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电解刺激技术对***生长代谢的研究

食品工业科技 2013年第11期34卷 111-114页

作者：宋波侯怡铃丁祥西华师范大学生命科学学院四川南充637002

以葡萄糖为唯一碳源,研究了10mA电流下,直流电和交流电对细菌***的电解刺激过程。实验结果表明,10mA电流下,交流电与直流电的施加均能够对细胞的生长和代谢产生促进作用,但在相同的电流强度下,直流电的刺激效果显著强于交流电。通过对... 详细信息

以葡萄糖为唯一碳源,研究了10mA电流下,直流电和交流电对细菌***的电解刺激过程。实验结果表明,10mA电流下,交流电与直流电的施加均能够对细胞的生长和代谢产生促进作用,但在相同的电流强度下,直流电的刺激效果显著强于交流电。通过对电极反应产物的分析,表明可能是电解刺激下产生的氢气,过氧化氢等中间产物所致。

关键词：电解刺激直流电交流电

大熊猫Sjogren综合症/硬皮病自身抗原1基因(SSSCA1)的克隆及比较

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兽类学报 2010年第2期30卷 212-217页

作者：侯怡铃张田侯万儒西华师范大学生命科学学院南充637002

Scleroderma is a connective tissue disease characterized by the fibrosisization of skin and internal *** this study,the genomic sequence and cDNA of Sjogren’s syndrome/scleroderma autoantigen 1(SSSCA1)gene of the giant panda was cloned successfully using *** cDNA fragment cloned was 642 bp in length,and contained an open reading frame (ORF) of 600 bp encoding 199 amino *** genomic sequence was 1 262 bp,containing four exons and three introns. The deduced amino acid sequence showed that this protein was composed of 199 amino acids and its estimated molecular weight was 21.53841 kDa with a pI of 5.14. Three different patterns of functional sites were found:one protein kinase C phosphorylation site,five casein kinase Ⅱ phosphorylation sites,and three N-myristoylation sites. The SSSCA1 gene of the giant panda were highly homologous to those of some other mammals.

关键词：大熊猫 RT-PCR SSSCA1 克隆

大熊猫和亚洲黑熊TNNC1基因的克隆、表达与序列分析

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兽类学报 2012年第3期32卷 228-238页

作者：侯怡铃丁祥侯万儒西南野生动植物资源保护教育部重点实验室西华师范大学生命科学学院南充637009

慢肌肌钙蛋白C(Troponin C type 1,TNNC1)具有高度保守性,调控骨骼肌慢肌和心肌的收缩,影响肌蛋白的生成,从而可能导致动物肌肉的生长、进化和功能的差异。本研究以大熊猫和亚洲黑熊骨骼肌为材料,提取总RNA和基因组DNA,运用RT-PCR和Touc... 详细信息

慢肌肌钙蛋白C(Troponin C type 1,TNNC1)具有高度保守性,调控骨骼肌慢肌和心肌的收缩,影响肌蛋白的生成,从而可能导致动物肌肉的生长、进化和功能的差异。本研究以大熊猫和亚洲黑熊骨骼肌为材料,提取总RNA和基因组DNA,运用RT-PCR和Touch-down PCR分别扩增出TNNC1基因的cDNA序列和结构基因序列,并且构建了含有TNNC1 cDNA的重组表达载体,转化进入*** BL21进行超表达研究。结果表明大熊猫TNNC1基因的cDNA片段长602 bp,包含一个编码161个氨基酸的开放阅读框,其结构基因全长2 831 bp,包含6个外显子和5个内含子。亚洲黑熊TNNC1基因的cDNA片段长486 bp,亦包含一个编码161个氨基酸的开放阅读框,其结构基因全长2 758 bp,同样包含6个外显子和5个内含子。该两个物种的TNNC1基因与已报道的13种动物的TNNC1基因具有很高的相似性。拓扑预测表明,大熊猫和亚洲黑熊TNNC1蛋白有1个蛋白激酶C磷酸化位点,5个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点,1个N-豆蔻酰化位点,3个EF手性钙结合域及1个N-糖基化位点。将TNNC1基因在大肠杆菌中表达发现TNNC1蛋白与氮端多聚组氨酸标签蛋白(His6)融合成大小为23.5kD左右的多肽,这与预期结果相一致。本研究结果为进一步深入探讨大熊猫和亚洲黑熊TNNC1基因及蛋白的结构、功能和进化关系提供资料。

关键词：克隆表达 TNNC1 大熊猫亚洲黑熊

大熊猫核糖体蛋白S26亚基基因(rps26)的cDNA克隆及序列分析

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北京师范大学学报（自然科学版） 2010年第2期46卷 177-181页

作者：侯怡铃孙冰侯万儒西华师范大学生命科学学院四川南充637002

为了解大熊猫核糖体蛋白亚基rps26基因的结构特点及其与已报道的人和其他哺乳动物核糖体蛋白亚基基因rps26的异同,以大熊猫的肌肉组织为材料,根据已报道的部分哺乳动物核糖体蛋白S26亚基基因(rps26)的相关信息设计引物,运用RT-PCR技术,... 详细信息

为了解大熊猫核糖体蛋白亚基rps26基因的结构特点及其与已报道的人和其他哺乳动物核糖体蛋白亚基基因rps26的异同,以大熊猫的肌肉组织为材料,根据已报道的部分哺乳动物核糖体蛋白S26亚基基因(rps26)的相关信息设计引物,运用RT-PCR技术,成功地克隆了核糖体蛋白亚基基因rps26的表达序列,并对其进行了测序及初步分析.结果表明:大熊猫rps26亚基基因的表达序列长为413 bp,开放阅读框(ORF)为348 bp,编码115个氨基酸的蛋白质,该蛋白的相对分子质量为13.025 2×103,等电点为11.61.拓扑预测显示该蛋白含有3个功能位点:1个N-糖基化位点,1个酪蛋白激酶Ⅱ蛄姿峄?位点和1个核糖体蛋白S26e signature位点.进一步分析发现,大熊猫rps26基因与已报道的人、西藏黄牛、野猪、褐家鼠和小家鼠5个哺乳动物物种的表达序列其编码的氨基酸序列具有很高的相似性:编码序列同源性分别为90.23%、91.67%、92.82%、87.36%和86.78%;氨基酸序列同源性均为99.86%.

关键词：大熊猫 RT-PCR S26亚基基因(rps26) 克隆序列分析

天府花生叶多糖AHL-P结构解析及体外抗肿瘤和免疫活性

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食品科学 2023年第23期44卷 45-54页

作者：卢睿加夏友霖游宇王艺学丁祥侯怡铃西华师范大学生命科学学院西南野生动植物资源保护教育部重点实验室四川南充637009 南充市农业科学院四川南充637009 西华师范大学环境科学与工程学院嘉陵江流域生态环境保护与污染防治南充市重点实验室四川南充637009

本研究利用热水浸提法制备天府花生叶片多糖(Arachis hypogaea leaves polysaccharide,AHL-P),分别利用高效凝胶渗透色谱(high performance gel permeation chromatography,HPGPC)、傅里叶变换红外光谱(Fourier transform infrared spectroscopy,FTIR)、核磁共振波谱(nuclear magnetic resonance spectroscopy,NMR)、气相色谱-质谱联用(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)等技术对AHL-P进行结构鉴定,并采用CCK-8法探索AHL-P对腹水癌细胞(S180)、小鼠胃癌细胞(MFC)、免疫B细胞(Raji)、T细胞(Jurkat)和巨噬细胞(RAW 264.7)体外增殖的影响。结果表明,AHL-P分子质量为12.84 kDa,其单糖组成为葡萄糖、木糖、半乳糖和阿拉伯糖,物质的量比为7∶2∶1∶1,是一种主链由(1→4,6)-葡萄糖和(1→4)-葡萄糖连接,(1→4)-木糖、(1→4)-阿拉伯糖和(1→4)-半乳糖作为支链,→1)-葡萄糖作为末端糖的重复结构单位的新颖多糖。体外抗肿瘤活性研究显示,AHL-P在质量浓度为5μg/mL时对S180的抑制率最高,为39.07%,2.5μg/mL时对MFC的抑制率最高,为52.22%。体外免疫活性研究显示,当AHL-P的质量浓度为10μg/mL时,对Raji和RAW 264.7增殖率分别为104.39%和32.25%,但对Jurkat没有显著增殖效果。本研究解析出了AHL-P的结构并探寻了其体外抗肿瘤及免疫活性,可为天府花生的开发利用提供一定的科学依据。

关键词：天府花生叶片多糖结构解析免疫活性抗肿瘤活性

大熊猫核糖体蛋白S17亚基基因(rps17)的克隆及序列分析

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西南大学学报（自然科学版） 2011年第8期33卷 80-87页

作者：侯怡铃李俊侯万儒西南野生动植物资源保护教育部重点实验室四川南充637009 西华师范大学生命科学学院四川南充637009

RPS17蛋白是核糖体40S亚基的组成部分,由rps17基因编码.为了解大熊猫核糖体蛋白亚基rps17基因的结构特点及其与已报道的人和其他哺乳动物核糖体蛋白亚基rps17基因的异同,分别运用RT-PCR和PCR技术,从大熊猫肌肉组织的mRNA中成功克隆了核... 详细信息

RPS17蛋白是核糖体40S亚基的组成部分,由rps17基因编码.为了解大熊猫核糖体蛋白亚基rps17基因的结构特点及其与已报道的人和其他哺乳动物核糖体蛋白亚基rps17基因的异同,分别运用RT-PCR和PCR技术,从大熊猫肌肉组织的mRNA中成功克隆了核糖体蛋白亚基S17基因的cDNA序列以及从总DNA中成功克隆了S17基因的结构基因序列.序列分析发现,大熊猫核糖体蛋白亚基S17基因的表达序列长为457bp,开放阅读框(ORF)为408bp,编码135个氨基酸的蛋白质.结构基因序列长2 368bp,含有4个外显子和3个内含子.拓扑预测显示,核糖体蛋白亚基RPS17的相对分子质量为15.52×103,PI为10.26,含有5个类型的功能位点,即:5个蛋白激酶C磷酸化位点,1个酪蛋白激酶II磷酸化位点,1个酪氨酸激酶磷酸化位点,1个N-豆蔻酰化位点及1个核糖体蛋白S17Esignature位点.进一步分析发现,该基因的表达序列及其编码的氨基酸序列与已报道的部分哺乳动物有很高的相似性,其蛋白质的高级结构除褐家鼠外与其它物种也具有一致性.对大熊猫rps17基因及其表达的蛋白质结构的比较研究,旨在丰富和完善哺乳动物rps17的基因资料库.

关键词：大熊猫 RT-PCR rps17 克隆序列分析

大熊猫核糖体蛋白L30亚基基因(RPL30)的cDNA克隆及序列分析

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四川大学学报（自然科学版） 2010年第5期47卷 1154-1158页

作者：侯怡铃侯万儒西华师范大学生命科学学院西南野生动植物资源保护教育部重点实验室南充637002

RPL30是核糖体大亚基60S的组成部分,由RPL30基因所编码,主要存在于真核生物中.根据已报道的部分哺乳动物核糖体蛋白L30亚基基因(RPL30)的相关信息设计引物,运用RT-PCR技术,以大熊猫(Ailuropoda melanoleuca)的肌肉组织为材料,成功地克... 详细信息

RPL30是核糖体大亚基60S的组成部分,由RPL30基因所编码,主要存在于真核生物中.根据已报道的部分哺乳动物核糖体蛋白L30亚基基因(RPL30)的相关信息设计引物,运用RT-PCR技术,以大熊猫(Ailuropoda melanoleuca)的肌肉组织为材料,成功地克隆了核糖体蛋白L30亚基RPL30基因,并对其进行了测序及初步分析.结果表明:大熊猫L30亚基基因的表达序列长为388bp,开放阅读框(ORF)为348 bp,编码115个氨基酸的蛋白质,并含有6个功能位点.进一步分析发现,该基因的表达序列及其编码的氨基酸序列与已报道的人、牛、褐家鼠、小家鼠有很高的相似性,其表达序列同源性分别为93.97%,96.26%,89.66%和89.94%,其编码的氨基酸序列同源性分别为99.13%,98.26%,99.13%,99.13%,且其蛋白质的高级结构相似性也很高.

关键词：大熊猫 RT-PCR RPL30 克隆序列分析

线粒体膜蛋白mgr2基因的缺失导致裂殖酵母细胞动力学变化的研究

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基因组学与应用生物学 2021年第5期40卷 2068-2075页

作者：谭秀梅丁祥袁荣美侯怡铃西华师范大学生命科学学院西南野生动植物资源保护教育部重点实验室南充637009 西华师范大学环境科学与工程学院南充637009

mgr2基因编码线粒体中一个重要的跨膜蛋白,对细胞生长和生存起着重要作用。本研究以粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)为材料,采用活细胞成像的方式来探讨mgr2基因缺失对有丝分裂中细胞动力学的影响。结果表明,mgr2基因缺失会导... 详细信息

mgr2基因编码线粒体中一个重要的跨膜蛋白,对细胞生长和生存起着重要作用。本研究以粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)为材料,采用活细胞成像的方式来探讨mgr2基因缺失对有丝分裂中细胞动力学的影响。结果表明,mgr2基因缺失会导致微管数量及长度异常而影响微管动力学。同时,与野生型细胞相比,mgr2Δ细胞的纺锤体动力学不同。纺锤长度统计显示,mgr2Δ细胞中的纺锤断裂延迟。mgr2基因的缺失还可以影响纺锤体在中期的伸长速度、中期时间和后期时间。对突变菌株进行活细胞成像,可观察到两种不同的染色体行为:正常和滞后,此外还存在纺锤体异常断裂现象。综上所述,mgr2基因的缺失影响细胞有丝分裂过程中的动力学,导致纺锤体维持缺陷、染色体分离缺陷及纺锤体断裂缺陷。

关键词： mgr2基因有丝分裂细胞周期细胞动力学微管

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德钦乌头根部化学成分的研究

昆明理工大学学报（自然科学版） 2012年第6期37卷 62-66页

作者：丁祥侯怡铃罗利西华师范大学生命科学学院西南野生动植物资源保护教育部重点实验室四川南充637009

从乌头属植物德钦乌头(Aconitum ouvrardianum Hand.-Mazz.)根部的乙酸乙酯提取物中共分得6个二萜生物碱类化合物,应用光谱(NMR,ESIMS)和对照TLC对所有的化合物的结构进行了鉴定,均为C-3位或C-6位含氧取代的C19-二萜生物碱,分别是:滇乌... 详细信息

从乌头属植物德钦乌头(Aconitum ouvrardianum Hand.-Mazz.)根部的乙酸乙酯提取物中共分得6个二萜生物碱类化合物,应用光谱(NMR,ESIMS)和对照TLC对所有的化合物的结构进行了鉴定,均为C-3位或C-6位含氧取代的C19-二萜生物碱,分别是:滇乌碱(yunaconi-tine)(1),8-去乙酰滇乌碱(8-deacetylyunaconitine)(2),印乌碱(indaconitine)(3),查斯曼宁(chasmanine)(4),14-苯甲酰查斯曼宁(14-benzoyl chasmanine)(5),伪乌头宁(pseudaco-nine)(6).C19-二萜生物碱为德钦乌头药材的主要药用化学成分及毒性成分,以上化合物均为首次从该植物中分离得到.

关键词：德钦乌头毛茛科 C19-二萜生物碱