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作者：余黄合湖南中医药大学

学位级别：硕士

目的:血筒为土家族常用于祛风除湿、行气止痛的药物,经鉴定为五味子科南五味子属植物异型南五味子Kadsura heteroclita(Roxb)Craib的藤茎,民间习用其治疗风湿痹痛、骨痛、风湿关节炎。我们通过建立佐剂性关节炎(AIA)大鼠模型,开展血筒... 详细信息

目的:血筒为土家族常用于祛风除湿、行气止痛的药物,经鉴定为五味子科南五味子属植物异型南五味子Kadsura heteroclita(Roxb)Craib的藤茎,民间习用其治疗风湿痹痛、骨痛、风湿关节炎。我们通过建立佐剂性关节炎(AIA)大鼠模型,开展血筒抗类风湿关节炎(RA)药效学及其相关机制研究,从而明确土家族药物血筒临床治疗风湿或关节疾病的药效作用,为其研发为安全有效的民族创新药物奠定基础。方法:1.血筒经95%乙醇提取,浓缩干燥,采用HPLC法对血筒醇提物进行质量控制;ICR小鼠,雌雄各半,随机分为对照组(0.3%CMC-Na溶液)和血筒醇提物组(每3.25 g血筒醇提物溶于10m L 0.3%CMC-Na),24hr内连续给药2次,翌日停药,连续14d观察小鼠饮食、饮水、体质量、精神状态等表现,记录小鼠死亡、毒性反应情况,测定最大耐受量(MTD)。2.采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀模型和角叉菜胶致大鼠足趾肿胀模型,研究血筒醇提物对急性炎症的抑制作用。ICR小鼠随机分为模型组、吲哚美辛组(10mg·kg)、血筒醇提物低、中、高剂量组(200、400、800mg·kg),评价血筒醇提物对二甲苯致小鼠耳廓肿胀模型的影响;Wistar雌性及雄性大鼠随机分为模型组、吲哚美辛组(10mg·kg)、血筒醇提物低、中、高剂量组(剂量设置为200、400、800mg·kg及100、200、400mg·kg),评价血筒醇提物对角叉菜胶致大鼠足趾肿胀模型的影响。3.采用醋酸致小鼠扭体实验和光辐射致大鼠甩尾实验考察血筒醇提物的镇痛作用。将实验ICR小鼠随机分为模型组、罗通定组(100mg·kg)、血筒醇提物低、中、高剂量组(50、100、200mg·kg),观察血筒醇提物对醋酸致小鼠扭体次数的影响;SD大鼠随机分为模型组、罗通定组(100mg·kg)、血筒醇提物低、中、高剂量组(50、100、200mg·kg),评价血筒醇提物对光辐射致大鼠甩尾潜伏期的影响。4.采用角叉菜胶致大鼠足趾肿胀模型,研究血筒醇提物抗急性炎症作用机制。Wistar大鼠随机分为模型组、吲哚美辛组(100mg·kg)、血筒醇提物低、中、高剂量组(100、200、400mg·kg)。大鼠后右足足趾皮下注射0.1m L角叉菜胶致炎,5 hr后麻醉大鼠,腹主动脉取血,分离血清,截取双足。测量致炎后1-5h大鼠的足趾容积,用ELISA试剂盒检测大鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6等炎性因子的含量,Western Blotting检测大鼠足趾组织中COX-1、COX-2及i NOS蛋白的表达水平。5.建立大鼠AIA模型,初步评价血筒醇提物抗关节炎药效作用。雄性SD大鼠30只,随机分为正常组、模型组、血筒醇提物组。大鼠尾根部免疫注射0.10m L含200μg热灭活结核杆菌(Mtb)的完全弗氏佐剂(CFA)建立AIA模型,血筒醇提物(1.0g·kg)口服给药治疗30d。AIA造模后进行后足肿胀测量、关节炎指数评分及体质量称量评价。治疗结束后对后足进行小动物CT扫描和组织病理学检查,用ELISA试剂盒检测血清中炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的表达水平。6.采用大鼠AIA模型,系统地研究血筒醇提物抗关节炎药效作用及其作用机制。雄性SD大鼠60只,随机分为正常组、模型组、吲哚美辛组(1.0 mg·kg)、血筒醇提物低、中、高剂量组(200、400、800mg·kg)。大鼠尾根部免疫注射CFA后,于造模当日开始给药,连续给药30d。记录关节炎症状发生的时间,测量大鼠足跖肿胀容积,并按照关节炎严重程度评分法计算关节炎指数,用小动物CT扫描观察后足股破坏程度。第30d末次给药后麻醉大鼠,腹主动脉采血,分离血清,截取双后足,对足组织进行病理学检查。用ELISA试剂盒检测血清中TNF-α、IL-1β、IL-6及IL-17A/F含量,Western Blotting检测MMP-1、MMP-3及TIMP-1蛋白的表达水平。结果:1.从210 nm波长条件下的HPLC色谱图观察到血筒醇提物样品中含有Schistandronic acid、D-epigalbacin、Heteroclitalactone A、Schisanlactone E、Nigranoic acid这5个有效成分,含量测定显示Schisanlactone E含量最高,D-epigalbacin的含量最低。2.小鼠对血筒醇提物的最大耐受剂量(MTD)为26g·kg(相当于成人一日用量的253倍)。与对照组小鼠相比,给药组小鼠无死亡现象,健康状况良好,体重保持增长趋势,饮食饮水情况正常。3.与模型组相比,血筒醇提物低、中、高剂量组(100、200、400mg·kg)能显著抑制二甲苯致小鼠耳廓肿胀(P<0.05或P<0.01);血筒醇

关键词：土家族医药血筒异型南五味子镇痛抗炎类风湿关节炎佐剂性关节炎分子机制

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穿心莲内酯调控HaCaT细胞中Nrf2/ARE通路的抗氧化作用机制研究

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中国药学杂志 2019年第10期54卷 777-782页

作者：何思蓉余黄合杨珍曾嵘湖南中医药大学药学院长沙410208 中药成药性与制剂制备湖南省重点实验室长沙410208

目的探讨穿心莲内酯通过诱导Ha Ca T细胞中Nrf2/ARE信号通路介导的HO-1、NQO1、AKR1C1的表达,减少细胞因氧化应激而受到的损伤。方法通过CCK-8方法检测穿心莲内酯对Ha Ca T细胞的活力影响以及过氧化氢诱导的细胞存活率的影响。用穿心莲... 详细信息

目的探讨穿心莲内酯通过诱导Ha Ca T细胞中Nrf2/ARE信号通路介导的HO-1、NQO1、AKR1C1的表达,减少细胞因氧化应激而受到的损伤。方法通过CCK-8方法检测穿心莲内酯对Ha Ca T细胞的活力影响以及过氧化氢诱导的细胞存活率的影响。用穿心莲内酯不同浓度预处理Ha Ca T细胞24 h,分别通过Western blot以及实时荧光定量PCR分析检测Ha Ca T细胞中Nrf2、HO-1、AKR1C1、NQO1的表达水平;通过胞质胞核分离以及免疫荧光的方法分析Nrf2蛋白核内表达情况。结果穿心莲内酯不影响细胞存活率,并剂量依赖性的降低H2O2诱导的细胞死亡,差异具有统计学意义。穿心莲内酯能显著增强抗氧化酶Nrf2、HO-1、AKR1C1、NQO1的蛋白和mRNA表达,增加Nrf2的细胞核内的分布,并上调ARE的表达活性。穿心莲内酯能够上调上游蛋白激酶AMPKα的磷酸化(p-AMPKα)水平。结论穿心莲内酯降低H2O2诱导的细胞死亡,其作用机制可能是通过激活Nrf2/ARE信号通路,从而调控HO-1、AKR1C1、NQO1的表达水平。

关键词：穿心莲内酯抗氧化 HO-1 NQO1 AKR1C1 Nrf2/ARE

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土家族药物血筒抗佐剂性关节炎药效作用研究

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中国药理学通报 2016年第10期32卷 1427-1432页

作者：余黄合曾嵘李鑫宋厚盼魏艳霞李如意李涛刘良王炜蔡雄湖南中医药大学中医诊断学湖南省重点实验室湖南长沙410208 湖南中医药大学药学院湖南长沙410208 澳门科技大学中药质量研究国家重点实验室澳门999078

目的对土家族药物血筒抗佐剂性关节炎（AIA）作用进行初步评价研究,为其进一步系统和深入研究奠定基础。方法 ♂SD大鼠30只,随机分为正常组、模型组、血筒醇提物组。CFA尾根部免疫建立AIA模型,血筒醇提物（1.0g·kg^-1）口服给药治疗30... 详细信息

目的对土家族药物血筒抗佐剂性关节炎（AIA）作用进行初步评价研究,为其进一步系统和深入研究奠定基础。方法 ♂SD大鼠30只,随机分为正常组、模型组、血筒醇提物组。CFA尾根部免疫建立AIA模型,血筒醇提物（1.0g·kg^-1）口服给药治疗30d。AIA造模后进行后足肿胀测量、关节炎指数评分及体质量称量评价。治疗结束后进行后足CT扫描和组织病理学检查,同时检测血清中炎症因子含量。结果与模型组比较,血筒组大鼠AIA发病率仅55%（P=0.035）,关节肿胀度降低1.8-2.3倍（P〈0.01）、体质量重10%-20%（P〈0.05）;CT和组织病理学检查显示,血筒明显抑制关节滑膜增生,减少关节翳形成,抑制关节软骨破坏和骨侵蚀（P〈0.01）;血筒组大鼠血清TNF-α、IL-1β和IL-6含量明显降低（P〈0.05）。结论该研究明确了血筒治疗风湿关节疾病的药效作用,也显示了其进一步研究开发的前景。

关键词：土家医药血筒异型南五味子佐剂性关节炎骨破坏炎症因子

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异型南五味子醇提物对D-半乳糖胺/脂多糖致小鼠急性肝损伤的保护作用

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中国医院药学杂志 2017年第11期37卷 1009-1013页

作者：余黄合谭小雯杨珍邹俊驹韩慧曾嵘王炜湖南中医药大学药学院湖南长沙410208 长沙市中医医院药剂科湖南长沙410208

目的:研究异型南五味子对D-半乳糖胺/脂多糖诱导小鼠肝损伤的保护作用。方法:ICR小鼠按体质量随机分为6组,即正常组、模型组、联苯双酯(200 mg·kg^(-1))组,异型南五味子醇提物低、中、高剂量(200、400、800 mg·kg^(-1))组。每天给药一... 详细信息

目的:研究异型南五味子对D-半乳糖胺/脂多糖诱导小鼠肝损伤的保护作用。方法:ICR小鼠按体质量随机分为6组,即正常组、模型组、联苯双酯(200 mg·kg^(-1))组,异型南五味子醇提物低、中、高剂量(200、400、800 mg·kg^(-1))组。每天给药一次,连续给药14 d,末次给药1 h后,除正常组外其余各组用600 mg·kg^(-1) D-半乳糖胺和40μg·kg^(-1)脂多糖腹腔注射以复制小鼠急性肝损伤模型,末次给药12 h后,摘眼球取血,取材。用生化法测定血清中ALT、AST水平,用酶联免疫法测定各组小鼠肝匀浆中SOD、MDA、MPO及GPx-2含量,测定血清及肝组织中TNF-α、IL-6、IL-10炎性因子表达水平,并于光镜下检查肝组织病理变化。结果:与模型组比较,异型南五味子200、400、800 mg·kg^(-1)剂量均能显著降低血清中ALT、AST水平(P<0.05或P<0.01),明显降低肝匀浆中MDA、MPO含量,显著升高SOD、GPx-2水平(P<0.05或P<0.01),并能降低肝脏及血清中TNF-α、IL-6含量,升高IL-10的表达水平(P<0.05或P<0.01)。病理观察显示异型南五味子组能明显减轻肝脏灶性坏死、水肿,减少肝脏炎性细胞浸润。结论:异型南五味子对腹腔注射600 mg·kg^(-1) D-半乳糖胺和40μg·kg^(-1)脂多糖诱导的小鼠急性肝损伤具有较好的保护作用。

关键词：异型南五味子醇提物 D-半乳糖胺/脂多糖肝损伤氧化应激炎性细胞因子

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药食同源植物杜仲化学成分、药理作用及产品开发的研究概况

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中国实验方剂学杂志 2024年第2期30卷 190-202页

作者：向智李焕杰谌鑫阳林昊锴彭彩云王炜余黄合湖南中医药大学药学院长沙410208

杜仲(Eucommia ulmoides),又称胶木,为杜仲科杜仲属植物,在我国已有超过两千年的药用历史。杜仲通常使用其干燥的树皮和叶子入药。由于其在临床应用中的较高安全性,杜仲叶已在2019年通过食用安全性评价正式列为药食同源物质,成为食品和... 详细信息

杜仲(Eucommia ulmoides),又称胶木,为杜仲科杜仲属植物,在我国已有超过两千年的药用历史。杜仲通常使用其干燥的树皮和叶子入药。由于其在临床应用中的较高安全性,杜仲叶已在2019年通过食用安全性评价正式列为药食同源物质,成为食品和保健品开发的有力资源。根据中医理论,杜仲具有补肝肾、强筋骨、安胎等功效。现代研究表明,杜仲的不同部位,如皮、叶、花和种子等,含有类似的化学成分,主要包括苯丙素类、萜类、黄酮类、酚酸类、甾体和多糖类等物质。杜仲因其丰富的成分,具有降血压、降血脂、降血糖、预防骨质疏松、抗肿瘤、抗菌抗病毒、抗炎、抗氧化、肝保护等多种药理作用,因此具有开发多样化药食同源产品的潜力。该文对杜仲不同部位的化学成分、药理作用及代表性的药食同源产品进行了系统整理,旨在为杜仲及其活性成分的临床应用及药食同源产品的开发利用提供理论参考。这将有助于深入了解杜仲的药用特性,并为进一步探索其在健康领域的应用提供指导。作为一种传统药食同源植物,杜仲将在未来的研究中引起更多关注,并有望为人们的健康作出更多贡献。

关键词：杜仲药食同源化学成分药理作用产品开发研究概况

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喉咽清口服液对大鼠急性咽炎及炎症因子影响的实验研究

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中国药理学通报 2015年第B11期31卷 30-31页

作者：王志琪李赛邹俊驹余黄合曾嵘彭艳梅田雪飞湖南中医药大学药理教研室湖南长沙410208 湖南中医药大学研究生院湖南长沙410208 湖南省中医药研究院中药研究所湖南长沙410013 中药粉体创新国家重点实验室(培育) 湖南长沙410208

目的观察传统工艺制备的喉咽清口服液（喉咽清1）与膜分离技术制备的喉咽清口服液（喉咽清2）对辣椒素诱导的急性咽炎模型大鼠的作用及其对炎症因子的影响,并初步探讨作用机制.方法50只雄性Wistar大鼠按体重分层随机分为空白组、模型组... 详细信息

目的观察传统工艺制备的喉咽清口服液（喉咽清1）与膜分离技术制备的喉咽清口服液（喉咽清2）对辣椒素诱导的急性咽炎模型大鼠的作用及其对炎症因子的影响,并初步探讨作用机制.方法50只雄性Wistar大鼠按体重分层随机分为空白组、模型组、双黄连组、喉咽清1组和喉咽清2组共5组.以在大鼠左侧咽喉部涂抹辣椒素法制备急性咽炎大鼠模型.造模3d后各动物均灌胃给药,每天1次,连续7d,于d7给药后40min取材、制备咽喉黏膜组织样本后处死动物.显微镜下观察黏膜组织病理形态,并进行黏膜炎症评分;ELISA法测定样本TNF-α、IL-1β和IL-6;Westernblot法检测样本MCP-1、Cox-2、NF-кB蛋白表达.结果喉咽清口服液明显降低模型大鼠咽喉黏膜组织中TNF-α、IL-1β和IL-6水平（P均〈0.05）,使NF-κB、COX-2和MCP-1的蛋白表达显著下降（P均〈0.05）,且与阳性药比较差异均无统计学意义.结论喉咽清口服液具有抗辣椒素所致大鼠急性咽炎的作用,其抗炎机制可能与抑制NF-κB、COX-2、MCP-1等相关细胞通路相关.

关键词：咽喉清口服液急性咽炎 TNF-α IL-1β IL-6 MCP-1 Cox-2 NF-κB

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MMPs/pH协同响应的血筒素-普鲁士蓝纳米递药系统联合光热抑制RAFLS细胞增殖和迁移的研究

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中国中药杂志 2024年第11期49卷 2906-2919页

作者：邓雅思谌鑫阳龙梦婷郑豪李斌王炜余黄合湖南中医药大学药学院创新药物研究所中药与民族药创新与发展国际实验室湖南长沙410208

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)关节处于弱酸性环境,关节中RA成纤维样滑膜细胞(RA fibroblast-like synoviocyte,RAFLS)被异常激活,分泌大量基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs),细胞膜上CD44受体蛋白被特异性上调。血筒素(xuetongsu,XTS)是土家族药物血筒中抑制RAFLS增殖的主要活性成分,因靶向性差限制了其开发利用。该研究构建了一种可靶向CD44的仿生XTS-普鲁士蓝纳米(Prussian blue nanoparticles,PB NPs)载药递送系统THMPX NPs。THMPX NPs表面有透明质酸(hyaluronic acid,HA)和三聚甘油单硬脂酸酯(triglycerol monostearate,TGMS)-3-氨基苯硼酸(3-aminobenzeneboronic acid,PBA)长链(PBA-TGMS)修饰。炎性RAFLS中过表达的MMPs和H+可协同切割纳米粒表面的PBATGMS,从而暴露HA与CD44相互作用,使THMPX NPs在RAFLS中高度富集,近红外光照射后产热并释放XTS,抑制RAFLS细胞增殖和迁移。表征发现THMPX NPs为形态均一的立方形,粒径为(190.3±4.7)nm,平均电位在(-15.3±2.3)mV,近红外光照射5 min温度可达41.5℃,释药呈现MMPs和H+敏感性;生物安全性考察发现THMPX NPs溶血率小于4%,对正常的RAW264.7和HFLS无细胞毒性;体外摄取实验表明THMPX NPs有明显的RAFLS靶向性;自由基清除实验发现THMPX NPs有优异的自由基清除能力,可清除RAFLS中的活性氧;cell counting kit-8和划痕实验表明THMPX NPs显著抑制RAFLS活力和迁移能力。该研究为开发抗RA中药民族药创新纳米靶向药物提供了思路。

关键词：类风湿关节炎类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞血筒素普鲁士蓝透明质酸 MMPs/pH协同响应

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黄芪多糖调控多胺介导的Ca^(2+)-RhoA通路促进小肠上皮细胞迁移研究

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中草药 2016年第23期47卷 4224-4230页

作者：宋厚盼李如意魏艳霞余黄合李鑫李茹柳袁振仪秦裕辉蔡雄刘平安黄惠勇湖南中医药大学中医诊断学湖南省重点实验室湖南长沙410208 湖南中医药大学药学院湖南长沙410208 广州中医药大学脾胃研究所广东广州510405 湖南中医药大学中医方证研究转化医学湖南省高校重点实验室湖南长沙410208

目的考察黄芪多糖对小肠上皮细胞(IEC-6)迁移及迁移过程细胞内多胺水平、细胞质游离钙离子([Ca2+]cyto)的量、细胞骨架蛋白Rho A表达的影响,探讨黄芪修复胃肠黏膜损伤的疗效机制。方法黄芪药材经水提醇沉、Sevage法去蛋白后得到黄芪粗多... 详细信息

目的考察黄芪多糖对小肠上皮细胞(IEC-6)迁移及迁移过程细胞内多胺水平、细胞质游离钙离子([Ca2+]cyto)的量、细胞骨架蛋白Rho A表达的影响,探讨黄芪修复胃肠黏膜损伤的疗效机制。方法黄芪药材经水提醇沉、Sevage法去蛋白后得到黄芪粗多糖,运用DEAE纤维素柱分离得到黄芪多糖I、II、III、IV,黄芪多糖I以Sephadex LH-20凝胶柱色谱得到黄芪多糖V。Tips划痕法建立IEC-6细胞损伤迁移模型,柱前衍生高效液相色谱法测定多胺的量,流式细胞仪检测[Ca2+]cyto水平,Western blotting法检测Rho A蛋白表达。考察黄芪多糖对正常IEC-6细胞[未加α-二氟甲基鸟氨酸(DFMO)]和多胺耗竭IEC-6细胞(加入DFMO)迁移、多胺水平、[Ca2+]cyto的量及Rho A蛋白表达的影响。结果黄芪粗多糖、黄芪多糖I、黄芪多糖V(50、100、200 mg/L)均能促进IEC-6细胞迁移(P<0.01),并且可逆转多胺合成抑制剂DFMO所致的细胞迁移抑制效果(P<0.01);在正常(未加DFMO)或多胺耗竭情况(加DFMO),黄芪多糖V均可提高迁移过程细胞内多胺的量(P<0.01);黄芪多糖V可提高细胞迁移过程[Ca2+]cyto水平(P<0.01),并且可逆转DFMO所致的[Ca2+]cyto水平下降(P<0.01);黄芪多糖V(100、200 mg/L)可明显提高Rho A蛋白表达,同时可逆转DFMO所导致的Rho A蛋白表达抑制作用。结论黄芪多糖可加速胃肠黏膜损伤早期修复过程,其机制可能与增加黏膜上皮细胞多胺的量,提升[Ca2+]cyto,从而提高Rho A蛋白表达,进而促进胃肠黏膜上皮细胞迁移有关。

关键词：黄芪多糖小肠上皮细胞细胞迁移细胞质游离钙离子 RhoA 多胺

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基于表观遗传调控的中药防治类风湿关节炎作用机制研究进展

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中国药理学通报 2019年第7期35卷 893-897页

作者：林也李鑫杨珍唐琳张婷余黄合丁长松廖菁蔡雄刘良湖南中医药大学中药粉体与创新药物省部共建国家重点实验室培育基地湖南长沙410208 湖南中医药大学中医诊断学湖南省重点实验室湖南长沙410208 广东药科大学中药学院广东广州510006 澳门科技大学中药质量研究国家重点实验室澳门999078

表观遗传修饰(epigenetic modifications)代表了调节基因表达的重要机制,使人体能够适应不断变化的环境。应用表观遗传学修饰研究方法是自身免疫疾病机制研究的前沿领域,类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)是自身免疫性疾病研究领... 详细信息

表观遗传修饰(epigenetic modifications)代表了调节基因表达的重要机制,使人体能够适应不断变化的环境。应用表观遗传学修饰研究方法是自身免疫疾病机制研究的前沿领域,类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)是自身免疫性疾病研究领域的难点之一,其病因不明,发病机制复杂,至今仍然缺乏理想的治疗药物与方法。中医药治疗RA具有独特优势,新近研究发现中药单体成分和复方通过作用于表观遗传修饰而治疗RA。该文拟对表观遗传学在RA发生、发展中的机制,以及中药通过调控表观遗传防治RA的作用进行综述,以期为中药治疗RA临床疗效及其作用机制研究提供新的思路。

关键词：类风湿关节炎中药表观遗传修饰 DNA甲基化组蛋白修饰 miRNA

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委陵菜属植物的化学成分及药理作用研究进展

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中国中药杂志 2022年第6期47卷 1509-1538页

作者：吴嘉张在其余黄合黄费炳陈柱梁储玲玲李斌王炜湖南中医药大学中医药民族医药国际联合实验室湖南长沙410208 湖南医药学院侗医药研究湖南省重点实验室湖南怀化418000

蔷薇科委陵菜属Potentilla植物全球现存200~500种,约有90余种在我国广泛分布,且多为民族用药。笔者统计目前已从该属植物中共分离并鉴定367个化合物,涵盖萜类、黄酮类、酚酸类、鞣质类、苯丙素类等,药理作用主要涉及抗氧化、降糖、抗炎... 详细信息

蔷薇科委陵菜属Potentilla植物全球现存200~500种,约有90余种在我国广泛分布,且多为民族用药。笔者统计目前已从该属植物中共分离并鉴定367个化合物,涵盖萜类、黄酮类、酚酸类、鞣质类、苯丙素类等,药理作用主要涉及抗氧化、降糖、抗炎、抗肿瘤、心血管系统保护、神经保护、保肝等。该文系统综述了国内外委陵菜属植物的化学成分和药理活性研究进展,为其进一步深入研究和临床应用提供科学依据。

关键词：委陵菜属化学成分药理活性综述

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