号病病毒病合成肽抗体效价

台州市椒江区规模化养殖场畜禽排泄物的治理现状及对策

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浙江畜牧兽医 2010年第4期35卷 19-21页

作者：林建平侯贤宏王迪台州市椒江区畜牧兽医局浙江椒江318000

近年来,随着经济的发展和消费水平的提高,人们对肉、蛋、奶等畜禽产品的需求量迅速增加,畜牧业开始进入了从传统散养为主向规模养殖发展的新阶段.

关键词：规模化养殖场椒江区台州市畜禽排泄物治理现状社会主义新农村建设生态畜牧业城市化进程

基于RNA聚合酶Ⅱ的传染性法氏囊病病毒反向遗传系统的建立

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中国预防兽医学报 2008年第10期30卷 751-754页

作者：魏永伟侯贤宏章晓栋徐弘吕冬梅于涟浙江大学动物预防医学研究所浙江省重点实验室浙江杭州310029

应用重叠PCR法在鸡传染性法氏囊病病毒基因组A、B两节段的5'末端和3'末端分别引入具有自我剪切功能的核酶HamRz和HDV序列,然后分别将含有核酶序列的A、B节段构建到pCI真核载体当中,构建真核载体pCI-ma核pCI-mb。在脂质体介导下,将pCI-ma... 详细信息

应用重叠PCR法在鸡传染性法氏囊病病毒基因组A、B两节段的5'末端和3'末端分别引入具有自我剪切功能的核酶HamRz和HDV序列,然后分别将含有核酶序列的A、B节段构建到pCI真核载体当中,构建真核载体pCI-ma核pCI-mb。在脂质体介导下,将pCI-ma和pCI-mb共转染Vero细胞。细胞病变观测、间接免疫荧光试验和分子标记检测证实成功实现了鸡传染性法氏囊病病毒的遗传拯救。

关键词： IBDV RNA聚合酶Ⅱ 反向遗传

几种新型有机—无机杂化功能晶体的光学性能研究

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几种新型有机—无机杂化功能晶体的光学性能研究

作者：侯若贤曲阜师范大学

学位级别：硕士

近年来,有机-无机杂化晶体材料引起了人们的越来越多的关注。有机-无机杂化材料不但保有有机材料的柔性,另一方面也兼顾了无机材料的稳定性,是一种值得关注的功能晶体材料。目前,有机-无机杂化晶体材料已经在太阳能电池、光电探测器、... 详细信息

近年来,有机-无机杂化晶体材料引起了人们的越来越多的关注。有机-无机杂化材料不但保有有机材料的柔性,另一方面也兼顾了无机材料的稳定性,是一种值得关注的功能晶体材料。目前,有机-无机杂化晶体材料已经在太阳能电池、光电探测器、发光二极管、光伏组件及非线性光学等领域显示出广泛的应用前景。本文通过改变不同组分,合成了多种有机-无机杂化晶体,并对晶体的结构、光致发光性能、非线性光性能和理论计算等方面进行了研究,取得了下面的研究成果:尝试用具有平面π-共轭结构的4-羟基吡啶(C6H8N2)与氨基磺酸相结合,用溶液法成功合成了具有良好稳定性的新型有机-无机杂化晶体(C5H6NO)SO3NH2,并且尝试了用有五元环的咪唑与氨基磺酸合成新的有机-无机杂化晶体(C3H5N2)SO3NH2。这两种晶体有比较相似的中心对称的结构,均属于单斜晶系的P21/c空间群。同时对两种晶体的相纯度、紫外吸收光谱、红外光谱和光致发光等物理性质进行了深入的研究。在此基础上探索了同样拥有π-共轭结构的2-氨甲基吡啶(C6H8N)与MnCl2在盐酸溶液中的组合,生长出了具有0维结构的中心对称的(C6H10N2)2MnCl6·2H2O,晶体结构属于三斜晶系,空间群为P 1。在研究晶体热稳定性的过程中,发现了晶体在没有脱水的情况下表现出温度诱导的可逆PL开关行为。通过进一步研究发现(C6H10N2)2MnC16.2H2O在618 nm处表现出红光发射,斯托克斯位移大于300 nm,荧光寿命长达6.21 ms。利用第一性原理,对晶体结构与光致发光性能之间的关系进行了计算与研究。同时,基于(C6H10N2)2MnCl6·2H2O对温度的敏感性以及发光性能,探讨并设计了该.晶体在可逆PL开关以及LED的应用。尝试将含有高电负性原子(O、N)的有机物吗啉(C4H9NO),与含有孤对电子构型的阳离子(Sb3+)的氯化物组合,通过溶剂挥发法结合,生成了一种非线性光学晶体(C4H10NO)2SbCl5。晶体结构属于正交晶系的P212121空间群。晶体的吸收截止边为394 nm,SHG响应强度约为KDP晶体的0.28倍,同时对晶体的热稳定性以及红外光谱进行了详细的分析和讨论。这项工作通过引入高电负性元素(O、N)来调控晶体对称性,为设计新的非线性光学晶体提供了一种新的思路。

关键词：有机-无机杂化晶体光致发光二阶非线性晶体结构

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个人信息的反垄断法保护

个人信息的反垄断法保护

作者：侯沁宏吉林大学

学位级别：硕士

如今的数字经济方兴未艾,对于相关企业来说,数据即成为了关乎自身发展的重要资源,特别是与用户(或称作消费者)息息相关的“个人信息”。重要的资源自然会被争夺,个人信息在数字经济中也是如此,但广大消费者却成为了争夺战中的受损方,由... 详细信息

如今的数字经济方兴未艾,对于相关企业来说,数据即成为了关乎自身发展的重要资源,特别是与用户(或称作消费者)息息相关的“个人信息”。重要的资源自然会被争夺,个人信息在数字经济中也是如此,但广大消费者却成为了争夺战中的受损方,由于信息不对称和隐私悖论等问题的存在,如何保护个人信息,就成为了一个重要的问题。个人信息保护面临的法律困境主要有两点。首先,个人信息保护法的存在并不能解决个人信息保护的所有问题,个人信息保护法主要关注个人隐私和数据安全,从消费者的处分自由出发,在较低的层面上保护个人信息。其次,传统的反垄断分析建立在价格理论之上,零价服务的出现使价格分析在数字经济中没有了现实支撑。反垄断法之所以保护竞争,是因为要通过保护竞争来促进基本价值的实现,比如正义、自由、尊严这些人类期望,而并非只是单纯追求竞争带来的经济效益,所以不能仅仅依靠竞争的经济损害后果来判断是否能适用反垄断法。当个人信息成为消费者的支付对价、个人信息保护水平成为经营者的竞争新方向后,企业对个人信息的保护水平也就成为了判定服务质量的重要参考标准,个人信息保护通过被纳入到“消费者福利”中,从理论上来说也就能被纳入到反垄断法的调整范围中。既然个人信息可作为独立的消费者福利内容而进入反垄断法体系中,那么由此可以构建出通过反垄断法保护个人信息的路径:个人信息独立于价格,作为一项单独的消费者福利,其本身就是反垄断法的保护对象,这就是对个人信息的独立保护。保护个人信息的具体方法可以从垄断行为入手,根据不同垄断行为分为三个方面。首先,在垄断协议行为方面,要注重从关注“价格”到关注“个人信息保护”的转型,防止经营者之间,针对降低个人信息保护水平达成垄断协议,达到限制或排除对个人信息保护的竞争的目的。其次,在滥用市场支配地位行为方面,要根据剥削性滥用和排他性滥用两个行为的不同特点,丰富规制滥用市场支配地位收集个人信息的适用标准。最后,在经营者集中行为方面,执法机构要更新审查理念,在审查数据驱动型集中时,需要更多关注个人信息保护水平受到的影响,要评估集中是否会排斥或阻碍其他企业参与竞争。

关键词：反垄断法个人信息保护互联网经济垄断行为