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作者：侯十前河北医科大学

学位级别：硕士

目的:利用异基因造血干细胞移植治疗恶性血液病己经越来越成为血液病的常规治疗手段,而异基因干细胞移植后GVHD是限制移植技术发展的最大障碍。如何防治GVHD已经成为这一领域研究的重点。研究显示,间充质干细胞可能有抑制GVHD作用。在... 详细信息

目的:利用异基因造血干细胞移植治疗恶性血液病己经越来越成为血液病的常规治疗手段,而异基因干细胞移植后GVHD是限制移植技术发展的最大障碍。如何防治GVHD已经成为这一领域研究的重点。研究显示,间充质干细胞可能有抑制GVHD作用。在BMT的同时植入包含供者骨髓间充质干细胞在内的骨髓作为造血微环境,发生GVHD的危险性显著降低。进一步研究提示体外培养扩增的人间充质干细胞也可以减轻GVHD反应,提高异基因干细胞移植的成功率。我们通过体外培养扩增HBM-MSCs,并与纯化后的异体外周血T细胞进行接触和非接触共培养,观察其对PHA刺激的T细胞增殖及调节T细胞亚群数量的影响,探讨MSCs抑制GVHD可能的作用机制,为MSCs在GVHD防治中应用提供理论依据。方法: 1 BMMSCs的培养、扩增及鉴定 1.1 BMMSCs的分离、培养及扩增:取肝素抗凝非恶性病患者骨髓液,Ficoll分离液分离单个核细胞,接种于25cm2一次性无菌塑料培养瓶中,37℃,5%CO2饱和湿度培养。72小时后首次全量换液,此后每3-4天换液一次。待贴壁细胞层融合达80-90%以上时,胰酶消化传代。 1.2生长曲线测定:分别取P1、P3、P5生长良好细胞接种于96孔板,MTT法检测细胞增殖活性,每代细胞连续观察8天。将每天的OD值取均值,做生长曲线分析。 1.3 BMMSCs鉴定 1.3.1倒置显微镜下直接活体观察。 1.3.2取P3细胞,做细胞爬片,瑞氏吉姆萨染色,显微镜下观察。 1.3.3收集P3、P5细胞,选取CD34-PE、CD45-PerCP、CD44-FITC单抗,流式细胞仪进行免疫表型测定。 2 T细胞分离纯化 2.1外周血单个核细胞(PBMNC)分离:取新鲜健康献血志愿者外周血过滤的白细胞,Ficoll分离液分离单个核细胞。 2.2 T淋巴细胞纯化:取处理后的尼龙毛柱,加入PBMNC悬液,37℃,5%CO2饱和湿度孵育1小时,纯化T淋巴细胞。 2.3 T细胞纯度检测:取尼龙毛柱纯化前和纯化后细胞,选取CD3-PerCP、CD4-FITC、CD25-PE单克隆抗体,流式细胞仪检测免疫表型。 3 MSCs与T淋巴细胞共培养 3.1实验分组A:BMMSCs空白对照组;B:BMMSCs+PHA对照组;C:BMMSCs+T细胞接触培养组;D:BMMSCs+T细胞接触培养PHA刺激组;E:BMMSCs+T细胞非接触培养组;F:BMMSCs+T细胞非接触培养PHA刺激组;G:T细胞空白对照组;H:T细胞PHA刺激对照组;每组实验重复3次。MSCs:T为1:20。PHA浓度50ug/ml。 3.2 MSCs制备:取P4代生长良好MSCs,按分组接种于6孔板,设3复孔,同时按相同条件和密度接种MSC于96孔板,设6复孔,待细胞完全贴壁后,以60Coγ5Gy照射去增殖处理。 3.3 MSCs接触培养对T细胞的影响观察:接种T细胞于已制备好MSCs的6孔板内,用于T细胞表型和PCR检测;同时按相同条件和密度接种于已制备好MSC的96孔板内,用于细胞增殖检测。加入PHA作为刺激原,同时分别设置无PHA刺激组作为对照。 3.4 MSCs非接触培养对T细胞的影响观察:在已制备好MSCs的6孔板内放置Transwell小室,接种T细胞于小室内,用于T细胞表型和PCR检测。加入PHA作为刺激原,同时设置无PHA刺激组作为对照。 3.5对照组:按相同条件和密度设置单独T细胞和单独MSCs培养组,加入PHA作为刺激原,同时分别设置无PHA刺激组作为对照。 4 T细胞增殖检测:MTT法检测T细胞增殖活性。 5 CD4、CD25检测:选取CD3-PerCP、CD4-FITC、CD25-PE单克隆抗体,流式细胞仪分析,检测不同培养条件下免疫表型变化。 6 Foxp3mRNA表达检测 6.1取共培养后细胞,提取总RNA。取提取物测OD260/OD280。RNA电泳检测RNA完整性。逆转录合成cDNA。 6.2 realtime PCR检测不同培养条件下Foxp3 mRNA表达变化。Foxp3引物:上游(5’→3’) : GTCTGGGCTCATAGGCACATT ,下游(5’→3’) :ATGGCGTTCTGTGGAAGGC,片段长度116bp。β-actin引物:上游(5’→3’) :CTGGCACCACACCTTCTACAAT,下游(5’→3’):AATGTCACG CACGATTTCCCGC,片段长度382bp。PCR反应体系为25μl ,包括cDNA2μl,上下游引物各1μl,2.5×Real MasterMix 10μl,20×SBYR GREEN 1.25μl,DEPC水补足至25μl。反应条件:95℃,3min×1cycle预变性;94℃,25sec;54℃,30sec×3

关键词：间充质干细胞异体T淋巴细胞调节性T细胞 Foxp3 流式细胞术 RT-PCR MTT

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人骨髓间充质干细胞对异体T淋巴细胞增殖及Treg细胞亚群的影响

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中华血液学杂志 2011年第6期32卷 416-418页

作者：侯十前袁军张学军张硕潘崚王福旭杨敬慈姚丽河北医科大学第二医院血液科石家庄050000 河北省人民医院血液科

间充质干细胞（MSC）可抑制移植物抗宿主病（GVHD），提高异基因移植的成功率，但具体机制尚不清楚。我们通过观察人MSC直接和间接对T淋巴细胞增殖及调节性T淋巴细胞（Treg）亚群的影响，探讨MSC抑制GVHD可能的作用机制。

关键词：人骨髓间充质干细胞 T淋巴细胞增殖细胞亚群调节性T淋巴细胞移植物抗宿主病异基因移植 GVHD

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中文版风湿病治疗依从性问卷的信度和效度研究

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中国全科医学 2013年第24期16卷 2803-2805页

作者：朱桂华王永志童宗武陈景华吴冬梅路萍范秋兰岳鸿丽朱理平侯十前云南省玉溪市人民医院风湿科 653100

目的探讨中文版风湿病治疗依从性问卷(CCQR)的信度和效度。方法选择2010年1月—2011年12月在玉溪市人民医院风湿科住院,出院诊断为类风湿关节炎的患者54例,通过翻译风湿病治疗依从性问卷(CQR)原文并根据中国文化进行调整后制定出CCQR。... 详细信息

目的探讨中文版风湿病治疗依从性问卷(CCQR)的信度和效度。方法选择2010年1月—2011年12月在玉溪市人民医院风湿科住院,出院诊断为类风湿关节炎的患者54例,通过翻译风湿病治疗依从性问卷(CQR)原文并根据中国文化进行调整后制定出CCQR。间隔2～4周重复问卷,应用组内相关系数来评估CCQR的信度。采用药房处方数据评估患者治疗的现实依从性,通过确定CCQR评分和患者现实依从性的相关情况来评价CCQR的效度。结果 54例患者完成了第1次问卷调查,4例拒绝接受第2次调查,2例失访,最终48例患者完成第2次问卷调查。第1次平均CCQR评分为(57.7±19.8)分,第2次平均CCQR评分为(60.2±17.0)分,两次CCQR评分的组内相关系数为0.994〔95%可信区间为(0.990,0.997)〕。采用Pearson相关分析显示,CCQR评分与患者的现实依从性呈正相关(R2=0.635,P=0.000)。结论 CCQR是评估我国类风湿关节炎患者治疗依从性的可靠、有效的工具。

关键词：关节炎类风湿风湿病治疗依从性问卷信度效度

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免疫性血小板减少症患者Th1、Th2、Treg、Th17细胞的表达及其临床意义

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吉林医学 2022年第4期43卷 931-932页

作者：侯十前王丽花刘静路萍王永志钱维王希刘贤玉溪市人民医院血液内科云南玉溪653100

目的:探讨免疫性血小板减少症(ITP)患者Th1、Th2、Treg、Th17细胞表达水平及其临床意义。方法:采用回顾性方法,收集2019年1月~2020年12月确诊及治疗的ITP患者98例为研究组,同期收集体检中心健康体检者100例作为对照组。检测两组研究对象... 详细信息

目的:探讨免疫性血小板减少症(ITP)患者Th1、Th2、Treg、Th17细胞表达水平及其临床意义。方法:采用回顾性方法,收集2019年1月~2020年12月确诊及治疗的ITP患者98例为研究组,同期收集体检中心健康体检者100例作为对照组。检测两组研究对象的Th1、Th2、Treg、Th17细胞表达水平,并分析其在治疗前后与血小板的关系。结果:研究组Th1、Treg细胞比例显著低于对照组,Th2、Th17细胞比例显著高于对照组,差异有统计学意义(P前升高,Th2及Th17细胞比例较治疗前降低,差异有统计学意义(P前后血小板变化呈正相关,而Th2、Th17与血小板变化呈负相关。结论:Th1、Th2、Treg、Th17细胞表达水平失衡在ITP发病中起重要作用,且与治疗前后血小板的变化密切相关。

关键词：免疫性血小板减少症 Th1细胞 Th2细胞 Treg细胞 Th17细胞

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人MSCs对异体T淋巴细胞增殖及Treg细胞亚群的影响

人MSCs对异体T淋巴细胞增殖及Treg细胞亚群的影响

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河北省免疫学会第六次免疫学大会

作者：侯十前张学军张硕潘崚王福旭杨敬慈姚丽尚银涛河北医科大学第二医院血液科

＜正＞目的观察MSCs对PHA刺激的异体T细胞增殖及Treg细胞亚群的影响,探讨MSCs在GVHD防治中的作用和机制。方法体外分离培养人骨髓MSCs,与PHA刺激的异体外周血T淋巴细

关键词：骨髓间充质干细胞异体T淋巴细胞调节性T细胞 Foxp3mRNA

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人骨髓间充质干细胞抑制T淋巴细胞增殖及对IL-10,IFN-γ,LFA-1m RNA表达的影响

人骨髓间充质干细胞抑制T淋巴细胞增殖及对IL-10,IFN-γ,LFA-1m R...

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河北省免疫学会第六次免疫学大会

作者：张硕张学军侯十前潘崚王福旭杨敬慈姚丽尚银涛河北医科大学第二医院血液科

＜正＞目的研究人骨髓间充质干细胞（BM-MSCs）对T淋巴细胞增殖抑制及对IL-10,IFN-γ,LFA-1 mRNA表达的影响。方法采用密度梯度离心法分离人BM-MSCs和外周血T淋巴细胞,利用

关键词：间充质干细胞 T淋巴细胞 IFN-γ IL-10 LFA-1

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重组人白介素-11治疗急性髓系白血病化疗后血小板减少的临床研究

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临床血液学杂志 2012年第6期25卷 733-735页

作者：路萍王永志朱桂华侯十前陈锦华吴冬梅范秋兰岳鸿丽朱理平玉溪市人民医院血液风湿科云南玉溪653100

目的:探讨重组人白介素-11治疗急性髓系白血病(AML)化疗后血小板减少的有效性和安全性。方法:分别选择21例患者43例次化疗为治疗组和对照组,治疗组化疗结束24h或血小板低于100×109/L时给予皮下注射重组人白介素-11 25μ***-1.d-1,观察... 详细信息

目的:探讨重组人白介素-11治疗急性髓系白血病(AML)化疗后血小板减少的有效性和安全性。方法:分别选择21例患者43例次化疗为治疗组和对照组,治疗组化疗结束24h或血小板低于100×109/L时给予皮下注射重组人白介素-11 25μ***-1.d-1,观察患者化疗后血小板计数变化、输注血小板剂量和药物不良反应。结果:治疗组和对照组化疗后最低血小板计数和输注血小板次数差异无统计学意义(P>0.05)。血小板恢复至50×109/L的天数和恢复至100×109/L的天数差异有统计学意义(P前2.5d。治疗组耐受性良好,观察到的不良反应有全身乏力、水肿、注射部位疼痛,其发生率均不到10%。结论:重组人白介素-11辅助治疗AML可以一定程度上缩短患者化疗后血小板低下持续的时间,且耐受性良好。

关键词：白血病,髓系,急性重组人白介素-11 血小板减少化疗

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Good综合征合并纯白细胞再生障碍一例

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中国临床实用医学 2020年第6期11卷 67-69页

作者：侯十前王丽花王永志路萍王健路蓉罗朝蕊范秋兰冯林森刘贤王希云南省玉溪市人民医院血液内科云南玉溪653100 云南省玉溪市人民医院神经外科云南玉溪653100 云南省玉溪市人民医院泌尿外科云南玉溪653100 云南省玉溪市人民医院肾内科云南玉溪653100

患者女,54岁,因“发热5d”于2019年10月18日就诊于云南省玉溪市人民医院血液内科。患者5d前受凉后出现畏冷,咽痛,偶有咳嗽,干咳无痰,无四肢无力,体温37.3-37.7℃,输液治疗2d无好转,查血常规提示白细胞减少,期间体温最高38.2℃。既往身... 详细信息

患者女,54岁,因“发热5d”于2019年10月18日就诊于云南省玉溪市人民医院血液内科。患者5d前受凉后出现畏冷,咽痛,偶有咳嗽,干咳无痰,无四肢无力,体温37.3-37.7℃,输液治疗2d无好转,查血常规提示白细胞减少,期间体温最高38.2℃。既往身体健康,无特殊用药史,无放射线接触史,父母非近亲婚配。

关键词：干咳无痰放射线接触史血液内科特殊用药白细胞减少近亲婚配输液治疗血常规

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白血病患者化疗前后调节性T细胞的表达与微小残留白血病的关系

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昆明医科大学学报 2015年第4期36卷 93-96,113页

作者：路萍侯十前王永志范秋兰罗朝蕊陈景华玉溪市人民医院血液科云南玉溪653100

目的探讨急性白血病患者Treg细胞与MRD的关系及其临床意义.方法对2012年至2014年在玉溪市人民医院血液科规律诊治的53例急性白血病患者利用流式细胞术进行MRD、Treg细胞检测,从首次诱导缓解治疗结束后第14天开始,每3~6月检测1次,并动... 详细信息

目的探讨急性白血病患者Treg细胞与MRD的关系及其临床意义.方法对2012年至2014年在玉溪市人民医院血液科规律诊治的53例急性白血病患者利用流式细胞术进行MRD、Treg细胞检测,从首次诱导缓解治疗结束后第14天开始,每3~6月检测1次,并动态监测,对治疗前后、不同疾病组别、不同危险度Treg细胞进行比较分析,并分析MRD阴性、MRD阳性组Treg细胞表达差别.结果 AL患者诱导缓解前Treg细胞明显高于治疗缓解后、正常对照组（P〈0.01）,ANLL与ALL组间治疗前后Treg细胞无明显差别,高危组Treg细胞明显高于低危组（P〈0.01）,与中危组无明显差别,而中危组与低危组无明显差别,MRD阴性组复发率明显低于MRD阳性组（P〈0.01）,MRD阳性组Treg细胞明显高于MRD阴性组（P〈0.01）.结论初诊白血病患者体内Treg细胞明显增高,且恶性程度越高,Treg细胞水平越高,治疗缓解后Treg细胞水平明显下降,接近正常水平,MRD阳性患者Treg细胞明显高于MRD阴性患者,提示Treg细胞可能抑制机体对肿瘤细胞的免疫杀伤,对白血病患者判断预后、评估疗效、预测疾病复发、改善治疗方案,有着十分积极的作用和临床应用价值.

关键词：调节性T细胞微小残留病白血病

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文化与物种的协同演化——基于人工油茶林传统技术体系的讨论

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湖北民族大学学报(哲学社会科学版) 2025年 44-52页

作者：侯有德铜仁学院马克思主义学院

生态人类学认为人与自然物之间、文化与自然生态之间、文化与物种之间存在协同演化关系。人通过劳动为特定物种排除自然界自身不可能排除的种内竞争、种间竞争,创造更有利于特定物种生长的人造环境,在此过程中文化与环境相互影响、协同... 详细信息

生态人类学认为人与自然物之间、文化与自然生态之间、文化与物种之间存在协同演化关系。人通过劳动为特定物种排除自然界自身不可能排除的种内竞争、种间竞争,创造更有利于特定物种生长的人造环境,在此过程中文化与环境相互影响、协同演化,最终形成“文化生态共同体”。农业是人与自然、文化与物种相互形塑最直接的业态载体。在一定意义上来说,农业文化遗产是人与自然生态系统、文化与特定物种协同演化的产物。农业文化遗产中的技术体系既是文化与特定物种协同演化的产物,也是协同演化过程中最突出、最重要的介质。人工油茶林传统技术体系包括不种自生与仿生定植的汰选技术、精准修剪与反复调控的管护技术、复合经营与以用定管的利用技术,是典型的文化与特定物种协同演化而形成的“文化生态共同体”,是人们应对特定生态环境与利用生态资源的传统生存智慧,对当今生态文明建设依然有借鉴意义。

关键词：协同演化农业文化遗产人工油茶林传统技术体系

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