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猪腹泻病毒iiRT-PCR和三重qRT-PCR方法的建立与应用

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猪腹泻病毒iiRT-PCR和三重qRT-PCR方法的建立与应用

作者：侯闻闻扬州大学

学位级别：硕士

高中生数学认知负荷与心理复原力的现状及关系研究

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高中生数学认知负荷与心理复原力的现状及关系研究

作者：侯连红青海师范大学

学位级别：硕士

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关联企业实质合并破产规则研究

关联企业实质合并破产规则研究

作者：侯盈盈吉林大学

学位级别：硕士

FMDV非结构蛋白3ABC单克隆抗体制备及其生物传感器的初步研究

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FMDV非结构蛋白3ABC单克隆抗体制备及其生物传感器的初步研究

作者：侯向玉重庆理工大学

学位级别：硕士

口蹄疫（foot-and-mouth disease,FMD）是由口蹄疫病毒引起的感染性强、传播途径广、持续性感染且易突变的人畜共患疾病,主要侵害偶蹄目动物牛、羊、猪等。目前在口蹄疫诊断技术中血清学检测在临床较普遍,其中病毒中和试验（Virus neutr... 详细信息

口蹄疫（foot-and-mouth disease,FMD）是由口蹄疫病毒引起的感染性强、传播途径广、持续性感染且易突变的人畜共患疾病,主要侵害偶蹄目动物牛、羊、猪等。目前在口蹄疫诊断技术中血清学检测在临床较普遍,其中病毒中和试验（Virus neutralization test,VNT）诊断FMD准确可靠,但需要动用活毒,对实验室的要求比较高,正向间接血凝试验（Indirect Hemagglutination Assay,IHA）对环境比较敏感,外界的条件影响检测结果。液相阻断酶联免疫吸附试验（Liquid-phase blocking enzyme-linked immunosorbent assay,LPB-ELISA）适合于大批量血清样品的检测,但操作繁琐耗时,检测灵敏度有限。因此探索一种快速、灵敏、简单方便的检测技术对口蹄疫的防控有十分重要的意义。我国目前主要采取疫苗防控策略,在疫苗加工过程中,非结构蛋白（Non-structural protein,NSPs）会被除去,所以免疫动物体内不会产生针对NSPs的抗体,只会诱导产生针对（Structural protein,SPs）的抗体。而当感染FMDV并出现病毒复制后,无论表现为临床还是亚临床症状,动物体内会产生针对SPs和NSPs的两种抗体。研究表明,口蹄疫病毒（FMDV）非结构蛋白抗体的检测是区分感染动物和接种疫苗动物的可靠诊断方法,其中非结构蛋白3ABC是最可靠的FMD感染“指示器”。MXene具有过渡金属碳化物的金属导电性,允许PtPd NPs纳米材料共价结合,再与高比表面积、可调孔径的共价有机骨架材料（Covalent Organic Frameworks,COFs）组合优化可以提高电化学生物传感器的灵敏度。另外,作为类石墨烯材料的二硫化钼（Molybdenum disulfide,MoS）,具有比表面积大、可调节谐带宽窄等优点,可以使极大角度光纤光栅（Excessively tilted fiber grating,Ex-TFG）生物传感器的检测限变宽。本研究旨在制备出特异性强、活性高的FMDV 3ABC单克隆抗体,并以此试剂为原料,构建基于PtPd NPs/MXene/COFs的电化学生物传感器和基于MoS集成Ex-TFG的光纤生物传感器,用于口蹄疫抗体的快速检测,为口蹄疫的诊断提供新的检测技术。本文研究内容:（1）FMDV 3ABC单克隆抗体的制备及生物学特性鉴定。将酵母真核表达系统表达的3ABC重组蛋白与等体积弗氏佐剂混合,充分乳化后作为免疫原,采用长程免疫法免疫BALB/c小鼠。使用PEG法进行细胞融合,采用间接ELISA法对融合细胞及亚克隆后的细胞上清进行重复筛选,采用BALB/c小鼠体内诱生法制备腹水,利用Protein A柱纯化,并对纯化后的抗体进行生物特性鉴定。（2）基于PtPd NPs/MXene/COFs复合材料修饰玻碳电极的FMDV 3ABC抗体电化学生物传感器构建。采用氢氟酸刻蚀法制备二维材料MXene,使用氧化还原法制备PtPd NPs/MXene,通过溶剂热法合成COFs;材料表征成功后,在裸玻碳电极上依次滴加材料溶液进行传感器修饰,材料通过共价结合方式固定到传感器上,然后FMDV3ABC抗原的羧基与材料上的羟基发生脱水缩合而固定到传感器上,检测不同浓度的FMDV 3ABC抗体样品,借助电化学工作站检测出电极上的感应电流情况,从而实现口蹄疫抗体快速检测。（3）基于MoS集成Ex-TFG生物传感器的FMDV 3ABC抗体快速检测方法研究。采用MoS修饰极大角度倾斜光纤光栅（Ex-TFG）生物传感器,经过光纤表面预处理、羟基化、硅烷化以及MoS修饰等一系列修饰过程,使Ex-TFG表面带有巯基,由于MoS表面硫原子缺失而形成缺陷位点能够与巯基结合,然后再通过MoS的高疏水性将FMDV 3ABC抗原固定在光纤表面,将制备得到的生物传感器用于检测FMDV 3ABC抗体,并对该传感器的性能进行评价。结果:（1）成功制备FMDV 3ABC单克隆抗体。细胞融合率达到94.10%,阳性率为29.86%。经过两次亚克隆,获得3株稳定分泌3ABC抗体的单克隆细胞株,命名为1-4D、3-6H、4-8F。选取其中效价最高的4-8F细胞株进行二次亚克隆,其亚型鉴定为Ig G1亚类。对腹水型单抗进行纯化,纯化后的单抗纯度较高,浓度最高可达1.1923 mg/m L,并且纯化后的FMDV 3ABC单克隆抗体能够与重组FMDV 3ABC抗原特异性结合,其效价为1:128 000。（2）成功构建基于PtPd NPs/MXene/COFs修饰的电化学生物传感器。该传感器3ABC抗体的检测范围为100 fg/m L到100 ng/m L之间,检测限为

关键词： FMDV3ABC 单克隆抗体 PtPd NPs/MXene/COFs复合材料电化学生物传感器 MoS2 Ex-TFG生物传感器

基于合成氨基酸缓释的低蛋白日粮下肉鸡适宜苏氨酸需要量研究

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基于合成氨基酸缓释的低蛋白日粮下肉鸡适宜苏氨酸需要量研究

作者：侯安琪山东农业大学

学位级别：硕士

枹栎细根形态特征及其化学组分对环境变化的响应

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枹栎细根形态特征及其化学组分对环境变化的响应

作者：侯清晨曲阜师范大学

学位级别：硕士

枹栎(Quercus serrata)作为群落中的奠基种和建群种,在所处的群落中分布着大量个体,且具有较高的生物量,对所在群落生物多样性、生态系统功能和物种间相互作用产生着巨大影响,是温带阔叶林分布最广的树种之一,具有重要的生态和经济价值... 详细信息

枹栎(Quercus serrata)作为群落中的奠基种和建群种,在所处的群落中分布着大量个体,且具有较高的生物量,对所在群落生物多样性、生态系统功能和物种间相互作用产生着巨大影响,是温带阔叶林分布最广的树种之一,具有重要的生态和经济价值。拥有广袤分布范围的枹栎在不同地域间形态和化学特征往往表现出较高的变异性,从而适应不同的生态环境。细根是吸收、储存和运输养分水分的器官,对生存环境的变化最为敏感,可以通过改变其形态和化学性状特征适应外界环境的变化。所以要想获知植物对不同地点异质性环境的适应机制,了解枹栎细根性状特征对环境变化的响应规律尤为重要。有大量研究指出土壤理化性质、温度和降水是影响植物生存和繁殖的重要控制因素。因此,本研究选取20个枹栎自然种群的地点采取枹栎根系和土壤样品,综合分析枹栎细根形态和化学组分对土壤理化性质、温度和降水这些环境控制因素变化的响应规律,有助于了解植物对全球环境变化的生存策略和适应机制。主要研究结果如下:(1)枹栎细根形态特征对环境变化的响应具有规律性。吸收根(1-2级根)主要受到土壤理化性质和降水的影响,降水和土壤养分胁迫会降低吸收根直径,增加比根长和比根面积。运输根(4-5级根)受单一温度因素的影响,气温升高会降低运输根直径,增加比根长和比根面积。3级细根处于过渡状态,主要受土壤理化性质和温度的影响,在响应规律上与运输根相同。因此,研究发现降水和土壤理化性质主要影响较低根序的细根形态,温度倾向于影响较高根序的细根形态。(2)枹栎细根化学组分对环境变化的响应具有规律性。运输根和吸收根主要受到温度的影响。气温升高会增加细根磷含量,降低细根碳含量、碳磷比和氮磷比。过渡根(3级根)主要受到土壤理化性质和温度的影响,这种影响主要通过土壤环境变化实现。土壤肥力增强会提高过渡根的氮和磷含量,降低细根碳氮比和碳磷比。(3)温度对枹栎细根性状的影响最强,对运输根形态和化学组分有显著的影响。在温度较高的情况下,枹栎将构建代谢能力更强、呼吸和生长速度更快、以及运输效率更高的运输根。此外,在土壤肥力较高的水平下,枹栎将构建生理代谢能力更强的过渡根,提高其吸收和运输能力。在降水和养分胁迫的情况下,枹栎将构建具有较强吸收能力的吸收根;当温度升高时,枹栎将提高吸收根的代谢能力和生长速率。综上所述,本研究通过探索枹栎细根形态、化学组成和计量比对不同地点土壤理化性质、温度和降水环境控制因素变化的响应规律,了解枹栎对环境变化的适应机制。结果表明枹栎通过调整吸收根和运输根的形态和化学特征来优化其功能,以此适应环境的变化。

关键词：枹栎细根形态特征化学组分化学计量比环境变化适应机制

互惠是为了公平还是表现？自我控制、旁观者效应对互惠行为的影响

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互惠是为了公平还是表现？自我控制、旁观者效应对互惠行为的影响

作者：侯艾华云南师范大学

学位级别：硕士

基于AGE/RAGE通路对TRPV1的调控探究“调脏通络”电针对痛性糖尿病周围神经病伴随微血管障碍的机制研究

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基于AGE/RAGE通路对TRPV1的调控探究“调脏通络”电针对痛性糖尿...

作者：侯清誉长春中医药大学

学位级别：硕士

目的:基于AGEs-RAGE通路对TRPV1的调控,探讨“调脏通络”电针对PDPN小鼠微血管障碍的调节作用,揭示“调脏通络”电针改善PDPN伴随微血管障碍的作用机制。阐明“调脏通络”电针在外周微血管内,可通过调节AGE/RAGE通路及其相关产物改善PD... 详细信息

目的:基于AGEs-RAGE通路对TRPV1的调控,探讨“调脏通络”电针对PDPN小鼠微血管障碍的调节作用,揭示“调脏通络”电针改善PDPN伴随微血管障碍的作用机制。阐明“调脏通络”电针在外周微血管内,可通过调节AGE/RAGE通路及其相关产物改善PDPN,明确“调脏通络”电针在PDPN的病理条件下对痛性糖尿病周围神经微血管障碍的调节作用,为PDPN微血管障碍的治疗及机制的研究提供了新的靶点和方向。方法:选取16周龄的符合标准雄性db/m小鼠15只作为正常对照组;另外使用随机数字法选取30只16周龄的雄性db/db小鼠分为“调脏通络”电针组和模型组,每组15只。观察经过12周治疗后的三组小鼠血糖、体重、痛阈、神经传导速度变化;使用免疫组化与免疫荧光方法检测“调脏通络”电针对PDPN伴随微血管障碍小鼠坐骨神经与足部微细血管中白细胞介素6与肿瘤坏死因子α表达的影响。结果:1.与正常对照组相比,模型组小鼠的整体精神状态不佳,血糖值居高不下。治疗12周后针刺组小鼠的整体状态有明显改善;2.模型组血糖值与对照组相比显著升高(P<0.01);“调脏通络”电针组小鼠血糖值与模型组相比显著降低(P<0.01);3.与正常对照组相比,模型组坐骨神经的运动神经传导速度降低(P<0.01);“调脏通络”电针组运动神经传导速度显著高于模型组(P<0.01),运动神经传导速度增加;4.治疗12周后,模型组小鼠坐骨神经中IL-6和TNF-α的水平高于正常对照组(P<0.01);“调脏通络”电针组与模型组相比坐骨神经IL-6和TNF-α的水显著降低(P<0.01);提示“调脏通络”电针能改善痛性糖尿病周围神经病变小鼠的病理变化;5.与正常对照组小鼠相比,模型组小鼠血清中AGEs/RAGE明显提高,有显著性差异(p<0.01)。经治疗后,“调脏通络”电针组小鼠血清中AGEs/RAGE含量明显降低,与模型组相比具有显著性的差异(p<0.01)。结论:“调脏通络”电针能降低PDPN小鼠血糖水平,改善PDPN小鼠的神经传导速度,降低PDPN小鼠痛阈的反应潜伏期,缓解PDPN小鼠的疼痛。“调脏通络”电针能对PDPN小鼠受损的坐骨神经保护和修复,改善坐骨神经的病理形态。“调脏通络”电针能抑制PDPN小鼠坐骨神神经中TNF-α、IL-6和AGEs-RAGE的表达,抑制TRPV1的生成,有效改善PDPN小鼠微血管通透性,进而减少周围神经的损伤及疼痛水平。

关键词：痛性糖尿病周围神经病变微血管障碍电针 AGEs/RAGE TRPV1

基于支架式教学法的初级汉语综合课教学设计 ——以《长城有八千八百五十多公里》为例

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基于支架式教学法的初级汉语综合课教学设计 ——以《长城有八千...

作者：侯培安阳师范学院

学位级别：硕士

对外汉语综合课初级教学是留学生学习汉语的基础和重点。支架式教学法作为一种学生在学习过程中遇到困难教师提供帮扶的教学法,帮助学生逐步理解初级汉语综合课的内容,有利于学生掌握汉语的日常用法进而了解中华文化。本文旨在探讨支架... 详细信息

对外汉语综合课初级教学是留学生学习汉语的基础和重点。支架式教学法作为一种学生在学习过程中遇到困难教师提供帮扶的教学法,帮助学生逐步理解初级汉语综合课的内容,有利于学生掌握汉语的日常用法进而了解中华文化。本文旨在探讨支架式教学法如何实现教师的引导作用以突显学生的主体地位,通过支架式教学法对提高学生的理解、分析和应用的能力进行了深入研究。研究首先梳理了有关支架式教学法的相关文献,指出了当前对外汉语教学中存在的缺乏趣味性,程序化严重,学生注意力不集中等教学问题。在此基础上,本文提出了根据学生学习的心理特点和知识承受能力搭建支架,激发学生学习的积极性促进学生对知识的深度理解和知识迁移,并通过具体的教学设计,将支架式教学法运用于实际的课堂教学,验证了支架式教学法能够很好地为教师讲解初级汉语课程提供帮助。研究结果表明,充分利用支架式教学法的优点可以提高学生自主学习汉语的能力,这一发现对于合理安排课程的结构、优化传统教学模式具有重要意义。此外,本文还进一步探讨了教师逐步减少支架从而辅助学生对知识的创新应用和独立思考,为海内外的汉语教学提供了有益的借鉴。总的来说,本文通过支架式教学法对《发展汉语初级综合I》中的《长城有八千八百五十多公里》一文进行具体的课堂教学研究,以期提高对外汉语教师的教学水平。最后通过总结教学实践和反思本节课的不足之处,丰富了支架式教学法对于如何激发学生学习汉语积极性的相关理论体系,也为在对外汉语教学中更科学高效地应用支架式教学法提供了重要的指导,从而更好地实现对外汉语的传承和发展。

关键词：支架式教学法初级汉语综合课《长城有八千八百五十多公里》