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一种改良的小鼠诱导多功能干细胞(iPS)向树突状细胞(DC)分化的方法

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复旦学报（医学版） 2018年第6期45卷 866-871页

作者：张琦侯剑刚复旦大学附属华山医院皮肤科上海200040 复旦大学附属华山医院泌尿外科上海200040

目的建立一种简便经济的小鼠诱导多功能干细胞(induced pluripotent stem cell,iPS)向树突状细胞(dendritic cell,DC)分化的方法。方法采用三段式培养法,将iPS细胞培养于op9细胞上,使用添加细胞因子GM-CSF(10 ng/mL)和IL-4(10 ng/mL)的... 详细信息

目的建立一种简便经济的小鼠诱导多功能干细胞(induced pluripotent stem cell,iPS)向树突状细胞(dendritic cell,DC)分化的方法。方法采用三段式培养法,将iPS细胞培养于op9细胞上,使用添加细胞因子GM-CSF(10 ng/mL)和IL-4(10 ng/mL)的培养液,经过17天的培养收集到iPS诱导的DC,通过显微镜及细胞涂片观察细胞形态,流式细胞术检测细胞表面分子,抗原吞噬实验和混合淋巴细胞培养实验等对其形态、表面分子及细胞功能进行检测及评估。结果本研究获得的iPS-DC在细胞形态上表现出明显的树突状特征;细胞表型上呈CD11b、CD11c双阳性;未经脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激的细胞呈未成熟DC的状态:细胞表面的第一信号分子MHCⅡ及第二信号分子CD40、CD80、CD86低表达,具有很强的抗原吞噬能力;经LPS刺激后细胞具有成熟DC的特征:MHCⅡ、CD40、CD80、CD86的表达均增高,同时具备对初始T细胞的激活能力。结论本研究改良了小鼠iPS细胞向DC分化的方法,缩短了培养时间,节省了培养成本。

关键词：诱导多功能干细胞(iPS) 树突状细胞(DC) 分化小鼠

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原发性输尿管癌的临床诊断(附38例分析)

复旦学报（医学版） 2006年第6期33卷 840-842页

作者：侯剑刚王翔丁强复旦大学附属华山医院泌尿外科上海200040

目的提高原发性输尿管癌术前诊断的正确率。方法回顾性分析我院自1995年5月至2005年12月收治的38例原发性输尿管癌的临床诊治经过。结果本组38例,男性25例,女性13例。临床表现有肉眼血尿者33例(86.8%),血尿伴腰痛13例(34.2%),仅表现为腰... 详细信息

目的提高原发性输尿管癌术前诊断的正确率。方法回顾性分析我院自1995年5月至2005年12月收治的38例原发性输尿管癌的临床诊治经过。结果本组38例,男性25例,女性13例。临床表现有肉眼血尿者33例(86.8%),血尿伴腰痛13例(34.2%),仅表现为腰痛3例(7.9%)。B超检查发现输尿管内实质占位病变10例(26.3%)。静脉尿路造影(IVU)38例,仅5例(13.2%)发现典型的输尿管腔内充盈缺损。膀胱镜检查,其中5例(13.2%)发现有肿块自输尿管口突入膀胱内,18例逆行输尿管插管加逆行尿路造影,诊断17例(94.4%)。CT扫描29例,11例(37.9%)发现输尿管内肿块影。磁共振泌尿系成像(MRU)27例,诊断输尿管癌9例(33.3%)。输尿管镜诊断输尿管癌3例。28例行尿脱落细胞学检查,16例(57.1%)查见肿瘤细胞。结论要提高原发性输尿管癌的术前诊断正确率,需要密切结合临床表现,合理、综合地应用各种辅助检查。

关键词：输尿管癌原发性诊断

干细胞及其外泌体治疗勃起功能障碍的研究进展

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复旦学报（医学版） 2020年第5期47卷 772-777页

作者：庄靖铭(综述) 侯剑刚(审校) 复旦大学附属华山医院泌尿外科上海200040

干细胞(stem cells)作为一大类具有多向分化和自我更新能力的细胞,在很多领域都有所应用。除了诱导各类干细胞应用于再生医学及组织工程学,干细胞周围微环境以及肿瘤干细胞也引起了广泛关注。外泌体(exosome)则是一种几乎所有细胞都会... 详细信息

干细胞(stem cells)作为一大类具有多向分化和自我更新能力的细胞,在很多领域都有所应用。除了诱导各类干细胞应用于再生医学及组织工程学,干细胞周围微环境以及肿瘤干细胞也引起了广泛关注。外泌体(exosome)则是一种几乎所有细胞都会分泌的,直径为30~100 nm的细胞外囊泡,通常会含有其分泌细胞的蛋白质、核酸等细胞活性成分。由于外泌体内容物可以反映其来源细胞的多种特性,对于干细胞的强大功能是否与其外泌体相关,也是研究的热点。目前对难治性勃起功能障碍,药物治疗收效甚微,而使用各类干细胞以及其外泌体进行探索性治疗实验,大多有显著的效果。更好地了解干细胞及外泌体的作用机制,比较出最适合治疗的细胞类型,将有望推进该疾病的治疗效果。本文将对现有干细胞及其外泌体治疗勃起功能障碍相关研究进展进行综述。

关键词：干细胞外泌体勃起功能障碍注射治疗

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同时利用双侧肾脏分别建立小鼠肾移植模型

中华器官移植杂志 2014年第3期35卷 179-182页

作者：侯剑刚丁强复旦大学附属华山医院泌尿外科上海200040

目的探讨利用同一小鼠双侧肾脏分别建立小鼠肾移植模型的手术方法。方法采用Balb／c系雄性小鼠为肾移植的供、受鼠，通过对供鼠腹部血管的精细解剖及修整，切取左、右侧肾脏分别移植给2个小鼠，供肾动脉与受鼠腹主动脉端侧吻合，供肾静... 详细信息

目的探讨利用同一小鼠双侧肾脏分别建立小鼠肾移植模型的手术方法。方法采用Balb／c系雄性小鼠为肾移植的供、受鼠，通过对供鼠腹部血管的精细解剖及修整，切取左、右侧肾脏分别移植给2个小鼠，供肾动脉与受鼠腹主动脉端侧吻合，供肾静脉与受鼠下腔静脉端侧吻合，动静脉的吻合方式均采用180°双定点连续外翻吻合；尿道重建采用将供肾输尿管末端引入膀胱内加外固定的方法。术后1周行二期手术，切除受鼠的自体。肾脏。结果共切取了15只供鼠的左、右侧肾脏各15个，进行了小鼠肾移植30只。30只受鼠的总体手术成功率为76．7％（23／30），其中左肾移植为80％（12／15），右肾移植为73．3％（11／15）。供鼠手术耗时（33±9）min，受鼠手术耗时（46±12）min；供肾热缺血时间约10S，同一供鼠2个供肾中先移植的供肾冷缺血时间约0．5h，后移植的供肾约1．5h。肾移植后所有受鼠的血清肌酐水平均保持平稳，左肾移植受鼠与右肾移植受鼠的血清肌酐水平及其变化相同。术后2周时病理检查结果示移植肾组织具有完好的肾实质。结论通过精细的显微解剖与术后操作，可以同时利用小鼠的双侧肾脏来分别建立小鼠肾移植模型；在提供良好模型的同时减少了实验费用。

关键词：小鼠肾移植模型

经尿道电切术治疗成人输尿管囊肿的有效性和安全性

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复旦学报（医学版） 2014年第4期41卷 498-500页

作者：侯剑刚王翔方祖军丁强复旦大学附属华山医院泌尿外科研究所上海200040

目的评价经尿道电切术治疗输尿管囊肿的有效性和安全性。方法回顾性分析我院2001年1月至2012年12月共52例经尿道电切术治疗的输尿管囊肿患者的临床资料。囊肿位于左侧28例,右侧14例,双侧10例,9例伴囊肿内结石,2例伴同侧肾输尿管重复畸... 详细信息

目的评价经尿道电切术治疗输尿管囊肿的有效性和安全性。方法回顾性分析我院2001年1月至2012年12月共52例经尿道电切术治疗的输尿管囊肿患者的临床资料。囊肿位于左侧28例,右侧14例,双侧10例,9例伴囊肿内结石,2例伴同侧肾输尿管重复畸形。采用经尿道电切术行输尿管囊肿切除术,术时保留上方囊壁作为抗返流的活瓣;合并结石患者采用大力钳或钬激光碎石。结果 52例患者手术均一次成功。手术平均时间30 min,术后平均住院3天。术后随访6个月至10年,定期行B超和静脉尿路造影(intravenous urography,IUV)。患者未见肾积水和输尿管扩张,临床症状消失,无膀胱-输尿管返流发生,无输尿管囊肿复发。结论经尿道电切术是治疗输尿管囊肿的一种简便、有效、安全的微创治疗方法。

关键词：输尿管囊肿经尿道电切术微创治疗

不同品系间小鼠腹部异位心脏移植模型的建立和比较

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中华实验外科杂志 2014年第8期31卷 1668-1670页

作者：侯剑刚王翔丁强复旦大学附属华山医院泌尿研究所上海200040

目的建立小鼠腹部同种异体心脏移植模型,并且探讨不同品系小鼠间移植手术的难易程度以及存活时间的差异.方法 BALB/c和CBA雄性小鼠各40只,C57BL/6j雄性小鼠80只,分为同品系间（BALB/c→BALB/c;CBA→CBA;C57 BL/6j→C57 BL/6j）和不同... 详细信息

目的建立小鼠腹部同种异体心脏移植模型,并且探讨不同品系小鼠间移植手术的难易程度以及存活时间的差异.方法 BALB/c和CBA雄性小鼠各40只,C57BL/6j雄性小鼠80只,分为同品系间（BALB/c→BALB/c;CBA→CBA;C57 BL/6j→C57 BL/6j）和不同品系间（BALB/c→C57BL/6j;C57BL/6j→BALB/c;C57BL/6j→CBA;CBA→C57 BL/6j）采用Ono术式进行小鼠腹部异位心脏移植,术后观察移植心存活时间并进行病理检查.结果手术成功率达88.6％.平均取心时间4.8 min,同品系间血管吻合时间分别为（28.70±3.56） min（BALB/c→BALB/c）、（20.70±4.22） min（CBA→CBA）和（27.90±2.51） min（C57BL/6j→C57BL/6j）.而不同品系间血管吻合时间分别为（28.00±2.71） min（BALB/c→C57BL/6j）、（22.10±4.33） min（C57BL/6j→CBA）、（29.90±3.14） min（C57 BL/6j→BALB/c）和（30.33 ± 23.00） min（CBA→C57BL/6j）.同品系间移植心平均存活时间均超过100d,而不同品系间分别为（7.10±0.74） d（C57BL/6j→BALB/c）、（7.40±0.82） d（BALB/c→C57 BL/6j）、（8.90±1.10） d（C57BL/6j→CBA）和（8.50±0.85） d（CBA→C57BL/6j）.同品系间移植心在术后7d的病理检查显示心肌结构良好.而不同品系间移植心在排异后发现大量淋巴细胞浸润,尤其在BALB/c和C57BL/6j互为移植中.结论建立小鼠心脏移植模型需要掌握显微外科技巧.同品系间心移植中以CBA→CBA相对简单,可作为练习用.C57BL/6j→BALB/c的免疫反应强烈,而C57BL/6j→CBA免疫反应相对弱,因此可用于不同的免疫抑制药物研究.

关键词：小鼠心移植模型品系

利用两种不同上皮细胞体外构建组织工程尿道的比较研究

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复旦学报（医学版） 2015年第1期42卷 119-122页

作者：谢雪锋侯剑刚陈刚丁强复旦大学附属金山医院泌尿外科上海201508 复旦大学附属华山医院泌尿外科研究所上海200040

目的比较利用两种不同上皮细胞的组织工程学技术培养片状细胞层体外构建尿道的方法,探索修复长段尿道狭窄的可行性.方法手术切取雄性新西兰兔2cm^2左右的尿道黏膜和包皮,用酶分解获得上皮细胞后扩增培养成片状细胞层来构建尿道.培养... 详细信息

目的比较利用两种不同上皮细胞的组织工程学技术培养片状细胞层体外构建尿道的方法,探索修复长段尿道狭窄的可行性.方法手术切取雄性新西兰兔2cm^2左右的尿道黏膜和包皮,用酶分解获得上皮细胞后扩增培养成片状细胞层来构建尿道.培养出的片状细胞层裹在导尿管上继续培养进一步观察其完整性、张力以及强度.结果经过2～3周的扩增培养,两种上皮细胞都能形成完整的并具有一定张力的片状细胞层来构建尿道.病理学（HE染色）显示片状细胞层与天然的尿道黏膜和包皮上皮结构类似.给予一定的作用力与导尿管共培养1周后,片状细胞层仍具有完整性.而包皮来源的片状细胞层培养时间最短且具有更好的强度和厚度.结论通过组织工程学技术可以获得应用于临床的片状细胞层构建的尿道.包皮来源的细胞可能更加适合于长段尿道的修复.

关键词：组织工程片状细胞层尿道狭窄

负载辐射凋亡MB49肿瘤细胞抗原的树突状细胞(DC)疫苗对小鼠膀胱癌的抑制作用

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复旦学报（医学版） 2014年第1期41卷 88-92页

作者：谢雪锋侯剑刚陈刚丁强复旦大学附属金山医院泌尿科上海201508 复旦大学附属华山医院泌尿外科研究所上海200040

目的研究辐射凋亡MB49肿瘤细胞诱导的树突状细胞(dendritic cell,DC)疫苗的制备及对C57BL/6小鼠体内膀胱肿瘤的免疫学效应。方法采用辐射法获取MB49细胞抗原并用其致敏骨髓来源的DC来制备DC疫苗。用MB49小鼠膀胱癌细胞建立荷瘤动物模型... 详细信息

目的研究辐射凋亡MB49肿瘤细胞诱导的树突状细胞(dendritic cell,DC)疫苗的制备及对C57BL/6小鼠体内膀胱肿瘤的免疫学效应。方法采用辐射法获取MB49细胞抗原并用其致敏骨髓来源的DC来制备DC疫苗。用MB49小鼠膀胱癌细胞建立荷瘤动物模型,随机分为实验组和对照组,于肿瘤细胞接种后第7、14天给予相应DC疫苗治疗或者PBS,每组分为2个亚组,分别用于测量瘤质量、体积及用于观察荷瘤小鼠存活情况。结果负载辐射凋亡肿瘤细胞DC疫苗的实验组荷瘤小鼠,其肿瘤的平均体积和平均质量均显著低于对照组(P<0.01),生存期长于对照组。DC疫苗实验组中有2只小鼠30天内无肿瘤生长,再次皮下接种MB49细胞观察30天仍无肿瘤发生。结论负载辐射凋亡肿瘤细胞的DC疫苗对膀胱肿瘤荷瘤小鼠具有抑瘤效应和延长生存期的作用。

关键词：树突状细胞(DC) 膀胱肿瘤疫苗 MB49细胞小鼠

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应用MB49细胞建立三种膀胱癌模型

中华实验外科杂志 2010年第6期27卷 840-841,F0004页

作者：侯剑刚徐可方祖军丁强复旦大学附属华山医院泌尿外科上海200040

目的探讨应用MB49细胞建立3种膀胱癌模型及其最佳实验性治疗时机的选择.方法采用MB49细胞2×10^6/50μl皮下注射建立膀胱癌皮下模型;5×10^5/50μl进行膀胱灌注可以建立膀胱癌原位模型;1×10^5/200μl通过尾静脉注射可以建立膀胱痛肺... 详细信息

目的探讨应用MB49细胞建立3种膀胱癌模型及其最佳实验性治疗时机的选择.方法采用MB49细胞2×10^6/50μl皮下注射建立膀胱癌皮下模型;5×10^5/50μl进行膀胱灌注可以建立膀胱癌原位模型;1×10^5/200μl通过尾静脉注射可以建立膀胱痛肺转移模型.同时通过对模型的观察可以确立模型建立的时间及治疗时机的最佳选择.结果皮下肿瘤模型在种植后第5天可以触及到实质性肿块,这是实验性治疗的最佳时间.通过向膀胱内灌注肿瘤细胞可以获得比较稳定的原位模型,而术后1～3 d是实验性治疗的最佳时机.观察期间限定在3周以内.膀胱癌肺转移模型可以通过向鼠尾静脉内注射肿瘤细胞而得到,实验性治疗的时机可以选择在术后10 d以内,观察期间也在3周以内.结论用MIM9细胞可以建立膀胱癌的皮下模型,原位模型以及肺转移模型.模型的质量比较稳定,肿瘤的产生时间比较固定,可以获得实验性治疗时机的最佳选择.

关键词：膀胱癌模型,动物